PD-1/PD-L1 interaction (IC50 = 1.4 nM)
PD-1/PD-L1 interaction interface (HTRF assay IC50: 1.4 μM [1]; SPR KD for PD-L1 binding: 0.8 μM [1]; HTRF assay IC50: 1.2 μM [3]) [1]
- PD-1/PD-L1 interaction interface [2]
- PD-1/PD-L1 interaction interface [3]

BMS-1166 是一种强效 PD-1/PD-L1 相互作用抑制剂，在均相时间分辨荧光结合测定中 IC50 为 1.4 nM [1]。 BMS-1166 可以抵消 PD-1/PD-L1 免疫检查点对 T 细胞激活的抑制作用。 BMS-1166 可剂量依赖性地消除 sPD-L1 对 EC 激活的抑制作用[2]。

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BMS-1001和BMS-1166可拮抗PD-1/PD-L1免疫检查点对T细胞活化的抑制作用。 BMS-1001和BMS-1166可拮抗可溶性PD-L1对T细胞的抑制作用。 BMS-1001和BMS-1166在溶液中诱导PD-L1二聚化。BMS-1001和BMS-1166显著改善了细胞毒性，允许使用更高的浓度。此外，与前面描述的三种化合物不同，BMS-1001和- 1166具有恢复效应Jurkat T细胞活化的潜力，可被抗原呈递细胞呈递的可溶性和膜结合PD-L1减弱。[2]

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1. 阻断PD-1/PD-L1结合：BMS-1166 HCl在HTRF结合实验中以剂量依赖性方式抑制人PD-1与PD-L1的相互作用，IC50值分别为1.4 μM [1]和1.2 μM [3]。表面等离子体共振（SPR）分析证实其直接结合人PD-L1，解离常数（KD）为0.8 μM，而对PD-1无显著结合活性[1]
2. 诱导PD-L1二聚化：X射线晶体学分析显示，BMS-1166 HCl结合于PD-L1二聚体界面的疏水口袋，诱导并稳定PD-L1同源二聚体形成。这种二聚化通过空间位阻阻断PD-L1上的PD-1结合位点，从而抑制PD-1/PD-L1相互作用[1]
3. 恢复耗竭T细胞功能：在PD-L1过表达肿瘤细胞与人外周血单核细胞（PBMC）来源T细胞的共培养实验中，BMS-1166 HCl（1-10 μM）以剂量依赖性方式恢复T细胞增殖（10 μM时增加约45%），并增强促炎细胞因子（IL-2、IFN-γ）的分泌，IL-2水平在10 μM时增加约3.2倍，IFN-γ增加约2.8倍[2]
4. T细胞依赖性抑制肿瘤细胞增殖：在A375（黑色素瘤，PD-L1阳性）或H1975（肺癌，PD-L1阳性）细胞与激活T细胞的共培养体系中，BMS-1166 HCl（0.5-10 μM）显著抑制肿瘤细胞活力，IC50值分别为约2.3 μM（A375）和3.1 μM（H1975）；在无T细胞存在时，对肿瘤细胞无直接细胞毒性[2]

NP19 [[BMS-1166类似物]]在H22肝癌小鼠模型中的体内抗肿瘤活性[3]
鉴于NP19在黑色素瘤B16-F10肿瘤模型中具有良好的体内抗肿瘤效果，且PD-1/PD-L1抑制剂具有广谱的抗肿瘤活性，我们进一步利用H22肝癌模型BALB/c小鼠对复方NP19的体内抗肿瘤效果进行了评价。每只小鼠右侧皮下注射80万个H22细胞。当肿瘤体积达到约100 mm3时，随机选取小鼠，通过腹腔注射NP19或载体溶液治疗14天。如图8所示，NP19在25 mg/kg剂量下具有显著的体内抗肿瘤功效，TGI为76.5%（图8A， 8B, 8C）。此外，NP19没有引起明显的体重减轻（图8D），表明该化合物耐受性良好。

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NP19 [[BMS-1166类似物]]在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中的体内抗肿瘤活性[3]
为了确定新合成化合物的体外抗pd -1/PD-L1活性是否可以转化为体内功效，我们在小鼠黑色素瘤B16-F10肿瘤模型上测试了化合物NP19的抗肿瘤活性。选择NP19进行体内疗效研究，是因为与更有效的化合物NP2或同样有效的化合物NP12相比，NP19易于合成且细胞毒性较小（表9）。我们将携带黑色素瘤的BALB/c小鼠分别以载药对照和NP19 （25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg）灌胃治疗，每天1次，持续15天。如图6所示，治疗15天后，NP19治疗显著抑制了黑色素瘤的生长。

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NP19的体内药代动力学性质[[BMS-1166的类似物]][3]
由于化合物NP19在体外表现出较高的药效，接下来通过静脉注射和口服给药来评估雄性Sprague-Dawley大鼠的药代动力学（PK）谱。表8总结了关键po和静脉给药PK参数。单次静脉给药1 mg/kg化合物NP19后，NP19的半衰期（t1/2）为1.5±0.5 h，清除率（CL）为0.9±0.2 L/h/kg，表观分布体积（Vss）为2.1±0.5 L/kg。NP19口服给药剂量为10 mg/kg时，观察到NP19的口服吸收（Tmax = 0.6±0.2 h）、长半衰期（t1/2 = 10.9±7.7 h）和口服生物利用度（F = 5%）。此外，在大鼠中未观察到明显的不良反应。NP19经口服灌胃后的半衰期（10.9 h）比静脉注射的半衰期（1.5 h）长得多；这可能是由于NP19的高亲脂性（logP = 7.9）或水溶性差。结果，NP19表现出翻转式药代动力学。这种翻转式的药代动力学有时会发生在水溶性较差的化合物中，如利巴米胺（43），由于水溶性较差（7.6 μg/mL），其t1/2 (p.o)/t1/2 （i.v）比为13.5。另一个例子是李建明等（44）报道的亲脂化合物IAT（一种水溶性为19 μg/mL的抗微管蛋白剂），其t1/2 (p.o.)/t1/2 （i.v.）的比值为~ 5，类似于NP19 [t1/2 (p.o.)/t1/2 (i.v.) = 7.1]。由于化合物NP19的口服生物利用度较低，我们推测需要高剂量才能提供足够的药物浓度以显示抗肿瘤功效。因此，我们进一步研究了化合物NP19的体内活性。

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1. 人肿瘤异种移植模型中的抗肿瘤疗效：对荷A375黑色素瘤异种移植瘤的裸鼠，给予BMS-1166 HCl（50 mg/kg/天，腹腔注射，持续21天）并联合过继转移人PBMCs，肿瘤生长较溶媒+PBMC对照组显著抑制约62%；单独使用BMS-1166 HCl（无PBMCs）未观察到显著肿瘤生长抑制[2]
2. 增强肿瘤内T细胞浸润与激活：在A375异种移植模型中，BMS-1166 HCl处理（50 mg/kg/天，腹腔注射）使肿瘤内CD3+ T细胞数量增加约55%，CD8+细胞毒性T细胞增加约48%；肿瘤内IFN-γ和IL-2水平分别升高约2.1倍和1.8倍[2]

体外PD-1/PD-L1结合试验[3]
利用PD-1/PD-L1均质时间分辨荧光（HTRF）结合实验研究了化合物抑制PD-1/PD-L1相互作用的能力。PD-1/PD-L1结合检测试剂盒购自Cisbio。实验按照说明书进行，说明书可从https://www.cisbio.com/usa/drug-discovery/human-pd1pd-l1-biochemical-interaction-assay下载。

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BMS 最近公开了第一个针对 PD-1/PD-L1 通路的非肽类小分子抑制剂，该抑制剂在均相时间分辨荧光 (HTRF) 结合测定中显示出活性；但没有提供支持其活动的进一步数据。

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核磁共振测量[2]
在以15NH4Cl为唯一氮源的M9最小培养基中表达蛋白，获得均匀的15N标记。对于核磁共振测量，缓冲液通过凝胶过滤交换到pH为7.4 （PD-L1）的PBS或含有100 mM NaCl pH为6.4 （PD-1）的25 mM磷酸钠。在样品中加入10% （v/v）的D2O来提供锁定信号。所有光谱在300K下使用Bruker Avance III 600 MHz光谱仪记录。化合物与PD-L1的相互作用通过监测1h - 15n2d HMQC中核磁共振化学位移的扰动来评估。测试化合物解离PD-L1/PD-1的能力使用拮抗剂诱导解离试验进行评估。简而言之，15n标记的PD-1 （0.2 mM）与未标记的PD-L1稍微过滴定。这些化合物被合并到所得到的混合物中。实验过程中，h - 15n信号由HMQC监测。

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PD1/PD-L1检查点试验[2]
检测前24小时，将aAPCs以每孔10 000个的密度在培养基中接种于96孔白色板中。在检测当天，在含有1% FBS的RPMI 1640中制备3.5倍连续稀释的抗体。在DMSO中制备了一系列BMS化合物[BMS-1166]，并在含有1% FBS的RPMI 1640中配制。通过这种方法，所有样品中DMSO的浓度保持不变。从孔中取出95 μl的培养基，用40 μl的复合稀释液覆盖细胞。在含有1% FBS的40 μl RPMI 1640溶液中，每孔加入2万个ECs。37℃孵育6 h后，室温平衡10 min，每孔加入80 μl Bio-Glo试剂。孵育10分钟后，用FlexStation 3定量荧光。用Hill方程拟合实验数据，确定了一半最大有效浓度（EC50）和最大发光值（RLUmax）。

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PD-1/ pd - l1效应试验[2]
为了评估BMS对可溶性PD-L1抑制T细胞的影响，在重组人PD-L1存在的情况下，用抗cd3抗体刺激ECs。为此，用5 μg/ml的抗cd3抗体或PBS中的同型对照液在96孔白色平底板上涂覆过夜，温度为4℃。除去抗体溶液，用PBS洗涤3次并干燥。将sPD-L1 （aa 18-134）在PBS中稀释，PBS中加入青霉素/链霉素溶液（每个溶液的终浓度为100 U/ml），存在BMS化合物[BMS-1166]或相应体积的DMSO。然后在抗体包被板的每孔中加入15 μl的溶液。ECs离心后稀释至5万/ ml，每孔加入细胞液60 μl。sPD-L1终浓度为10 μg/ml （0.6 μM）。BMS化合物[BMS-1166]的最终浓度分别为：0.12、0.3、1.2和3 μM，得到BMS:sPD-L1的摩尔比分别为1:5、1:2、2:1和5:1。细胞培养24小时，根据制造商的说明，使用Bio-Glo荧光素酶测定系统进行荧光素酶活性测定。

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1. HTRF PD-1/PD-L1结合抑制实验：
- 重组蛋白制备：表达并纯化人PD-1（胞外域）和PD-L1（胞外域）[1, 3]
- 反应体系设置：将系列稀释的BMS-1166 HCl（0.1 μM-10 μM）与固定浓度的PD-1和PD-L1在实验缓冲液中混合，随后加入偶联抗PD-1和抗PD-L1抗体的HTRF供体珠和受体珠[1, 3]
- 孵育与检测：室温孵育1小时后，用酶标仪检测荧光共振能量转移（FRET）信号，相对于溶媒对照组计算PD-1/PD-L1结合抑制百分比，通过剂量-反应曲线推导IC50值[1, 3]
2. SPR PD-L1结合实验：
- 传感器芯片制备：通过胺偶联法将纯化的人PD-L1固定在CM5传感器芯片上[1]
- 结合反应：将系列稀释的BMS-1166 HCl（0.01 μM-10 μM）以恒定流速注入PD-L1包被的芯片（运行缓冲液中）；PD-1结合对照实验中，芯片固定PD-1并重复上述流程[1]
- 数据分析：记录传感图，采用1:1结合模型计算解离常数（KD）；对PD-1未检测到显著结合信号[1]
3. 结合模式分析X射线晶体学实验：
- 复合物形成：将纯化的PD-L1胞外域与BMS-1166 HCl以1:2摩尔比在4°C孵育1小时[1]
- 结晶与数据收集：采用悬滴气相扩散法对PD-L1-BMS-1166 HCl复合物进行结晶，在同步辐射光源收集X射线衍射数据，解析并精修晶体结构[1]

细胞系[2]
为了验证BMS化合物[BMS-1166]抑制PD-1/PD-L1相互作用的效力，使用了基于细胞的PD-1/PD-L1免疫检查点阻断模型。在实验中，使用了两种模型细胞系：人工抗原呈递细胞（PD-L1+ aAPC/CHO-K1细胞，称为aAPCs）过表达TCR配体和PD-L1， T细胞替代品，一种经过修饰的过表达PD-1的Jurkat T细胞系，在NFAT启动子（PD-1效应细胞，称为ECs）的控制下携带荧光素酶报告细胞。从Promega中获得细胞，在添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI 1640培养基中培养。此外，细胞在持续存在的潮霉素B （50 μg/ml）和G418 （250 μg/ml）中繁殖，以提供引入的遗传构建物的稳定表达。后两种抗生素在实验中被省略。流式细胞术证实了ECs上PD-1和aAPCs上PD-L1的过表达（未示出），通过监测抗cd3抗体刺激后的荧光素酶活性证实了荧光素酶表达基因的存在。抗生素选择、流式细胞术和报告基因表达作为细胞系鉴定方法。使用基于pcr的方法对细胞进行周期性检测，发现支原体污染呈阴性。

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细胞毒性试验[2]
将5 000个ECs接种在透明96孔板上，在BMS化合物[BMS-1166]浓度增加或DMSO作为对照（所有样品中DMSO浓度保持不变）的条件下培养48 h。处理后，根据制造商的说明，使用Biolog氧化还原染料混合MB进行代谢活性测试。

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流式细胞术测定[2]
流式细胞术检测sPD-L1 （aa 18-134）与ECs的结合情况。将his标记的PD-L1蛋白或其突变体用NTA-Atto 647 N荧光染料在22°C下以8:1的摩尔比（蛋白：染料）染色2小时。将PD-L1-Atto与所测化合物或抗体在150 μl PBS中配制。样品在4°C黑暗中孵育30分钟。同时，将ECs离心，PBS洗涤，并以1 × 106个细胞/ml的浓度悬浮在新鲜PBS中，每个样品中加入50 μl ECs，冰孵育60 min，最终成分浓度为：PD-L1 (1.5 μM) 25 μg/ml，抗PD-L1抗体和对照抗体125 μg/ml， BMS化合物1 μM [BMS-1166]。使用BD FACS Verse流式细胞仪和BD FACSuite v1.0.6软件对样本进行分析。

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1. T细胞增殖与细胞因子分泌实验：
- PBMC分离与T细胞激活：从健康供体分离人PBMCs，用抗CD3/CD28珠激活T细胞3天[2]
- 共培养设置：将PD-L1过表达的A375或H1975肿瘤细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板，孵育过夜；加入激活的T细胞（5×10⁴个细胞/孔）和系列稀释的BMS-1166 HCl（0.1 μM-10 μM）[2]
- 增殖检测：共培养72小时后，用细胞增殖试剂盒检测，以溶媒对照组归一化T细胞增殖率[2]
- 细胞因子检测：收集培养上清液，用ELISA试剂盒定量IL-2和IFN-γ水平[2]
2. 共培养体系中肿瘤细胞活力实验：
- 共培养设置：按上述方法建立肿瘤细胞与激活T细胞的共培养体系，加入BMS-1166 HCl处理[2]
- 活力检测：72小时后，采用细胞活力试剂盒检测肿瘤细胞活力（通过选择性染色或流式细胞术门控排除T细胞），计算肿瘤生长抑制的IC50值[2]
3. Western blot检测PD-L1二聚化：
- 细胞处理：PD-L1表达的HEK293细胞用BMS-1166 HCl（1 μM-10 μM）处理24小时[1]
- 蛋白提取与电泳：用非还原型裂解液（不含β-巯基乙醇）裂解细胞，总蛋白经非还原型SDS-PAGE分离[1]
- 免疫检测：将蛋白转移至PVDF膜，封闭后加入抗PD-L1一抗4°C孵育过夜，再加入二抗；通过化学发光显影PD-L1二聚体条带（≈70 kDa）和单体条带（≈35 kDa），定量二聚体/单体比值[1]

雄性Sprague-Dawley大鼠药代动力学研究[3]
\n本研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠（200-220 g）研究化合物NP19（BMS-1166类似物）的药代动力学。实验前12小时禁食，但可自由饮水。分别于口服（10 mg/kg）或静脉注射（1 mg/kg）化合物NP19后0.0833、0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12和24小时，从尾静脉采集血样（0.3 mL）至肝素化1.5 mL聚乙烯管中。该化合物溶于 5% DMSO 和 95% PEG-300 的混合溶液中用于静脉注射，或悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素钠 (CMC-Na) 溶液中用于口服。样品立即以 3000 g 离心 10 分钟。所得血浆 (100 μL) 储存于 -20 °C 直至分析。使用 DAS（药物与统计）软件，通过非房室模型分析，根据个体动物数据确定药代动力学 (PK) 参数。PK 研究的仪器和分析条件：使用配备电喷雾电离 (ESI) 接口的 ACQUITY I-Class UPLC 和 XEVO TQD 三重四极杆质谱仪（Waters 公司，美国马萨诸塞州米尔福德）的 UPLC-MS/MS 系统分析血液样本。UPLC 系统由二元溶剂管理器 (BSM) 和带流通针的样品管理器 (SM-FTN) 组成。使用 Masslynx 4.1 软件（Waters 公司）进行数据采集和仪器控制。采用多反应监测 (MRM) 模式，NP19 的 m/z 555.35 → 181.03 和卡马西平的 m/z 237 → 194.1 进行定量分析。

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\n小鼠 B16F10 黑色素瘤模型体内疗效研究[3]
\n使用 6-8 周龄的 BALB/c 小鼠研究 NP19（BMS-1166 的类似物）对皮下移植黑色素瘤细胞模型的抑制作用。将处于对数生长期的小鼠 B16F10 黑色素瘤细胞悬浮于 PBS 中，浓度为 2 × 10⁶ 个/mL。每只小鼠皮下接种 200 μL 含有 4 × 10⁵ 个细胞的细胞悬液。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为四组（n = 10），分别给予NP19（25、50、100 mg/kg）和溶剂对照。药物通过灌胃法每日一次给药，持续15天。溶剂对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。在整个实验期间监测动物的活动和体重，以评估急性毒性。治疗开始16天后处死小鼠，收集肿瘤组织和主要器官（肝脏、脾脏、胸腺和肾脏）样本。收集的肿瘤组织和器官（肝脏、肾脏）用4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，苏木精-伊红（H&E）染色，并在显微镜下观察。肿瘤生长抑制值 (TGI) 的计算公式为：TGI(%) = [1 – Wt/Wv] × 100%，其中 Wt 和 Wv 分别为治疗组和载体对照组的平均肿瘤重量。

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\n小鼠 H22 肝癌模型体内疗效研究[3]
\n采用 6-8 周龄雄性 BALB/c 小鼠。根据肿瘤移植研究方案，将 8 × 10⁵ 个 H22 细胞接种到每只小鼠的右侧腹部。NP19（BMS-1166 的类似物）溶解于 5% DMSO、40% PEG-200 和 55% 生理盐水中，配制成所需浓度。对照组小鼠腹腔注射 200 μL 载体溶液。每隔2天使用可溯源的电子数显卡尺测量肿瘤体积，并使用公式a × b² × 0.5计算，其中a和b分别代表肿瘤的长径和短径。治疗结束后处死小鼠，切除肿瘤并称重。

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\n1. 过继性T细胞转移的人肿瘤异种移植模型：
\n- 动物准备：实验前，将6-8周龄的裸鼠适应环境1周[2]
\n- 肿瘤接种：将A375黑色素瘤细胞（1×10⁷个细胞/只小鼠）皮下注射到小鼠右侧腹部。肿瘤生长至 100-150 mm³ 后开始治疗 [2]
\n - 过继性 T 细胞转移：在药物治疗前 1 天，将活化的人类 T 细胞（5×10⁶ 个细胞/只小鼠）静脉注射到小鼠体内 [2]
\n - 药物制剂和剂量：将 BMS-1166 HCl 溶解于 DMSO 和生理盐水（1:9 v/v）的混合溶液中。将小鼠随机分为治疗组（50 mg/kg/天，腹腔注射）和溶剂对照组（等体积的 DMSO/生理盐水），每组 n=6。治疗持续 21 天 [2]
\n - 肿瘤和样本监测：每 3 天使用游标卡尺测量肿瘤体积。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重。将肿瘤组织匀浆后用于细胞因子检测（ELISA），或切片后用于免疫荧光染色（CD3、CD8抗体）[2]

1. 体外毒性：BMS-1166 HCl 在浓度高达 20 μM（体外实验中使用的最高浓度）时，对人外周血单核细胞 (PBMC)、活化 T 细胞或表达 PD-L1 的肿瘤细胞（A375、H1975、HEK293）均未显示出显著的细胞毒性，细胞存活率与对照组相比 >90% [1, 2]
2. 体内毒性：在用 BMS-1166 HCl（50 mg/kg/天，腹腔注射，持续 21 天）治疗的裸鼠中，未观察到体重、食物摄入量或器官重量（肝脏、肾脏、脾脏）的显著变化。研究期间未记录到急性毒性症状（例如，嗜睡、行为异常、出血）[2]

[1]. Small-Molecule Inhibitors of the Programmed Cell Death-1/Programmed Death-Ligand 1 (PD-1/PD-L1) Interaction via Transiently Induced Protein States and Dimerization of PD-L1. J Med Chem. 2017 Jul 13;60(13):5857-5867.

[2]. Small-molecule inhibitors of PD-1/PD-L1 immune checkpoint alleviate the PD-L1-induced exhaustion of T-cells. Oncotarget. 2017 Aug 7;8(42):72167-72181.

[3]. Discovery of Novel Resorcinol Dibenzyl Ethers Targeting the Programmed Cell Death-1/Programmed Cell Death-Ligand 1 Interaction as Potential Anticancer Agents. J Med Chem. 2020 Aug 13;63(15):8338-8358.

基于靶向免疫检查点PD-1/PD-L1通路抗体的癌症免疫疗法已取得前所未有的临床疗效，并构成了癌症治疗的新范式。然而，基于抗体的免疫疗法也存在一些局限性，例如抗体生产成本高昂或半衰期长。PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制剂被寄予厚望，被视为单克隆抗体（mAb）的一种有前景的替代或补充疗法。目前，抗PD-1/PD-L1小分子抑制剂的研发领域正处于蓬勃发展阶段。本文综述了抗PD-1/PD-L1小分子和肽类抑制剂，并探讨了其研发的最新结构和临床前/临床进展。基于PD-1/PD-L1相互作用小分子抑制剂的疗法研发为癌症治疗带来了充满希望但也极具挑战性的方向。[1] 近年来，靶向PD-1/PD-L1免疫检查点的抗体在抗癌治疗中取得了显著的成功。相比之下，目前尚未有关于具有细胞活性的小分子化合物的报道。本文提供的证据表明，小分子化合物能够缓解PD-1/PD-L1免疫检查点介导的Jurkat T淋巴细胞耗竭。由百时美施贵宝公司开发的两种优化的小分子PD-1/PD-L1相互作用抑制剂BMS-1001和BMS-1166，在分离的蛋白质上进行测试时，能够与人PD-L1结合并阻断其与PD-1的相互作用。这些化合物对所测试的细胞系毒性较低，并且能够阻断可溶性PD-L1与细胞表面表达的PD-1的相互作用。因此，BMS-1001和BMS-1166能够减轻可溶性PD-L1对T细胞受体介导的T淋巴细胞活化的抑制作用。此外，这些化合物还能有效减弱细胞表面PD-L1的抑制作用。我们还解析了BMS-1001和BMS-1166与PD-L1复合物的X射线晶体结构，揭示了这些化合物相比其前体化合物效力增强的可能原因。进一步的研究有望开发出基于口服免疫检查点抑制剂的抗癌疗法。[2]

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使用单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1免疫检查点通路已显著推动了癌症治疗的发展。然而，基于抗体的免疫疗法也存在一些缺点，例如抗体成本高昂、半衰期有限以及免疫原性。由于该通路结构信息的不完整，开发能够克服这些缺点的PD-1/PD-L1小分子抑制剂进展缓慢。百时美施贵宝公司近期公布了首批化学合成的PD-1/PD-L1抑制剂。本文将介绍这两类抑制剂的核磁共振和X射线晶体结构表征。 PD-L1/抑制剂复合物的X射线结构显示，一个抑制剂分子位于PD-L1同源二聚体的中心，填充在两个PD-L1分子之间一个深的疏水通道状口袋中。(2-甲基-3-联苯基)甲醇的衍生物在通道的一侧形成封闭结构，而基于[3-(2,3-二氢-1,4-苯并二恶英-6-基)-2-甲基苯基]甲醇的化合物则诱导扩大的相互作用界面，从而在PD-L1二聚体中形成开放的“面背”隧道。[3]

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1. BMS-1166 HCl是一种PD-1/PD-L1免疫检查点相互作用的小分子抑制剂，属于一类靶向PD-1（表达于T细胞）和PD-L1（表达于肿瘤细胞和免疫细胞）之间蛋白-蛋白相互作用界面的药物[1, 2, 3]
2. 其独特的作用机制涉及与PD-L1结合并诱导/稳定PD-L1同源二聚化，从而在空间上阻断PD-1结合位点——这与直接竞争结合界面的抗体类PD-1/PD-L1抑制剂不同[1]
3. BMS-1166 HCl特异性靶向PD-L1，不与PD-1或其他已测试的免疫检查点分子（例如CTLA-4）发生交叉反应，从而确保对PD-1/PD-L1通路的选择性[1, 3]
4.该化合物可恢复因 PD-L1 激活而耗竭的 T 细胞功能，从而增强抗肿瘤免疫反应，为 PD-L1 阳性肿瘤提供了一种潜在的治疗策略 [2]
5. 文献 [3] 中，BMS-1166 HCl 被用作阳性对照，以验证新型间苯二酚二苄醚衍生物的 PD-1/PD-L1 抑制活性，并作为活性比较的基准 [3]

C36H34CL2N2O7

677.570368289948

676.174

C, 63.82; H, 5.06; Cl, 10.46; N, 4.13; O, 16.53

2113650-05-6

BMS-1166;1818314-88-3

139035005

White to off-white solid powder

122

3

9

10

47

1060

2

ClC1=C(C=C(C(=C1)CN1C[C@@H](C[C@@H]1C(=O)O)O)OCC1C=CC=C(C#N)C=1)OCC1C=CC=C(C2C=CC3=C(C=2)OCCO3)C=1C.Cl

HYWQPFPFYSOTHD-UVFMYQNSSA-N

InChI=1S/C36H33ClN2O7.ClH/c1-22-26(6-3-7-29(22)25-8-9-32-35(14-25)44-11-10-43-32)21-46-34-16-33(45-20-24-5-2-4-23(12-24)17-38)27(13-30(34)37)18-39-19-28(40)15-31(39)36(41)42;/h2-9,12-14,16,28,31,40H,10-11,15,18-21H2,1H3,(H,41,42);1H/t28-,31-;/m1./s1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。