BMS-262084

Factor XIa (IC50 = 2.8 nM); tryptase (IC50 = 5 nM)

与胰蛋白酶、尿激酶、血浆激肽释放酶、纤溶酶、凝血酶（因子 IIa）和因子 IXa 相比（IC50=0.005、0.05、0.542、0.55）——分别比 1.7、10.5 和 17.4 μM 高 70 倍以上——BMS- 262084 对人类因子 XIa 更具选择性 (IC50=2.8 nM) [1]。 BMS-262084 (1-100 μM) 可使人和大鼠血浆中的活化凝血活酶时间（浓度为 0.14 和 2.2 μM）加倍 [1]。

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体外选择性[1]
BMS-262084是人因子XIa（IC50=2.8 nM）和人类胰蛋白酶（IC50=5 nM）的强效抑制剂，如表1所示。与参与凝血（凝血酶、因子Xa、因子IXa、因子XIIa、组织因子：因子VIIa）和纤溶（组织纤溶酶原激活剂、尿激酶、纤溶酶）的其他丝氨酸蛋白酶相比，它对因子XIa的选择性至少高70倍，但对胰蛋白酶的活性较弱（IC50=50 nM）。与分离的酶相比，BMS-262084在基于血浆的凝血时间内效力较低，但其活性与抑制内在（活化的部分凝血活酶时间）而非外在（凝血酶原时间）凝血一致。在大鼠血浆中，浓度为2.2±0.5μM的BMS-262084使活化的部分凝血活酶时间加倍（图2）。它对凝血酶原时间没有影响，凝血酶原时间可以通过对抗因子VIIa、因子Xa或凝血酶的活性来延长。BMS-262084在人血浆中的效力是15倍，其中活化的部分凝血活酶时间在0.14±0.02μM的浓度下加倍（n=5）。人血浆中的凝血酶原时间不受BMS-262084浓度为1、10和100μM的影响（最大变化±5%，n=3）。

使用 BMS-262084（2-12 mg/kg + 2-12 mg/kg/h；iv）治疗颈动脉血栓重量减轻、血管通畅性改善和综合血流的大鼠[1]。

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在大鼠体内，也观察到对BMS-262084的选择性抗凝反应，活化的部分凝血活酶时间呈剂量依赖性延长，但凝血酶原时间没有延长（图2）。载体输注对凝血时间没有显著影响（未显示）。在每种BMS-262084剂量水平下，在5至90分钟的输注过程中，活化部分凝血活酶时间的增加最多变化17%，因此，使用平均5至90 min的凝血时间增加来构建剂量反应。在所有研究剂量下，观察到活化的部分凝血活酶时间显著延长，但在6+6、12+12和24+24的剂量（mg/kg+mg/kg/h）下，抗凝作用在对照组的3.0至3.2倍时达到峰值。在体外没有观察到这种平台，大鼠血浆中的凝血时间增加到对照的5.9倍（图2）。在人血浆中，在5-μM浓度的BMS-262084下，活化的部分凝血活酶时间增加到对照组的6.9倍。
通过阻抗法在未凝固（低钙）的全血中测量大鼠血小板的聚集，用于测试对血小板功能的体外影响。我们首先确定，胶原蛋白浓度为20μg/ml时，半最大峰值聚集反应为28±1Ω（n=3）。这种胶原蛋白反应不受0.5μM（27±3Ω，n=3）、2μM（31±1Ω，n=3）和100μM（30±2Ω，n=4）浓度的影响。[1]

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抗血栓活性[1]
作为治疗前用药的12mg/kg+12mg/kg/h剂量的BMS-262084使颈动脉血栓重量减少了73±5%，并改善了血管通畅性和综合血流（图3）。较低的剂量水平无效。在其他实验中，赋形剂或BMS-262084的给药延迟了10分钟，此时血栓已达到赋形剂治疗大鼠最终重量的25%（图4）。使用这种治疗后方案，BMS-262084使血栓重量减轻了80±3%，并防止了所有药物治疗大鼠的闭塞。这种效果相当于从BMS-262084治疗开始预防了血栓的进一步生长。

BMS-262084作为预处理，对FeCl2诱导的腔静脉血栓形成也有效（图5）。与动脉模型相比，静脉模型的效力和疗效更高。静脉血栓重量减轻范围从0.2 mg/kg+0.2 mg/kg/h的38±9%到12 mg/kg+12 mg/kg/h的97±2%。2 mg/kg+2 mg/kg/h的剂量产生了78±5%的血栓减少，也在治疗后方案中进行了测试。在对照组大鼠中，首次施用FeCl2 20分钟后去除的腔静脉血栓重11.0±0.5mg（n=5）。当此时施用供试品时，在赋形剂处理的大鼠中观察到静脉血栓生长的显著增长（26.5±1.0 mg，n=5，与对照组相比P<0.05），但在BMS-262084处理的大白鼠中没有观察到（14.4±2.1 mg，n=7；与对照组比较不显著）。

当通过输注组织因子诱导腔静脉血栓形成时，BMS-262084在高达24 mg/kg+24 mg/kg/h的剂量水平下是无效的（图5）。

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对引发出血时间的影响[1]
与赋形剂治疗相比，6+6、12+12和24+24的BMS-262084剂量水平（mg/kg+mg/kg/h）没有延长角质层、肠系膜或肾脏出血时间（图6）。因此，选择肝素作为阳性对照，测试与BMS-262084的最大全身抗凝作用相匹配的剂量。

以33单位/千克加60单位/千克/小时的速度输注肝素，使活化的部分凝血活酶时间增加到对照组的3.16±0.15倍（n=9），相当于最高剂量BMS-262084（24 mg/kg+24 mg/kg/小时）时的3.19倍。该肝素剂量在所有三种出血模型中均产生了显著影响（P<0.05）。在表皮模型（179±11至280±29秒，增加1.62±0.21倍，n=9）、肠系膜模型（53±6至89±14秒，增加1.6±0.12倍，n=5）和肾模型（75±4至98±4秒，增加1.33±0.09倍，n=11）中，肝素引起的出血相对延长不到一倍。

对人丝氨酸蛋白酶的选择性[1]
在室温下，在96孔微孔板中使用酶（因子XIa为0.5 nM）与BMS-262084在缓冲溶液中孵育3分钟，测量因子XIa活性和所有其他酶测定（对于因子XIa，pH 7.4为145 mM NaCl、5 mM KCl、1 mg/ml PEG 8000、30 mM HEPES）。孵育后，加入适当的合成底物以开始反应（因子XIa为100μM S-2366，Km=86μM）。在以动力学模式操作的Spectro Max Plus平板读数器中在405nm处测量酶速度，并使用相关的SOFTmax Pro®软件进行分析。XLfit使用至少3个单独实验的数据计算了产生50%抑制作用的BMS-262084浓度（IC50）
应用上述方法，使用10μM S-2238（Km=2.54μM）在0.145 M NaCl、0.005 M KCl、1 mg/ml聚乙二醇（PEG-8000）、0.030 M HEPES（pH 7.4）中测量人α-凝血酶（0.03 U/ml）的酶活性。在与α-凝血酶相同的缓冲液中，分别使用100μM的S-2222（Km=87μM）、光谱酶组织纤溶酶原激活剂（Km=90μM）和S-2444（Km=31μM）测定因子Xa（0.033 U/ml）、组织纤溶酶原活化剂（3703 U/ml。使用100μM S-2251（Km=98μM）在50 mM Tris（pH 7.8）中测量纤溶酶活性（0.23 nM）。因子XIIa（15 nM）测定包括150 mM NaCl、50 mM Tris（pH 8.2）、50 mM咪唑和100μM光谱酶FXIIa（Km=40.2μM）。在100 mM NaCl、5 mM CaCl2、33%乙二醇、50 mM Tris（pH 7.5）中，用100μM光谱酶因子IXa（Km>100μM）测量因子IXa的活性（20 nM）。使用因子VIIa（1 nM）和等摩尔组织因子在20 mM HEPES、150 mM NaCl、5 mM CaCl2、1 mM CHAPS和1 mg/ml PEG 6000（pH至7.4）中，并使用100μM S-2288（Km>500μM）测量与因子VIIa复合的组织因子的活性。激肽释放酶（5 nM）测定使用50 mM Tris（pH 8.2）、50 mM咪唑和150 mM NaCl，以及50μM Spectrozyme血浆激肽释放肽（Km=15.2μM）。在50 mM Tris（pH 8.0）和2 mM CaCl2中，用100μM色酶TRY（Km=26.6μM）测量胰蛋白酶（0.33μg/mL）的活性。类胰蛋白酶（0.67 nM）测定包括100 mM Tris（pH 8.0）、200 mM NaCl和100μg/ml低分子量重组肝素与200μM Z-gly-pro-arg-AMC（Km=237μM）。

体外凝血时间和血小板功能测定[1]
分别使用BBL纤维计和Dade Actin FSL和Dade凝血活酶-C试剂描述的程序在血浆中测量活化的部分凝血活酶时间和凝血酶原时间。凝血酶原时间试剂的国际敏感性指数为2.0。使用560-CA型Chrono-Log聚集仪描述的阻抗程序和试剂，在全血中测定大鼠血小板对20μg/ml胶原蛋白的聚集反应。血浆和血液样本来自新鲜抽取的动脉血，收集到1/10体积的3.8%柠檬酸钠中，如第2.4节所述，从麻醉大鼠中获得，或通过静脉穿刺从同意的人类志愿者中获得。

动物/疾病模型：雄性Sprague Dawley大鼠（310-390 g）用FeCl2[1]处理以诱导静脉血栓形成，剂量分别为：2 mg/kg + 2 mg/kg/h、6 mg/kg + 6 mg/kg/h、12 mg/kg + 12 mg/kg/h。
给药途径：静脉注射（iv），在给予FeCl2前10分钟。
实验结果：在12 mg/kg + 12 mg/kg/h剂量下，颈动脉血栓重量减少了73%。改善血管通畅性和整体血流。\n

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\n\n体内研究的动物准备和给药[1]
\n雄性Sprague Dawley大鼠（310至390克）购自Harlan实验室，所有针对这些动物进行的实验程序均已获得我院动物护理和使用委员会的批准。大鼠用戊巴比妥钠（50毫克/公斤，腹腔注射）麻醉，左颈静脉插管（聚乙烯-50导管）用于给药，气管插管（聚乙烯-205导管）以确保气道通畅。部分动物的颈动脉插管（聚乙烯-50导管）用于采集血样。
\n由于BMS-262084在大鼠体内的作用时间有限，因此采用静脉输注给药。试验药物以5分钟快速推注（1 ml/kg）的方式给药，随后持续输注（1 ml/kg/h）直至实验结束。BMS-262084剂量（mg/kg + mg/kg/h）包括0.2 + 0.2、0.5 + 0.5、2 + 2、6 + 6、12 + 12和24 + 24，剂量根据各模型进行调整。每只大鼠均接受2.5、2.6节（动脉血栓形成）、2.7节（静脉血栓形成）和2.8节（出血时间）中所述的其中一项操作。各剂量组的动物数量在结果和图中均有标明。\n

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\n\n体外凝血时间[1]
\n这些动物未进行血栓形成或出血时间试验，但用于测定这些试验中达到的全身抗凝效果。处理组包括赋形剂和不同剂量的BMS-262084（mg/kg + mg/kg/h），剂量分别为0.2 + 0.2、0.5 + 0.5、2 + 2、6 + 6、12 + 12和24 + 24。在试验药物输注开始前（0分钟对照）以及输注后5、15、30、60和90分钟，采集颈动脉血（0.6 mL，加入1/10体积的3.8%柠檬酸钠溶液），并在新鲜制备的血浆中测定活化部分凝血酶原时间。在BMS-262084剂量（mg/kg + mg/kg/h）分别为6 + 6、12 + 12和24 + 24时，也测定了凝血酶原时间。凝血时间测定方法见2.3节。\n

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\n\n动脉血栓形成[1]
\n暴露左侧颈动脉，并在血管下方插入一块“M”形封口膜。将电磁流量探头（内径1.0 mm）置于动脉上，并连接至MDL 1401型流量计。在进行基线流量测量后，将浸有50% FeCl2溶液的2 mm × 5 mm滤纸条置于流量探头下游的血管上方，持续10分钟。滤纸放置60分钟后取出颈动脉。血管纵向切开，取出血栓并立即用AE50天平称重。使用TA3800生理记录仪连续监测颈动脉血流量。颈动脉血流量积分值通过计算血流曲线下面积确定，并以60分钟内基线（0分钟）血流量的百分比进行标准化，从而衡量血栓形成过程中的血流量积分值。
\n共有两种治疗方案，一种是在血栓形成前进行治疗，另一种是在血栓形成至最大重量的约25%时才进行治疗。在预处理方案中，在开始输注试验药物10分钟后启动FeCl2诱导的血栓形成。预处理组包括载体组和BMS-262084剂量组（mg/kg + mg/kg/h），剂量分别为2 + 2、6 + 6和12 + 12。在延迟治疗方案中，移除FeCl2饱和滤纸后，立即开始输注载体和BMS-262084，剂量为12 mg/kg + 12 mg/kg/h。同时，在对照组大鼠中也测量了移除FeCl2时的血栓重量。\n

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\n\n静脉血栓形成[1]
\n使用了两种静脉血栓形成模型。在组织因子模型中，通过严重的但非闭塞性固定性狭窄阻断下腔静脉血流，并将组织因子注入股静脉。在血管损伤模型中，将FeCl2局部应用于无狭窄的下腔静脉。
\n在FeCl2诱导的损伤中，通过腹部正中切口分离下腔静脉，并在肾静脉和髂腰静脉之间进行钝性分离以清除表面组织。将浸有15%氯化铁溶液的2毫米×5毫米滤纸条置于下腔静脉上1分钟。滤纸敷贴60分钟后，分离下腔静脉，取出血栓并立即用梅特勒天平称重。在组织因子模型中，将聚乙烯-50导管插入左侧股静脉，并通过腹部正中切口分离下腔静脉。为了制造非闭塞性狭窄，将一根26号针头置于肾静脉远端下腔静脉上方，并将一段30号丝线穿过静脉下方并固定在针头上。然后将针头从结扎处滑出，形成固定性狭窄。通过股动脉导管以 1.4 ml/kg 的剂量输注人重组组织因子（1/10 稀释的 RecombiPlasTin，Ortho Diagnostics），在 2 分钟内完成，诱导血栓形成。组织因子注射后 25 分钟取出血栓并称重。
\n两种模型均采用预处理给药方案。BMS-262084 的剂量（mg/kg + mg/kg/h）在 FeCl2 模型中分别为 0.2 + 0.2、0.5 + 0.5、2 + 2 和 6 + 6，在组织因子模型中分别为 6 + 6、12 + 12 和 24 + 24。在开始输注载体或BMS-262084后10分钟进行血栓诱发（组织因子输注或FeCl2应用）。
\n在FeCl2模型中，载体或BMS-262084（12 mg/kg + 12 mg/kg/h）的输注也延迟至FeCl2应用后20分钟，这使得血栓在给予受试物前生长至最大值的41%。

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\n\n出血时间[1]
\n出血时间的测定方法为切开肾皮质或角质层，并穿刺肠系膜小血管。在每个模型中，出血时间均从损伤发生时开始计算，直至出血停止30秒。重复出血实验的出血量取平均值作为统计比较。
\n在肾脏模型中，通过腹部正中切口暴露双肾。去除肾包膜后，用37℃的林格氏液灌注肾皮质。使用Surgicutt模板制作切口，该模板由弹簧式手术刀片（25号，锋利刀尖）切割出5毫米长、1毫米深的切口，并在3倍双目放大镜下观察出血情况。在右肾输注试验药物前和左肾输注试验药物15分钟后分别测定出血时间。
\n在角质层模型中，用单刃剃须刀片在甲床与甲片交界处切开趾甲。立即用37℃的林格氏液灌注角质层，并在3倍双目放大镜下观察出血情况。在给予试验药物前，分别在左后爪和给予试验药物15分钟后，分别在右后爪重复测定三次出血时间。
\n在肠系膜模型中，通过腹部正中切口将小肠外翻。用钳子固定空肠，并用37℃的林格氏液灌注。使用SZH10体视显微镜观察垂直于肠系膜动脉分支并走行于空肠表面的小血管。用30号皮下注射针穿刺血管。在给予受试药物前，以及在开始输注受试药物20分钟后，分别在3-5条血管中测定出血时间。
\nBMS-262084在每种出血模型中分别以6 + 6、12 + 12和24 + 24 mg/kg/h的剂量给药。每种模型中还研究了肝素作为阳性对照。在这些实验中，采用与BMS-262084相同的程序测试了赋形剂或肝素（33 U/kg + 60 U/kg/h）。肝素剂量的选择基于体外活化部分凝血酶原时间（APTT）的增加，以达到BMS-262084的最大抗凝效果。

[1]. Antithrombotic and hemostatic effects of a small molecule factor XIa inhibitor in rats. Eur J Pharmacol. 2007 Sep 10;570(1-3):167-74.

[2]. A stereoselective synthesis of BMS-262084, an azetidinone-based tryptase inhibitor. J Org Chem. 2002 May 31;67(11):3595-600.

本研究在血栓形成和止血的大鼠模型中测定了抑制活化凝血因子XIa的作用。BMS-262084是一种不可逆且选择性的小分子因子XIa抑制剂，对人因子XIa的IC50为2.8 nM。在0.14 μM和2.2 μM浓度下，BMS-262084分别使人血浆和大鼠血浆中的活化凝血活酶时间延长一倍。与因子XIa抑制作用一致，在浓度高达100 μM时，凝血酶原时间未受影响。静脉负荷加持续输注BMS-262084可有效抑制FeCl2诱导的下腔静脉和颈动脉血栓形成。在预处理剂量为 12 mg/kg + 12 mg/kg/h 时，血栓重量分别最大程度地减少了 97% 和 73% (P<0.05)，同时体外活化凝血酶原时间延长至对照组的 3.0 倍。该剂量水平在部分血栓形成后给药时，也能抑制静脉和动脉血栓的生长。BMS-262084 对 FeCl₂ 诱导的静脉血栓形成最为有效，在阈值剂量为 0.2 mg/kg + 0.2 mg/kg/h 时，血栓重量减少了 38% (P<0.05)。相比之下，高达 24 mg/kg + 24 mg/kg/h 的剂量对组织因子诱导的静脉血栓形成或体外凝血酶原时间均无影响。剂量高达 24 mg/kg + 24 mg/kg/h 也未显著延长由小肠系膜血管穿刺、肾皮质模板切开或皮肤切开引起的出血时间。这些结果表明，因子 XIa 的药理学抑制可达到抗血栓疗效，且对诱发性出血的影响极小。[1]

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我们开发了一种新型类胰蛋白酶抑制剂 BMS-262084 的高立体选择性合成方法。该合成的关键在于发现并开发了一种高非对映选择性的二酯 12 脱甲氧羰基化反应，生成反式氮杂环丁酮 13。BMS-262084 由 D-鸟氨酸经 10 步反应制得，总收率为 30%。[2]

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BMS-262084 的体外活性谱与选择性抑制因子 XIa 相符。研究人员利用参与凝血和纤溶的人类丝氨酸蛋白酶，以及选择性延长人和大鼠血浆中的活化部分凝血酶原时间（APTT）而非凝血酶原时间（PT），证实了BMS-262084的作用。然而，BMS-262084不仅是一种强效的XIa因子抑制剂，它还是类胰蛋白酶（肥大细胞分泌的主要蛋白酶，被认为参与哮喘反应）的等效且不可逆抑制剂。早期对过敏性支气管收缩和气道炎症的研究表明，雾化吸入BMS-262084具有保护作用（Sutton等，2002）。因此，在使用BMS-262084作为血栓形成和止血研究工具之前，需要考虑肥大细胞类胰蛋白酶在凝血和纤溶中的作用。基于其在动脉粥样硬化斑块（Jeziorska等人，1997）和深静脉血栓形成（Bankl等人，1999）中的存在，含有类胰蛋白酶的肥大细胞可能参与人类血管疾病。在这些病例中，观察到肥大细胞主要聚集在血管壁内，由此提出了肥大细胞参与动脉粥样硬化发生、血管修复和血栓事件消退的假设（Valent等人，2002）。部分血管活性活动可归因于肥大细胞衍生的肝素和组织型纤溶酶原激活剂，但类胰蛋白酶本身可能通过切割内皮细胞的蛋白酶激活受体2 (PAR2) 来调节血管反应（Meyer等，2005）。肥大细胞对凝血（Samoszuk等，2003）和血小板功能（Gardiner等，1999）的直接影响似乎更多地与释放的肝素而非类胰蛋白酶相关。目前的数据最支持类胰蛋白酶在慢性血栓形成和血管炎症中发挥复杂作用的观点。在我们的模型中，闭塞性血栓在主要血管壁发生氧化后迅速形成，这一过程不太可能受到内源性类胰蛋白酶的影响。此外，也缺乏证据表明肥大细胞参与了小血管损伤引起的短暂性失血的止血。因此，BMS-262084 在急性实验性止血和血栓形成中的作用很可能是由于因子 XIa 抑制，而非类胰蛋白酶抑制。
BMS-262084 可使体外活化部分凝血活酶时间增加高达 3.2 倍。这种体外活性平台期在体外实验中并未出现。大鼠体内对 BMS-262084 暴露-反应有限的原因尚不清楚，但这妨碍了我们评估最大水平因子 XIa 抑制的影响。尽管如此，BMS-262084 对 FeCl2 诱导的血栓形成的保护作用与之前使用肝素、低分子量肝素和凝血酶抑制剂的研究结果相当（Schumacher 等，1993；Schumacher 等，1996）。在腔静脉和颈动脉中，无论是在血栓形成之前还是部分血栓形成之后开始使用BMS-262084治疗，都能抑制闭塞性血栓的形成和生长。
BMS-262084对组织因子输注诱导的静脉血栓形成没有影响，也不会延长凝血酶原时间。在这些情况下，由高水平组织因子启动的凝血过程几乎不受因子XIa的影响。相反，研究发现，因子XI能够增强低水平组织因子诱导的血栓形成（von dem Borne等人，2006）。 BMS-262084 的抗血栓活性并非由于其直接的抗血小板作用，因为在无凝血条件下测得的聚集反应不受该拮抗剂的影响。
在我们的实验中，氧化损伤导致血管壁全层损伤部位出现血小板聚集和纤维蛋白形成（Wang et al., 2007）。然而，在兔髂动脉重复球囊损伤模型（Yamashita等，2006）和猴动静脉分流模型（Gruber和Hanson，2003）中也证实了因子XIa抑制剂的有效性。缺乏因子XII的小鼠（其因子XI的接触相关激活受损）也能免受氧化损伤或压迫损伤引起的动脉血栓形成（Renné等，2005）。
BMS-262084的一个令人鼓舞的特性是，在三种诱发出血模型中，使用抗血栓剂量时，未观察到明显的出血时间延长。这些模型对抗凝剂敏感，如肝素所示，肝素可使出血时间略微延长，最高可达对照组的1.6倍。一种能够显著延长体外活化部分凝血酶原时间（例如，延长5倍）的因子XIa抑制剂，将能更好地界定该靶点的出血风险上限。小血管出血的止血可能需要有限的因子XI活化，从而限制了因子XIa抑制不完全的止血效果。该靶点的安全性还得到了以下报道的支持：在因子XI基因敲除小鼠中，该抑制剂在诱导出血的情况下表现出抗血栓活性（Rosen等人，2002；Wang等人，2005），并且在因子XIa中和抗体的作用下也观察到了类似的结果（Minnema等人，1998；Gruber和Hanson，2003；Yamashita等人，2006）。
BMS-262084的体内特性表明，因子XIa是一个出血风险有限的、有吸引力的抗血栓靶点。对血小板与凝血之间相互关系的持续研究进一步支持了这一靶点。因子XIa和因子XIIa有助于实验动物体内凝血酶的最佳激活和稳定的血栓形成（Colman，2003）。因子XIa的生成和活性似乎与血小板活化密切相关（Walsh，2003），这可以解释在血小板占主导地位的血栓性疾病中抑制或耗竭因子XIa的益处。调节凝血酶生成和纤溶（von dem Borne等，2006）也可能有助于抗血栓疗效。因子XIa相对于凝血酶和因子Xa等更成熟的抗凝靶点可能具有的优势，仍然是目前积极探索的领域。[1]

C18H31N7O5

425.48

425.239

C, 50.81; H, 7.34; N, 23.04; O, 18.80

253174-92-4

253172-74-6 (HCl);253174-92-4;

9802488

White to off-white solid powder

0.616

175.65

4

6

6

30

721

2

CC(C)(C)NC(=O)N1CCN(CC1)C(=O)N2[C@@H]([C@H](C2=O)CCCN=C(N)N)C(=O)O

MFTQITSPGQORDA-NEPJUHHUSA-N

InChI=1S/C18H31N7O5/c1-18(2,3)22-16(29)23-7-9-24(10-8-23)17(30)25-12(14(27)28)11(13(25)26)5-4-6-21-15(19)20/h11-12H,4-10H2,1-3H3,(H,22,29)(H,27,28)(H4,19,20,21)/t11-,12+/m1/s1

(2S,3R)-1-[4-(tert-butylcarbamoyl)piperazine-1-carbonyl]-3-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-4-oxoazetidine-2-carboxylic acid

BMS-262084; BMS262084; BMS-262084; 253174-92-4; UNII-I0IR71971G; I0IR71971G; (-)-BMS-262084; 2-Azetidinecarboxylic acid, 3-(3-((aminoiminomethyl)amino)propyl)-1-((4-(((1,1-dimethylethyl)amino)carbonyl)-1-piperazinyl)carbonyl)-4-oxo-, (2S,3R)-; CHEMBL71037; (2S,3R)-1-[4-(tert-butylcarbamoyl)piperazine-1-carbonyl]-3-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-4-oxoazetidine-2-carboxylic acid; BMS 262084

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~117.51 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。