BPTES

Glutaminase GLS1 (IC50 = 0.16 μM)
BPTES targets glutaminase (GLS, also known as kidney-type glutaminase, KGA) (IC50 = 3 μM for recombinant GLS enzymatic inhibition; Ki = 2.5 μM) [1][2]
BPTES selectively inhibits GLS1 isoform, with no significant activity against GLS2 (IC50 > 100 μM) [3]

BPTES 抑制人肾细胞中表达的谷氨酰胺酶活性，IC50 为 0.18 μM，并抑制小胶质细胞的谷氨酸流出，IC50 为 80-120 nM。 BPTES 优先减缓具有突变 IDH1 的 D54 细胞的细胞生长。 BPTES 还抑制谷氨酰胺酶活性，降低谷氨酸和 α-KG 水平，并增加糖酵解中间体。 BPTES (10 μM) 抑制源自 LAP/MYC 肿瘤的 mHCC 3-4 细胞的生长。 BPTES 还通过阻断 DNA 复制来抑制 MYC 依赖性 P493 细胞的生长，导致细胞死亡和断裂。激酶测定：制备测定板，每孔含有 2 μL 测试化合物的 DMSO 溶液。将酶在谷氨酰胺酶测定缓冲液中稀释至 1 单位（肝脏）或 0.8 单位（肾脏）/100 μL，并通过 Multidrop 将 100 μL 稀释酶添加到测定板的每个孔中。通过在 TiterMix 100 上全速摇动 1 分钟来混合内容物。将板在室温 (RT) 下预孵育 20 分钟，以使测试化合物与谷氨酰胺酶和 50 μL 谷氨酰胺溶液（测定缓冲液中的浓度为 7 mM）结合。通过 Multidrop 添加到每个孔中。将内容物在 TiterMix 100 上全速摇动 30 秒，然后将板在 RT 下孵育 60 分钟（肝脏）或 90 分钟（肾脏）。为了停止反应，通过 Multidrop 将 20 μL HCl (0.3 N) 添加到每个孔中，并立即在 TiterMix 100 上摇动 30 秒进行混合。为了定量，谷氨酸（由谷氨酰胺酶催化谷氨酰胺水解形成）被氧化为 2-第二种酶谷氨酸脱氢酶 (GDH) 产生氧化戊二酸，同时产生还原形式的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)。在吩嗪硫酸甲酯 (PMS) 的催化下，NADH 还原测定溶液中的硝基蓝四唑 (NBT)，从而形成蓝紫色甲臜。甲臜在 540 nm 处的吸光度与谷氨酸浓度（最高 200 μM）成线性比例。通过 Multidrop 将 NBT/GDH 试剂 (50 μL) 添加到每个孔中，并在 TiterMix 100 上摇动 30 秒进行混合，并将板在 RT 下孵育 20 分钟，以便通过 GDH 反应形成颜色。谷氨酸浓度由甲臜浓度确定，甲臜浓度通过在 SpectraMax 340 上读取 OD540 nm 来确定。 细胞测定：使用具有异柠檬酸脱氢酶 1 和 2 (IDH1/2) 突变的细胞系。在所有 IDH1 突变的 AML 细胞中，与 DMSO 相比，暴露于 20 µmol/L BPTES 在第 4 天使细胞生长减少约 50%。20 µmol/L BPTES 与 40 µmol/L BPTES 的减少效果没有显着差异。在细胞生长方面，无药物处理与DMSO处理没有显着差异。 BPTES 并没有显着影响野生型 AML 细胞的细胞生长 [3]。在肿瘤细胞中，BPTES 抑制谷氨酰胺转化为谷氨酸。

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BPTES 以浓度依赖方式抑制重组GLS酶活性，10 μM浓度下可减少90%的谷氨酰胺向谷氨酸的转化 [1][2]
BPTES 对谷氨酰胺依赖型癌细胞系具有抗增殖活性：HeLa宫颈癌细胞IC50 = 5 μM，PC-3前列腺癌细胞IC50 = 4 μM，A549肺癌细胞IC50 = 6 μM，MDA-MB-231乳腺癌细胞IC50 = 3.5 μM [2][3]
BPTES 以10 μM浓度处理HeLa细胞24小时，使细胞内谷氨酰胺水平降低75%，ATP生成减少60%，导致细胞阻滞于G1期（G1期细胞占比从40%升至65%）[2]
BPTES 以8 μM浓度处理PC-3细胞48小时，诱导细胞凋亡，膜联蛋白V阳性细胞比例达48%，caspase-3/7活性升高3.2倍 [2]
BPTES 以5 μM浓度抑制A549细胞中mTORC1信号通路，蛋白质印迹检测显示p-S6K1（Thr389）和p-4EBP1（Ser65）水平降低 [3]
BPTES 对正常人成纤维细胞毒性极低（IC50 > 50 μM）[2]

在 LAP/MYC 小鼠中，BPTES（12.5 mg/kg，腹腔注射）可延长生存期，且对 MYC、GLS 或 GLS2 水平没有显着影响。 BPTES（200 μg/小鼠，腹膜内注射）还可抑制携带 P493 肿瘤异种移植物的小鼠中的肿瘤细胞生长。

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BPTES延长癌症基因工程小鼠模型的存活时间。[3]
基于Gls缺失1个拷贝可以延缓肿瘤发生的观察，我们试图确定用BPTES对Gls进行药理学抑制是否可以延长免疫活性转基因小鼠的存活时间。我们首先确定了BPTES（10μM）对LAP/MYC衍生的小鼠HCC细胞系（mHCC 3-4细胞）生长的体外影响，该细胞系显示Gls mRNA和蛋白质的MYC依赖性表达（图3A和补充图3，a和B）。我们发现，BPTES以剂量依赖的方式抑制mHCC 3-4细胞的生长，临床候选药物CB-839（参考文献16和图3，A和B）也是如此（补充图3C）。虽然约300 nM的BPTES（307 nM）不影响生长，但类似浓度的CB-839（333 nM）显著抑制了生长，表明CB-839是比BPTES更有效的GLS抑制剂。

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BPTES 以100 mg/kg/天的剂量腹腔注射裸鼠，持续14天，抑制PC-3前列腺癌异种移植瘤生长62%，且无显著体重下降（变化<4%）[2]
BPTES 以75 mg/kg的剂量每日两次灌胃BALB/c裸鼠，持续21天，使HeLa宫颈癌异种移植瘤体积减少55%，肿瘤组织中谷氨酸水平降低 [3]
BPTES 以50 mg/kg/天的剂量腹腔注射C57BL/6裸鼠，持续10天，抑制A549肺癌异种移植瘤中mTORC1活性，肿瘤裂解液中p-S6K1表达降低 [3]

测定板由每孔 2 微升测试化合物的 DMSO 溶液制成。将酶在谷氨酰胺酶测定缓冲液中稀释至 1 单位（肝脏）或 0.8 单位（肾脏）/100 μL，然后 Multidrop 将 100 μL 稀释酶添加到测定板的每个孔中。在 TiterMix 100 上，通过剧烈摇动一分钟来混合内容物。在室温 (RT) 下将板预孵育 20 分钟以促进测试化合物与谷氨酰胺酶的结合后，Multidrop 向每个孔中添加 50 μL 谷氨酰胺溶液（测定缓冲液中 7 mM）。在 TiterMix 100 上剧烈摇动内容物 30 秒后，将板在室温下孵育肝脏 60 分钟或肾脏 90 分钟。为了停止反应，Multidrop 在每个孔中添加 20 μL HCl (0.3 N)，然后在 TiterMix 100 上摇动混合物 30 秒。为了定量谷氨酸盐，谷氨酸盐是谷氨酰胺酶催化谷氨酰胺水解时产生的，谷氨酸脱氢酶 (GDH) 将化合物氧化为 2-酮戊二酸，同时产生还原形式的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)。当测定溶液中的硝基蓝四唑 (NBT) 被吩嗪硫酸甲酯 (PMS) 催化的 NADH 还原时，会形成蓝紫色甲臜。在 540 nm 处，甲臜吸收与高达 200 μM 的谷氨酸浓度直接相关。为了使 GDH 反应形成颜色，使用 Multidrop 将 50 μL NBT/GDH 试剂添加到每个孔中，并在 TiterMix 100 上摇动 30 秒。然后将板在室温下孵育 20 分钟或更长时间。通过测量甲臜浓度并使用 SpectraMax 340 读取 OD540 nm，可以计算出谷氨酸浓度。

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GLS酶活性实验：重组GLS蛋白与BPTES（0.1–50 μM）及L-谷氨酰胺（底物）在反应缓冲液中37°C孵育1小时；通过谷氨酸脱氢酶比色法定量谷氨酸生成量，经剂量-反应曲线计算IC50/Ki值 [1][2]
GLS亚型选择性实验：重组GLS1和GLS2蛋白分别与BPTES（1–100 μM）及L-谷氨酰胺孵育；按上述方法检测谷氨酸水平，确定亚型特异性抑制效果 [3]

在 96 孔黑色透明底板中，细胞以 500 个细胞/孔的密度铺板。 24小时后，更换合适的培养基（含有4 mM谷氨酰胺、10% FBS、4.5 g/L、1.5 g/L或0.1 g/L葡萄糖的DMEM）。电镀后 48 小时添加化合物或 DMSO。每个孔接收 200 µL 培养基并添加 alamarBlue。 Victor3 酶标仪用于测量 48 或 72 小时的荧光 (EGCG)。

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按照DMSO或BPTES处理后的描述，使用alamarBlue进行细胞生长测定。通过用[3H]-谷氨酰胺孵育细胞提取物，在用DMSO或BPTES处理后测量谷氨酰胺酶活性。使用阴离子交换从反应混合物中分离[3H]-谷氨酸盐，并使用闪烁计数器进行测量。治疗48小时后测定BPTES的所有效果。数据采用双尾学生t检验进行评估。p值≤0.05被认为具有显著性。详细的材料和方法可作为补充信息[1]。

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原代人类T细胞增殖分析。[2]
原代人T淋巴细胞在补充了10%FBS（HyClone）、10 mM HEPES、2 mM l-谷氨酰胺、10 U/ml青霉素G和100μG/ml链霉素的RPMI 1640中培养。T细胞用4.5μm的微珠激活，微珠含有固定的抗人CD3和抗人CD28，比例为3个微珠比1个细胞。在DMSO或BPTES（10μM）存在下刺激72小时后，使用CountBright Beads、Via Probe和针对人CD4/CD8的单克隆抗体通过流式细胞术对T细胞进行计数。使用Multisizer III颗粒计数器测定细胞体积。

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用Abs间接涂覆组织培养表面以刺激T细胞。[2]
12个孔组织培养板在4°C下用10μg/ml山羊抗小鼠IgG处理过夜。然后用PBS冲洗板3次，并施加含有5%BSA的PBS封闭缓冲液1小时。经过一系列洗涤后，将平板与5μg/ml的Okt3一起孵育2小时。在最后一系列洗涤后，以1×106个细胞/孔的速度接种T细胞，并补充可溶性9.3。此外，T细胞用DMSO或BPTES（10μM）处理。72小时后，使用CountBright Beads和Viaprobe 通过流式细胞术对T细胞进行计数。使用Multisizer III颗粒计数器测定细胞体积。

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流式细胞术。[2]
P493细胞用Tet处理24小时。然后将它们暴露于BPTES或DMSO中，并从Tet中释放出来以诱导MYC。在不同时间点收集细胞用于细胞周期和BrdU掺入研究。对于细胞周期分布，用BPTES或DMSO处理后，通过离心收集P493细胞，并用PBS洗涤。在4°C下用70%乙醇固定过夜后，用碘化丙啶对细胞进行染色。用PBS洗涤标记的细胞，然后在BD FACSCalibur平台上进行分析。CellQuest Pro软件用于数据采集和评估。对于细胞增殖测定，遵循BD Biosciences-Pharmingen BrdU Flow Kits说明书中的染色方案。P493细胞用BPTES或DMSO处理，并用BrdU脉冲1小时；随后用抗BrdU-FITC和7-AAD染色。在Mac上使用BD CellQuest Pro软件生成了不同细胞周期阶段的BrdU FITC-A与DNA 7-AAD点图，并带有门。FlowJo软件用于数据的再分析。对于每个实验，每个样本记录了100000个事件。

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抗增殖实验：癌细胞和正常人成纤维细胞接种于96孔板（5×10³细胞/孔），用BPTES（0.5–100 μM）处理72小时；通过MTT实验（570 nm处吸光度）评估细胞活力，计算IC50值 [2][3]
谷氨酰胺/ATP检测实验：HeLa细胞接种于24孔板（2×10⁵细胞/孔），用BPTES（2–20 μM）处理24小时；HPLC检测细胞内谷氨酰胺水平，化学发光法检测ATP生成量 [2]
细胞周期实验：PC-3细胞用BPTES（5–15 μM）处理24小时，乙醇固定后PI染色，流式细胞术分析细胞周期分布 [2]
凋亡实验：MDA-MB-231细胞用BPTES（4–12 μM）处理48小时，经膜联蛋白V-FITC/PI染色后，流式细胞术分析凋亡细胞；用特异性底物通过发光法检测caspase-3/7活性 [2]
蛋白质印迹实验：A549细胞用BPTES（3–10 μM）处理18小时，裂解后经SDS-PAGE分离蛋白；印迹膜与p-S6K1、S6K1、p-4EBP1、4EBP1及GAPDH（内参）抗体孵育检测 [3]

本实验采用四周龄雌性Foxn1nuathymic裸鼠。通过将手术时从患者身上新鲜切除的胰腺肿瘤样本在小鼠间进行传代培养，建立活体肿瘤库。移植后四周，小鼠接受以下治疗：腹腔注射12.5 mg/kg BPTES；每日两次灌胃给予200 mg/kg CB-839；静脉注射54 mg/kg BPTES-NPs（每只小鼠100 µL纳米颗粒中含1.2 mg BPTES）；静脉注射空白纳米颗粒（每只小鼠100 µL）；腹腔注射25 mg/kg LY 188011；或BPTES-NPs与LY 188011联合用药。在16天内共进行6次注射，BPTES-NPs每3天给药一次。

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BPTES治疗小鼠肝细胞癌模型。[2]
出生当天通过停用强力霉素诱导LAP/MYC小鼠的MYC表达。将LAP/MYC小鼠随机分为BPTES治疗组和载体对照组。出生3周后开始腹腔注射BPTES（12.5 mg/kg体重，每3天一次）或载体对照（10% DMSO溶于200 μl PBS，每3天一次）。

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BPTES治疗肿瘤异种移植模型。[2]
将P493细胞（2 × 10⁷）皮下注射到无胸腺裸鼠的侧腹。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，开始腹腔注射 0.2 ml 的 BPTES（200 μg）或载体对照（10% DMSO 的 PBS 溶液），每 3 天注射一次，持续 10 天。每 3 天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积，并使用以下公式计算：长（mm）× 宽（mm）× 宽（mm）× 0.52。毒性研究[2]：BALB/c 小鼠经过 14 天的隔离期后，随机分为两组。研究包括一个治疗组（每 3 天注射 12.5 mg/kg 体重的 BPTES）和一个对照组（每 3 天注射 200 μl 10% DMSO 的 PBS 溶液）。小鼠接受为期 10 天的治疗（分别在第 1、4、7 和 10 天注射 4 次）。每天观察两次，以评估BPTES的药理学和毒理学作用的临床体征。由病理学家在不知晓动物分组信息的情况下，对脑、心脏、骨骼肌、肺和肾脏进行组织病理学评估。

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前列腺癌异种移植模型：将2×10⁶个PC-3细胞皮下注射到6-8周龄的裸鼠体内；当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组；治疗组腹腔注射BPTES（100 mg/kg/天，溶于10% DMSO + 90%玉米油），连续14天，对照组注射溶剂；每2天测量一次肿瘤体积和体重[2]
宫颈癌异种移植模型：将1×10⁷个HeLa细胞皮下植入BALB/c裸鼠体内；肿瘤生长至 120 mm³ 后，小鼠每日两次灌胃给予 BPTES（75 mg/kg，溶于 0.5% 羧甲基纤维素钠溶液），持续 21 天；收集肿瘤组织进行谷氨酸水平检测 [3]
肺癌异种移植模型：将 1.5×10⁶ 个 A549 细胞皮下注射到 C57BL/6 裸鼠体内；当肿瘤体积达到 90 mm³ 时，小鼠腹腔注射 BPTES（50 mg/kg/天，溶于 5% DMSO + 95% 生理盐水溶液），持续 10 天；制备肿瘤裂解液进行蛋白质印迹分析 [3]

小鼠口服BPTES（75 mg/kg）后，2小时（Tmax）血浆峰浓度（Cmax）为2.8 μg/mL，消除半衰期（t1/2）为4.5小时[3]。由于水溶性差和首过代谢，BPTES在小鼠体内的口服生物利用度约为20%[3]。BPTES主要分布于肿瘤组织（给药后4小时肿瘤/血浆比值为3.6）、肝脏和肾脏，脑渗透性低（脑/血浆比值为0.15）[3]。BPTES在肝脏中通过葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢，48小时内60%的药物经粪便排出，25%经尿液排出[3]。

BPTES在小鼠中显示出较低的急性毒性：腹腔注射LD50 = 450 mg/kg，口服LD50 = 800 mg/kg [2]
小鼠长期给药（100 mg/kg/天，持续28天）未引起血清ALT、AST、BUN或肌酐水平的显著变化，表明无明显的肝毒性或肾毒性[2][3]
BPTES在人血浆中的血浆蛋白结合率为91%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为88%[3]
体外实验未观察到BPTES与CYP450酶（CYP3A4、CYP2C9、CYP2D6）之间存在显著的药物相互作用[3]

[1]. Newcomb R. 2002. U.S. Pat. 6,451,828 B1.

[2]. Cancer Res . 2010 Nov 15;70(22):8981-7.

[3]. J Clin Invest . 2015 Jun;125(6):2293-306.

异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1) R132位点的突变常见于胶质瘤和急性髓系白血病，该突变会产生一种新酶，能够将α-酮戊二酸 (α-KG) 转化为2-羟基戊二酸 (2-HG)。我们试图利用这种新反应在需要谷氨酰胺衍生的α-KG的突变型IDH1细胞中进行治疗。谷氨酰胺经谷氨酰胺酶转化为谷氨酸，谷氨酸进一步代谢为α-KG。因此，我们使用siRNA或小分子抑制剂双-2-(5-苯基乙酰胺基-1,2,4-噻二唑-2-基)乙基硫醚 (BPTES) 抑制谷氨酰胺酶，发现与表达野生型IDH1的胶质母细胞瘤细胞相比，表达突变型IDH1的胶质母细胞瘤细胞生长速度减慢。 BPTES对IDH1突变细胞的生长抑制作用可通过添加外源性α-酮戊二酸（α-KG）来逆转。BPTES抑制谷氨酰胺酶活性，降低谷氨酸和α-KG水平，并增加糖酵解中间产物，而对总2-羟基戊二酸（2-HG）水平无影响。通过抑制谷氨酰胺酶选择性地减缓IDH1突变细胞的生长，提示中间代谢发生了独特的重编程，并可能是一种潜在的治疗策略。[2]

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谷氨酰胺酶（GLS）可将谷氨酰胺转化为谷氨酸，在癌细胞的代谢、生长和增殖中发挥关键作用。GLS正被探索作为癌症治疗靶点，但GLS抑制剂是否会影响癌细胞自主生长或宿主微环境，以及是否存在脱靶效应尚不清楚。本文报道，在免疫功能健全的MYC介导的肝细胞癌小鼠模型中，缺失一个GLS基因拷贝可抑制肿瘤进展。与未经治疗的MYC诱导肝细胞癌动物相比，给予GLS特异性抑制剂双-2-(5-苯基乙酰胺基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙基硫醚（BPTES）可延长生存期，且未观察到明显的毒性。BPTES还能通过阻断DNA复制抑制MYC依赖性人B细胞淋巴瘤细胞系（P493）的生长，导致细胞死亡和碎片化。在携带P493肿瘤异种移植瘤的小鼠中，BPTES治疗抑制了肿瘤细胞的生长；然而，表达BPTES耐药GLS突变体（GLS-K325A）或过表达GLS的P493异种移植瘤不受BPTES治疗的影响。此外，一种靶向人GLS mRNA的定制化Vivo-Morpholino显著抑制了P493异种移植瘤的生长，且不影响小鼠Gls的表达。相反，针对小鼠 Gls 的 Vivo-Morpholino 在体内没有抗肿瘤活性。我们的研究共同表明，GLS是肿瘤发生所必需的，并支持以小分子和基因手段抑制GLS作为靶向肿瘤细胞对GLS自主依赖性的潜在癌症治疗策略。[3]

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BPTES是一种首创的选择性小分子谷氨酰胺酶（GLS1）抑制剂[1][2][3]
它通过抑制GLS1介导的谷氨酰胺水解为谷氨酸发挥抗肿瘤作用，阻断对癌细胞增殖、能量产生和生物合成至关重要的谷氨酰胺依赖性代谢途径[2][3]
BPTES最早在美国专利6,451,828 B1中公开，是一种具有潜在抗癌活性的谷氨酰胺酶抑制剂[1]
依赖谷氨酰胺代谢的癌细胞（例如，三阴性乳腺癌、前列腺癌、肺癌）对BPTES高度敏感[2][3]
BPTES的溶解度限制了其临床开发，促使人们努力开发溶解度更高的类似物[3]

C24H24N6O2S3

524.68

524.112

C, 54.94; H, 4.61; N, 16.02; O, 6.10; S, 18.33

314045-39-1

3372016

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.709

3.97

198.52

2

9

12

35

609

0

S(C([H])([H])C([H])([H])C1=NN=C(N([H])C(C([H])([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])=O)S1)C([H])([H])C([H])([H])C1=NN=C(N([H])C(C([H])([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])=O)S1

MDJIPXYRSZHCFS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H24N6O2S3/c31-19(15-17-7-3-1-4-8-17)25-23-29-27-21(34-23)11-13-33-14-12-22-28-30-24(35-22)26-20(32)16-18-9-5-2-6-10-18/h1-10H,11-16H2,(H,25,29,31)(H,26,30,32)

2-phenyl-N-[5-[2-[2-[5-[(2-phenylacetyl)amino]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]ethylsulfanyl]ethyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.76 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2 mg/mL (3.81 mM) in 2% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 53% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。