Brilliant Blue G-250   中文名称: 亮蓝G

Dye reagent

使用亮蓝G-250对聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质进行染色
1. 溶液的制备
考马斯亮染色液：
1） 将100克硫酸铝（14-18水合物）溶解在2000毫升Milli-Q水中
2） 加入200毫升96%乙醇并充分混合
3） 加入0.4克亮蓝g-250，搅拌至完全溶解
4） 在持续搅拌的同时缓慢加入47mL 85%磷酸
5） 使用Milli-Q水将最终体积调节至2000 mL
注意：不要过滤溶液。它应该与悬浮颗粒保持胶体状态
脱色液：
取2000 mL Milli-Q水，加入200 mL 96%乙醇和47 mL 85%磷酸
2. 染色流程
凝胶处理：
1） 蛋白质电泳后，小心地从玻璃板上取下凝胶
2） 用Milli-Q水冲洗凝胶三次，每次10分钟，以去除SDS
3） 使用前摇动考马斯染色溶液，以确保胶体颗粒均匀分散
4） 将凝胶浸入染色溶液中，在摇床上搅拌2-12小时
染色过程：
蛋白质带将在10分钟后开始出现，2小时内达到80%的染色
为了获得最佳染色效果，建议过夜染色
脱色：
1） 染色后，去除染色溶液，用Milli-Q水冲洗凝胶两次
2） 将凝胶放入脱色溶液中搅拌10-60分钟，以去除多余的染料
3. 清洗和储存
1） 用Milli-Q水再冲洗凝胶两次，以恢复其原始厚度
2） 凝胶可以存放在冰箱里，加入酸性溶液可以防止霉菌污染
4. 备注
1） 确保在染色前彻底清洗凝胶，因为残留的SDS可能会干扰染料蛋白的结合
2） 只要溶液中仍有颗粒，染色溶液就可以重复使用
3） 建议将染色溶液储存在深色瓶中，以延长其保质期。

Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)/考马斯亮蓝G-250（CBBG）对肺组织学图像和纤维化面积百分比（A%）的影响 [3]
如图1所示，正常（图1A）或CBBG 1000（图1B）动物的肺标本未显示正常细支气管、肺泡、肺泡壁和空气间隙的组织学改变；然而，暴露于BLMCN的大鼠表现出大量的炎性细胞浸润、肺泡壁增厚、纤维蛋白渗出和两种炎症评分中的最高值（图1C）。相比之下，最低剂量（图1D）和最高剂量（图1E）的CBBG均显著改善了肺部组织学特征，炎症细胞浸润、肺泡壁增厚和纤维蛋白渗出程度较低。此外，与未经治疗的BLMCN暴露的肺部相比，这些组的炎症评分显著下降（图1F）。关于纤维化面积的百分比（图2），正常（图2A）或CBBG 1000（图2B）动物没有显示纤维化变化。相比之下，BLMCN暴露的肺部显示纤维化组织沉积增加（图2C）。与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500mg/kg）（图2D），特别是CBBG（1000mg/kg）（图2E）的治疗导致纤维化的a%显著降低（图2F）。

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Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)/考马斯亮蓝G-250（CBBG）对BALF中总蛋白和LDH以及肺组织中caspase-1活性的影响 [3]
与正常大鼠相比，BLMCN暴露大鼠BALF中的LDH（图3a）和总蛋白（图3b）水平显著升高。相比之下，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500mg/kg）和CBBG（1000mg/kg）治疗的大白鼠的这些水平显著降低。此外，与CBBG（500mg/kg）治疗组相比，CBBG（1000mg/kg）治疗组大鼠BALF中的LDH和总蛋白水平显著降低。此外，与BLMCN+CBBG 500组大鼠相比，用CBBG（1000mg/kg）治疗BLMCN暴露的大鼠导致BALF中LDH和总蛋白水平显著降低。同样，CBBG的最低和最高剂量都导致胱天蛋白酶-1活性显著降低（图3c），与BLMCN+CBBG 500组大鼠相比，用CBBG（1000mg/kg）处理的BLMCN暴露大鼠的胱天蛋白酶1活性显著降低。

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Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)考马斯亮蓝G-250（CBBG）对MDA、GSH、SOD、CAT和NOx的影响 [3]
与正常大鼠相比，气管内BLMCN治疗导致MDA（图4a）和NOx（图4e）水平显著升高。然而，与BLMCN治疗的大鼠相比，用最低和最高剂量的CBBG治疗导致MDA和NOx水平显著降低。另一方面，与正常大鼠相比，BLMCN暴露导致GSH（图4b）、SOD（图4c）和CAT（图4d）水平显著降低。与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500mg/kg）治疗导致GSH和SOD水平显著升高，CAT水平无显著差异。此外，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（1000mg/kg）治疗导致GSH、SOD和CAT水平显著升高。此外，关于MDA、CAT和NOx的水平，我们检测到BLMCN+CBBG 500组和BLMCN+CBAG 1000组之间存在显著差异。

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Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)考马斯亮蓝G-250（CBBG）对肺组织Col1a1和α-SMA mRNA表达及羟脯氨酸含量的影响 [3]
如图5所示，与正常大鼠相比，BLMCN治疗导致肺组织Col1a1 mRNA（图5b）、α-SMA mRNA（图5c）和羟脯氨酸含量（图5a）显著增加。然而，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500mg/kg）治疗导致Col1a1 mRNA表达和羟脯氨酸含量水平显著降低，α-SMA mRNA表达水平无显著变化。另一方面，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（1000mg/kg）治疗导致Col1a1 mRNA、α-SMA mRNA和羟脯氨酸水平显著降低。此外，与CBBG（500mg/kg）治疗组相比，CBBG（1000mg/kg）治疗组大鼠的COl1a1 mRNA、α-SMA mRNA和羟脯氨酸水平显著降低。

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Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)/考马斯亮蓝G-250（CBBG）对肺组织TNF-α、IL-1β、IL-18、TGF-β、TGF-βmRNA、PDGF-BB、MMP-9、TIMP-1、ICAM-1、MCP-1的影响 [3]
关于TNF-α（图6a）、IL-1β（图6b）、IL-18（图6c）、TGF-β（图6d）、TGF-αmRNA（图6e）、PDGF-BB（图6f）、MMP-9（图6g）、TIMP-1（图6h）、ICAM-1（图6i）和MCP-1（图6j）的水平，与正常大鼠相比，BLMCN暴露导致其水平显著升高。相比之下，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500和1000mg/kg）治疗导致其水平显著降低。此外，与CBBG（500mg/kg）治疗组相比，CBBG（1000mg/kg）治疗组大鼠的TNF-α、TGF-β、TGF-βmRNA、PDGF-BB、MMP-9、TIMP-1、ICAM-1和MCP-1水平显著降低。

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Coomassie brilliant blue G-250 (CBBG)/考马斯亮蓝G-250（CBBG）对TLR4、TLR4 mRNA、p-p-65、p65结合活性、NLRP3、NLRP3mRNA的影响 [3]
关于TLR4（图7a）、TLR4 mRNA（图7b）、p-p-65（图7c）、p65结合活性（图7d）、NLRP3（图7e）和NLRP3 mRNA（图7f）的水平，与正常大鼠相比，BLMCN暴露导致其水平显著升高。相比之下，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（500mg/kg）治疗导致TLR4、TLR4 mRNA、p65结合活性、NLRP3、NLRP3mRNA水平显著降低，p-p-65水平无显著变化。此外，与BLMCN治疗的大鼠相比，CBBG（1000mg/kg）治疗导致TLR4、TLR4 mRNA、p-p-65、p65结合活性、NLRP3、NLRP4水平显著降低。此外，与CBBG（500mg/kg）治疗组相比，CBBG（1000mg/kg）治疗组大鼠的TLR4、TLR4 mRNA、p-p-65、p65结合活性、NLRP3 mRNA水平显著降低，NLRP3水平变化不显著。然而，在省略了在用CBBG（500mg/kg）治疗的PF大鼠中测量NLRP3水平时检测到的异常值后，可以检测到后两组之间的显著变化。

蛋白质样品的预处理[2]
用PBS将蛋白质测定试剂稀释100倍，然后分别加入蛋白质样品。2分钟后，加入银胶体，稀释的蛋白质测定试剂、蛋白质样品和银胶体的体积比为1:1:1，SERS测量中使用的银胶体浓度为3×10-4M。

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SERS测量[2]
将蛋白质-CBBG混合物与银胶体混合一分钟后，将每种样品的10μL滴到硅芯片上进行SERS测量。SERS光谱用HoloSpec f/1.8i光谱仪测量，785nm的NIR二极管激光器用作激发源。样品处的激光功率约为15mW，每次SERS测量的曝光时间为15s。此处显示的所有SERS光谱都是通过基线校正收集的。

大鼠被随机分为以下五个实验组：正常组（n = 8），该组大鼠接受麻醉、手术操作和气管内PBS灌注；考马斯亮蓝G-250 (CBBG) 1000组（n = 8），该组大鼠连续4周口服考马斯亮蓝G-250 (CBBG)（1000 mg/kg/天），并接受麻醉、手术操作和气管内PBS灌注。该组大鼠作为药物对照组；BLMCN组（n = 10），该组大鼠接受麻醉、手术操作，并在实验第一天接受一次气管内BLMCN（5 mg/kg，溶于PBS）灌注； BLMCN + CBBG 500 组（n = 8）中，大鼠连续 4 周口服 CBBG（500 mg/kg/天），并接受麻醉、手术操作，以及在实验第一天进行一次气管内滴注 BLMCN（5 mg/kg，溶于 PBS）；BLMCN + CBBG 1000 组（n = 8）中，大鼠连续 4 周口服 CBBG（1000 mg/kg/天），并接受麻醉、手术操作，以及在实验第一天进行一次气管内滴注 BLMCN（5 mg/kg，溶于 PBS）。CBBG 治疗在诱导肺纤维化前 2 天开始。实验结束后，大鼠在腹腔注射司可巴比妥钠（500 mg/kg）麻醉下处死（表 1）。 CBBG 剂量是根据之前的研究选择的，这些研究报告了药物安全性和口服生物利用度的估计数据。[3]

吸收、分布和排泄
由于该药物通过玻璃体内注射给药，并在染色后被清除，因此预计不会被全身显著吸收。
该染料在临床手术后会被清除。
该药物通过玻璃体内注射给药，可能仅分布于眼球的部分区域。

[1]. Dyballa N, Metzger S. Fast and sensitive colloidal coomassie G-250 staining for proteins in polyacrylamide gels. J Vis Exp. 2009;(30):1431. Published 2009 Aug 3.

[2]. Highly sensitive protein concentration assay over a wide range via surface-enhanced Raman scattering of Coomassie brilliant blue. Anal Chem. 2010;82(11):4325-4328.

[3]. Coomassie brilliant blue G-250 dye attenuates bleomycin-induced lung fibrosis by regulating the NF-κB and NLRP3 crosstalk: A novel approach for filling an unmet medical need [published online ahead of print, 2022 Feb 21]. Biomed Pharmacother. 2022;148:112723.

亮蓝G是一种眼科溶液，用于在眼科手术中对眼内界膜（ILM）进行染色。该膜薄而半透明，在需要高度视觉精确性的眼科手术中难以识别。亮蓝G顾名思义，能赋予ILM鲜艳的蓝色，从而便于识别。它于2019年12月20日获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于眼科。

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药物适应症
本药适用于选择性地对眼内界膜（ILM）进行染色。
FDA标签

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作用机制
眼内界膜（ILM）是一层薄而半透明的结构，它界定了视网膜和玻璃体之间的过渡区域。ILM就像一个支架，允许过多的组织在其上生长，当这些组织投射到邻近的视网膜上时，就会导致视觉扭曲。这会导致视力丧失和/或视觉畸形。视网膜前膜（也称ERM）是一种纤维组织，位于视网膜内表面，其发生原因不明，有时也与视网膜脱离和炎症有关。它通常位于内界膜（ILM）表面，导致视力下降和视物变形。上述情况以及相关的黄斑皱褶或牵引性黄斑病变均可影响ILM，从而引发视觉并发症。通常，通过玻璃体切除术或不进行玻璃体切除术来去除ILM是治疗这些疾病的简便方法。亮蓝G可特异性地对眼内ILM进行染色，而不会对视网膜前膜或视网膜本身染色，从而使手术切除更加容易。目前，其仅限于内界膜（ILM）的特异性染色机制尚未完全阐明。

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药效学
亮蓝G可辅助眼科手术，使内界膜（ILM）更容易被识别，从而便于手术切除。

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考马斯亮蓝（CBB）是一种常用的染料，用于SDS-PAGE分离蛋白质的显色，具有染色操作简便、定量精度高的优点。此外，它与质谱蛋白质鉴定完全兼容。但尽管有这些优点，CBB的灵敏度仍低于银染或荧光染色，因此很少用于基于凝胶的分析蛋白质组学方法中的蛋白质检测。为了提高CBB的灵敏度，人们对最初的考马斯亮蓝染色方案(1)进行了多项改进。为了提高低丰度蛋白的检测灵敏度，研究人员提出了两项主要改进方案，即将染料分子转化为胶体颗粒：1988年，Neuhoff及其同事在基于考马斯亮蓝G-250的染色液中添加了20%的甲醇和更高浓度的硫酸铵(2)；2004年，Candiano等人利用磷酸、硫酸铵和甲醇，在考马斯亮蓝G-250的基础上，建立了蓝银染色法(3)。然而，所有这些改进方案都只能检测到约10 ng的蛋白质。2002年，Kang等人发表了一种鲜为人知的胶体考马斯亮蓝染色方案，该方案改进了Neuhoff的胶体考马斯亮蓝染色方案，主要涉及络合物质。他们用硫酸铝代替了硫酸铵，并将甲醇替换为毒性较低的乙醇(4)。 Kang等人的研究中提出的新型铝基染色方法展现出卓越的灵敏度，可检测低至1 ng/条带的磷酸化酶b，且灵敏度受蛋白质种类影响较小。本文将展示Kang等人的方法在快速灵敏的胶体考马斯亮蓝染色蛋白质分析中的应用。我们将以我们课题组常规进行的二维凝胶电泳为例，阐述这一快速简便的方法。[1]

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在Bradford蛋白定量法中，蛋白质浓度是通过考马斯亮蓝G-250 (CBBG)与蛋白质结合后在595 nm处的吸光度来确定的。在蛋白质-CBBG混合液中，表面增强拉曼散射(SERS)对吸附在银表面的游离CBBG分子量非常敏感，而结合的CBBG量与目标蛋白浓度直接相关。因此，我们基于游离CBBG的SERS，并以硅为内标，开发了一种检测溶液中总蛋白浓度的新方法。与传统的Bradford蛋白测定法相比，所提出的蛋白测定方法具有两个显著优势：线性浓度范围更宽（10⁻⁵-10⁻⁹ g/mL），检测限降低200倍（1 ng/mL），这表明其在快速、高灵敏度测定高丰度和低丰度蛋白浓度方面具有巨大潜力。[2]

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肺纤维化（PF）是一种危及生命的疾病，预后极差。由于PF病理机制的复杂性，满足这一未被满足的医疗需求极具挑战性。许多肺部疾病都与NF-κB和NLRP3炎症小体的激活有关。考马斯亮蓝G-250（CBBG）已被证实是一种安全、高选择性的P2×7R拮抗剂，具有抑制NLRP3炎症小体活性的潜力。本研究首次探讨了CBBG对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响。我们的研究结果表明，CBBG显著改善了博来霉素暴露肺组织的组织学特征和氧化状态生物标志物。此外，羟脯氨酸、TGF-β、PDGF-BB、TIMP-1、MMP-9、Col1a1、SMA和ICAM-1的分析表明，CBBG抑制了胶原沉积。肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-18和MCP-1的测定也表明，CBBG具有抗炎作用。支气管肺泡灌洗液中的总蛋白和LDH活性均显著降低。CBBG的肺保护作用可能一方面归因于NLRP3炎症小体的抑制，另一方面归因于NF-κB的失活。磷酸化p65及其DNA结合活性的降低以及TLR4的分析证实了NF-κB的失活。抑制 NLRP3 炎症小体的组装会导致 Caspase-1 活性受到抑制。总之，CBBG 可作为 PF 治疗的一线或辅助疗法，因此可能为满足未被满足的医疗需求提供一种新的途径。[3]

C47H48N3NAO7S2

854.02

853.283

C, 66.10; H, 5.67; N, 4.92; Na, 2.69; O, 13.11; S, 7.51

6104-58-1

6324599

Dark purple to black solid powder

>1.0 g/cm3 (20ºC)

100 °C

11 °C

11.198

158.67

1

9

13

60

1610

0

CCN(CC1=CC(=CC=C1)S(=O)(=O)[O-])C2=CC(=C(C=C2)/C(=C\3/C=CC(=[N+](CC)CC4=CC(=CC=C4)S(=O)(=O)[O-])C=C3C)/C5=CC=C(C=C5)NC6=CC=C(C=C6)OCC)C.[Na+]

RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C47H49N3O7S2.Na/c1-6-49(31-35-11-9-13-43(29-35)58(51,52)53)40-21-25-45(33(4)27-40)47(37-15-17-38(18-16-37)48-39-19-23-42(24-20-39)57-8-3)46-26-22-41(28-34(46)5)50(7-2)32-36-12-10-14-44(30-36)59(54,55)56;/h9-30H,6-8,31-32H2,1-5H3,(H2,51,52,53,54,55,56);/q;+1/p-1

sodium;3-[[4-[(Z)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-N-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate

Acid blue 90; Brilliant Blue G; 6104-58-1; C.I. Acid Blue 90; Coomassie Brilliant Blue G; Acid Blue 90; C.I. Acid Blue 90, monosodium salt; M1ZRX790SI; Coomassie Blue G 250; Coomassie Brilliant Blue G; BBG; Brilliant Blue G

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~12.5 mg/mL (~14.64 mM)
H2O : ~10 mg/mL (~11.71 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (0.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.6 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (0.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.6 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。