BRL-15572 HCl   中文名称: BRL-15572

5-HT1D ( pKi = 7.9 ); 5-HT1A ( pKi = 7.7 ); 5-HT2B ( pKi = 7.4 ); 5-HT2A ( pKi = 6.6 ); 5-HT7 ( pKi = 6.3 )
h5-HT1D receptor (serotonin receptor subtype 1D). BRL-15572 hydrochloride is a selective antagonist of h5-HT1D, displaying high affinity for h5-HT1D receptors.

BRL-15572 对 CHO 细胞表达的 h5-HT1D 受体的亲和力比 5-HT1B 受体高 60 倍 (pKi=7.9) [1]。BRL-15572 (0.1 nM–10 μM) 可刺激表达 h5-HT1B 和 h5-HT1D 受体的 CHO 细胞膜上 [³⁵S]GTPγS 的结合 [1]。体外实验表明，BRL-15572 对 CHO 细胞表达的 h5-HT1D 受体的亲和力 (pKᵢ=7.9) 比对 5-HT1B 受体高 60 倍。在 0.1 nM 至 10 μM 的浓度范围内，BRL-15572 可刺激表达 h5-HT1B 和 h5-HT1D 受体的 CHO 细胞膜上 [³⁵S]GTPγS 的结合。这表明 BRL-15572 对该受体具有功能性拮抗活性。

在福尔马林试验中，BRL-15572抑制了(-)-表儿茶素引起的镇痛作用[2]。腹腔注射BRL-15572（0.3–100.0 mg/kg）无活性，且BRL-15572（0.1–10 mg/kg）对豚鼠体温无影响[3]。BRL-15572可阻止福尔马林试验中(-)-表儿茶素诱导的镇痛作用，表明5-HT1D受体参与了疼痛调节通路。BRL-15572（0.3–100.0 mg/kg，腹腔注射）在某些行为学试验中无活性，且0.1–10 mg/kg腹腔注射对豚鼠体温无影响。

尽管h5-HT1B和h5-HT1D受体氨基酸序列的同源性较低，但这些受体却表现出惊人的相似性。迄今为止，能够区分这些受体亚型的化合物寥寥无几，而一些具有一定选择性的化合物，例如酮色林，对其他5-HT受体亚型具有更高的亲和力。我们现在报道两种化合物，SB-216641（N-[3-(2-二甲氨基)乙氧基-4-甲氧基苯基]-2'-甲基-4'-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)-(1,1'-联苯)-4-甲酰胺）和BRL-15572（3-[4-(3-氯苯基)哌嗪-1-基]-1,1-二苯基-2-丙醇），它们分别对h5-HT1B和h5-HT1D受体表现出高亲和力和选择性。在CHO细胞表达的人源受体结合研究中，SB-216641对h5-HT1B受体具有高亲和力（pKi = 9.0），而对h5-HT1D受体的亲和力则低25倍。相比之下，BRL-15572对h5-HT1D受体的亲和力（pKi = 7.9）比对5-HT1B受体的亲和力高60倍。在豚鼠纹状体天然组织5-HT1B受体上也测定了这些化合物的类似亲和力。SB-216641和BRL-15572的功能活性通过[35S]GTPγS结合试验和重组h5-HT1B和h5-HT1D受体的cAMP积累试验进行测定。在这些高受体表达系统中，两种化合物均为部分激动剂，其效力和选择性与其受体结合亲和力相关。在 cAMP 积累测定中，化合物的 pK(B) 测量结果再次与受体结合亲和力相关（SB-216641，pK(B) = 9.3 和 7.3；BRL-15572，pK(B) = <6 和 7.1，分别对应 h5-HT1B 和 h5-HT1D 受体）。这些化合物将成为表征 5-HT1B 和 5-HT1D 受体介导反应的有用药理学试剂[1]。

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非细胞受体结合测定采用稳定表达人 5-HT1D 或 5-HT1B 受体的 CHO 细胞膜制备物进行。将膜与 [³H]5-HT 或 [³H]GR125743 以及不同浓度的 BRL-15572 (0.001-10 μM) 孵育。用 10 μM 甲硫噻吩测定非特异性结合。在 25°C 孵育 60 分钟后，通过过滤分离结合的和游离的配体，并计数放射性。根据竞争曲线计算 Ki 值。

细胞功能分析采用表达 h5-HT1D 或 h5-HT1B 受体的 CHO 细胞。进行 [³⁵S]GTPγS 结合分析：将细胞膜与 GDP、[³⁵S]GTPγS 以及不同浓度的 BRL-15572（0.1 nM-10 μM）孵育，并加入或不加入 5-HT 激动剂。通过测量 [³⁵S]GTPγS 结合的刺激情况来确定拮抗剂的效力。或者，也可以使用 cAMP 积累分析来评估福斯克林刺激的 cAMP 生成的抑制情况。

本研究旨在探讨(-)-表儿茶素的镇痛潜力及其可能的镇痛机制。采用角叉菜胶和福尔马林模型建立炎症性疼痛模型。使用体积描记器测量炎症反应，并采用L5/L6脊神经结扎模型建立神经性疼痛模型。口服(-)-表儿茶素可分别降低角叉菜胶诱导的炎症反应和疼痛约59%和73%，并分别降低福尔马林诱导和神经损伤诱导的疼痛约86%和43%。在福尔马林试验中，腹腔注射以下拮抗剂可阻止 (-)-表儿茶素诱导的镇痛作用：甲硫噻平（5-HT1/5 受体）、WAY-100635（5-HT1A 受体）、SB-224289（5-HT1B 受体）、BRL-15572（5-HT1D 受体）、SB-699551（5-HT5A 受体）、纳洛酮（阿片受体）、CTAP（μ 阿片受体）、去甲双萘并吗啡（κ 阿片受体）和 7-亚苄基纳曲酮（δ1 阿片受体）。腹腔注射 L-NAME（一氧化氮合酶抑制剂）、7-硝基吲唑（神经元一氧化氮合酶抑制剂）、ODQ（鸟苷酸环化酶抑制剂）、格列本脲（ATP 敏感性钾通道阻滞剂）、4-氨基吡啶（电压依赖性钾通道阻滞剂）和伊贝洛毒素（大电导钙激活钾通道阻滞剂）均可阻止 (-)-表儿茶素的作用，但阿米洛利（酸敏感离子通道阻滞剂）则不能。数据表明，(-)-表儿茶素通过激活NO-环磷酸鸟苷钾通道通路、5-HT1A/1B/1D/5A血清素受体和μ/κ/δ阿片受体发挥其镇痛作用。[2]

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选择性、可穿透血脑屏障的5-HT(1B/D)（原5-HT(1Dβ/α)）受体激动剂SKF-99101H（3-(2-二甲氨基乙基)-4-氯-5-丙氧基吲哚半富马酸盐）（30 mg/kg腹腔注射）可引起豚鼠直肠温度呈剂量依赖性下降，先前的研究表明，非选择性5-HT(1B/D)受体拮抗剂GR-127935（N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-2'-甲基-4'-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)[1,1'联苯]-4-甲酰胺草酸盐）。本研究表明，SB-224289G（1'-甲基-5-(2'-甲基-4'-[(5-甲基-1,2,4-恶二唑-3-基)联苯基-1-4-基]羰基)-2,3,6,7-四氢螺[呋喃[2,3-f]吲哚-3,4'-pi哌啶酮]半草酸盐）（0.3-10.0 mg/kg 口服）（ED50 3.62 mg/kg）可剂量依赖性地阻断 SKF-99101H 引起的体温过低反应。SB-224289G 是第一个被报道的对 5-HT1B 受体的选择性比对 5-HT1D 受体的选择性高 60 倍以上的化合物。 SB-216641A（N-[3-(2-二甲氨基)乙氧基-4-甲氧基苯基]2'-甲基-4'-(5-甲基-1,2,4-恶二唑-3-基)-(1,1'-联苯)-4-甲酰胺盐酸盐）（0.6-20.0 mg/kg，腹腔注射）对5-HT1B受体的选择性略低于5-HT1D受体（选择性低30倍），但其作用相似（ED50为4.43 mg/kg）。可穿透血脑屏障的5-HT1D选择性受体拮抗剂BRL-15572（4-(3-氯苯基)-α-(二苯甲基)-1-哌嗪乙醇二盐酸盐）（0.3-100.0 mg/kg，腹腔注射）无活性。单独给药时，BRL-15572（0.1-10 mg/kg，腹腔注射）或SB-224289G（2.2-22 mg/kg，口服）均未对体温产生影响。这些数据表明，在豚鼠中，SKF-99101H（30 mg/kg，腹腔注射）引起的体温过低反应是由5-HT1B（原5-HT(1D β)）受体介导的，而非5-HT1D（原5-HT(1D α)）受体介导的。所描述的化合物是区分5-HT1B和5-HT1D受体反应的有用药理学工具。[3]

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体内动物研究是在啮齿动物疼痛或体温调节模型中进行的。在福尔马林试验中，将福尔马林注射到大鼠后爪，并记录其伤害性行为。在测试前，腹腔注射 BRL-15572（0.3-100 mg/kg）。在体温调节研究中，豚鼠接受 BRL-15572（0.1-10 mg/kg，腹腔注射）治疗，并监测其核心体温。

目前已发表的BRL-15572药代动力学数据有限。在豚鼠研究中，该化合物采用腹腔注射给药，提示其在研究中可能采用肠外给药途径。需要进一步研究以确定其口服生物利用度、半衰期和代谢稳定性。作为一种小分子拮抗剂，预计其具有良好的组织分布。

目前尚无公开的BRL-15572的全面毒理学数据。已发表的研究表明，该化合物在啮齿动物腹腔注射剂量高达100 mg/kg时耐受性良好。在有效剂量下未报告明显的急性毒性或行为学影响。治疗性药物开发需要进行标准的安全性药理学研究。

[1]. SB-216641 and BRL-15572--compounds to pharmacologically discriminate h5-HT1B and h5-HT1D receptors. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1997 Sep; 356(3): 312-20.

[2]. Antinociceptive effect of (-)-epicatechin in inflammatory and neuropathic pain in rats. Behav Pharmacol. 2018 Apr; 29(2 and 3-Spec Issue): 270-279.

[3]. Stimulation of 5-HT1B receptors causes hypothermia in the guinea pig. Eur J Pharmacol. 1997 Jul 23; 331(2-3): 169-74.

1. 本研究探讨了阿洛辛诱导的糖尿病如何影响去脑大鼠迷走神经刺激诱发的心动过缓中5-羟色胺（5-HT）的调节作用，并分析了涉及的5-HT受体类型和/或亚型。2. 雄性Wistar大鼠通过单次皮下注射阿洛辛（150 mg/kg）诱导糖尿病。四周后，对大鼠进行麻醉，预先注射阿替洛尔，然后进行去脑手术。迷走神经刺激（3、6和9 Hz）导致心率（HR）呈频率依赖性下降。3. 在糖尿病大鼠中，静脉注射高剂量5-HT（100和200 μg/kg）增强了迷走神经刺激诱发的心动过缓。同样，低剂量（10 μg/kg）的5-HT(1/7)受体激动剂血清素（5-CT）可增强迷走神经诱发的心动过缓。然而，高剂量（50、100和150 μg/kg）的5-CT则可减弱心动过缓。选择性非啮齿类5-HT(1B)和5-HT(1D)受体激动剂L-694,247（50 μg/kg）可重现高剂量5-CT对迷走神经诱发心动过缓的减弱作用。选择性5-HT(1A)受体激动剂8-羟基二丙基氨基曲林氢溴酸盐（8-OH-DPAT；50 μg/kg）可重现低剂量5-CT对迷走神经诱发心动过缓的增强作用。在糖尿病大鼠中，给予外源性乙酰胆碱后，也观察到了迷走神经诱发的心动过缓的这些刺激和抑制作用。4. 给予选择性5-HT(2)受体激动剂α-甲基-5-HT（150 μg/kg）、选择性5-HT(3)受体激动剂1-苯基双胍（150 μg/kg）或选择性5-HT(1B)受体激动剂CGS-12066B（50 μg/kg）均不影响糖尿病大鼠的迷走神经诱发的心动过缓。 5. 5-CT (10 μg/kg) 或 8-OH-DPAT (50 μg/kg) 诱导的糖尿病大鼠电刺激诱发的心动过缓增强作用分别被选择性 5-HT(2/7) 受体拮抗剂美索卡戈林 (1 mg/kg) 和选择性 5-HT(1A) 受体拮抗剂 WAY-100,635 (100 μg/kg) 阻断。同样，预先给予非选择性 5-HT(1) 受体拮抗剂甲硫硫平 (0.1 mg/kg) 可阻断 5-CT (50 μg/kg) 对糖尿病大鼠迷走神经刺激诱发的心动过缓的抑制作用。选择性5-HT(1D)受体拮抗剂BRL-15572 (2 μg/kg)抑制了非啮齿类动物5-HT(1B)和5-HT(1D)受体选择性激动剂L-694,247 (50 μg/kg)对迷走神经诱发的心动过缓的影响。6. 总之，本研究表明，实验性糖尿病改变了迷走神经诱发的心动过缓的性质以及5-HT受体的类型/亚型。[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17880377/]

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既往研究表明，麦角胺可通过5-HT1B/1D受体和α2-肾上腺素能受体诱导迷走神经切断犬的颈外动脉血管收缩。本研究使用选择性更高的拮抗剂（单独或联合使用）重新分析了这一观点。该研究纳入了 52 只麻醉犬，并进行了颈外动脉血流的超声测量。动物被分为 13 组（每组 n=4），分别接受静脉推注生理盐水（0.3 ml/kg；对照组）或以下拮抗剂：SB224289（300 μg/kg；5-HT1B 受体拮抗剂）、BRL15572（300 μg/kg；5-HT1D 受体拮抗剂）、劳沃利定（300 μg/kg；α2 受体拮抗剂）、SB224289 + BRL15572（各 300 μg/kg）、SB224289 + 劳沃利定（各 300 μg/kg）、BRL15572 + 劳沃利定（各 300 μg/kg）、劳沃利定（300 μg/kg）+ 哌唑嗪（100 μg/kg；α1 受体拮抗剂）。 SB224289 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg；α1 受体拮抗剂)，或 SB224289 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg)。 SB224289 (300 μg/kg) + 萝芙木芬 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg)、SB224289 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg) + BRL44408 (1,000 μg/kg; α2A)、SB224289 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg) + 咪唑沙星 (1,000 μg/kg; α2B) 或 SB224289 (300 μg/kg) + 哌唑嗪 (100 μg/kg) + MK912 (300 μg/kg; α2C)。所有动物均按照累积方案，经颈内动脉持续1分钟输注麦角胺（0.56、1、1.8、3.1、5.6、10和18 μg/min）。在预先注射生理盐水的动物中，麦角胺呈剂量依赖性地降低了颈外动脉血流量，但未影响动脉血压或心率。SB224289、BRL15572、劳伏利定或SB224289 + BRL15572、BRL15572 + 劳伏利定、劳伏利定 + 哌唑嗪、SB224289 + 哌唑嗪或SB224289 + 哌唑嗪 + 咪唑沙星的组合均不影响这些对照反应；而SB224289 + 劳伏利定则轻微阻断了这些反应。 SB224289 + 萝芙木苷 + 哌唑嗪、SB224289 + 哌唑嗪 + BRL44408 或 SB224289 + 哌唑嗪 + MK912 均显著阻断了这种血管收缩。因此，麦角胺诱导的犬颅内选择性血管收缩主要由 5-HT1B 受体和 α2A/2C 肾上腺素能受体亚型介导，而 α1 肾上腺素能受体的介导作用相对较小。[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15224175/]

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BRL-15572 是一种用于药理学区分 h5-HT1B 和 h5-HT1D 受体的研究化合物。它可作为研究5-HT1D受体在血清素介导的生理和病理过程中（包括疼痛调节、血管收缩和神经精神疾病）作用的重要工具。该化合物尚未获准用于临床。

C25H29CL3N2O

479.87

478.1345

C, 67.72; H, 6.37; Cl, 15.99; N, 6.32; O, 3.61

1173022-77-9

193611-72-2

9891303

Typically exists as solid at room temperature

580.7ºC at 760 mmHg

305ºC

2.51E-14mmHg at 25°C

5.459

26.71

3

3

6

31

451

0

0

BRL-15,572; BRL 15572 HCl; 193611-72-2; BRL-15572 dihydrochloride; 3-(4-(3-chlorophenyl)piperazin-1-yl)-1,1-diphenylpropan-2-ol dihydrochloride; BRL-15572 (dihydrochloride); BRL-15572 2HCl; BRL 15572; 3-[4-(3-chlorophenyl)piperazin-1-yl]-1,1-diphenylpropan-2-ol;dihydrochloride; 3-[4-(3-chlorophenyl)piperazin-1-yl]-1,1-diphenylpropan-2-ol dihydrochloride; BRL15572

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~520.97 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~4.17 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。