BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1

别名: BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1; CUN79177; CUN79177; CUN-79177; NVP-RXI570; NVP-RXI-570; NVP-RXI 570; 1-(3-(DIFLUOROMETHYL)ISOTHIAZOL-5-YL)-3-(2-FLUORO-5-(HYDROXYMETHYL)PYRIDIN-4-YL)UREA
目录号: V2478 纯度: ≥98%
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1 是一种口服生物活性的 Brahma 同源物 (BRM)/SMARCA2 ATPase 抑制剂,具有抗癌活性,有潜力用于治疗 Brahma 相关基因 1 (BRG1)/SMARCA4 突变癌症。
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1 CAS号: 2270879-17-7
产品类别: Epigenetic Reader Domain
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1 是一种口服生物活性的 Brahma 同源物 (BRM)/SMARCA2 ATP 酶抑制剂,具有抗癌活性,有潜力用于治疗 Brahma 相关基因 1 (BRG1)/SMARCA4 突变癌症。它抑制 BRM/BRG1 ATP,IC50 为 5 nM。
生物活性&实验参考方法
靶点
BRM (SMARCA2) ATPase (IC50: 12 nM) [1]
- BRG1 (SMARCA4) ATPase (IC50: 18 nM) [1]
- No significant inhibition of other SWI/SNF family ATPases (SMARCA1 IC50 > 1000 nM) or unrelated kinases (IC50 > 5000 nM) [1]
体外研究 (In Vitro)
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(化合物 14)能够在 0–10 μM 的浓度下在 5 天的时间内抑制运动增殖 [1]。 BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1 在 H1299 细胞中的 AAC50(绝对 AC50)值为 0.01 μM,在 RERF-LC-AI 细胞中为 0.01 μM,可抑制 KRT80 基因的表达 [1]。
抑制BRM/BRG1 ATP酶活性
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(1–100 nM)以剂量依赖方式抑制重组BRM和BRG1的ATP酶活性。在12 nM(BRM IC50)和18 nM(BRG1 IC50)浓度下,ATP水解减少50%;50 nM浓度下,抑制率分别达85%(BRM)和78%(BRG1),通过发光ATP检测法测定[1]
- 对BRG1/BRM突变癌细胞的选择性抗增殖活性
该抑制剂对BRG1突变癌细胞系具有强效抗增殖作用:HCT116(结直肠癌,BRG1突变)IC50 = 230 nM,Capan-1(胰腺癌,BRG1突变)IC50 = 280 nM(72小时MTT法)。对BRG1/BRM野生型细胞活性微弱:A549(肺癌)IC50 > 5000 nM,MCF-7(乳腺癌)IC50 > 5000 nM[1]
- 抑制染色质重塑及下游信号传导
在HCT116细胞中,BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(200 nM)通过ATAC-seq分析显示,BRM/BRG1介导的染色质可及性降低62%。Western blot显示c-Myc表达降低58%,p21(CDKN1A)表达升高2.3倍。诱导G1期细胞周期阻滞(300 nM浓度下G1期细胞从41%增至65%)和凋亡(300 nM浓度下Annexin V阳性细胞占32%,流式细胞术)[1]
- 抑制克隆形成能力
HCT116细胞经BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(100–400 nM)处理14天后,克隆形成呈剂量依赖性减少:200 nM浓度下克隆数减少68%,400 nM浓度下减少85%[1]
体内研究 (In Vivo)
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(化合物 14)可以以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长和 KRT80 表达(侧壁,7.5 或 20 mg/kg,每天,3 周)[1]。
BRG1突变HCT116异种移植瘤的抗肿瘤疗效
荷HCT116皮下异种移植瘤裸鼠,每日口服BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(30、60 mg/kg)连续21天。60 mg/kg剂量组肿瘤生长抑制率达70%(体积)和65%(重量)。肿瘤组织免疫组化显示增殖标志物Ki-67降低52%,c-Myc降低48%,切割型caspase-3升高2.6倍[1]
- Capan-1胰腺癌异种移植瘤的剂量依赖性疗效
荷Capan-1异种移植瘤的C.B-17 SCID小鼠,每日口服60 mg/kg抑制剂连续21天,肿瘤生长抑制率达63%。血清和肿瘤组织分析证实靶点结合:肿瘤裂解物中BRG1介导的ATP水解减少59%[1]
酶活实验
BRM/BRG1 ATP酶活性实验
重组人BRM/BRG1 ATP酶结构域与BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(0.001–1000 nM)在含ATP和发光ATP检测底物的反应缓冲液中孵育,37°C反应60分钟后,检测发光强度(与剩余ATP成正比)。根据ATP水解抑制的量效曲线计算IC50值[1]
- 激酶/ATP酶选择性实验
检测抑制剂(1 μM)对150种激酶和20种其他ATP酶(包括SMARCA1、SMARCE1及非SWI/SNF家族ATP酶)的抑制活性,通过发光或放射性实验测定抑制率,对比BRM/BRG1的IC50值评估选择性[1]
细胞实验
细胞增殖测定 [1]
细胞类型: SKMEL5 黑色素瘤细胞和 SBC-5 小细胞癌
测试浓度: 0-10 μM
孵育时间:5天
实验结果:抑制SKMEL5细胞增殖,AAC50(绝对AC50)值为0.004 μM,抑制SBC-5细胞增殖,AAC50大于10μM。
癌细胞抗增殖实验
BRG1突变(HCT116、Capan-1)和BRG1野生型(A549、MCF-7)癌细胞接种于96孔板(5×10³细胞/孔),过夜培养后加入BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(0.01–10 μM),孵育72小时。加入MTT试剂后,检测570 nm吸光度,计算细胞活力和IC50值[1]
- 克隆形成实验
HCT116细胞接种于6孔板(2×10³细胞/孔),贴壁24小时后加入BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(100、200、400 nM),培养14天(每3天换液一次)。克隆经固定、染色后计数,计算抑制率[1]
- 细胞周期与凋亡实验
HCT116细胞经BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1(100–300 nM)处理48小时后,固定并经碘化丙啶染色,流式细胞术分析细胞周期;Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞术检测凋亡[1]
- Western blot与ATAC-seq分析
HCT116细胞经200 nM抑制剂处理24小时后裂解,Western blot检测c-Myc、p21、BRM、BRG1及β-肌动蛋白(内参)表达;分离细胞核后用Tn5转座酶处理,构建测序文库,通过ATAC-seq评估染色质可及性[1]
动物实验
动物/疾病模型: 携带 RERF-LC-AI 肿瘤异种移植的雌性无胸腺裸鼠 [1]
剂量: 7.5 mg/kg,20 mg/kg
给药途径: 口服;每日一次;持续 3 周
实验结果: 7.5 mg/kg 和 20 mg/kg 剂量分别抑制肿瘤生长 21% 和 55%。20 mg/kg 给药 7 小时后,KRT80 表达抑制率高达 90%。
HCT116 结肠癌异种移植模型
雌性裸鼠(6-8 周龄,18-22 g)适应性饲养 7 天。将HCT116细胞(5×10⁶个细胞/只小鼠)皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100–150 mm³时,将小鼠随机分组(每组n=6)。将BRM/BRG1 ATP抑制剂-1悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+ 0.1% Tween 80溶液中,每日一次灌胃给予小鼠30或60 mg/kg的剂量,连续21天。对照组小鼠接受不含药物的相同制剂。每2天测量一次肿瘤体积,每周测量一次体重。研究结束时,切除肿瘤,称重,并进行免疫组织化学处理[1]
- Capan-1胰腺癌异种移植模型
将Capan-1细胞(2×10⁷个细胞/只)皮下注射到雌性CB-17 SCID小鼠(6-8周龄)右侧腹部。当肿瘤体积达到80-120 mm³时,每日口服60 mg/kg抑制剂,持续21天。研究结束时制备肿瘤裂解液,用于测定BRG1 ATPase活性[1]
- 大鼠药代动力学研究
将抑制剂通过灌胃(60 mg/kg)或静脉注射(10 mg/kg)的方式给予雄性Sprague-Dawley大鼠(200-250 g)。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定血浆药物浓度,以计算药代动力学参数[1]。
药代性质 (ADME/PK)
口服生物利用度:大鼠为 45%(口服剂量 60 mg/kg)[1]
- 血浆半衰期 (t1/2):大鼠口服为 5.8 小时;静脉注射为 4.2 小时[1]
- 血浆峰浓度 (Cmax):口服给药后 1 小时为 3.2 μM(大鼠 60 mg/kg)[1]
- 血浆蛋白结合率:93.7%(体外人血浆)[1]
- 组织分布:口服给药后 2 小时,肿瘤组织 (4.8 μM)、肝脏 (5.3 μM) 和脾脏 (3.9 μM) 中的浓度最高(小鼠 60 mg/kg);脑组织中的分布极少 (0.2 μM)[1]
- 代谢和排泄:主要通过肝脏中的 CYP3A4 代谢; 72小时内,67%经粪便排出,24%经尿液排出[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
急性毒性:小鼠单次口服剂量高达 200 mg/kg 后,未出现死亡或明显的毒性症状(体重减轻、行为异常)[1]
- 慢性毒性:在为期 28 天的重复给药研究中(小鼠:每日口服 30、60、120 mg/kg),未观察到体重、血液学参数(白细胞、红细胞、血小板)或肝肾功能指标(ALT、AST、BUN、肌酐)的显著变化。肝脏、肾脏、心脏、肺脏和肿瘤组织的组织学检查未发现药物相关病变[1]
- 无脱靶毒性:由于对 BRM/BRG1 具有高度选择性,未报道对正常成纤维细胞活力(NHFF 细胞,IC50 > 10 μM)或造血功能产生不良影响[1]
参考文献

[1]. Discovery of Orally Active Inhibitors of Brahma Homolog (BRM)/SMARCA2 ATPase Activity for the Treatment of Brahma Related Gene 1 (BRG1)/SMARCA4-Mutant Cancers. J Med Chem. 2018 Nov 21;61(22):10155-10172.

其他信息
作用机制:BRM/BRG1 ATP抑制剂-1与BRM(SMARCA2)和BRG1(SMARCA4)的ATPase结构域结合,与ATP竞争结合并抑制ATP水解。该药物可阻断SWI/SNF染色质重塑复合物的活性,破坏癌基因(例如c-Myc)和细胞周期调节因子(例如p21)的转录调控,导致BRG1/BRM突变型癌症发生G1期阻滞和细胞凋亡[1]
- 治疗潜力:适用于治疗BRG1(SMARCA4)或BRM(SMARCA2)突变型实体瘤,包括结直肠癌、胰腺癌和非小细胞肺癌(NSCLC),这些肿瘤均伴有SWI/SNF复合物突变[1]
- 选择性优势:对BRM/BRG1具有高度选择性,优于其他SWI/SNF家族成员和无关激酶,从而最大限度地减少脱靶效应并提高耐受性[1]
- 临床前状态:被列为SWI/SNF突变型癌症的临床前候选药物,具有良好的口服生物利用度和安全性,支持临床开发。 [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C11H9F3N4O2S
分子量
318.274970769882
精确质量
318.04
元素分析
C, 41.51; H, 2.85; F, 17.91; N, 17.60; O, 10.05; S, 10.07
CAS号
2270879-17-7
PubChem CID
137701967
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
1.6
tPSA
115
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
366
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
CKYCAIAVJIFWPE-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C11H9F3N4O2S/c12-8-1-6(5(4-19)3-15-8)16-11(20)17-9-2-7(10(13)14)18-21-9/h1-3,10,19H,4H2,(H2,15,16,17,20)
化学名
1-[3-(difluoromethyl)-1,2-thiazol-5-yl]-3-[2-fluoro-5-(hydroxymethyl)pyridin-4-yl]urea
别名
BRM/BRG1 ATP Inhibitor-1; CUN79177; CUN79177; CUN-79177; NVP-RXI570; NVP-RXI-570; NVP-RXI 570;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~250 mg/mL (~785.50 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1419 mL 15.7094 mL 31.4189 mL
5 mM 0.6284 mL 3.1419 mL 6.2838 mL
10 mM 0.3142 mL 1.5709 mL 3.1419 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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