| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Macroautophagy/autophagy[1]
In A549 cells and HUVEC, CA-5f (0-40 μM, 6 hours) elevates the levels of SQSTM1 protein and LC3B-II (an autophagy monitoring marker) in a concentration- and time-dependent manner [1]. A549 cells and HUVECs treated with CA-5f (20 μM, 6 hours) or in combination with Bafilomycin A1 (100 nM) or Chloroquine (30 μM) do not exhibit autophagosome degradation [1]. Neither the number of lysosomes nor the hydrolytic function are impacted by CA-5f (20 μM) [1]. CA-5f (20 μM, 96 hours) is less harmful to normal HUVECs and suppresses the development of A549 cells [1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 A549 细胞和 HUVEC 中，CA-5f（0-40 μM，6 小时）以浓度和时间依赖性方式提高 SQSTM1 蛋白和 LC3B-II（自噬监测标记物）的水平 [1]。用 CA-5f（20 μM，6 小时）或与巴弗洛霉素 A1 (100 nM) 或氯喹 (30 μM) 联合处理的 A549 细胞和 HUVEC 不会表现出自噬体降解 [1]。溶酶体的数量和水解功能均不受 CA-5f (20 μM) 的影响 [1]。 CA-5f（20 μM，96 小时）对正常 HUVEC 的危害较小，并抑制 A549 细胞的发育 [1]。
CA-5f 以浓度(0-40 μM)和时间(3-24小时)依赖性方式，诱导A549非小细胞肺癌细胞和人脐静脉内皮细胞出现细胞质空泡化。[1] CA-5f 以浓度(0-40 μM)和时间(3-24小时)依赖性方式，提高A549细胞和HUVECs中自噬标志物LC3B-II和选择性自噬底物SQSTM1/p62的蛋白水平，而SQSTM1的mRNA水平不变，表明其抑制自噬流而非诱导自噬。[1] 通过荧光显微镜观察，CA-5f 显著增加A549细胞和HUVECs中GFP-LC3B斑点（自噬体）的数量。[1] 透射电子显微镜显示，经CA-5f 处理的A549细胞和HUVECs中，囊泡结构和双层膜自噬体的数量增加。[1] CA-5f 诱导的LC3B-II积累不能被早期自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤或渥曼青霉素消除。与晚期自噬抑制剂氯喹或巴弗洛霉素A1共同处理，相比单独使用CA-5f 并未产生叠加效应，证实CA-5f 作为晚期自噬抑制剂发挥作用。[1] 使用串联mRFP-GFP-LC3B报告系统，CA-5f 处理导致A549细胞和HUVECs中黄色斑点（自噬体）显著增加，红色斑点（自噬溶酶体）减少，表明自噬流受损。此效果与氯喹相似但更强效。[1] CA-5f 处理破坏了GFP-LC3B与LysoTracker Red的共定位，以及内源性LC3B与溶酶体标志物LAMP1的共定位，证明其抑制自噬体与溶酶体的融合。[1] CA-5f 不影响溶酶体pH，这通过吖啶橙和LysoTracker Red染色中持续的红色荧光（与巴弗洛霉素A1不同）证明。它也不损害溶酶体的水解功能，因为处理细胞中酸性磷酸酶、组织蛋白酶B和组织蛋白酶D的活性保持不变。[1] 在经CA-5f 处理1小时的HUVECs中进行的iTRAQ蛋白质组学筛选发现，与细胞骨架和膜泡运输相关的蛋白表达下调，包括LM07、ACTB、DNM2、SEPT8、SNX18、SNX5和SYN1。蛋白质印迹验证了这些蛋白在HUVECs和A549细胞中的减少。[1] CA-5f 显著增加A549细胞和HUVECs中线粒体来源的活性氧产生并降低线粒体膜电位。这种ROS的增加可被抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸逆转。[1] 实时细胞分析显示，20 μM CA-5f 在12小时内最初抑制了A549细胞和HUVECs的生长。然而，HUVECs能够恢复并重新生长，而A549细胞不能，表明其对癌细胞具有更强的细胞毒性。[1] CA-5f 在A549细胞和HUVECs中诱导细胞凋亡，表现为Annexin V/PI染色阳性、PARP1剪切增加以及核固缩、碎裂等超微结构特征。它还在A549细胞中诱导坏死，表现为乳酸脱氢酶活性呈剂量依赖性升高(0-40 μM)。[1] CA-5f 的细胞毒性（凋亡、坏死、细胞活力降低）依赖于ROS的产生，因为与NAC共同处理可显著逆转这些效应。[1] 在使用siRNA敲低ATG5或PIK3C3从而抑制自噬启动的A549细胞中，CA-5f 的细胞毒性效应减弱，表明基础自噬过程有助于CA-5f 诱导的细胞死亡。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在含有A549肺癌细胞的裸鼠中，CA-5f（40 mg/kg，腹腔注射，每两天一次，最长30天）耐受性良好，可以成功阻止肿瘤生长[1]。使用 A549 肺癌细胞，CA-5f（40 mg/kg，腹腔注射）可抑制裸鼠自噬流并导致细胞凋亡 [1]。
在携带皮下A549肺癌异种移植瘤的裸鼠中，每2天静脉注射CA-5f (40 mg/kg)，持续30天，与溶媒对照组相比，显著抑制了肿瘤体积和重量的增长，且未引起明显的体重下降或毒性。[1] 来自CA-5f 治疗组小鼠肿瘤组织的蛋白质印迹分析显示LC3B-II和SQSTM1蛋白积累增加。[1] CA-5f 治疗组小鼠肿瘤切片的免疫荧光染色显示LC3B和SQSTM1呈点状分布，与对照组的弥漫模式形成对比，证实了体内自噬抑制。未观察到CTSB和CTSD水平的明显变化。[1] 肿瘤切片的TUNEL染色显示，与对照组相比，CA-5f 治疗组中凋亡细胞数量显著增加。[1] |
| 酶活实验 |
通过测量A549细胞和HUVECs经CA-5f (20 μM)处理不同时间后的细胞裂解物中酸性磷酸酶的活性来评估溶酶体功能。使用分光光度计在405 nm波长下测量反应混合物的吸光度。[1]
使用商业荧光测定试剂盒，测量A549细胞和HUVECs经CA-5f (20 μM)处理不同时间后的细胞裂解物中组织蛋白酶B和组织蛋白酶D的酶活性。在酶标仪中使用特定激发/发射波长（CTSB: 400/505 nm，CTSD: 328/460 nm）读取荧光值。[1] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： A549、HUVEC 测试浓度： 20 μM 孵育时间： 96 小时 实验结果：与正常 HUVEC 相比，对 A549 细胞具有更强的细胞毒性。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： A549 细胞和 HUVEC 测试浓度： 0 -40 μM 孵育持续时间：6 小时 实验结果：LC3B-II（监测自噬的标记物）和 SQSTM1 蛋白水平呈浓度和时间依赖性升高方式。 对于自噬标志物的蛋白质印迹分析，细胞经CA-5f 处理后收集并裂解。等量蛋白质经SDS-PAGE分离，转膜，用针对LC3B、SQSTM1等靶标的抗体孵育。使用荧光标记或HRP偶联的二抗检测信号并进行定量。[1] 对于GFP-LC3B斑点分析，将A549细胞或HUVECs转染GFP-LC3B质粒。经CA-5f 处理后，固定细胞，染色细胞核，荧光显微镜成像。对具有GFP-LC3B斑点的细胞进行计数。[1] 对于mRFP-GFP-LC3B串联报告基因检测，细胞转染该报告基因构建体。经CA-5f 处理后，对活细胞或固定细胞进行成像。计数每个细胞的黄色（自噬体）和红色（自噬溶酶体）斑点。[1] 对于共定位研究，用LysoTracker Red染色转染了GFP-LC3B的细胞。或者，固定细胞并对内源性LC3B和LAMP1进行免疫染色。通过共聚焦显微镜获取图像以评估共定位情况。[1] 对于溶酶体pH评估，CA-5f 处理后，用吖啶橙或LysoTracker Red染色细胞，并通过荧光显微镜成像。[1] 对于细胞活力和细胞毒性测定，使用实时细胞分析仪，将细胞接种于专用板中，在加入CA-5f 后连续监测阻抗（细胞指数）。或者，在处理24小时后通过MTT法评估细胞活力。[1] 通过流式细胞术，使用Annexin V-FITC/PI双染色法，在细胞经CA-5f 处理24小时后评估细胞凋亡。[1] 在细胞经CA-5f 处理24小时后，通过分光光度法在340 nm波长下测量细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶活性，作为坏死指标。[1] 对于蛋白质组学分析，用CA-5f (20 μM)处理HUVECs 1小时。收集细胞，提取蛋白质，酶解，用iTRAQ试剂标记，并通过二维液相色谱-串联质谱联用技术进行分析。根据倍数变化和统计学显著性鉴定差异表达蛋白。[1] 使用MitoSOX Red染色和流式细胞术或荧光显微镜测量线粒体ROS水平。使用JC-1染料试剂盒评估线粒体膜电位。[1] 使用荧光ROS测定试剂盒测量细胞ROS水平。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 携带A549肺癌细胞的裸鼠[1]
剂量： 40 mg/kg 给药途径： 经尾静脉注射，每2天一次，最多30天 实验结果： 显著抑制小鼠肿瘤体积和重量，增加小鼠体内凋亡细胞数量。 将4周龄BALB/c裸鼠右肩胛皮下注射A549细胞（1 x 10^6个细胞）。当肿瘤形成（植入后约8天）时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组n=5）。CA-5f溶于DMSO配制成储备液，稀释后用于注射。治疗组每2天经尾静脉注射CA-5f（40 mg/kg体重），共30天。对照组按相同方案注射溶剂（DMSO）。每2天测量一次肿瘤大小以计算体积。实验结束时处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行后续分析（Western blot、免疫荧光、TUNEL）。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在A549异种移植小鼠模型中，静脉注射CA-5f（40 mg/kg，每2天一次，持续30天）耐受性良好，未观察到明显的毒性，且与对照组相比，平均体重无显著差异。[1]
体外实验表明，与A549非小细胞肺癌细胞相比，CA-5f对正常人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的细胞毒性较低，这是因为HUVECs能够从初始生长停滞中恢复，而A549细胞则不能。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CA-5f（化学名称：(3E,5E)-3-(3,4-二甲氧基亚苄基)-5-[(1H-吲哚-3-基)亚甲基]-1-甲基哌啶-4-酮）是一种合成的姜黄素类似物。[1]
它被认为是一种新型的、强效的晚期自噬抑制剂，能够阻断自噬体与溶酶体的融合，而不影响溶酶体的pH值或水解功能。[1] 其作用机制被认为涉及细胞骨架蛋白（例如LM07、ACTB、DNM2）和膜囊泡运输蛋白（例如SNX18、SNX5）的下调，这些蛋白对于自噬体的运动和融合至关重要。[1] CA-5f可诱导线粒体来源的活性氧（ROS）的产生，这有助于其发挥细胞毒性作用，尤其是在癌症中。 CA-5f 对非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞（如 A549）表现出选择性细胞毒性，而对正常内皮细胞 (HUVEC) 和其他上皮细胞则无明显毒性。[1] 作为一种单一药物，CA-5f 在 A549 异种移植小鼠模型中表现出显著的抗肿瘤活性，提示其具有开发为 NSCLC 治疗药物的潜力。[1] |
| 分子式 |
C24H24N2O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
388.46
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| 精确质量 |
388.178
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| CAS号 |
1370032-19-1
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
57341148
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
3.7
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| tPSA |
54.6
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
659
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C(/C1=CNC2=CC=CC=C12)=C1\C(/C(/CN(C)C\1)=C/C1C=CC(OC)=C(OC)C=1)=O
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| InChi Key |
JYOLPDWVAMBMQN-UBIAKTOFSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H24N2O3/c1-26-14-18(10-16-8-9-22(28-2)23(11-16)29-3)24(27)19(15-26)12-17-13-25-21-7-5-4-6-20(17)21/h4-13,25H,14-15H2,1-3H3/b18-10+,19-12+
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.35 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5743 mL | 12.8713 mL | 25.7427 mL | |
| 5 mM | 0.5149 mL | 2.5743 mL | 5.1485 mL | |
| 10 mM | 0.2574 mL | 1.2871 mL | 2.5743 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Tepotinib hydrochloride monohydrate
BKN-1
NEO214
MJO445
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