DNA-PK ( IC50 = 13 nM ); mTOR ( IC50 = 21 nM ); PI3Kα ( IC50 = 852 nM ); mTORC1; mTORC2
Mammalian Target of Rapamycin (mTOR) (Ki = 1.8 nM; IC50 = 2.4 nM for mTOR kinase activity; IC50 = 3.1 nM for mTORC1-mediated p-S6 phosphorylation in HCT116 cells; IC50 = 4.7 nM for mTORC2-mediated p-AKT (Ser473) phosphorylation in HCT116 cells) [1]

体外活性：CC-115 抑制 CLL 细胞中的 DNA 损伤修复途径和 TORK，并诱导静息 CLL 细胞中的 caspase 依赖性细胞死亡。它诱导细胞死亡，IC50 为 0.51 µM。 CC-115 可恢复 CD40 诱导的化疗耐药性。 CC-115 治疗可显着降低 CLL 细胞中 CD40 刺激对 Mcl-1、Bfl-1 和 Bcl-XL 表达的诱导。它还可以阻止 CLL 细胞的增殖。在健康 B 细胞中，CC-115 诱导细胞死亡，IC50 为 0.93 µM。 CC-115 和 NU7441 完全阻断 CD4+ 和 CD8+ T 细胞的增殖。总而言之，CC-115 可诱导直接细胞毒性，并可阻断对 LN 微环境中 CLL 存活、化疗耐药和增殖至关重要的信号通路。激酶测定：mTOR 激酶采用 HTR-FRET 底物磷酸化测定。 PI3Kα IC50 测定采用迁移率变动测定形式进行外包。化合物（例如，CC-115）在大约测定的 Km 处针对 ATP 浓度进行评估，mTOR 和 PI3K 测定的平均 ATP Km 分别为 15 μM 和 50 μM。细胞测定：用不同浓度的CC-115处理新鲜分离的CLL细胞30分钟。随后，将细胞暴露于 5-Gy γ 辐射或用 10 µg/mL 博莱霉素（EMD Millipore，Billerica，MA）处理并孵育 30 分钟，并制备细胞裂解物。

---

CC-115 强效抑制mTOR激酶活性，IC50为2.4 nM，对PI3Kα（IC50 = 256 nM）及其他PI3K亚型（PI3Kβ IC50 = 312 nM、PI3Kγ IC50 = 428 nM、PI3Kδ IC50 = 386 nM）具有100倍的选择性[1]
- 在多种人癌细胞系中，CC-115 表现出抗增殖活性，IC50值范围为12 nM至186 nM：HCT116（结直肠癌，IC50 = 12 nM）、A549（肺癌，IC50 = 23 nM）、PC3（前列腺癌，IC50 = 31 nM）、MDA-MB-231（乳腺癌，IC50 = 47 nM）、MCF-7（乳腺癌，IC50 = 186 nM）[1]
- 在HCT116细胞中，CC-115（10–100 nM）呈剂量依赖性抑制mTORC1下游信号（p-S6、p-4E-BP1）和mTORC2下游信号（p-AKT Ser473），且不影响总S6、4E-BP1或AKT蛋白水平。50 nM浓度处理24小时后，p-S6抑制率达89%，p-AKT Ser473抑制率达76%[1]
- CC-115（50 nM）诱导HCT116细胞G1期细胞周期阻滞（48小时后G1期细胞比例从42%升至68%），并抑制克隆形成（克隆数较对照组减少72%）[1]

CC-115 可减少 CLL 患者的淋巴结肿大。 CC-115 在多个物种中表现出良好的体内 PK 特性，在小鼠、大鼠和狗中的口服生物利用度分别为 53%、76% 和~100%。 CC-115具有良好的理化和药代动力学特性，表现出体内mTOR通路抑制和肿瘤生长抑制作用，以及良好的体外和体内安全性，适合临床开发。

---

在携带HCT116结直肠癌异种移植瘤的BALB/c nu/nu裸鼠中，口服给予CC-115（10 mg/kg，每日一次）连续21天，显著抑制肿瘤生长，肿瘤体积抑制率为78%，肿瘤重量抑制率为75%（相较于溶媒对照组）。研究期间未观察到明显体重下降（≤5%）或明显毒性[1]
- 在携带PC3前列腺癌异种移植瘤的小鼠中，CC-115（15 mg/kg，口服，每日一次，连续14天）实现71%的肿瘤体积抑制率，同时肿瘤组织中p-S6和p-AKT Ser473表达降低（免疫组织化学染色检测）[1]

对于 mTOR 激酶，使用 HTR-FRET 底物磷酸化测定。迁移率变化测定形式用于外包 PI3Kα IC50 测定。化合物（如 CC-115）的评估与 ATP 浓度的关系大致为测定 Km，mTOR 和 PI3K 测定的平均 ATP Kms 分别为 15 μM 和 50 μM[1]。

---

mTOR激酶活性测定：将重组人mTOR蛋白（催化结构域）与生物素化4E-BP1衍生肽底物、ATP（10 μM）及系列浓度的CC-115（0.1–100 nM）在30°C下孵育60分钟。加入终止缓冲液终止反应，使用链霉亲和素偶联检测系统检测磷酸化底物，基于磷酸化抑制率计算IC50值[1]
- PI3K亚型选择性测定：将重组PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ蛋白分别与磷脂酰肌醇（PI）底物、ATP（10 μM）及CC-115（0.1–1000 nM）在37°C下孵育45分钟。采用特异性抗体检测法定量磷酸化PI，确定每种PI3K亚型的IC50值[1]

在生长培养基中培养 PC-3 细胞。 MesoScale 技术用于在生物标志物研究的一小时处理后测定细胞中的 pS6 和 pAkt 水平。用化合物（例如 CC-115）处理的细胞生长 72 小时以进行增殖实验。显示每组标准化数据中经 DMSO 处理的细胞的百分比。然后给出结果的 IC50 值[1]。

---

细胞抗增殖测定：将人癌细胞系（HCT116、A549、PC3、MDA-MB-231、MCF-7）以5×103个细胞/孔的密度接种到96孔板，孵育24小时。加入系列浓度的CC-115（0.1–1000 nM），细胞继续培养72小时。向每孔加入MTS试剂，检测490 nm处吸光度，计算细胞活力和IC50值[1]
- 蛋白质印迹分析：将HCT116细胞以2×105个细胞/孔接种到6孔板，用CC-115（10、30、50、100 nM）处理24小时。裂解细胞并提取总蛋白，经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。用抗p-S6（Ser235/236）、S6、p-AKT（Ser473）、AKT和β-肌动蛋白（内参）的一抗孵育膜，随后加入二抗。通过化学发光显影蛋白质条带，并采用光密度法定量[1]
- 细胞周期分析：用CC-115（50 nM）处理HCT116细胞48小时，收集细胞，用70%乙醇固定，碘化丙啶染色。通过流式细胞术分析细胞周期分布（G0/G1、S、G2/M期）[1]
- 克隆形成测定：将HCT116细胞以200个细胞/孔接种到6孔板，贴壁24小时后加入CC-115（50 nM），培养14天。用甲醇固定克隆，结晶紫染色后计数，计算相对于对照组的克隆形成率[1]

Mice: CC-115 is being studied in single dose PK/PD studies to evaluate mTOR pathway biomarker inhibition in tumor-bearing mice, which is encouraged by the observed exposures. Plasma and tumor samples are taken for analysis at different times after a single oral dose of CC-115, either 1 mg/kg or 10 mg/kg, is given to PC-3 tumor-bearing mice. For every compound, significant inhibition of mTORC1 (pS6) and mTORC2 (pAktS473) is seen, and the degree of biomarker inhibition was correlated with plasma compound levels.

---

HCT116 colon cancer xenograft model: BALB/c nu/nu nude mice (6–8 weeks old, female) were subcutaneously injected with HCT116 cells (5×106 cells/mouse) into the right flank. When tumors reached a volume of 100–200 mm3, mice were randomly divided into 2 groups (n=8): vehicle control (0.5% carboxymethylcellulose sodium + 0.1% Tween 80) and CC-115 treatment group (10 mg/kg). CC-115 was suspended in the vehicle and administered orally once daily for 21 days. Tumor volume (measured every 3 days using calipers, volume = length × width² / 2) and body weight were recorded throughout the study. At the end of the study, mice were euthanized, and tumors were excised and weighed [1]
- PC3 prostate cancer xenograft model: BALB/c nu/nu nude mice (6–8 weeks old, male) were subcutaneously implanted with PC3 cells (1×107 cells/mouse) into the right flank. When tumors reached 150–250 mm3, mice were assigned to control (vehicle) or CC-115 (15 mg/kg, p.o.) groups (n=6). CC-115 was administered once daily for 14 days. Tumor volume and body weight were measured every 2 days. After euthanasia, tumor tissues were collected for immunohistochemical analysis [1]

口服吸收：在 SD 大鼠中，口服 CC-115 (10 mg/kg) 后，血浆最大浓度 (Cmax) 为 125 ng/mL，达峰时间 (Tmax) 为 1.5 小时，口服生物利用度 (F) 为 38% [1]
- 半衰期：大鼠口服 CC-115 后的消除半衰期 (t1/2) 为 6.2 小时，静脉注射 (2 mg/kg) 后的消除半衰期为 5.8 小时 [1]
- 代谢稳定性：CC-115 在人肝微粒体中表现出良好的代谢稳定性，孵育 60 分钟后仍有 75% 的母体化合物残留。在大鼠肝微粒体中，60分钟后剩余的母体化合物为72%[1]
- 血浆蛋白结合率：CC-115在人血浆中的血浆蛋白结合率为92%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为90%[1]

体外细胞毒性：CC-115 对正常人肺成纤维细胞 (WI-38) 的细胞毒性较低，IC50 为 890 nM，表明其对癌细胞具有高度选择性 [1]
- 体内急性毒性：小鼠单次口服 CC-115（剂量高达 100 mg/kg）14 天内未观察到明显的毒性或死亡。体重变化在对照组的 ±5% 以内 [1]
- 大鼠重复口服 CC-115（10 mg/kg，每日一次，连续 14 天）后，未观察到血清肝功能指标（ALT、AST）或肾功能指标（BUN、肌酐）的显著变化 [1]

[1]. Optimization of a Series of Triazole Containing Mammalian Target of Rapamycin (mTOR) Kinase Inhibitors and the Discovery of CC-115. J Med Chem. 2015 Jul 23;58(14):5599-5608.

CC-115 已用于前列腺癌、肿瘤转移、尤文氏肉瘤、多形性胶质母细胞瘤和慢性淋巴细胞白血病等多种癌症的治疗试验。
DNA-PK/TOR 激酶抑制剂 CC-115 是一种 DNA 依赖性蛋白激酶 (DNA-PK) 和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 的双重抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。CC-115 可结合并抑制 DNA-PK 以及 raptor-mTOR（TOR 复合物 1 或 TORC1）和 rictor-mTOR（TOR 复合物 2 或 TORC2）的活性，这可能导致表达 DNA-PK 和 TOR 的癌细胞增殖减少。 DNA-PK 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于 PI3K 相关激酶亚家族的蛋白激酶，在 DNA 损伤时被激活，并通过 DNA 非同源末端连接 (NHEJ) 途径在修复双链 DNA 断裂中发挥关键作用； mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在多种肿瘤中表达上调，在PI3K/Akt/mTOR信号通路下游发挥重要作用。

---

CC-115是一种含三唑的小分子mTOR激酶抑制剂，它是通过对早期三唑类似物进行结构优化而开发的，旨在改善其药代动力学性质和体内疗效[1]。
CC-115的作用机制是直接与mTOR的ATP结合口袋结合，抑制mTORC1和mTORC2复合物，从而阻断参与细胞增殖、存活和代谢的下游信号通路[1]。
由于其强大的mTOR抑制活性、良好的口服生物利用度和安全性，CC-115有望成为治疗实体瘤（尤其是结肠癌和前列腺癌）的口服药物[1]。

C16H16N8O

336.35

336.145

C, 57.13; H, 4.79; N, 33.31; O, 4.76

1228013-15-7

58298318

Red Solid powder

1.613

112.58

2

7

3

25

491

0

O=C1C([H])([H])N([H])C2C(=NC(=C([H])N=2)C2C([H])=C([H])C(C3=NC([H])=NN3[H])=NC=2C([H])([H])[H])N1C([H])([H])C([H])([H])[H]

GMYLVKUGJMYTFB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H16N8O/c1-3-24-13(25)7-18-15-16(24)22-12(6-17-15)10-4-5-11(21-9(10)2)14-19-8-20-23-14/h4-6,8H,3,7H2,1-2H3,(H,17,18)(H,19,20,23)

5-ethyl-3-[2-methyl-6-(1H-1,2,4-triazol-5-yl)pyridin-3-yl]-7,8-dihydropyrazino[2,3-b]pyrazin-6-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。