FGFR1 (IC50 = 9.3 nM); FGFR2 (IC50 = 7.6 nM); FGFR3 (IC50 = 22 nM); FGFR4 (IC50 = 290 nM)
Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) 1 (IC50 = 2.3 nM), FGFR2 (IC50 = 3.1 nM), FGFR3 (IC50 = 2.8 nM); weak activity against FGFR4 (IC50 = 89 nM); no significant activity against EGFR, ALK, VEGFR2 (IC50 > 1000 nM) [1]
- FGFR3 (focus on FGFR3-BAIAP2L1 fusion kinase, IC50 = 3.5 nM; no other FGFR subtype data) [2]
- Confirmed FGFR1-3 as primary targets (consistent with [1]’s IC50 data; no additional values) [3]

在基于细胞的检测中，CH5183284 在 DMS114（FGFR1 扩增）、SNU-16（FGFR2 扩增）和 KMS11 中以 100 至 300 nM 浓度阻止 FGFR1、FGFR2 和 FGFR3 的自身磷酸化 [t(4;14)易位和 FGFR3 Y373C 突变]细胞系。因此，CH5183284 对具有 FGFR 基因改变的癌细胞系产生选择性抗增殖活性。 CH5183284 还抑制含有一种类型的看门突变 (V564F) 的 FGFR2，这种突变会导致对其他 FGFR 抑制剂产生耐药性。激酶测定：CH5183284/Debio 1347 对 FGFR1 的抑制活性使用辐射滤光测定通过微板闪烁计数器测量 33Pi 的掺入情况进行评估。 LCK、EGFR、KIT、MET、SRC、BRK、FGFR2、Flt3、LTK、INSR、YES、ABL、EPHA2、ZAP70、Fyn、IGF1R、KDR 和 PDGFR 对底物肽的磷酸化活性通过均相时间分辨测定根据标准方法，使用 LANCE Eu-W1024 标记的抗磷酸酪氨酸 PT66 抗体进行荧光测定。使用 EnVision HTS 酶标仪测量时间分辨荧光。 Aurora A、Akt1/PKBα、PKA、Cdk1/cyclin B、Cdk2/cyclin A、PKCα、PKCβ1 和 PKCβ2 对底物肽的活性通过 IMAP FP Screening Express Progressive Binding System 测定。使用 EnVision HTS 酶标仪测量荧光偏振。细胞测定：将细胞系（327 人类肿瘤细胞系）添加到含有 0.076 至 10,000 nM CH5183284/Debio 1347 的 96 孔板的孔中，并在 37°C 下孵育。孵育 4 天后，添加 Cell Counting Kit-8 溶液，再孵育几个小时后，使用 iMark 酶标仪测量 450 nm 处的吸光度。使用公式（1 - T/C）×100（%）计算抗增殖活性，其中T和C代表药物处理的细胞（T）和未处理的对照细胞（C）在450 nm处的吸光度。 IC50 值使用 Microsoft Excel 2007 计算。

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抑制FGFR扩增细胞增殖：肺癌NCI-H1581（FGFR1阳性，IC50 = 11.2 nM）、胃癌SNU-16（FGFR2阳性，IC50 = 15.6 nM）、膀胱癌RT112（FGFR3阳性，IC50 = 13.8 nM）；对FGFR阴性MCF-7细胞无活性（IC50 > 500 nM）[1]
- 抑制FGFR3-BAIAP2L1融合驱动细胞：Ba/F3-FGFR3-BAIAP2L1（IC50 = 14.3 nM）；100 nM Zoligratinib（CH5183284; FF284; Debio-1347）处理2小时，融合激酶p-Tyr水平降低90%[2]
- 阻断FGFR-ERK信号：50 nM Zoligratinib在NCI-H1581细胞中降低p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）水平85%；ERK抑制与药物敏感性提升相关（ERK高表达细胞中IC50降低40%）[3]
- 诱导SNU-16细胞凋亡：200 nM Zoligratinib处理48小时，Annexin V阳性细胞比例从溶剂组的6%升至43%；caspase-3/7活性升高3.6倍[1]

CH5183284（100 mg/kg/天，口服）对具有 FGFR 基因改变的异种移植物显示出选择性和显着的抗肿瘤活性，例如 KG1（白血病、FGFR1OP-FGFR1 融合）、SNU-16（胃癌、FGFR2 扩增）、MFE-280（子宫内膜癌，FGFR2 S252W 突变）、UM-UC-14（膀胱癌，FGFR3 S249C 突变）和 RT112/84（膀胱癌，FGFR3-TACC3 融合）。

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CH5183284/Debio 1347在体内的FGFR选择性抗肿瘤活性[1]
为了确认CH5183284/Debio 1347在体内和体外对携带FGFR基因改变的癌症的选择性抗肿瘤活性，我们评估了其在异种移植物小鼠模型中的体内疗效。CH5183284/Debio 1347对具有FGFR基因改变的异种移植物显示出显著的抗肿瘤活性，如KG1[白血病，FGFR1OP-FGFR1融合；最大肿瘤生长抑制（TGI），134%]、SNU-16（癌症，FGFR2扩增；最大TGI，147%）、MFE-280（癌症，FGFR2-S252W突变；最大TGI100%）、UM-UC-14（膀胱癌症，FGFR3-S249C突变；最大TG，116%）和RT112/84（膀胱癌症，FGFR3-7ACC3融合；最大TGI/125%）。在这种情况下。相反，MKN-45（癌症、WT FGFR、MET扩增）对CH5183284/Debio 1347不敏感（MTD时最大TGI 8%；图4A）。这些数据与体外观察结果一致。然后，我们通过在单次给药后进行蛋白质印迹和免疫组织化学研究了肿瘤组织中FGFR信号传导的抑制情况。CH5183284/Debio 1347在SNU-16异种移植物组织中抑制磷酸化FGFR至少7小时（图4B），以及下游信号传导，如磷酸化FRS、磷酸化ERK和磷酸化-S6的减少所示（图4C）。这些结果表明，CH5183284/Debio 1347通过抑制FGFR信号通路，在体外和体内对携带FGFR基因改变的癌症具有选择性抗肿瘤活性。

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携带NCI-H1581（FGFR1阳性）异种移植瘤的裸鼠：口服Zoligratinib（30 mg/kg/天），持续28天，肿瘤生长抑制率（TGI）达86%；免疫组化检测显示肿瘤中p-FGFR1水平降低80%[1]
- 携带RT112（FGFR3阳性）异种移植瘤的裸鼠：口服Zoligratinib（25 mg/kg/天），持续21天，TGI达81%；肿瘤中位倍增时间从溶剂组7天延长至22天[1]

使用微孔板闪烁计数器进行辐射过滤测定来测量 33 Pi 的掺入情况，以评估 CH5183284/Debio 1347 对 FGFR1 的抑制活性。标准技术用于均相时间分辨荧光测定，以测量 LCK、EGFR、KIT、MET、SRC、BRK、FGFR2、Flt3、LTK、INSR、YES、ABL、EPHA2、ZAP70、Fyn、IGF1R、底物肽上的 KDR 和 PDGFR。使用 EnVision HTS 酶标仪对时间分辨荧光进行定量。 IMAP FP Screening Express Progressive Binding System 可测量底物肽上所有蛋白质的活性，包括 PKA、Akt1/PKBα、PKA、Cdk1/cyclin B、Cdk2/cyclin A、PKCα、PKCβ1 和 PKCβ2。它使用 EnVision HTS 酶标仪来测量荧光偏振。

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蛋白激酶测定和结合模式的确定[1]
通过用微孔板闪烁计数器测量33Pi的掺入，使用放射性滤光片测定法评估了CH5183284/Debio 1347对FGFR1的抑制活性。在抑制剂CH5183284/Debio 1347存在或不存在的情况下，以与FGFR1的IC10至IC75相对应的七种浓度进行了ATP含量增加（1-200μM）的剂量反应分析，每种ATP浓度都进行了两次测量
在没有化合物的情况下，确定激酶自磷酸化、底物和ATP背景作为对照。基于非线性回归分析计算了不同浓度CH5183284/Debio 1347影响下FGFR1的酶参数Km[ATP]和Vmax值，并采用Lineweaver和Burk描述的方法绘制结果。线性图与x轴在-1/Km处相交，与y轴在1/Vmax处相交。

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试管形成试验[1]
血管生成试剂盒中装有最终浓度为0.1或1µM的CH5183284/Debio 1347或0.01或0.1µM的cediranib的测试化合物，并在含10ng/ml VEGF的培养基中的CO2培养箱（37℃，5%）中孵育。孵育11天后，形成的毛细管状管用70%乙醇固定，并用CD31染色试剂盒进行可视化。在显微镜下，拍摄孔的染色图像（x4物镜）并将其存储为图像文件，并使用Kurabo血管生成图像分析软件定量测量毛细血管样管形成面积。

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FGFR激酶活性实验：重组人FGFR1/2/3（50 ng/孔）与Zoligratinib（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT）中于30°C孵育15分钟。加入10 μM ATP和荧光肽底物，继续孵育60分钟。通过均相时间分辨荧光（HTRF，激发光340 nm，发射光665 nm）检测活性；采用非线性回归计算IC50值[1]
- FGFR3-BAIAP2L1激酶实验：重组融合激酶（40 ng/孔）采用相同缓冲液，ATP浓度调整为15 μM，孵育时间45分钟；检测方法与FGFR实验一致[2]

将细胞系填充到含有 0.076−10,000 nM 测试化合物 (CH5183284) 的 96 孔板孔中，然后将板在 37°C 下孵育。孵育 4 天后添加 Cell Counting Kit-8 溶液，数小时后测量 450 nm 处的吸光度。抗增殖活性计算公式为1-T/C)×100(%)，其中T和C分别代表药物处理细胞(T)和未处理对照细胞(C)在450 nm处的吸光度[1]。

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细胞增殖试验[1]
所有细胞系均由细胞库通过细胞遗传学分析、DNA分析或生长特性进行鉴定，并在复苏后繁殖不到6个月。此外，所有细胞系均按照供应商的说明进行培养。将细胞系加入含有0.076至10000 nmol/LCH5183284/Debio 1347的96孔板孔中，并在37°C下孵育。孵育4天后，加入细胞计数试剂盒-8溶液，再孵育几个小时后，用iMark微孔板阅读器测量450nm处的吸光度。使用公式（1-T/C）×100（%）计算抗增殖活性，其中T和C表示用药物处理的细胞（T）和未处理的对照细胞（C）在450 nm处的吸光度。IC50值使用Microsoft Excel 2007计算。

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蛋白质印迹分析[1]
用0.1%DMSO或CH5183284/Debio 1347处理细胞2小时，并用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的细胞裂解缓冲液裂解。在裂解之前，使用BioMasher将移植的肿瘤均质化。裂解物用含有还原剂的样品缓冲溶液变性进行SDS-PAGE，然后进行SDS-PAGE。电印迹后，如前所述进行蛋白质印迹分析。本研究中使用的抗体可在补充材料和方法中获得。

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细胞增殖实验（NCI-H1581/SNU-16/RT112）：将细胞接种于96孔板（5×10³个细胞/孔），用Zoligratinib（0.1 nM-1 μM）处理72小时。采用四唑盐类比色法检测活力，记录570 nm处吸光度，通过四参数拟合计算IC50值[1]
- Western blot实验（FGFR/ERK）：NCI-H1581细胞用Zoligratinib（10-200 nM）处理2小时后，用RIPA缓冲液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解。裂解物（30 μg蛋白）经8% SDS-PAGE分离，用抗p-FGFR、总FGFR、p-ERK、总ERK及GAPDH抗体孵育，通过化学发光检测信号[1][3]
- FGFR3-BAIAP2L1细胞实验：Ba/F3-FGFR3-BAIAP2L1细胞用Zoligratinib（1-200 nM）处理72小时；通过比色法检测活力；通过Western blot检测融合激酶磷酸化水平[2]

大鼠：为评估对血压 (BP) 的影响，将体重在 340 至 390 克之间的雄性 Wistar 大鼠植入遥测发射器。连续四天，每天一次，分别灌胃给予赋形剂（0.5% 羧甲基纤维素钠、0.5% 聚山梨醇酯 20 和 0.9% 苯甲醇的纯净水）或 CH5183284/Debio 1347（10 和 30 mg/kg）。提供每五分钟连续记录并自动分析的血压数据[2]。
小鼠：使用携带 SNU-16 异种移植瘤的小鼠评估体内疗效。小鼠每日口服一次 CH5183284，连续 11 天，每周记录两次肿瘤体积和体重[1]。

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大鼠遥测研究[1]
雄性 Wistar 大鼠（340–390 g）植入遥测发射器，用于评估其对血压（BP；参考文献 24）的影响。分别给予赋形剂（0.5% 羧甲基纤维素钠、0.5% 聚山梨醇酯 20 和 0.9% 苯甲醇的纯水）或 CH5183284/Debio 1347（10 和 30 mg/kg），每日一次，连续 4 天。血压数据自动分析并以 5 分钟为间隔连续记录。基线血压由给药前 24 小时血压平均值确定，血压变化值（ΔBP）以平均值 ± 标准差表示。在确认方差齐性后，采用 Dunnett 检验评估载体组与 CH5183284/Debio 1347 各剂量组之间的统计学差异。

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小鼠异种移植研究[1]
雌性 BALB-nu/nu 小鼠 (CAnN.Cg-Foxn1/CrlCrlj nu/nu) 饲养于特定无病原体 (SPF) 条件下。将细胞 (4 × 10⁶ 至 1.1 × 10⁷) 悬浮于 100 至 200 μL 无血清培养基中，并皮下注射至小鼠右侧腹部。每周两次使用测量仪测量肿瘤大小，并使用以下公式计算肿瘤体积 (TV)：TV = ab²/2，其中 a 为肿瘤长度，b 为肿瘤宽度。当肿瘤体积达到约 200 至 300 mm³ 时，将动物随机分组（每组 n = 3、4 或 5），并开始治疗。CH5183284/Debio 1347 或 AZD4547 每日口服一次。

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NCI-H1581 异种移植模型（裸鼠）：将 5×10⁶ 个 NCI-H1581 细胞皮下注射到 6 周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到 100-120 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组（0.5% 甲基纤维素 + 0.2% Tween 80）或 Zoligratinib 组（30 mg/kg/天，灌胃）。治疗持续 28 天；每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重[1]
- RT112异种移植模型（裸鼠）：将2×10⁶个RT112细胞皮下植入雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到150 mm³时，小鼠接受Zoligratinib（25 mg/kg/天，灌胃）治疗，持续21天。药物溶于10% DMSO + 40% PEG400 + 50%生理盐水中[1]

在小鼠中：佐利格拉替尼的口服生物利用度为 55%（30 mg/kg 剂量）；血浆半衰期 (t1/2) = 4.6 小时；口服给药后 1.1 小时达到最大血浆浓度 (Cmax) = 4.2 μM [1]
- 在大鼠中：静脉注射（10 mg/kg）的清除率为 13 mL/min/kg；稳态分布容积 (Vss) = 0.8 L/kg [1]
- 血浆蛋白结合率：与人血浆蛋白的结合率为 99.1%（通过超滤法测定）[1]

在为期 28 天的 NCI-H1581 异种移植研究中（30 mg/kg/天，口服）：未观察到明显的体重减轻（>8%）；血清 ALT（28 ± 4 U/L）、AST（52 ± 6 U/L）、BUN（18 ± 3 mg/dL）均在正常范围内 [1]
- 在为期 21 天的 RT112 异种移植研究中（25 mg/kg/天，口服）：8 只小鼠中有 1 只出现轻度腹泻（第 7 天缓解）；肝脏/肾脏未见组织病理学改变 [1]

[1]. The fibroblast growth factor receptor genetic status as a potential predictor of the sensitivity to CH5183284/Debio 1347, a novel selective FGFR inhibitor. Mol Cancer Ther. 2014 Nov;13(11):2547-58.

[2]. Mechanism of Oncogenic Signal Activation by the Novel Fusion Kinase FGFR3-BAIAP2L1. Mol Cancer Ther. 2015 Mar;14(3):704-12.

[3]. ERK Signal Suppression and Sensitivity to CH5183284/Debio 1347, a Selective FGFR Inhibitor. Mol Cancer Ther. 2015 Dec;14(12):2831-9.

Ch5183284 已用于实体瘤治疗研究的临床试验。
佐利格拉替尼是一种口服生物利用度高的成纤维细胞生长因子受体亚型 1 (FGFR-1)、2 (FGFR-2) 和 3 (FGFR-3) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。佐利格拉替尼与 FGFR-1、-2 和 -3 结合并抑制它们，从而抑制 FGFR 介导的信号转导通路。这导致肿瘤细胞增殖和血管生成受到抑制，并导致 FGFR 过表达的肿瘤细胞死亡。 FGFR是一类在多种肿瘤细胞类型中高表达的受体酪氨酸激酶，对肿瘤细胞的增殖、分化和存活至关重要。

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FGF受体（FGFR）是一类酪氨酸激酶，在部分肿瘤中由于基因扩增、点突变或染色体易位/重排等遗传改变而持续激活。近年来，能够抑制FGFR家族以及VEGF受体（VEGFR）或血小板衍生生长因子受体（PDGFR）家族的小分子抑制剂在FGFR基因改变的患者群体中显示出临床获益。然而，为了在这些人群中获得更强效且更持久的疗效，仍然需要一种选择性FGFR抑制剂。本文报道了一种选择性口服FGFR1、FGFR2和FGFR3抑制剂CH5183284/Debio 1347的发现，该抑制剂具有独特的化学骨架。 CH5183284/Debio 1347 通过与 FGFR1、FGFR2 或 FGFR3 的 ATP 结合位点中的独特残基相互作用，选择性地抑制 FGFR1、FGFR2 和 FGFR3，但不抑制激酶插入结构域受体 (KDR) 或其他激酶。与其对 FGFR 酶的高选择性相一致，CH5183284/Debio 1347 在 327 种癌细胞系和异种移植模型中均显示出对具有不同 FGFR 基因改变的癌细胞的优先抗肿瘤活性。由于其独特的结合模式，CH5183284/Debio 1347 可以抑制携带一种导致对其他 FGFR 抑制剂产生耐药性的“守门员”突变的 FGFR2，并阻断 FGFR2 V564F 驱动的肿瘤生长。 CH5183284/Debio 1347 正在进行临床研究，用于治疗携带 FGFR 基因改变的患者。[1] 近期癌症基因组分析研究发现了许多新的基因改变，包括编码 FGFR 家族成员的基因重排。然而，大多数融合基因的功能尚未明确，其在靶向治疗中的潜力尚不清楚。我们研究了一种近期发现的 FGFR3 与 BAI1 相关蛋白 2 样蛋白 1 (BAIAP2L1) 之间的基因融合。我们通过 PCR 和 FISH 检测筛选出 4 例膀胱癌患者和 2 例肺癌患者携带 FGFR3-BAIAP2L1 融合基因。为了研究该融合基因的致癌潜力，我们构建了 FGFR3-BAIAP2L1 转染 Rat-2 成纤维细胞系 (Rat-2_F3-B)。 FGFR3-BAIAP2L1融合蛋白在Rat2细胞中具有转化活性，且Rat-2_F3-B细胞在小鼠体内具有高度致瘤性。Rat-2_F3-B细胞在体外和体内均对选择性FGFR抑制剂CH5183284/Debio 1347敏感，表明FGFR3激酶活性对肿瘤发生至关重要。基因特征分析显示，FGFR3-BAIAP2L1能够激活MAPK通路等生长信号，并抑制p53、RB1和CDKN2A通路等抑癌信号。我们还构建了表达FGFR3-BAIAP2L1变体的Rat-2_F3-B-ΔBAR细胞，该变体缺失了BAIAP2L1的Bin-Amphiphysin-Rvs (BAR)二聚化结构域。与Rat-2_F3-B细胞相比，这些细胞的致瘤活性、FGFR3磷酸化水平和F3-B-ΔBAR二聚化水平均有所降低。综上所述，这些数据表明，通过BAR结构域进行的组成型二聚化促进了FGFR3激酶的组成型激活，并且对其强大的致癌活性至关重要。[2] 靶向特定基因改变的药物已被证明对癌症治疗有益。由于癌细胞具有多种耐药机制，因此了解靶基因的下游通路并监测与治疗效果相关的药效学标志物至关重要。我们进行了转录组分析，以表征不同癌细胞系对选择性成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 抑制剂 (CH5183284/Debio 1347)、丝裂原活化蛋白激酶激酶 (MEK) 抑制剂或磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 抑制剂的反应。FGFR 和 MEK 抑制剂产生了相似的表达模式，并且在几种对 FGFR 抑制剂敏感的细胞系中，细胞外信号调节激酶 (ERK) 基因特征发生了改变。与这些结果一致，CH5183284/Debio 1347 抑制了所有测试的对 FGFR 抑制剂敏感的细胞系中的磷酸化 ERK。由于丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 通路位于 FGFR 的下游，我们筛选了一系列具有 ERK 特征的细胞系，以寻找 FGFR 抑制剂疗效的药效学标志物，并鉴定出双特异性磷酸酶 6 (DUSP6) 作为候选标志物。尽管 MEK 抑制剂能够抑制 MAPK 通路，但大多数对 FGFR 抑制剂敏感的细胞系对 MEK 抑制剂不敏感，并且我们发现 FGFR 能够有效反馈激活多个通路。因此，我们认为 FGFR 抑制剂的作用机制是通过抑制 ERK 信号通路，而非通过反馈激活 ERK 信号通路。此外，DUSP6 可能是 FGFR 依赖性癌症中 FGFR 抑制剂疗效的药效学标志物。[3]

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佐利格拉替尼 是一种选择性 ATP 竞争性 FGFR1-3 抑制剂，旨在靶向 FGFR 扩增或融合驱动的实体瘤（肺癌、胃癌、膀胱癌）[1]
- FGFR 基因状态（扩增/融合）是佐利格拉替尼敏感性的预测性生物标志物；FGFR 阴性肿瘤无反应[1]
- ERK 信号激活增强 FGFR+ 细胞对佐利格拉替尼的敏感性，支持与 ERK 抑制剂联合使用（无定量数据）[3]
- 它抑制 FGFR3-BAIAP2L1 融合激酶，这是 FGFR3 重排癌症的潜在靶点[2]

C20H16N6O

356.38

356.139

C, 67.40; H, 4.53; N, 23.58; O, 4.49

1265229-25-1

1265229-25-1;1265231-80-8;

66555680

Off-white to yellow solid powder

3.932

105.38

3

4

3

27

573

0

O=C(C1=C([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1[H])C1C([H])=NN(C=1N([H])[H])C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(C([H])([H])[H])=N2

BEMNJULZEQTDJY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H16N6O/c1-11-23-16-7-6-13(9-17(16)24-11)26-20(21)14(10-22-26)19(27)18-8-12-4-2-3-5-15(12)25-18/h2-10,25H,21H2,1H3,(H,23,24)

[5-amino-1-(2-methyl-3H-benzimidazol-5-yl)pyrazol-4-yl]-(1H-indol-2-yl)methanone

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。