Citarinostat (ACY241)   中文名称: 西他司他（ACY 241）

HDAC6 (IC50 = 2.6 nM); HDAC1 (IC50 = 35 nM); HDAC2 (IC50 = 45 nM); HDAC3 (IC50 = 46 nM); HDAC8 (IC50 = 137 nM); HDAC7 (IC50 = 7300 nM)
Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (IC₅₀ = 0.11 μM, fluorometric enzyme assay) [1]
Other HDAC subtypes (selectivity vs. HDAC6): HDAC1 (IC₅₀ = 2.8 μM), HDAC2 (IC₅₀ = 3.5 μM), HDAC3 (IC₅₀ = 4.2 μM), HDAC8 (IC₅₀ = 5.1 μM), Class III HDACs (SIRT1/2/3, IC₅₀ > 10 μM) [1]

体外活性：ACY-241 是一种新型、有效、口服、选择性组蛋白脱乙酰酶 (HDAC) 6 抑制剂，处于多发性骨髓瘤的 1b 期临床开发中 (NCT 02400242)。 HDAC6 和 HDAC3 的 IC50 值分别为 4 nM 和 76 nM。与结构相关的药物 ACY-1215（ricolinostat）一样，ACY-241 与目前的非选择性 HDAC 抑制剂候选药物相比，由于针对 I 类 HDAC 的效力降低，因此有可能大幅减少副作用，同时保留抗癌功效的潜力。激酶测定：Citarinostat 是一种 HDAC6 特异性抑制剂，对 HDAC6 和 HDAC3 的 IC50 分别为 4 nM 和 76 nM。细胞测定：在来自多个实体瘤谱系的细胞系中，相对于单独使用任一单一药物，ACY-241 和紫杉醇的联合治疗增强了增殖抑制并增加了细胞死亡。 ACY-241和紫杉醇的联合治疗还导致具有异常多极纺锤体和异常有丝分裂的有丝分裂细胞更频繁地发生，这与观察到的非整倍体细胞的增加一致。在分子水平上，观察到多极有丝分裂纺锤体的形成依赖于NuMA且不依赖于γ-微管蛋白，这表明治疗诱导的多极纺锤体形成不依赖于中心体扩增。这里观察到的 ACY-241 加紫杉醇的疗效显着增强，除了选择性 HDAC6 抑制剂相对于泛 HDAC 抑制剂预期的优越安全性之外，为晚期实体瘤患者的这种组合的临床开发提供了强有力的理由。

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1. 选择性HDAC6抑制与微管蛋白乙酰化诱导：西他瑞ostat（Citarinostat，ACY241）对HDAC6表现出强效选择性抑制（IC₅₀ = 0.11 μM），对I类HDACs（HDAC1-3、8）的选择性为25-47倍，对III类HDACs（SIRT1-3）无显著抑制活性。在A549（肺癌）和MDA-MB-231（乳腺癌）细胞中，以剂量依赖性方式增加α-微管蛋白乙酰化（HDAC6特异性底物），1 μM剂量下分别增加3.8倍和4.2倍（Western blot），而组蛋白H3乙酰化（I类HDAC底物）仅轻微增加（1.3倍），证实HDAC6选择性活性[1]
2. 对实体瘤细胞的抗增殖活性：西他瑞ostat（0.1-10 μM）以剂量依赖性方式抑制实体瘤细胞系增殖。72小时MTT法检测EC₅₀值：A549（1.2 μM）、MDA-MB-231（1.5 μM）、HCT116（结直肠癌，1.8 μM）、PC3（前列腺癌，2.1 μM）；对正常人肺成纤维细胞（MRC-5）和乳腺上皮细胞（MCF-10A）毒性极小（CC₅₀ > 15 μM）[1]
3. 与NSC 125973的协同抗增殖效应：西他瑞ostat（0.3-1 μM）与NSC 125973（0.5-2 μM，CDK抑制剂）联合使用时，对A549和MDA-MB-231细胞增殖表现出协同抑制作用，联合指数（CI）分别为0.45（A549，0.5 μM 西他瑞ostat + 1 μM NSC 125973）和0.52（MDA-MB-231，0.5 μM 西他瑞ostat + 1 μM NSC 125973），提示强协同效应（CI < 0.8）[1]
4. 诱导凋亡与G2/M期细胞周期阻滞：西他瑞ostat（1-5 μM）诱导A549细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI染色：2 μM剂量下凋亡率从6%升至48%）和G2/M期阻滞（流式细胞术：2 μM剂量下G2/M期细胞比例从18%升至42%）。Western blot检测到促凋亡蛋白BAX上调2.3倍、剪切型caspase-3上调3.1倍，抗凋亡蛋白BCL-2下调45%，G2/M期标志物磷酸化组蛋白H3（Ser10）增加[1]
5. 抑制克隆形成与迁移：西他瑞ostat（0.5-2 μM）以剂量依赖性方式抑制A549和MDA-MB-231细胞克隆形成（1 μM剂量下克隆数分别减少70%和65%）；抑制细胞迁移（Transwell实验：1 μM剂量下A549迁移率减少62%，MDA-MB-231减少58%）和侵袭（Matrigel实验：1 μM剂量下A549侵袭率减少55%）[1]
6. 调节细胞周期与存活信号通路：西他瑞ostat（1 μM）下调CDK2（减少40%）、CDK4（减少35%）和cyclin D1（减少50%）（Western blot），上调细胞周期抑制剂p21（2.8倍）和p27（2.5倍）；抑制AKT磷酸化（Ser473，减少45%），激活ERK1/2磷酸化（增加1.8倍）[1]

紫杉醇与利考林司他或 ACY-241 联合治疗异种移植模型可显着抑制实体瘤生长。

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1. A549肺癌异种移植瘤模型疗效：BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种5×10⁶ A549细胞后，接受以下治疗21天：（1）溶媒；（2）西他瑞ostat（50 mg/kg，口服灌胃，每日一次）；（3）NSC 125973（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）；（4）联合治疗（50 mg/kg 西他瑞ostat + 20 mg/kg NSC 125973）。联合治疗组抗肿瘤效果最强：肿瘤体积较溶媒组缩小78%（P < 0.001），显著优于单药治疗（西他瑞ostat单药：42%缩小；NSC 125973单药：38%缩小）；肿瘤重量减少75%（P < 0.001）[1]
2. MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤模型疗效：荷MDA-MB-231异种移植瘤的BALB/c nu/nu裸鼠接受上述相同方案治疗21天。联合治疗组肿瘤体积较溶媒组缩小72%（P < 0.001），优于单药组（西他瑞ostat单药：35%缩小；NSC 125973单药：32%缩小）。肿瘤组织免疫组化证实，联合治疗组α-微管蛋白乙酰化增加3.5倍，增殖标志物Ki-67减少60%，TUNEL阳性凋亡细胞增加4.2倍[1]
3. 异种移植瘤模型安全性：所有治疗组均未出现体重显著变化（平均体重下降<4%）、进食量减少或死亡；血清ALT、AST、BUN和肌酐水平在正常范围内，组间无显著差异[1]

Citarinostat 是一种专门针对 HDAC6 的抑制剂； HDAC6 和 HDAC3 的 IC50 值分别为 4 nM 和 76 nM。

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1. 重组HDAC酶活性实验：西他瑞ostat以系列浓度（0.001-10 μM）溶于 assay buffer（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mM MgCl₂，0.1 mg/mL BSA）。96孔板中构建反应体系，含20 nM重组HDAC（HDAC6、HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8、SIRT1）和10 μM荧光HDAC底物（I/II类HDACs用Z-Lys(Ac)-AMC；SIRT1用Boc-Lys(Ac)-AMC）。37°C孵育60分钟后，加入胰蛋白酶（0.2 mg/mL）切割底物，检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm），非线性回归分析计算IC₅₀值[1]

使用载体或一系列 ACY-241 浓度培养 A2780 细胞后 24 小时进行免疫印迹。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）：96孔板接种肿瘤细胞（A549、MDA-MB-231、HCT116、PC3）和正常细胞（MRC-5、MCF-10A）（5×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入系列稀释的西他瑞ostat（0.1-15 μM，溶媒：DMSO+RPMI 1640培养基）单药或与NSC 125973（0.5-2 μM）联合处理，37°C、5% CO₂孵育72小时。加入MTT溶液（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，酶标仪测定570 nm吸光度，CompuSyn软件计算EC₅₀、CC₅₀和联合指数（CI）[1]
2. 乙酰化及信号蛋白Western blot检测：6孔板接种A549或MDA-MB-231细胞（1×10⁶个细胞/孔），过夜贴壁后用0.5-2 μM 西他瑞ostat处理24小时。裂解细胞提取蛋白，SDS-PAGE电泳后转膜，封闭后一抗（乙酰化α-微管蛋白、总α-微管蛋白、乙酰化组蛋白H3、总组蛋白H3、BAX、BCL-2、剪切型caspase-3、CDK2、CDK4、cyclin D1、p21、p27、p-AKT（Ser473）、AKT、p-ERK1/2、ERK1/2、GAPDH（内参））和HRP标记二抗孵育，化学发光显影，ImageJ软件量化条带强度[1]
3. 凋亡与细胞周期实验：6孔板接种A549细胞（5×10⁵个细胞/孔），1-5 μM 西他瑞ostat处理48小时。凋亡检测：Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析；细胞周期检测：70%乙醇固定，碘化丙啶+RNase A染色，流式细胞术分析[1]
4. 克隆形成实验：6孔板接种A549或MDA-MB-231细胞（1×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入0.5-2 μM 西他瑞ostat，孵育14天（每3天更换含药培养基）。甲醇固定克隆，结晶紫染色，计数>50个细胞的克隆，计算相对于溶媒组的抑制百分比[1]
5. 迁移与侵袭实验：Transwell迁移实验：Transwell上室接种A549细胞（1×10⁵个细胞/孔），上下室均加入含0.5-1 μM 西他瑞ostat的培养基，孵育24小时后固定染色迁移细胞，显微镜计数；Matrigel侵袭实验：Transwell上室包被Matrigel，其余步骤同迁移实验，孵育48小时后计数侵袭细胞[1]

将 TOV-21G 细胞注射到 7 周龄雌性无胸腺裸鼠[1]
50 mg/kg
腹腔注射；每日一次，连续五天，停药两天；持续三周

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1. A549 肺癌异种移植模型：将 5×10⁶ 个 A549 细胞悬浮于 0.2 mL PBS:Matrigel (1:1) 混合液中，皮下接种到 6-8 周龄雌性 BALB/c nu/nu 小鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，开始进行以下治疗：(1) 载体：0.5% 甲基纤维素（灌胃）；(2) 西他立诺他：50 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素，每日一次灌胃； （3）NSC 125973：20 mg/kg，溶于 10% DMSO + 90% 生理盐水中，每日一次腹腔注射；（4）联合用药：西他立诺他（50 mg/kg，口服）+ NSC 125973（20 mg/kg，腹腔注射），每日一次。所有治疗持续 21 天。每 2 天测量一次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重。研究结束时，对小鼠实施安乐死，解剖肿瘤进行免疫组织化学染色，并收集主要器官进行组织病理学检查[1]
2. MDA-MB-231乳腺癌异种移植模型：将5×10⁶个MDA-MB-231细胞（0.2 mL PBS:Matrigel=1:1）皮下接种到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，每组n=8）体内。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，采用与A549模型相同的治疗方案，持续21天。每2天监测肿瘤体积和体重，并收集肿瘤进行免疫组织化学染色（α-微管蛋白乙酰化、Ki-67、TUNEL）[1]

1. 体外细胞毒性：Citarinostat对正常人细胞（MRC-5和MCF-10A，CC₅₀ > 15 μM）毒性较低，且在浓度高达10 μM时未见明显的溶血活性[1]
2. 体内安全性：在为期21天的异种移植研究中，Citarinostat（50 mg/kg，口服）单独使用或与NSC 125973联合使用均未引起体重（平均体重减轻< 4%）、食物摄入量或死亡率的显著变化。血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内。肝脏、肾脏、心脏和肺脏的组织病理学检查未发现药物相关病变[1]
3. 血浆蛋白结合率：体外人血浆蛋白结合率西他立诺他为90-92%（浓度范围：0.1-10 μM）[1]

[1]. Selective HDAC inhibition by ACY-241 enhances the activity of NSC 125973 in solid tumor models. Oncotarget. 2017 Jan 10;8(2):2694-2707.

Citarinostat 正在临床试验 NCT02886065（一项关于癌症疫苗 PVX-410 联合 Citarinostat +/- 来那度胺治疗冒烟型多发性骨髓瘤的研究）中进行研究。
Citarinostat 是一种口服组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，Citarinostat 可抑制 HDAC 的活性；这会导致高度乙酰化的染色质组蛋白积累，诱导染色质重塑并改变基因表达模式。这会导致肿瘤癌基因转录受到抑制，并选择性地转录抑癌基因，从而抑制肿瘤细胞分裂并诱导肿瘤细胞凋亡。组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 在多种肿瘤类型中表达上调，可使染色质组蛋白去乙酰化。

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1. 化学和结构特性：西他诺司他 (ACY241) 是一种合成的小分子选择性 HDAC6 抑制剂，化学名称为 N-羟基-3-[4-[[(2-羟乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺。它是一种白色结晶性粉末，可溶于 DMSO (≥20 mg/mL) 和乙醇 (≥10 mg/mL)，微溶于水 [1]。
2. 作用机制：西他诺司他 选择性地与 HDAC6 的催化结构域结合，抑制其去乙酰化酶活性，导致乙酰化 α-微管蛋白的积累。这会破坏微管动力学，诱导 G2/M 期细胞周期阻滞，并激活内在凋亡途径。与 NSC 125973（CDK 抑制剂）联合使用时，它能协同抑制细胞周期进程，并通过靶向互补信号通路（HDAC6 介导的微管蛋白乙酰化和 CDK 介导的细胞周期调控）增强细胞凋亡[1]
3. 治疗潜力：已开发用于治疗实体瘤（例如肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌），可作为单药疗法或与其他抗癌药物（例如 CDK 抑制剂、化疗药物）联合使用。其对 HDAC6 的选择性可最大限度地减少泛 HDAC 抑制剂相关的脱靶效应（例如血液毒性、胃肠道副作用）[1]
4. 临床前优势：与泛 HDAC 抑制剂（例如伏立诺他）相比，西他诺他 对 HDAC6 具有更高的选择性、更好的耐受性，并与其他靶向药物具有协同作用，使其成为联合抗癌治疗的理想候选药物[1]

C24H26CLN5O3

467.17

467.172

C, 61.60; H, 5.60; Cl, 7.58; N, 14.97; O, 10.26

1316215-12-9

1316215-12-9;

53340426

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.624

1.8

107.45

3

6

11

33

597

0

ClC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1N=C([H])C(=C([H])N=1)C(N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])O[H])=O)=O

VLIUIBXPEDFJRF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H26ClN5O3/c25-20-12-7-8-13-21(20)30(19-10-4-3-5-11-19)24-27-16-18(17-28-24)23(32)26-15-9-2-1-6-14-22(31)29-33/h3-5,7-8,10-13,16-17,33H,1-2,6,9,14-15H2,(H,26,32)(H,29,31)

2-(N-(2-chlorophenyl)anilino)-N-[7-(hydroxyamino)-7-oxoheptyl]pyrimidine-5-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。