| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Protein arginine deiminase 4 (PAD4); IC50 = 5.9 ± 0.3 μM [1]
Pan-PAD inhibitor (inhibits all active PAD isozymes with near equal potency); kinact/KI = 13,000 M⁻¹·min⁻¹ for PAD4 [1] Also inhibits PAD2 and PAD4 expressed in inflammatory cells [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
盐酸氯脒是一种基于卤代乙脒的生物利用度高的药物，能有效抑制所有活性PAD同工酶（PAD4的kinact/KI=13,000 M-1 min-1）[1]。盐酸氯脒（0、5、10、15、20、25、50 μg/mL，24小时）可诱导HT29和TK6淋巴母细胞。剂量图见圆形细胞模型。与盐酸氯脒诱导的细胞相比，导管脒系列（HT29）细胞的耐受性相对较低[2]。在动物模型中，盐酸氯脒可促进和抑制中性粒细胞胞外托盘的形成和组蛋白H3酸化[4]。
盐酸氯脒以时间和浓度依赖的方式不可逆地灭活PAD4。这种灭活作用依赖于钙离子，对钙结合形式的酶的亲和力比对氯脒高10倍以上。底物（BAEE）可防止失活，这与活性位点修饰一致。快速稀释和透析实验表明酶活性无法恢复，证实了不可逆失活。动力学参数：kinact = 2.4 ± 0.2 min⁻¹，KI = 180 ± 33 μM，kinact/KI = 13,000 M⁻¹·min⁻¹ [1] Cl-amidine 以剂量依赖性方式（0–200 μM）拮抗 PAD4 介导的 CV-1 细胞中 p300GBD-GRIP1 相互作用的增强作用 [1] Cl-amidine 以剂量依赖性方式诱导 TK6 淋巴母细胞凋亡，Annexin V/PI 染色结果显示（0–50 μg/ml，24 小时）。相比之下，HT29结肠癌细胞（p53突变型）对氯脒诱导的细胞凋亡具有相对的抵抗力[2] 在从小鼠结肠分离的CD45⁺炎症细胞中，氯脒处理（75 mg/kg，腹腔注射或口服）可提高p53水平，增加p21WAF1表达，并诱导PARP裂解，表明细胞周期阻滞和细胞凋亡[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Cl-amidine（75 mg/kg，每日一次腹腔注射）可预防和治愈小鼠 DSS 诱导的膀胱炎[2]。组织学评分在给予可乐定（5、25、75 mg/kg，每日一次，侧壁灌胃）后呈剂量依赖性显著降低[2]。
在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中，预防性腹腔注射Cl-amidine（75 mg/kg/天，从第0天开始）可显著减轻结肠炎症（组织学评分13.9±1.6 vs 单独DSS组的24.2±1.7），预防DSS诱导的结肠缩短（结肠长度8.4±0.2 cm vs 单独DSS组的7.2±0.2 cm），并改善整体健康状况（总运动距离3190±401 m vs 单独DSS组的800±163 m）[2] 在结肠炎发作后第7天开始，治疗性口服灌胃给予Cl-amidine（5、25、75 mg/kg/天）可降低组织学评分。氯脒治疗以剂量依赖的方式降低评分（分别为 17.4±3.7、15.5±2.3 和 3.1±0.3，而 2 周时 DSS 单独治疗组为 34.8±1.4）。氯脒治疗可预防体重减轻和结肠萎缩，且与水处理的对照组相比，白细胞计数无显著变化 [2] 氯脒治疗（75 mg/kg，腹腔注射）显著降低了 DSS 处理小鼠结肠中的 PAD 活性和总蛋白瓜氨酸化水平。肽基瓜氨酸含量也降低。DSS 结肠炎中 PAD 水平（泛 PAD 免疫反应性评分）升高，而氯脒可抑制其升高 [2] TUNEL 检测显示，氯脒可增加 DSS 诱导的结肠炎中肠系膜淋巴结 (MLN) 炎症细胞的凋亡（与 DSS 单独治疗组相比，DSS+氯脒组的免疫反应性评分显著升高）。相反，经氯脒处理的小鼠结肠上皮细胞凋亡减少，表明其对正常结肠上皮具有保护作用[2] |
| 酶活实验 |
IC50 测定：将 PAD4 与不同浓度的 Cl-脒在 10 mM 钙存在下于 37°C 预孵育 15 分钟。加入 10 mM BAEE 启动反应。孵育后，定量测定瓜氨酸的生成量。浓度-反应数据拟合方程为：分数活性 = 1/(1+[I]/IC50) [1]
时间进程失活：将 PAD4 与不同浓度的 Cl-脒在含有 BAEE 的测定缓冲液中孵育。在不同时间点取样，并通过速冻终止酶活性。定量测定瓜氨酸的生成量。将进程曲线拟合方程为 [Cit] = v₁(1-e^{-k_obs t})/k_obs，以获得准一级反应速率常数。将 k_obs 值与 Cl-脒浓度作图，并拟合 k_obs = k_inact[I]/(K_I+[I]) [1] 快速稀释实验：将预先形成的 PAD4-Cl-脒复合物（通过将酶与 250 μM Cl-脒在 37°C 下孵育 30 分钟生成）稀释 100 倍到含有 10 mM BAEE 的测定缓冲液中。监测产物生成随时间的变化。未观察到活性恢复，表明发生了不可逆失活 [1] 透析实验：将预先形成的 PAD4-Cl-脒复合物在缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM EDTA、500 mM NaCl、1 mM DTT、10% 甘油）中透析 3.5 小时，然后再透析 16.5 小时。在两个时间点均未观察到酶活性的恢复，排除了慢结合可逆抑制的可能性[1] 钙依赖性：在加入BAEE之前，将PAD4与Cl-amidine在有钙或无钙的条件下预孵育。在测定开始时，向无钙预孵育样品中加入钙以激活PAD4。Cl-amidine优先使酶的钙结合形式失活，失活倍数>10倍[1] 组织样品中PAD活性测定：将结肠或脾脏裂解液加入含有50 mM NaCl、10 mM CaCl₂、2 mM DTT、100 mM Tris pH 7.6和10 mM BAEE的反应缓冲液中。反应在37°C下进行2小时，然后冷冻保存。加入 COLDER 显色液（用于检测瓜氨酸化蛋白），于 95°C 孵育 30 分钟，并在 540 nm 处测量吸光度。使用空白样品扣除背景值，并将数据标准化至蛋白质浓度 [2] 肽基瓜氨酸测定：使用 Sephadex G-10 柱对组织裂解液进行脱盐，以去除游离瓜氨酸。将脱盐后的样品与 COLDER 溶液反应，于 95°C 孵育 30 分钟，并在 540 nm 处测量吸光度。使用重悬缓冲液扣除背景值，并将数据标准化至蛋白质浓度 [2] |
| 细胞实验 |
细胞凋亡分析[2]。
细胞类型： TK6 淋巴母细胞和 HT29 结肠癌细胞。 测试浓度： 0、5、10、15、20、25、50 μg/mL。 孵育时间： 24 小时。 实验结果： 细胞凋亡的诱导呈剂量依赖性。 哺乳动物双杂交实验：将编码荧光素酶报告基因构建体、与 Gal4 DNA 结合域融合的 p300GBD、与 VP16 激活域融合的 GRIP1 AD1 结构域以及野生型 PAD4 或催化缺陷型 C645S 突变体的质粒瞬时转染至 CV-1 细胞。转染 3 小时后更换培养基。将溶于 10 mM Na-HEPES (pH 7.0) 缓冲液中的 Cl-amidine 以 0 至 200 μM 的浓度加入细胞中。孵育 40 小时后，制备细胞提取物并定量荧光素酶活性。Cl-amidine 以剂量依赖的方式拮抗 PAD4 介导的 p300GBD-GRIP1 相互作用的增强，在 C645S 转染细胞中抑制作用极小 [1] TK6 和 HT29 细胞凋亡检测：将细胞以 1×10⁶ 个细胞/孔的密度接种，培养 24 小时。加入刀豆蛋白 A (2.5 μg/ml) 激活 TK6 细胞 12 小时，然后洗去刀豆蛋白 A。加入含有 Cl-amidine (0–50 μg/ml) 的新鲜培养基，培养 24 小时。收集细胞，用 Annexin V/碘化丙啶染色，然后进行流式细胞术分析。 TK6 细胞表现出剂量依赖性凋亡，而 HT29 细胞则相对具有抵抗力 [2] 组织切片 TUNEL 检测：对经处理的小鼠的结肠连续切片进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL)。生物素标记的核苷酸掺入 3'-OH DNA 末端，然后链霉亲和素-HRP 结合，并用二氨基联苯胺 (DAB) 检测。凋亡细胞核呈深棕色。复染采用 CAT 苏木精。对上皮区域和肠系膜淋巴结中的 TUNEL 进行定量。与单独使用 DSS 相比，Cl-脒增加了肠系膜淋巴结炎症细胞的凋亡，但减少了上皮细胞的凋亡 [2] CD45⁺ 炎症细胞的蛋白质印迹分析：分离结肠黏膜细胞，并使用磁珠阳性选择纯化 CD45⁺ 炎症细胞。用针对 p53、p21WAF1/Cip1 和 PARP 的抗体检测细胞裂解液。氯脒处理（75 mg/kg，腹腔注射或口服）可提高 p53 水平，增加 p21 表达，并诱导 PARP 裂解，表明细胞周期阻滞和细胞凋亡 [2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： C57BL/6 小鼠（8-12 周龄，DSS 结肠炎小鼠模型）[2]。
剂量： 75 mg/kg。给药途径：腹腔注射，每日一次。 实验结果： 体内抑制 PAD 活性、蛋白质瓜氨酸化和结肠中 PAD 水平。 动物/疾病模型： C57BL/6 小鼠（8-12 周龄，DSS 结肠炎小鼠模型）[2]。 剂量： 5、25、75 mg/kg。 给药途径： 灌胃，每日一次。 实验结果： 组织学评分显著降低。 在DSS诱导的结肠炎模型中，采用预防性治疗：C57BL/6小鼠（8-12周龄）从第0天开始饮用含2%葡聚糖硫酸钠（DSS）的水。将Cl-amidine溶解于1×PBS中，从第0天开始，每天腹腔注射75 mg/kg体重（相当于人每日6.1 mg/kg的剂量）。第14天，采集血液、脾脏和结肠样本。测量结肠长度，并对结肠进行组织学（H&E染色）、免疫组织化学和炎症细胞分离处理。组织学评分的计算方法是将炎症严重程度（0-3）、范围（0-3）和隐窝损伤（0-4）的百分比乘以面积受累百分比（0-4）[2]。 结肠炎发作后的治疗（灌胃）：小鼠接受2% DSS处理1周以诱导中度结肠炎。从第7天开始，每天通过灌胃给予小鼠Cl-amidine（溶于1×PBS），剂量分别为5、25或75 mg/kg，同时继续给予DSS处理一周。第14天收集结肠并进行分析。Cl-amidine以剂量依赖的方式降低组织学评分，防止体重减轻和结肠萎缩，并且与水处理的对照组相比，对白细胞计数没有显著影响[2]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
研究期间，无论采用何种治疗方案，均未发生动物死亡。氯脒治疗组（水+氯脒组和DSS+氯脒组）的组织中未观察到明显的异常。水+氯脒组的体重增加（4.1±0.7 g）高于仅用水组（2.8±0.4 g）。水组（5,100±600 WBCs/μl）和水+氯脒组（5,900±400 WBCs/μl）的总白细胞计数无显著差异[2]。
氯脒治疗未观察到全身免疫抑制作用。即使在之前的RA模型中，每日以高达100 mg/kg/天的剂量连续给药56天，也未观察到毒性迹象[2]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Cl-amidine 是一种基于卤代乙酰胺的不可逆 PAD4 失活剂。它通过共价键形成特异性地修饰活性位点半胱氨酸 (Cys645)。其不可逆性源于稳定硫醚加合物的形成。Cl-amidine 具有生物利用度，且与 F-amidine 相比效力更强（IC50 为 5.9 μM，而 F-amidine 为 21.6 μM）[1]
PAD4 活性失调与类风湿性关节炎 (RA) 和炎症性肠病 (IBD) 相关。Cl-amidine 可抑制 DSS 小鼠模型中的结肠炎，并降低小鼠胶原诱导性关节炎 RA 模型中的疾病严重程度。这些发现证实了 PAD 可作为 IBD 和 RA 的治疗靶点 [1][2] 小鼠和人类结肠炎组织中 PAD（PAD2 和 PAD4）水平升高。氯脒作为一种泛PAD抑制剂，可降低体内PAD活性、蛋白质瓜氨酸化和PAD水平。该化合物通过p53依赖性通路（p53、p21和PARP裂解的增加）诱导炎症细胞（例如肠系膜淋巴结中的细胞）凋亡，从而阐明其抗炎作用的机制[2]。 |
| 分子式 |
C14H20CL2N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
347.24
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| 精确质量 |
346.096
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| CAS号 |
1373232-26-8
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| 相关CAS号 |
D-Cl-amidine hydrochloride;Cl-amidine;913723-61-2;Cl-amidine TFA;1043444-18-3;D-Cl-amidine;1404060-15-6
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| PubChem CID |
74889978
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| tPSA |
111
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
22
|
| 分子复杂度/Complexity |
381
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(CCl)N)C(=O)N.Cl
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| InChi Key |
OPFMEGSAOZAJIV-MERQFXBCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H19ClN4O2.ClH/c15-9-12(16)18-8-4-7-11(13(17)20)19-14(21)10-5-2-1-3-6-10;/h1-3,5-6,11H,4,7-9H2,(H2,16,18)(H2,17,20)(H,19,21);1H/t11-;/m0./s1
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| 化学名 |
N-[(1S)-1-(Aminocarbonyl)-4-[(2-chloro-1-iminoethyl)amino]butyl]-benzamide Hydrochloride
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| 别名 |
Cl amidine hydrochlorideCl amidine HClCl-amidine HCl Cl-amidine hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~143.99 mM)
H2O : ~50 mg/mL (~143.99 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5.5 mg/mL (15.84 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8799 mL | 14.3993 mL | 28.7985 mL | |
| 5 mM | 0.5760 mL | 2.8799 mL | 5.7597 mL | |
| 10 mM | 0.2880 mL | 1.4399 mL | 2.8799 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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