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COTI-2

别名: COTI2; COTI-2; COTI 2
目录号: V3174 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
COTI-2 是一种口服的第三代突变 p53 蛋白（肿瘤抑制因子）小分子激活剂。
COTI-2 CAS号: 1039455-84-9
产品类别: p53
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
COTI-2 是一种口服的第三代突变 p53 蛋白（肿瘤抑制因子）小分子激活剂。它具有潜在的抗癌活性，因为它可以将突变的p53蛋白恢复到其野生型构象。另一种 AKT2 抑制剂是 COTI-2。体外和体内测试均表明 COTI-2 对多种人类癌症的多种癌细胞系非常有效。此外，与传统化疗和靶向治疗药物相比，它显示出更好的疗效，并且在小鼠中毒性较低。早期对COTI-2作用机制的研究表明，它既不是传统的激酶抑制剂，也不是Hsp90蛋白的抑制剂，而是通过诱导细胞凋亡来杀死癌细胞。 COTI-2 目前正在进行临床试验。
生物活性&实验参考方法
靶点
p53
Mutant p53; PI3K/AKT/mTOR pathway [1]
Mutant p53; PI3K/AKT/mTOR pathway [2]
体外研究 (In Vitro)
据称，缩氨基硫脲 COTI-2 可以促进突变型 p53 的重新折叠并恢复野生型 p53 的功能。在纳摩尔浓度下，它可有效对抗多种来源的人类肿瘤细胞系，并通过细胞凋亡导致细胞死亡[1]。在体外和体内，COTI-2 对多种人类癌症的多种癌细胞系都非常有效。在两种激酶测定中评估的来自重要癌症相关激酶途径的 200 多种激酶并未被 COTI-2 显着抑制，并且 COTI-2 不会抑制 Hsp90 的 ATP 酶活性，这是一种广泛分布的分子伴侣，对细胞存活和细胞周期调节至关重要[2 ]。
COTI-2是一种靶向突变型p53并负向调控PI3K/AKT/mTOR通路的小分子化合物，具有抗癌潜力 [1]
COTI-2对多种人类癌细胞系（涵盖结直肠癌、肺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、乳腺癌、白血病、子宫内膜癌和胰腺癌）表现出强效抗增殖活性，IC₅₀值达纳摩尔级，不受组织来源或遗传背景（如TP53、KRAS、PIK3CA突变）影响。在抑制结直肠癌细胞（SW620、COLO-205、HCT-15）、非小细胞肺癌细胞（H292、H1975）和胶质母细胞瘤细胞（U87-MG、SNB-19）增殖方面，其效果优于西妥昔单抗、厄洛替尼、顺铂和卡莫司汀。COTI-2通过激活半胱天冬酶级联反应诱导癌细胞（如SHP-77、DMS-114、DMS-153）凋亡，Annexin V/7AAD染色及泛半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK可阻断凋亡的结果证实了这一点。它能降低SHP-77细胞中AKT（Ser473）和半胱天冬酶-9（Thr125）的磷酸化水平。COTI-2不会显著抑制200多种激酶或Hsp90 ATP酶活性 [2]
体内研究 (In Vivo)
在 10 mg/kg 的剂量下，COTI-2 显着减缓了人类结直肠肿瘤 HT-29 异种移植物的生长。在低至 3 mg/kg 的剂量下，COTI-2 也显着减缓了 SHP-77 SCLC 异种移植模型中肿瘤的生长。 OVCAR-3、MDA-MB-231 和 U87-MG 异种移植物生长均因其治疗而延迟。 COTI-2 治疗在体内显示出安全的毒性特征。正如体外数据所示，COTI-2 选择性地靶向多种人类癌细胞系，同时对正常细胞的负面影响最小[2]。
COTI-2在多种小鼠异种移植模型中展现出抗肿瘤疗效。在HT-29结直肠癌异种移植模型（NCr-nu小鼠）中，每周5次腹腔注射（IP）10 mg/kg COTI-2，持续7周，显著抑制肿瘤生长并延缓肿瘤进展（对照组肿瘤32天达到618 mm³，治疗组需48天）。在SHP-77小细胞肺癌异种移植模型中，每两天腹腔注射3 mg/kg COTI-2，持续38天，在抑制肿瘤生长方面优于顺铂（每周3 mg/kg）和紫杉醇（每两天12.5 mg/kg）。在U87-MG胶质母细胞瘤异种移植模型（裸鼠）中，每周3次腹腔注射8 mg/kg COTI-2，延缓肿瘤生长（对照组肿瘤5天达到828 mm³，治疗组需10天）。对MDA-MB-231乳腺癌异种移植模型，每周5次口服200 mg/kg COTI-2，延缓肿瘤生长。在OVCAR-3卵巢癌异种移植模型（NIH III nu/nu小鼠）中，每周3次静脉注射（IV）20 mg/kg COTI-2诱导肿瘤退缩，每周5次口服75 mg/kg COTI-2可使肿瘤体积在60天内维持在较低水平。COTI-2耐受性良好，荷瘤和非荷瘤小鼠均未出现明显毒性或体重下降 [2]
酶活实验
使用 AMBIT BIOSCIENCES KINOMESCAN 测定法测试 COTI-2 与 227 种激酶的相互作用。简而言之，用于激酶测定的亲和树脂是通过用生物素化小分子配体在 25°C 下处理链霉亲和素包被的磁珠 30 分钟来生产的。用过量的生物素封闭配体珠子，然后在封闭缓冲液（1% BSA、0.05% Tween 20、1 mM DTT）中清洗，这有助于去除未结合的配体并减少非特异性结合。在一种结合缓冲液（20% SeaBlock、0.17× PBS、0.05% Tween 20、6 mM DTT）中，将噬菌体裂解物、配体亲和珠和 COTI-2 混合。最终体积为 0.1 mL，所有反应均在已用封闭缓冲液预处理的聚苯乙烯 96 孔板中进行。
ATP竞争性激酶实验：链霉亲和素包被的磁珠负载生物素化配体，封闭后与噬菌体裂解物、磁珠和COTI-2（终浓度0.1% DMSO）在25°C孵育1小时。洗涤后，洗脱结合的激酶，通过空斑实验或定量PCR定量，评估结合亲和力。放射活性激酶功能实验：在含底物、辅因子和COTI-2（3倍系列稀释，起始浓度100 μM）的反应缓冲液中，加入γ-³³P-ATP进行激酶反应。通过P81滤膜结合法检测底物磷酸化水平，评估激酶活性。Hsp90 ATP酶抑制实验：采用荧光偏振实验，检测COTI-2（10剂量IC₅₀，3倍系列稀释，起始浓度100 μM）与FITC-格尔德霉素竞争结合Hsp90α和Hsp90β的能力 [2]
细胞实验
将SHP-77细胞与不同浓度的COTI-2一起培养48小时。然后用 1X 冷 PBS 洗涤细胞两次，然后用膜联蛋白 V 和 7AAD 染色。简而言之，将 1 × 105 个细胞用 5 μl 的膜联蛋白 V 和 7AAD 处理，然后将它们在室温下于黑暗中静置 15 分钟。然后将 400 μl 剂量的 1X 结合缓冲液注射到细胞中。
增殖/活力实验：癌细胞接种到96孔板，用系列浓度的COTI-2（或对照药物）处理，孵育4-7天。通过alamarBlue（代谢活性）或CellTiter-Blue实验检测活力，基于3-4次独立实验计算IC₅₀值。凋亡实验：SHP-77、DMS-114、DMS-153细胞用COTI-2（IC₅₀浓度）处理，加入或不加入Z-VAD-FMK（预处理20 μM），用Annexin V-FITC/PI或Annexin V/7AAD染色，流式细胞术分析。蛋白质印迹法：SHP-77细胞用250 nM COTI-2处理3-6小时，裂解后电泳分离蛋白质。膜用抗磷酸化AKT、磷酸化半胱天冬酶-9、剪切型半胱天冬酶-9和β-微管蛋白抗体孵育检测 [2]
动物实验
将SHP-77和HT-29细胞注射到NCr-nu小鼠的侧腹部（每个注射点注射2×10⁶个细胞），注射基质为50% Matrigel（每组n=5只小鼠）。对于SHP-77异种移植瘤，在出现可触及的肿瘤之前开始COTI-2治疗。在注射SHP-77细胞后第二天，给予小鼠3 mg/kg的COTI-2（每两天一次，最多38天）。使用标准游标卡尺测量肿瘤大小，分别在第5、10、17、24和38天进行评估。在HT-29异种移植瘤模型中评估COTI-2抑制已形成肿瘤生长的能力。在开始腹腔注射 COTI-2（10 mg/kg，每周 5 天，持续 7 周）或生理盐水治疗前，HT-29 异种移植瘤需生长至 200 mm³。每 4 天使用游标卡尺测量肿瘤生长情况。
异种移植瘤模型：将 HT-29 (2×10⁶) 或 SHP-77 (2×10⁶) 细胞悬浮于 50% Matrigel 基质胶中，皮下注射 (SC) 至 NCr-nu 小鼠侧腹。对于 HT-29，当肿瘤体积达到约 200 mm³ 时开始治疗：腹腔注射 COTI-2，剂量为 10 mg/kg，每周 5 天，持续 7 周。对于 SHP-77，在注射后 1 天开始治疗：腹腔注射 COTI-2，剂量为 3 mg/kg，每 2 天一次，持续 38 天。将悬浮于 50% Matrigel 中的 U87-MG 细胞 (2×10⁶) 皮下注射到裸鼠后肢；当肿瘤体积达到 200-300 mm³ 时，每周腹腔注射 3 次 COTI-2 (8 mg/kg)。将 MDA-MB-231 细胞 (2×10⁶) 注射到 SCID 小鼠侧腹；当肿瘤体积达到 100-200 mm³ 时，每周口服 5 次 COTI-2 (200 mg/kg，溶于 pH 2.3 的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液)。将 OVCAR-3 细胞 (7×10⁶) 皮下注射到 NIH III nu/nu 小鼠大腿；当肿瘤体积达到 75-100 mm³ 时，每周静脉注射 3 次 COTI-2 (20 mg/kg) 或每周口服 5 次 COTI-2 (75 mg/kg)。肿瘤体积计算公式为：π/6 × 最长直径 × (最短直径)²。毒性研究：BALB/c 小鼠每周 3 次腹腔注射 4、8 或 16 mg/kg COTI-2，持续 28 天；监测体重和毒性反应[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
COTI-2 在体内显示出良好的安全性。对免疫功能正常的 BALB/c 小鼠进行 4-16 mg/kg COTI-2 腹腔注射治疗 28 天，未观察到体重减轻、脱发、注射部位瘀伤或活动受限。对荷瘤小鼠（OVCAR-3、HT-29、U87-MG 模型）进行长达 60 天的 COTI-2 腹腔注射、静脉注射或口服治疗，也未观察到明显的毒性或体重减轻 [2]
参考文献

[1]. Nature Reviews Cancer. 2017.

[2]. Oncotarget. 2016 Jul 5; 7(27): 41363–41379.
其他信息
突变型p53激活剂COTI-2是一种口服的第三代硫代氨基脲类化合物，可激活突变型p53蛋白，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，突变型p53激活剂COTI-2靶向并结合错误折叠的突变型p53蛋白，诱导其构象变化，从而使p53蛋白恢复正常并重新激活。这可诱导p53蛋白发生突变的肿瘤细胞凋亡。此外，COTI-2抑制Akt2的激活，并阻止PI3K/AKT/mTOR通路的激活，从而诱导该通路过度表达的癌细胞凋亡。p53是一种肿瘤抑制蛋白，在控制细胞增殖和存活方面发挥着关键作用。许多癌症中都存在高水平的突变型p53，这与细胞不受控制的生长有关。
COTI-2是一种第三代硫代氨基脲类化合物，通过CHEMSAS®计算平台（整合了药理学、统计建模、药物化学和机器学习）鉴定[2]。
COTI-2并非传统的激酶或Hsp90抑制剂，其确切的作用机制仍在研究中[2]。
目前，COTI-2正作为一种靶向突变型p53驱动肿瘤的抗癌药物进行临床研究[1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C19H22N6S
分子量
366.48
精确质量
366.162
元素分析
C, 62.27; H, 6.05; N, 22.93; S, 8.75
CAS号
1039455-84-9
相关CAS号
1204956-74-0 (HCl);1039455-84-9;
PubChem CID
91810660
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
574.1±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
301.0±32.9 °C
蒸汽压
0.0±1.6 mmHg at 25°C
折射率
1.715
LogP
0.79
tPSA
88.7
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
26
分子复杂度/Complexity
516
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S=C(N/N=C1\C2C(=CC=CN=2)CCC\1)N1CCN(C2C=CC=CN=2)CC1
InChi Key
UTDAKQMBNSHJJB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C19H22N6S/c26-19(23-22-16-7-3-5-15-6-4-10-21-18(15)16)25-13-11-24(12-14-25)17-8-1-2-9-20-17/h1-2,4,6,8-10H,3,5,7,11-14H2,(H,23,26)
化学名
N-(6,7-dihydro-5H-quinolin-8-ylideneamino)-4-pyridin-2-ylpiperazine-1-carbothioamide
别名
COTI2; COTI-2; COTI 2
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: >70 mg/mL
Water: < 1mg/mL
Ethanol: < 1mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 0.67 mg/mL (1.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 6.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7287 mL 13.6433 mL 27.2866 mL
5 mM 0.5457 mL 2.7287 mL 5.4573 mL
10 mM 0.2729 mL 1.3643 mL 2.7287 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT02433626 Unknown Drug: COTI2
Drug: Cisplatin		 Ovarian Cancer
HNSCC		 Critical Outcome Technologies Inc. December 2015 Phase 1
生物数据图片

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  • COTI-2

    Refolding and reactivation of missense-mutant p53.2018 Feb;18(2):89-102.

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