Seldegamadlin (KT-253)   中文名称: NND20250224006

Murine double minute 2 (MDM2) E3 ligase.
Cereblon (CRBN) E3 ligase. DC50 = 0.4 nM [1]

Seldegamadlin (KT-253) 是一种双功能分子，由一个强效的MDM2配体通过连接链与一个高亲和力的CRBN配体连接而成。 [1]
在HEK293T-HiBiT实验中，KT-253以亚纳摩尔的效价降解MDM2（半数降解浓度DC50 = 0.4 nmol/L），而小分子抑制剂DS-3032则会上调MDM2水平。 [1]
在RS4;11急性淋巴细胞白血病细胞中，KT-253显示出强效的生长抑制作用（IC50 = 0.3 nmol/L），其效果优于多种MDM2小分子抑制剂（DS-3032的IC50为67 nmol/L；SAR405838的IC50为620 nmol/L）。 [1]
KT-253的生长抑制依赖于CRBN的招募，因为一个CRBN失活的类似物（化合物1）和仅含MDM2配体的弹头化合物（化合物2）的IC50值均显著右移。 [1]
在RS4;11细胞中，通过Western blot分析，KT-253处理4小时导致MDM2蛋白被有效且持续地降解至检测不到的水平，而DS-3032处理则导致MDM2蛋白水平升高。 [1]
靶向蛋白质组学分析显示，用150 nmol/L的KT-253处理RS4;11细胞15分钟可导致MDM2蛋白水平降低84%，处理1小时后降低91%。DS-3032（1 μmol/L）处理15分钟后MDM2水平升高18%，1小时后升高155%。 [1]
在RS4;11细胞中，用KT-253处理4小时后进行药物洗脱，足以在48小时内诱导caspase 3/7介导的细胞凋亡。在1 nmol/L至1 μmol/L的浓度范围内均观察到凋亡效应。DS-3032处理48小时后观察到的细胞死亡微乎其微。 [1]
在RS4;11细胞中，KT-253处理2小时内即可在亚纳摩尔浓度下实现强效的p53稳定化（半数有效浓度EC50 = 0.05 nmol/L），其效力比DS-3032（EC50 = 81.4 nmol/L）高出1500倍以上。 [1]
用KT-253处理RS4;11细胞8小时，可强效、剂量依赖性地诱导p53转录靶基因（包括MDM2, GDF15, CDKN1A, GADD45A, TNFRSF10B, FAS, BBC3）的表达，在10 nmol/L浓度下即可观察到4倍或更高的诱导倍数。DS-3032仅在最高浓度（1 μmol/L）时表现出微弱（2倍）的诱导作用。 [1]
KT-253在多个p53野生型血液肿瘤细胞系（AML、ALL、DLBCL）中显示出强效的生长抑制作用，在多个细胞系中IC50值达到亚纳摩尔级别。它还在多种p53野生型实体瘤细胞系（前列腺、脑、卵巢、软组织肉瘤、神经母细胞瘤、肺、结直肠）中显示出强效的生长抑制和caspase激活作用。p53突变的细胞系对高达10,000 nmol/L浓度的KT-253无反应。 [1]
流式细胞术分析显示，在RS4;11和MV4;11细胞中，用1000 nmol/L KT-253处理导致S期细胞减少（分别为0.97%和0.45%）和晚期凋亡细胞比例升高（分别为75.8%和62.1%）。相比之下，用1000 nmol/L DS-3032处理则导致S期细胞比例更高（分别为30.6%和12.0%），晚期凋亡细胞比例更低（分别为6.9%和9.3%）。 [1]
在体外MOLM-13 AML细胞中，将KT-253（1或10 nmol/L）与维奈克拉（1.6 μmol/L）联用，与任一单药相比，均导致显著更高的处于早期或晚期凋亡阶段的细胞比例（高出>50%），并实现最大的细胞生长抑制。 [1]

在RS4;11 ALL异种移植模型中，单次静脉注射1或3 mg/kg的KT-253可诱导肿瘤消退。较低暴露量匹配的每周给药方案（0.3 mg/kg，每周一次，共3周）仅能诱导短暂疾病稳定。DS-3032（30 mg/kg和100 mg/kg，口服，给药3天/停药11天）分别无效或仅表现出轻微的肿瘤生长抑制作用。 [1]
在携带RS4;11肿瘤的小鼠中，单次注射3 mg/kg KT-253的中位生存期为50天，而DS-3032临床等效给药方案的中位生存期为12天。 [1]
对RS4;11肿瘤的靶向蛋白质组学分析显示，单次注射1或3 mg/kg KT-253后1小时，MDM2被有效降解（分别降解94%和92%），这与p53、p21和PHLDA3的上调相关。DS-3032未观察到MDM2降解。 [1]
RS4;11肿瘤的免疫组化分析显示，在单次注射1或3 mg/kg KT-253后，p53显著上调和cleaved caspase-3诱导，但在每周给药（0.3 mg/kg）或DS-3032治疗后未观察到这些现象。 [1]
在MV4;11 AML异种移植模型中，单次静脉注射3 mg/kg的KT-253导致持续的肿瘤消退。6只动物中有5只达到完全缓解，其中4只在6个月内保持无肿瘤状态。3 mg/kg单次给药组的中位生存期>180天，而DS-3032（100 mg/kg）组为31天，DS-3032（30 mg/kg）组为16天。KT-253的每周给药方案仅导致短暂疾病稳定。 [1]
MV4;11肿瘤的免疫组化分析显示，单次注射3 mg/kg KT-253后，p53显著上调和cleaved caspase-3诱导，但在每周给药或DS-3032方案中未观察到。 [1]
在四个系统性AML患者来源异种移植模型中，单次静脉注射1 mg/kg KT-253导致外周血和骨髓中人类CD45+肿瘤负荷的减少。在CTG-2227模型中，第41天观察到完全缓解（未配对t检验P = 0.009）。在CTG-2700和CTG-2240模型中观察到部分缓解。 [1]
在MOLM-13 AML异种移植模型（对维奈克拉耐药）中，单次注射3 mg/kg KT-253与临床相关剂量维奈克拉（100 mg/kg，每日口服，持续1周）或亚临床剂量维奈克拉（50 mg/kg，每日口服，持续3周）联用，在所有动物中均诱导了持久的完全缓解，而任一单药均无此效果。 [1]
KT-253对p53野生型ABC亚型DLBCL异种移植模型（OCI-LY10）表现出高活性，其效果与R-CHOP方案相似，但对p53突变型ABC亚型模型（TMD8）无活性。 [1]

使用HEK293T-HiBiT实验研究MDM2降解的效价。该实验使用稳定表达C末端HiBiT标记的MDM2的HEK293T细胞。通过Nano-Glo HiBiT裂解检测系统检测处理后荧光素酶信号的丢失来评估降解。细胞用指定浓度的KT-253或DS-3032处理4小时。半数降解浓度（DC50）通过使用四参数非线性回归模型拟合数据获得。 [1]
使用Meso Scale Discovery总p53检测试剂盒定量p53水平。RS4;11细胞用1至10,000 nmol/L的KT-253或DS-3032处理2小时后裂解。使用SECTOR成像仪测量MSD信号。处理样品的p53水平相对于DMSO对照计算。剂量反应数据使用四参数非线性回归模型拟合。 [1]

使用CellTiter-Glo和Caspase-Glo 3/7实验检测细胞生长抑制和凋亡，步骤按照制造商说明书进行。使用R和R drc包分析细胞系筛选的CTG和Caspase-Glo数据，以拟合生长曲线并计算绝对IC50。 [1]
对于Western blotting，用指定条件处理的细胞使用添加了蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物的哺乳动物蛋白提取试剂裂解。等量裂解液经电泳后转移到PVDF膜上，使用抗MDM2和抗β-actin抗体检测蛋白水平。 [1]
对于qRT-PCR，细胞在指定时间点处理后进行洗脱，并在无药生长培养基中继续培养总计24小时。使用RNA Mini Kit提取RNA。进行逆转录和定量PCR。使用ΔΔCt方法计算mRNA水平的相对变化。 [1]
使用Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞术检测试剂盒评估细胞周期分布。使用异硫氰酸荧光素Annexin V/PI试剂盒评估细胞凋亡。细胞用指定化合物或组合处理4小时，然后洗脱，并在完全培养基中继续培养20小时。使用流式细胞仪获取数据。 [1]
对于发现蛋白质组学，使用iST样品制备试剂盒裂解细胞。胰蛋白酶消化后，使用串联质谱标签pro试剂对肽段进行脱盐和标记。合并的样品通过碱性反相色谱进行分级。每个肽段组分通过LC-MS/MS分析。使用MaxQuant处理原始数据。使用limma R包进行配对统计分析。 [1]
对于靶向蛋白质组学（LC-PRM-MS），肿瘤样品被匀浆和变性。样品经过还原、烷基化和胰蛋白酶消化。使用Oasis HLB板进行纯化。测量肽段浓度。将稳定同位素标记的参比肽段加入最终样品中。每个样品注入1 μg肽段到自制的反相色谱柱中，并通过LC-PRM-MS进行分析。使用SpectroDive软件进行数据提取和定量。 [1]

For xenograft models, female Balb/c nude, CB-17 SCID, or NOD-SCID mice were used. Tumor cells were implanted subcutaneously in the hind flank. When tumors reached a specified volume (e.g., ~100 mm3 for MOLM-13; 250-500 mm3 for RS4;11, MV4;11), mice were sorted into treatment groups. For patient-derived xenograft studies, cells were inoculated intravenously. [1]
KT-253 was formulated in 20% (w/v) 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HPβCD), 0.025 mol/L hydrochloric acid (HCl), and 0.025 mol/L acetate, pH 4, to the appropriate concentration for each dose level before dosing at 5 mL/kg intravenously (i.v.). [1]
DS-3032 was dissolved in 0.5% methylcellulose at the appropriate concentration prior to each oral dose. [1]
For combination studies in the MOLM-13 model, mice were dosed with either KT-253 (3 mg/kg, i.v., single dose) or cytarabine (25 mg/kg, intraperitoneal (IP), 5 days on/2 days off) alone or in combination with venetoclax (100 mg/kg, oral daily dose, formulated in 10% ethanol, 30% PEG 400, 60% Phosal 50 PG). [1]
Body weights and tumor volumes were recorded twice per week. Endpoint was reached when tumor volumes reached 10% of the mouse's weight or when body weight loss reached 20% of initial weight. A complete response was defined as no measurable tumor for at least any 10 days during the experiment. [1]
For PK/PD experiments, mice bearing RS4;11 tumors were dosed intravenously with KT-253 at the indicated doses and euthanized at 1, 8, and 24 hours post-dosing. Blood and tumors were collected for analysis. [1]
For systemic patient-derived xenograft studies, female NOG mice were sublethally irradiated. AML blasts derived from patients were injected intravenously. Mice were monitored for clinical signs and body weight. AML burden was determined by flow cytometric analysis of whole blood and bone marrow. Mice were dosed with KT-253 at 1 mg/kg i.v., at 10 mL/kg. The vehicle control was 20% HPβCD, 0.025 mol/L HCl, and 0.025 mol/L acetate, pH 4. On day 42, a second dose was given. Sixteen hours later, animals were euthanized, and whole blood and bone marrow were collected for flow cytometry analysis. [1]

Dose fractionation data from the RS4;11 xenograft model demonstrated that tumor regressions are driven by a single dose of KT-253 (1 or 3 mg/kg) that achieved plasma concentrations ≥10 nmol/L for 12 to 22 hours. A lower exposure-matched weekly dosing regimen (0.3 mg/kg) resulted in tumor stasis, indicating that the time-over-threshold concentration exposure profile is critical for achieving rapid induction of the apoptotic pathway. [1]

The literature did not report specific quantitative data on toxicity/toxicokinetics such as LD50, organ toxicity, or plasma protein binding for KT-253. However, it was noted that dose-limiting toxicities (e.g., neutropenia, thrombocytopenia) have been observed in clinical trials with MDM2 small-molecule inhibitors, which require multiday dosing regimens. The intermittent dosing schedule of KT-253 is hypothesized to allow for the recovery of non-malignant/normal cells, potentially offering an improved therapeutic index. [1]

[1]. KT-253, A Novel MDM2 Degrader and p53 Stabilizer, Has Superior Potency and Efficacy Than MDM2 Small Molecule Inhibitors. Mol Cancer Ther. 2025 Apr 2;24(4):497-510.

Seldegamadlin (KT-253) is a first-in-clinic highly potent and selective MDM2 degrader for the treatment of solid and liquid tumors with wild-type p53 (p53 WT). It catalyzes the degradation of MDM2 and disrupts the acute autoregulatory feedback loop inherent to MDM2 small-molecule inhibitors. [1]
KT-253 has advanced into a Phase 1 clinical study to evaluate its safety, tolerability, pharmacokinetics (PK)/pharmacodynamics (PD), and clinical activity in adult patients with relapsed or refractory high-grade myeloid malignancies, acute lymphoblastic leukemia (ALL), lymphoma, and solid tumors (NCT05775406). [1]

C48H52CL2FN7O6

912.87

911.334016

C, 63.15; H, 5.74; Cl, 7.77; F, 2.08; N, 10.74; O, 10.52

2713618-08-5

166753033

White to off-white solids at room temperature

5.3

160 Ų

4

8

6

64

1860

3

ClC1C=CC2=C(C=1)NC([C@@]12[C@@H](C2C=CC=C(C=2F)Cl)[C@H](C(NC2CCC(C(N3CCC(C4=CC=C5C(=C4)N(C)C(N5C4C(NC(CC4)=O)=O)=O)CC3)=O)CC2)=O)NC21CCCCC2)=O

CQFHGOWYJXQICA-FKDNKQOESA-N

InChI=1S/C48H52Cl2FN7O6/c1-56-37-24-28(10-15-35(37)58(46(56)64)36-16-17-38(59)54-42(36)60)26-18-22-57(23-19-26)44(62)27-8-12-30(13-9-27)52-43(61)41-39(31-6-5-7-33(50)40(31)51)48(47(55-41)20-3-2-4-21-47)32-14-11-29(49)25-34(32)53-45(48)63/h5-7,10-11,14-15,24-27,30,36,39,41,55H,2-4,8-9,12-13,16-23H2,1H3,(H,52,61)(H,53,63)(H,54,59,60)/t27?,30?,36?,39-,41+,48+/m0/s1

(3'R,4'S,5'R)-6''-chloro-4'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-N-((1R,4R)-4-(4-(1-((R)-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-1-carbonyl)cyclohexyl)-2''-oxodispiro[cyclohexane-1,2'-pyrrolidine-3',3''-indoline]-5'-carboxamide

Seldegamadlin; KT-253; 2713618-08-5; KT253; (3'R,4'S,5'R)-6'-chloro-4'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-N-((1r,4R)-4-(4-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-1-carbonyl)cyclohexyl)-2''-oxodispiro[cyclohexane-1,2'-pyrrolidine-3',3'-indoline]-5'-carboxamide; Seldegamadlinum; Seldegamadlin; seldegamadlin [INN]; VNP2BV6KGL;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。