| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Murine double minute 2 (MDM2) E3 ligase.
Cereblon (CRBN) E3 ligase. DC50 = 0.4 nM [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Seldegamadlin (KT-253) 是一种双功能分子,由一个强效的MDM2配体通过连接链与一个高亲和力的CRBN配体连接而成。 [1]
在HEK293T-HiBiT实验中,KT-253以亚纳摩尔的效价降解MDM2(半数降解浓度DC50 = 0.4 nmol/L),而小分子抑制剂DS-3032则会上调MDM2水平。 [1] 在RS4;11急性淋巴细胞白血病细胞中,KT-253显示出强效的生长抑制作用(IC50 = 0.3 nmol/L),其效果优于多种MDM2小分子抑制剂(DS-3032的IC50为67 nmol/L;SAR405838的IC50为620 nmol/L)。 [1] KT-253的生长抑制依赖于CRBN的招募,因为一个CRBN失活的类似物(化合物1)和仅含MDM2配体的弹头化合物(化合物2)的IC50值均显著右移。 [1] 在RS4;11细胞中,通过Western blot分析,KT-253处理4小时导致MDM2蛋白被有效且持续地降解至检测不到的水平,而DS-3032处理则导致MDM2蛋白水平升高。 [1] 靶向蛋白质组学分析显示,用150 nmol/L的KT-253处理RS4;11细胞15分钟可导致MDM2蛋白水平降低84%,处理1小时后降低91%。DS-3032(1 μmol/L)处理15分钟后MDM2水平升高18%,1小时后升高155%。 [1] 在RS4;11细胞中,用KT-253处理4小时后进行药物洗脱,足以在48小时内诱导caspase 3/7介导的细胞凋亡。在1 nmol/L至1 μmol/L的浓度范围内均观察到凋亡效应。DS-3032处理48小时后观察到的细胞死亡微乎其微。 [1] 在RS4;11细胞中,KT-253处理2小时内即可在亚纳摩尔浓度下实现强效的p53稳定化(半数有效浓度EC50 = 0.05 nmol/L),其效力比DS-3032(EC50 = 81.4 nmol/L)高出1500倍以上。 [1] 用KT-253处理RS4;11细胞8小时,可强效、剂量依赖性地诱导p53转录靶基因(包括MDM2, GDF15, CDKN1A, GADD45A, TNFRSF10B, FAS, BBC3)的表达,在10 nmol/L浓度下即可观察到4倍或更高的诱导倍数。DS-3032仅在最高浓度(1 μmol/L)时表现出微弱(2倍)的诱导作用。 [1] KT-253在多个p53野生型血液肿瘤细胞系(AML、ALL、DLBCL)中显示出强效的生长抑制作用,在多个细胞系中IC50值达到亚纳摩尔级别。它还在多种p53野生型实体瘤细胞系(前列腺、脑、卵巢、软组织肉瘤、神经母细胞瘤、肺、结直肠)中显示出强效的生长抑制和caspase激活作用。p53突变的细胞系对高达10,000 nmol/L浓度的KT-253无反应。 [1] 流式细胞术分析显示,在RS4;11和MV4;11细胞中,用1000 nmol/L KT-253处理导致S期细胞减少(分别为0.97%和0.45%)和晚期凋亡细胞比例升高(分别为75.8%和62.1%)。相比之下,用1000 nmol/L DS-3032处理则导致S期细胞比例更高(分别为30.6%和12.0%),晚期凋亡细胞比例更低(分别为6.9%和9.3%)。 [1] 在体外MOLM-13 AML细胞中,将KT-253(1或10 nmol/L)与维奈克拉(1.6 μmol/L)联用,与任一单药相比,均导致显著更高的处于早期或晚期凋亡阶段的细胞比例(高出>50%),并实现最大的细胞生长抑制。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在RS4;11 ALL异种移植模型中,单次静脉注射1或3 mg/kg的KT-253可诱导肿瘤消退。较低暴露量匹配的每周给药方案(0.3 mg/kg,每周一次,共3周)仅能诱导短暂疾病稳定。DS-3032(30 mg/kg和100 mg/kg,口服,给药3天/停药11天)分别无效或仅表现出轻微的肿瘤生长抑制作用。 [1]
在携带RS4;11肿瘤的小鼠中,单次注射3 mg/kg KT-253的中位生存期为50天,而DS-3032临床等效给药方案的中位生存期为12天。 [1] 对RS4;11肿瘤的靶向蛋白质组学分析显示,单次注射1或3 mg/kg KT-253后1小时,MDM2被有效降解(分别降解94%和92%),这与p53、p21和PHLDA3的上调相关。DS-3032未观察到MDM2降解。 [1] RS4;11肿瘤的免疫组化分析显示,在单次注射1或3 mg/kg KT-253后,p53显著上调和cleaved caspase-3诱导,但在每周给药(0.3 mg/kg)或DS-3032治疗后未观察到这些现象。 [1] 在MV4;11 AML异种移植模型中,单次静脉注射3 mg/kg的KT-253导致持续的肿瘤消退。6只动物中有5只达到完全缓解,其中4只在6个月内保持无肿瘤状态。3 mg/kg单次给药组的中位生存期>180天,而DS-3032(100 mg/kg)组为31天,DS-3032(30 mg/kg)组为16天。KT-253的每周给药方案仅导致短暂疾病稳定。 [1] MV4;11肿瘤的免疫组化分析显示,单次注射3 mg/kg KT-253后,p53显著上调和cleaved caspase-3诱导,但在每周给药或DS-3032方案中未观察到。 [1] 在四个系统性AML患者来源异种移植模型中,单次静脉注射1 mg/kg KT-253导致外周血和骨髓中人类CD45+肿瘤负荷的减少。在CTG-2227模型中,第41天观察到完全缓解(未配对t检验P = 0.009)。在CTG-2700和CTG-2240模型中观察到部分缓解。 [1] 在MOLM-13 AML异种移植模型(对维奈克拉耐药)中,单次注射3 mg/kg KT-253与临床相关剂量维奈克拉(100 mg/kg,每日口服,持续1周)或亚临床剂量维奈克拉(50 mg/kg,每日口服,持续3周)联用,在所有动物中均诱导了持久的完全缓解,而任一单药均无此效果。 [1] KT-253对p53野生型ABC亚型DLBCL异种移植模型(OCI-LY10)表现出高活性,其效果与R-CHOP方案相似,但对p53突变型ABC亚型模型(TMD8)无活性。 [1] |
| 酶活实验 |
使用HEK293T-HiBiT实验研究MDM2降解的效价。该实验使用稳定表达C末端HiBiT标记的MDM2的HEK293T细胞。通过Nano-Glo HiBiT裂解检测系统检测处理后荧光素酶信号的丢失来评估降解。细胞用指定浓度的KT-253或DS-3032处理4小时。半数降解浓度(DC50)通过使用四参数非线性回归模型拟合数据获得。 [1]
使用Meso Scale Discovery总p53检测试剂盒定量p53水平。RS4;11细胞用1至10,000 nmol/L的KT-253或DS-3032处理2小时后裂解。使用SECTOR成像仪测量MSD信号。处理样品的p53水平相对于DMSO对照计算。剂量反应数据使用四参数非线性回归模型拟合。 [1] |
| 细胞实验 |
使用CellTiter-Glo和Caspase-Glo 3/7实验检测细胞生长抑制和凋亡,步骤按照制造商说明书进行。使用R和R drc包分析细胞系筛选的CTG和Caspase-Glo数据,以拟合生长曲线并计算绝对IC50。 [1]
对于Western blotting,用指定条件处理的细胞使用添加了蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物的哺乳动物蛋白提取试剂裂解。等量裂解液经电泳后转移到PVDF膜上,使用抗MDM2和抗β-actin抗体检测蛋白水平。 [1] 对于qRT-PCR,细胞在指定时间点处理后进行洗脱,并在无药生长培养基中继续培养总计24小时。使用RNA Mini Kit提取RNA。进行逆转录和定量PCR。使用ΔΔCt方法计算mRNA水平的相对变化。 [1] 使用Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞术检测试剂盒评估细胞周期分布。使用异硫氰酸荧光素Annexin V/PI试剂盒评估细胞凋亡。细胞用指定化合物或组合处理4小时,然后洗脱,并在完全培养基中继续培养20小时。使用流式细胞仪获取数据。 [1] 对于发现蛋白质组学,使用iST样品制备试剂盒裂解细胞。胰蛋白酶消化后,使用串联质谱标签pro试剂对肽段进行脱盐和标记。合并的样品通过碱性反相色谱进行分级。每个肽段组分通过LC-MS/MS分析。使用MaxQuant处理原始数据。使用limma R包进行配对统计分析。 [1] 对于靶向蛋白质组学(LC-PRM-MS),肿瘤样品被匀浆和变性。样品经过还原、烷基化和胰蛋白酶消化。使用Oasis HLB板进行纯化。测量肽段浓度。将稳定同位素标记的参比肽段加入最终样品中。每个样品注入1 μg肽段到自制的反相色谱柱中,并通过LC-PRM-MS进行分析。使用SpectroDive软件进行数据提取和定量。 [1] |
| 动物实验 |
对于异种移植模型,使用雌性 Balb/c 裸鼠、CB-17 SCID 小鼠或 NOD-SCID 小鼠。将肿瘤细胞皮下植入小鼠后侧腹部。当肿瘤达到特定体积(例如,MOLM-13 肿瘤约为 100 mm³;RS4;11 和 MV4;11 肿瘤为 250-500 mm³)时,将小鼠分组进行治疗。对于患者来源的异种移植研究,采用静脉注射的方式接种细胞。[1]
KT-253 配制于 20% (w/v) 2-羟丙基-β-环糊精 (HPβCD)、0.025 mol/L 盐酸 (HCl) 和 0.025 mol/L 乙酸盐溶液中,pH 值为 4,配制成适合各剂量水平的浓度,然后以 5 mL/kg 的剂量进行静脉注射 (iv)。 [1] 每次口服给药前,将DS-3032溶解于0.5%甲基纤维素溶液中,配制成适当浓度。[1] 在MOLM-13模型中进行联合用药研究时,小鼠分别接受KT-253(3 mg/kg,静脉注射,单次给药)或阿糖胞苷(25 mg/kg,腹腔注射,连续用药5天/停药2天)单独给药,或与维奈托克(100 mg/kg,每日口服,配制于10%乙醇、30% PEG 400和60% Phosal 50 PG溶液中)联合给药。[1] 每周记录两次小鼠的体重和肿瘤体积。当肿瘤体积达到小鼠体重的10%或体重下降达到初始体重的20%时,即达到实验终点。完全缓解定义为在实验期间至少连续10天未检测到肿瘤。 [1] 在PK/PD实验中,将携带RS4;11肿瘤的小鼠静脉注射指定剂量的KT-253,并在给药后1、8和24小时处死。收集血液和肿瘤组织进行分析。[1] 在系统性患者来源异种移植研究中,对雌性NOG小鼠进行亚致死剂量照射。将来源于患者的AML原始细胞静脉注射到小鼠体内。监测小鼠的临床症状和体重。通过流式细胞术分析全血和骨髓来确定AML负荷。小鼠静脉注射KT-253,剂量为1 mg/kg,10 mL/kg。溶剂对照组为20% HPβCD、0.025 mol/L HCl和0.025 mol/L乙酸盐,pH值为4。第42天,给予第二次给药。 16小时后,对动物实施安乐死,并采集全血和骨髓进行流式细胞术分析。[1] |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C48H52CL2FN7O6
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|---|---|
| 分子量 |
912.87
|
| 精确质量 |
911.334016
|
| 元素分析 |
C, 63.15; H, 5.74; Cl, 7.77; F, 2.08; N, 10.74; O, 10.52
|
| CAS号 |
2713618-08-5
|
| PubChem CID |
166753033
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| 外观&性状 |
White to off-white solids at room temperature
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| LogP |
5.3
|
| tPSA |
160 Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
64
|
| 分子复杂度/Complexity |
1860
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
ClC1C=CC2=C(C=1)NC([C@@]12[C@@H](C2C=CC=C(C=2F)Cl)[C@H](C(NC2CCC(C(N3CCC(C4=CC=C5C(=C4)N(C)C(N5C4C(NC(CC4)=O)=O)=O)CC3)=O)CC2)=O)NC21CCCCC2)=O
|
| InChi Key |
CQFHGOWYJXQICA-FKDNKQOESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C48H52Cl2FN7O6/c1-56-37-24-28(10-15-35(37)58(46(56)64)36-16-17-38(59)54-42(36)60)26-18-22-57(23-19-26)44(62)27-8-12-30(13-9-27)52-43(61)41-39(31-6-5-7-33(50)40(31)51)48(47(55-41)20-3-2-4-21-47)32-14-11-29(49)25-34(32)53-45(48)63/h5-7,10-11,14-15,24-27,30,36,39,41,55H,2-4,8-9,12-13,16-23H2,1H3,(H,52,61)(H,53,63)(H,54,59,60)/t27?,30?,36?,39-,41+,48+/m0/s1
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| 化学名 |
(3'R,4'S,5'R)-6''-chloro-4'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-N-((1R,4R)-4-(4-(1-((R)-2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-1-carbonyl)cyclohexyl)-2''-oxodispiro[cyclohexane-1,2'-pyrrolidine-3',3''-indoline]-5'-carboxamide
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| 别名 |
Seldegamadlin; KT-253; 2713618-08-5; KT253; (3'R,4'S,5'R)-6'-chloro-4'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-N-((1r,4R)-4-(4-(1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)piperidine-1-carbonyl)cyclohexyl)-2''-oxodispiro[cyclohexane-1,2'-pyrrolidine-3',3'-indoline]-5'-carboxamide; Seldegamadlinum; Seldegamadlin; seldegamadlin [INN]; VNP2BV6KGL;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0954 mL | 5.4772 mL | 10.9545 mL | |
| 5 mM | 0.2191 mL | 1.0954 mL | 2.1909 mL | |
| 10 mM | 0.1095 mL | 0.5477 mL | 1.0954 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。