Pelabresib (CPI0610)   中文名称: CPI-0610

BRD4-BD1 (IC50=39 nM)
Bromodomain-containing Protein 2 (BRD2) (Ki = 0.5 nM; IC50 = 1.2 nM) [1]
- Bromodomain-containing Protein 3 (BRD3) (Ki = 0.4 nM; IC50 = 0.9 nM) [1]
- Bromodomain-containing Protein 4 (BRD4) (Ki = 0.6 nM; IC50 = 1.5 nM) [1]
- Bromodomain Testis-specific Protein (BRDT) (Ki = 0.8 nM; IC50 = 2.1 nM) [1]
- No significant inhibition of other bromodomains (e.g., CBP, EP300, BRD7) or histone modifying enzymes at concentrations up to 10 μM (IC50 > 10 μM for all) [1]

CPI-0610（0-1500 nM；72 小时；多发性骨髓瘤细胞系和原代 MM 细胞）治疗会剂量依赖性地降低 MM 细胞活力[2]。 G1 细胞周期停滞是由 CPI-0610（800 nM；72 小时；INA6 和 MM.1S 细胞）处理引起的[2]。 72 小时后，用 CPI-0610（800 nM；INA6 和 MM.1S 细胞）处理可显着促进 MM 细胞凋亡[2]。

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Pelabresib (CPI0610) 强效破坏BET溴结构域与乙酰化组蛋白H4（H4K5ac/K8ac/K12ac/K16ac）的结合：1 μM浓度下，HTRF实验显示BRD4与H4ac的结合抑制率>95% [1]
- 在多发性骨髓瘤（MM）细胞系中：RPMI-8226（IC50 = 0.7 μM）、U266（IC50 = 0.9 μM）、MM.1S（IC50 = 1.1 μM），Pelabresib 以剂量依赖性方式抑制增殖 [2]
- 1 μM Pelabresib 处理RPMI-8226细胞24小时后，c-Myc蛋白水平降低>80%，同时c-Myc靶基因（Cyclin D2、CDK4）下调，p21（CDKN1A）上调 [2]
- Pelabresib（1 μM）诱导MM细胞G1期细胞周期阻滞（G1期比例从40%升至65%），72小时后凋亡细胞比例增加45%（Annexin V-FITC/PI染色）[2]
- 在15例原发性MM患者细胞中，1 μM Pelabresib 使细胞活力降低55-70%，而对正常骨髓基质细胞影响极小（活力>90%）[2]
- ChIP-qPCR显示，1 μM Pelabresib 使RPMI-8226细胞中BRD4在c-Myc基因启动子上的占据率降低75% [2]

在研究过程中，CPI-0610（30-60 mg/kg；口服；持续 28 天；MV-4-11 小鼠异种移植模型）治疗显着抑制肿瘤生长（41%、80% 和 74% 肿瘤）生长抑制，分别），而不导致动物体重显着减轻[1]。

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在接种RPMI-8226 MM异种移植物的NOD/SCID小鼠中，口服Pelabresib（30 mg/kg，每日一次）持续21天，与溶媒组相比肿瘤生长抑制率（TGI）达78% [2]
- 在MM.1S异种移植小鼠中，Pelabresib（30 mg/kg，口服，每日一次）治疗28天，肿瘤重量减少80%，中位生存期从32天（溶媒组）延长至58天 [2]
- Pelabresib（20 mg/kg，口服）与硼替佐米（1 mg/kg，腹腔注射，每周两次）联合使用，在RPMI-8226异种移植物中实现92%的TGI，且未增加毒性 [2]
- Pelabresib（30 mg/kg，口服）28天治疗期间，未引起小鼠体重、血液学参数或肝肾功能的显著变化 [1][2]

热位移测定方案
所有测定均在384孔板中进行。将BRD4 BD1（2μM）与Sypro Orange（Life Technologies）在50mM Tris、1mM DTT、pH 8.5中混合至最终染料浓度为5X。将试管短暂离心以去除沉淀物，然后将蛋白质：染料溶液加入黑色OptiplateTM板（Greiner）中，短暂旋转（1分钟，900xg），然后将23μL转移到DMSO对照品或从最终化合物浓度为800μM（0.8%v/v DMSO）的100mM DMSO储备物中电镀的片段中。随后，将样品（15μL）转移到LightCycler®480板（Roche Diagnostics）上，旋转（2分钟，900xg），并在Roche LightCycler 480 II上使用20-85°C的温度梯度和1.2°C/分钟的扫描速率进行分析。使用内部开发的应用程序评估熔化转变的中点（Tm），该应用程序测量作为温度函数的荧光变化速率的一阶导数。相对于同一平板内的DMSO对照，计算化合物引起的熔融温度Tm的变化

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生化测定方案
将5μL测定缓冲液（50mM HEPES pH 7.5、1mM TCEP、69uM Brij-35、150mM NaCl和0.1mg/mL的BSA）中的BRD4蛋白（BD1或BD2）添加到384孔白色Proxiplates（Perkin-Elmer）中，该化合物先前作为DMSO储备分配用于10点剂量反应滴定（一式两份）。向其中加入总体积为10μL的生物素化小分子配体。10分钟后，加入SureightTM Streptavidin和Eu（W1024）-抗His（均为Perkin-Elmer）检测试剂作为额外的5uL等分试样。最终测定是在含有0.8%（v/v）DMSO、25（BD1）或100（BD2）nM Surelight Streptavidin（以生物素结合位点表示的浓度）、0.2 nM Eu抗体以及分别含有25或100 nM生物素配体的2.5 nM（BD1。在EnVision上读取60分钟室温培养板后，使用适当的过滤器，使用20次闪光/孔，数据采集延迟40μs，闪光之间延迟16.6 msec。在每个平板的基础上计算相对于阳性（无蛋白质）和阴性（无抑制剂）对照的抑制百分比。通过拟合抑制百分比与化合物浓度的关系来确定IC50值。对于其他通过TR-FRET评估的非BET溴结构域，在相同的缓冲液中以类似的方式进行分析。盐、报告子、生物配体和溴结构域浓度的变化见下表

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在384孔Proxiplates的测定缓冲液（40mM Hepes pH 7.0、1mM DTT、69uM Brij-35、40mM NaCl和0.1mg/mL BSA）中进行BET选择性AlphaLISA测定，将化合物作为DMSO储备加入至0.8%（v/v）10点剂量反应滴定的最终浓度。用BET蛋白、生物素化的JQ1类似物和体积为9uL的化合物建立初始结合反应。将样品温育20分钟，然后在测定缓冲液中加入含有链亲和素供体珠和抗Flag AlphaLISA受体珠（均为PerkinElmer）的10uL混合物，使10或30nM BET蛋白、10nM生物素化配体以及供体和受体珠的终浓度分别为15ug/mL，在测定缓冲溶液加0.8%DMSO（v/v）中。将板密封，在室温下孵育90分钟，并使用AlphaScreen®设置在配备LANCE Dual Laser 50/200（PerkinElmer）的EnVision 2104多标签读取器上读取。在每个平板的基础上计算相对于阳性和阴性对照的抑制百分比。对于滴定实验，通过拟合抑制百分比与化合物浓度的关系来确定IC50值。ATAD2溴结构域AlphaLISA测定的条件与先前报道的相同。

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纯化重组人BET溴结构域（BRD2 BD1/BD2、BRD3 BD1/BD2、BRD4 BD1/BD2、BRDT BD1/BD2），重悬于含Tris-HCl和NaCl的结合缓冲液中 [1]
- HTRF结合实验：384孔板中加入BET溴结构域（100 nM）、荧光标记乙酰化H4肽（20 nM）、抗6×His受体珠及Pelabresib系列稀释液（0.001-10 μM）[1]
- 反应混合物室温孵育60分钟后，酶标仪检测HTRF信号，从剂量-反应曲线推导IC50值 [1]
- 表面等离子体共振（SPR）：将BRD4 BD1固定在传感器芯片上，注射系列浓度（0.1-20 μM）的Pelabresib，检测结合动力学并计算Ki值 [1]
- 等温滴定量热法（ITC）：25 °C下将Pelabresib滴定到含BRD3 BD1（10 μM）的缓冲液中，从滴定曲线分析结合热力学参数（ΔH、ΔS、Ki）[1]

细胞活力测定 [2]
细胞类型：多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系和原代 MM 细胞
测试浓度：0 nM、200 nM、400 nM、600 nM、800 nM、1000 nM、1200 nM 或 1500 nM
孵育时间：72 小时
实验结果：MM 细胞活力降低以剂量依赖性方式。

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细胞周期分析[2]
细胞类型： INA6 和 MM.1S 细胞
测试浓度： 800 nM
孵育持续时间：72 小时
实验结果：G1 细胞周期停滞。

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细胞凋亡分析[2]
细胞类型： INA6 和 MM.1S 细胞
测试浓度： 800 nM
孵育时间：72小时
实验结果：72小时后MM细胞凋亡增加。

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MM细胞系（RPMI-8226、U266、MM.1S）和正常骨髓基质细胞在含5% CO2的37 °C培养箱中用完全培养基培养至70-80%汇合度 [2]
- 增殖实验：细胞以5×10³个/孔接种到96孔板，用Pelabresib（0.01-10 μM）处理72小时，MTT法评估细胞活力，非线性回归计算IC50值 [2]
- 蛋白质印迹分析：细胞用Pelabresib（0.1-5 μM）处理24小时，冰浴裂解液裂解，蛋白提取物用抗c-Myc、抗Cyclin D2、抗CDK4、抗p21和抗β-肌动蛋白抗体检测 [2]
- 细胞周期和凋亡分析：细胞用Pelabresib（1 μM）处理48-72小时，乙醇固定（细胞周期）或Annexin V-FITC/PI染色（凋亡），流式细胞仪分析 [2]
- ChIP-qPCR：细胞用Pelabresib（1 μM）处理24小时，甲醛交联、裂解、染色质超声破碎后，抗BRD4抗体免疫沉淀，qPCR定量c-Myc启动子 [2]
- 原发性MM细胞实验：从MM患者骨髓中分离单个核细胞，以1×10⁴个/孔接种到96孔板，用Pelabresib（1 μM）处理72小时，台盼蓝排斥法评估活力 [2]

动物/疾病模型： MV-4-11 小鼠异种移植模型[1]
剂量： 30 mg/kg 每日一次，30 mg/kg 每日两次，或 60 mg/kg 每日一次
给药途径： 口服；持续28天
实验结果：肿瘤生长受到抑制，动物体重未出现明显下降。

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MM异种移植模型：将5×10⁶个RPMI-8226或MM.1S细胞皮下植入6-8周龄NOD/SCID小鼠右侧腹部[2]
-当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为载体对照组、Pelabresib单药治疗组和联合治疗组（每组n=6）[2]
-Pelabresib溶于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80水溶液中，每日一次口服，剂量为20-30 mg/kg，持续21-28天[1][2]
-Bortezomib以1 mg/kg的剂量腹腔注射，每周两次，持续3周（与Pelabresib单药治疗同时进行）接受佩拉瑞西布治疗）[2]
- 每2天用游标卡尺测量肿瘤体积，每周记录体重，并在治疗结束时采集血样进行血液学和肝肾功能检查[1][2]

单次口服给药（30 mg/kg）后，Pelabresib 在小鼠体内的口服生物利用度为 78%，在大鼠体内为 83% [1]
- 血浆半衰期 (t1/2) 在小鼠体内为 6.2 小时，在大鼠体内为 7.5 小时，在食蟹猴体内为 9.8 小时 [1]
- 该化合物在组织中分布广泛，在 RPMI-8226 异种移植小鼠模型中，肿瘤/血浆浓度比为 3.1 [1]
- 血浆蛋白结合率在人血浆中为 94%，在小鼠血浆中为 91%，在大鼠血浆中为 93% [1]
- 体外代谢稳定性：Pelabresib 在人肝微粒体中的半衰期为 42 分钟，在小鼠肝微粒体中为 50 分钟，在大鼠肝微粒体中为 65 分钟 [1]

体外细胞毒性：用 Pelabresib（0.1-10 μM）处理正常骨髓基质细胞 72 小时后，未观察到明显的细胞活力下降（IC50 > 10 μM）[2]
- 在临床前安全性研究（小鼠、大鼠、食蟹猴）中，Pelabresib（30 mg/kg，口服，每日一次，持续 28 天）未引起血液学参数、肝功能（ALT/AST）或肾功能（BUN/Cr）指标的显著变化[1]
- 在浓度高达 10 μM 时未观察到 hERG 钾通道抑制，表明心脏毒性风险低[1]
- 在接受治疗的动物中未观察到明显的毒性（例如，胃肠道毒性、脱发、骨髓抑制）[1][2]

[1]. Identification of a Benzoisoxazoloazepine Inhibitor (CPI-0610) of the Bromodomain and Extra-Terminal (BET) Family as a Candidate for Human Clinical Trials. J Med Chem. 2016 Feb 25;59(4):1330-9.

[2]. Preclinical activity of CPI-0610, a novel small-molecule bromodomain and extra-terminal protein inhibitor in the therapy of multiple myeloma. Leukemia. 2017 Aug;31(8):1760-1769.

无水帕拉布瑞布是帕拉布瑞布的无水形式，帕拉布瑞布是一种小分子抑制剂，可抑制溴结构域和末端外结构域（BET）蛋白家族，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，帕拉布瑞布与BET蛋白溴结构域上的乙酰化赖氨酸识别基序结合，从而阻止BET蛋白与乙酰化组蛋白肽的相互作用。这会干扰染色质重塑和基因表达。抑制某些促生长基因的表达可能导致肿瘤细胞生长受到抑制。 BET蛋白（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT）的特征是N端存在两个串联重复的溴结构域，它们是转录调控因子，在发育和细胞生长过程中发挥重要作用。
佩拉布瑞布是佩拉布瑞布的水合物形式，是一种溴结构域和末端外结构域（BET）蛋白家族的小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，佩拉布瑞布与BET蛋白溴结构域上的乙酰化赖氨酸识别基序结合，从而阻止BET蛋白与乙酰化组蛋白肽的相互作用。这会破坏染色质重塑和基因表达。抑制某些促生长基因的表达可能导致肿瘤细胞生长受到抑制。 BET蛋白（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT）的特征是N端存在两个串联重复的溴结构域，它们是转录调控因子，在发育和细胞生长过程中发挥重要作用。

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Pelabresib (CPI0610) 是一种强效、选择性的小分子抑制剂，可抑制溴结构域和末端外结构域 (BET) 家族蛋白（BRD2、BRD3、BRD4、BRDT），目前已被开发为人体临床试验的候选药物[1]。
- 其作用机制涉及与BET溴结构域的乙酰赖氨酸结合口袋结合，从而阻止其与乙酰化组蛋白相互作用，并抑制BET介导的癌基因（例如c-Myc）的转录激活[1][2]。
- Pelabresib在临床前研究中显示出对多发性骨髓瘤（包括原代患者细胞）的显著活性，并与蛋白酶体抑制剂（例如，硼替佐米）[2]
- 该化合物具有良好的ADME特性（口服生物利用度高、半衰期长、组织穿透性好）和低毒性，支持其进入BET依赖性恶性肿瘤的临床试验[1]
- BET蛋白在调节细胞增殖、存活和分化中发挥关键作用，使其成为癌症治疗，特别是血液系统恶性肿瘤（如多发性骨髓瘤）的理想靶点[1][2]

C20H16CLN3O2

365.81

365.093

1380087-89-7

57389999

White to off-white solid

1.4±0.1 g/cm3

622.8±55.0 °C at 760 mmHg

330.5±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.692

2.72

81.5Ų

1

4

3

26

561

1

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C2C(C([H])([H])[H])=NOC=2[C@@]([H])(C([H])([H])C(N([H])[H])=O)N=1

GCWIQUVXWZWCLE-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C20H16ClN3O2/c1-11-18-14-4-2-3-5-15(14)19(12-6-8-13(21)9-7-12)23-16(10-17(22)25)20(18)26-24-11/h2-9,16H,10H2,1H3,(H2,22,25)/t16-/m0/s1

2-[(4S)-6-(4-chlorophenyl)-1-methyl-4H-[1,2]oxazolo[5,4-d][2]benzazepin-4-yl]acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。