Pelabresib (CPI0610)   中文名称: CPI-0610

BRD4-BD1 (IC50=39 nM)

CPI-0610（0-1500 nM；72 小时；多发性骨髓瘤细胞系和原代 MM 细胞）治疗会剂量依赖性地降低 MM 细胞活力[2]。 G1 细胞周期停滞是由 CPI-0610（800 nM；72 小时；INA6 和 MM.1S 细胞）处理引起的[2]。 72 小时后，用 CPI-0610（800 nM；INA6 和 MM.1S 细胞）处理可显着促进 MM 细胞凋亡[2]。

在研究过程中，CPI-0610（30-60 mg/kg；口服；持续 28 天；MV-4-11 小鼠异种移植模型）治疗显着抑制肿瘤生长（41%、80% 和 74% 肿瘤）生长抑制，分别），而不导致动物体重显着减轻[1]。

热位移测定方案
所有测定均在384孔板中进行。将BRD4 BD1（2μM）与Sypro Orange（Life Technologies）在50mM Tris、1mM DTT、pH 8.5中混合至最终染料浓度为5X。将试管短暂离心以去除沉淀物，然后将蛋白质：染料溶液加入黑色OptiplateTM板（Greiner）中，短暂旋转（1分钟，900xg），然后将23μL转移到DMSO对照品或从最终化合物浓度为800μM（0.8%v/v DMSO）的100mM DMSO储备物中电镀的片段中。随后，将样品（15μL）转移到LightCycler®480板（Roche Diagnostics）上，旋转（2分钟，900xg），并在Roche LightCycler 480 II上使用20-85°C的温度梯度和1.2°C/分钟的扫描速率进行分析。使用内部开发的应用程序评估熔化转变的中点（Tm），该应用程序测量作为温度函数的荧光变化速率的一阶导数。相对于同一平板内的DMSO对照，计算化合物引起的熔融温度Tm的变化

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生化测定方案
将5μL测定缓冲液（50mM HEPES pH 7.5、1mM TCEP、69uM Brij-35、150mM NaCl和0.1mg/mL的BSA）中的BRD4蛋白（BD1或BD2）添加到384孔白色Proxiplates（Perkin-Elmer）中，该化合物先前作为DMSO储备分配用于10点剂量反应滴定（一式两份）。向其中加入总体积为10μL的生物素化小分子配体。10分钟后，加入SureightTM Streptavidin和Eu（W1024）-抗His（均为Perkin-Elmer）检测试剂作为额外的5uL等分试样。最终测定是在含有0.8%（v/v）DMSO、25（BD1）或100（BD2）nM Surelight Streptavidin（以生物素结合位点表示的浓度）、0.2 nM Eu抗体以及分别含有25或100 nM生物素配体的2.5 nM（BD1。在EnVision上读取60分钟室温培养板后，使用适当的过滤器，使用20次闪光/孔，数据采集延迟40μs，闪光之间延迟16.6 msec。在每个平板的基础上计算相对于阳性（无蛋白质）和阴性（无抑制剂）对照的抑制百分比。通过拟合抑制百分比与化合物浓度的关系来确定IC50值。对于其他通过TR-FRET评估的非BET溴结构域，在相同的缓冲液中以类似的方式进行分析。盐、报告子、生物配体和溴结构域浓度的变化见下表

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在384孔Proxiplates的测定缓冲液（40mM Hepes pH 7.0、1mM DTT、69uM Brij-35、40mM NaCl和0.1mg/mL BSA）中进行BET选择性AlphaLISA测定，将化合物作为DMSO储备加入至0.8%（v/v）10点剂量反应滴定的最终浓度。用BET蛋白、生物素化的JQ1类似物和体积为9uL的化合物建立初始结合反应。将样品温育20分钟，然后在测定缓冲液中加入含有链亲和素供体珠和抗Flag AlphaLISA受体珠（均为PerkinElmer）的10uL混合物，使10或30nM BET蛋白、10nM生物素化配体以及供体和受体珠的终浓度分别为15ug/mL，在测定缓冲溶液加0.8%DMSO（v/v）中。将板密封，在室温下孵育90分钟，并使用AlphaScreen®设置在配备LANCE Dual Laser 50/200（PerkinElmer）的EnVision 2104多标签读取器上读取。在每个平板的基础上计算相对于阳性和阴性对照的抑制百分比。对于滴定实验，通过拟合抑制百分比与化合物浓度的关系来确定IC50值。ATAD2溴结构域AlphaLISA测定的条件与先前报道的相同。

细胞活力测定 [2]
细胞类型：多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系和原代 MM 细胞
测试浓度：0 nM、200 nM、400 nM、600 nM、800 nM、1000 nM、1200 nM 或 1500 nM
孵育时间：72 小时
实验结果：MM 细胞活力降低以剂量依赖性方式。

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细胞周期分析[2]
细胞类型： INA6 和 MM.1S 细胞
测试浓度： 800 nM
孵育持续时间：72 小时
实验结果：G1 细胞周期停滞。

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细胞凋亡分析[2]
细胞类型： INA6 和 MM.1S 细胞
测试浓度： 800 nM
孵育时间：72小时
实验结果：72小时后MM细胞凋亡增加。

Animal/Disease Models: MV-4-11 mouse xenograft model[1]
Doses: 30 mg/kg one time/day, 30 mg/kg twice (two times) daily, or 60 mg/kg one time/day
Route of Administration: Oral administration; for 28 days
Experimental Results: Suppressed of tumor growth, without any significant body weight loss in the animals.

[1]. Identification of a Benzoisoxazoloazepine Inhibitor (CPI-0610) of the Bromodomain and Extra-Terminal (BET) Family as a Candidate for Human Clinical Trials. J Med Chem. 2016 Feb 25;59(4):1330-9.

[2]. Preclinical activity of CPI-0610, a novel small-molecule bromodomain and extra-terminal protein inhibitor in the therapy of multiple myeloma. Leukemia. 2017 Aug;31(8):1760-1769.

Pelabresib Anhydrous is the anhydrous form of pelabresib, a small molecule inhibitor of the Bromodomain and Extra-Terminal (BET) family of proteins, with potential antineoplastic activity. Upon administration, pelabresib binds to the acetylated lysine recognition motifs on the bromodomain of BET proteins, thereby preventing the interaction between the BET proteins and acetylated histone peptides. This disrupts chromatin remodeling and gene expression. Prevention of the expression of certain growth-promoting genes may lead to an inhibition of tumor cell growth. Characterized by a tandem repeat of two bromodomains at the N-terminus, the BET proteins (BRD2, BRD3, BRD4 and BRDT) are transcriptional regulators that play an important role during development and cellular growth.
Pelabresib is the hydrated form of pelabresib, a small molecule inhibitor of the Bromodomain and Extra-Terminal (BET) family of proteins, with potential antineoplastic activity. Upon administration, pelabresib binds to the acetylated lysine recognition motifs on the bromodomain of BET proteins, thereby preventing the interaction between the BET proteins and acetylated histone peptides. This disrupts chromatin remodeling and gene expression. Prevention of the expression of certain growth-promoting genes may lead to an inhibition of tumor cell growth. Characterized by a tandem repeat of two bromodomains at the N-terminus, the BET proteins (BRD2, BRD3, BRD4 and BRDT) are transcriptional regulators that play an important role during development and cellular growth.

C20H16CLN3O2

365.81

365.093

1380087-89-7

57389999

White to off-white solid

1.4±0.1 g/cm3

622.8±55.0 °C at 760 mmHg

330.5±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.692

2.72

81.5Ų

1

4

3

26

561

1

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C2C(C([H])([H])[H])=NOC=2[C@@]([H])(C([H])([H])C(N([H])[H])=O)N=1

GCWIQUVXWZWCLE-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C20H16ClN3O2/c1-11-18-14-4-2-3-5-15(14)19(12-6-8-13(21)9-7-12)23-16(10-17(22)25)20(18)26-24-11/h2-9,16H,10H2,1H3,(H2,22,25)/t16-/m0/s1

2-[(4S)-6-(4-chlorophenyl)-1-methyl-4H-[1,2]oxazolo[5,4-d][2]benzazepin-4-yl]acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。