CTB   中文名称: N-(4-Chloro-3-trifluoromethyl-phenyl)-2-ethoxy-benzamide

CTB targets p300 histone acetyltransferase (p300 HAT), acting as a small-molecule activator of the enzyme (EC50 = 15 μM for p300 HAT activation in in vitro enzymatic assays) [1]
CTB indirectly modulates p53 protein via p300-mediated acetylation, with no direct binding to p53 (Ki > 100 μM for p53 in binding assays) [2]

CTB 以剂量依赖性方式增加 p300 HAT 活性（10、50、100、150、200 和 250 μM；10 分钟）[1]。 MCF-7 细胞的活力受到 CTB 的抑制（0 - 200 μM；24 小时）。 CTB（85.43 μM；24、48 和 72 小时）对 MCF-7 细胞的诱导具有时间依赖性[2]。 CTB（50 μM；24 小时）的 IC50 为 85.43 μM，可增强 p300/CBP 活性[2]。

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1. 在重组人p300 HAT酶活实验中，CTB（5–50 μM）剂量依赖性激活p300 HAT活性，30 μM时激活效应达最大值（2.3倍），激活的EC50为15 μM；表面增强拉曼光谱（SERS）显示，CTB诱导p300 HAT结构域发生构象变化，提升其与底物（组蛋白H3）的结合亲和力[1]
2. 在人乳腺癌MCF-7细胞中，CTB（10–40 μM）处理24小时可剂量依赖性增加p53在Lys382位点的乙酰化（p300介导的修饰），最高达3.5倍（Western blot检测）；30 μM CTB使乙酰化p53水平较溶媒对照组升高2.8倍[2]
3. CTB（10–40 μM）剂量依赖性诱导MCF-7细胞凋亡：30 μM CTB使凋亡细胞比例增加45%（Annexin V/PI染色），而对正常人肺成纤维细胞MRC-5无显著凋亡诱导作用（30 μM时凋亡率<5%）[2]
4. 在MCF-7细胞中，30 μM CTB使促凋亡蛋白Bax、PUMA的表达分别上调2.1倍和1.9倍，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调60%（Western blot），与p53介导的凋亡信号通路激活一致[2]

1. p300组蛋白乙酰转移酶（p300 HAT）活性实验：将2 μg重组人p300 HAT结构域蛋白与系列浓度的CTB（1–100 μM）在HAT实验缓冲液（50 mM Tris-HCl、10%甘油、0.1 mM EDTA、1 mM DTT，pH 8.0）中30℃孵育15分钟；加入1 μg组蛋白H3和0.5 μCi [³H]乙酰辅酶A启动乙酰化反应，30℃反应60分钟；加入SDS-PAGE上样缓冲液终止反应，电泳分离蛋白后，通过荧光自显影检测乙酰化组蛋白H3，液闪计数量化放射性强度，计算p300 HAT活性及EC50值[1]
2. p300构象分析的表面增强拉曼光谱（SERS）实验：将10 μM p300 HAT结构域蛋白与30 μM CTB在PBS中混合，25℃孵育30分钟；将混合物滴加至银纳米颗粒基底，采用拉曼光谱仪（激发波长785 nm，激光功率5 mW）记录SERS光谱；分析p300 HAT结构域的光谱变化（如酰胺I/II带、芳香族氨基酸振动），表征CTB诱导的构象改变[1]
3. p53乙酰化体外实验：将1 μg纯化的重组p53蛋白、0.5 μg p300 HAT结构域与10–40 μM CTB、1 mM乙酰辅酶A在HAT缓冲液中30℃孵育90分钟；采用乙酰化p53（Lys382）特异性抗体进行Western blot检测，通过条带密度量化乙酰化水平[2]

细胞活力测定 [2]
细胞类型： MCF-7 细胞
测试浓度： 0-200 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 抑制活力，IC50 为 85.43 μM，并减少原代神经元的自噬腐蚀 [3]。 。

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细胞凋亡分析 [2]
细胞类型： MCF-7 细胞
测试浓度： 85.43 μM
孵育持续时间：24、48和72小时
实验结果：诱导时间依赖性细胞凋亡。

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1. MCF-7和MRC-5细胞培养与处理实验：人乳腺癌MCF-7细胞和正常人肺成纤维细胞MRC-5培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基，在5% CO₂、37℃条件下培养；以1×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，贴壁24小时后，加入系列浓度的CTB（10–40 μM）或溶媒（DMSO，终浓度<0.1%）处理24–48小时；MTT实验评估细胞活力，Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测凋亡细胞[2]
2. p53乙酰化及凋亡蛋白的Western blot检测实验：CTB处理后，用RIPA缓冲液裂解MCF-7和MRC-5细胞，提取总蛋白并定量；取30 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜；用乙酰化p53（Lys382）、总p53、Bax、PUMA、Bcl-2及GAPDH（内参）一抗孵育膜，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗；化学发光法显影蛋白条带，密度分析量化相对蛋白表达水平[2]
3. 细胞活力MTT实验：将MCF-7和MRC-5细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，CTB（5–50 μM）处理48小时；加入0.5 mg/mL MTT试剂37℃孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后，酶标仪检测570 nm吸光度；以溶媒对照组为基准计算细胞活力百分比[2]

1. In vitro cytotoxicity: CTB (≤20 μM) shows no significant cytotoxicity in MCF-7 cells (cell viability >90%) and MRC-5 cells (cell viability >95%) by MTT assay; at 30 μM, MCF-7 cell viability is reduced to 55%, while MRC-5 cell viability remains >90%, indicating selective cytotoxicity toward cancer cells [2]
2. Apoptotic selectivity: CTB (30 μM) induces apoptosis in MCF-7 cancer cells (45% apoptotic rate) but not in normal MRC-5 fibroblasts (apoptotic rate <5%), demonstrating low toxicity to normal cells [2]

[1]. Activation of p300 histone acetyltransferase by small molecules altering enzyme structure: probed by surface-enhanced Raman spectroscopy. J Phys Chem B. 2007;111(17):4527-4534.

[2]. The effect of CTB on P53 protein acetylation and consequence apoptosis on MCF-7 and MRC-5 cell lines. Adv Biomed Res. 2013;2:24. Published 2013 Mar 6.

[3]. Promoting tau secretion and propagation by hyperactive p300/CBP via autophagy-lysosomal pathway in tauopathy. Mol Neurodegener. 2020;15(1):2. Published 2020 Jan 6.

N-[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-2-ethoxybenzamide is a member of benzamides.
An ENTEROTOXIN from VIBRIO CHOLERAE. It consists of two major protomers, the heavy (H) or A subunit and the B protomer which consists of 5 light (L) or B subunits. The catalytic A subunit is proteolytically cleaved into fragments A1 and A2. The A1 fragment is a MONO(ADP-RIBOSE) TRANSFERASE. The B protomer binds cholera toxin to intestinal epithelial cells and facilitates the uptake of the A1 fragment. The A1 catalyzed transfer of ADP-RIBOSE to the alpha subunits of heterotrimeric G PROTEINS activates the production of CYCLIC AMP. Increased levels of cyclic AMP are thought to modulate release of fluid and electrolytes from intestinal crypt cells.

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1. CTB is a small-molecule activator of p300 histone acetyltransferase, identified in a screen for compounds that modulate p300 HAT activity via conformational changes [1]
2. CTB exerts its biological effects by activating p300 HAT, which enhances the acetylation of target proteins including histone H3 and the tumor suppressor p53; in cancer cells, this leads to p53-mediated transcriptional activation of pro-apoptotic genes and induction of apoptosis [1][2]
3. Surface-enhanced Raman spectroscopy (SERS) studies reveal that CTB binds to the regulatory domain of p300 HAT, inducing a conformational shift that increases the enzyme’s catalytic activity by enhancing substrate binding [1]
4. CTB exhibits selective cytotoxicity toward human breast cancer MCF-7 cells (p53 wild-type) but not normal MRC-5 fibroblasts, suggesting potential as a targeted anticancer agent [2]

C16H13NO2F3CL

343.728

343.06

C, 55.91; H, 3.81; Cl, 10.31; F, 16.58; N, 4.07; O, 9.31

451491-47-7

729859

White to off-white solid powder

4.6

38.3

1

5

4

23

405

0

YDXZSNHARVUYNM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H13ClF3NO2/c1-2-23-14-6-4-3-5-11(14)15(22)21-10-7-8-13(17)12(9-10)16(18,19)20/h3-9H,2H2,1H3,(H,21,22)

N-[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-2-ethoxybenzamide

CTB ACT activator; CTB; Histone Acetyltransferase Activator

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~290.93 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。