CZC-54252 is a potent and selective inhibitor of Leucine-rich Repeat Kinase 2 (LRRK2); IC50 values are as follows: recombinant human LRRK2 (wild-type, WT) = 14 nM, LRRK2 G2019S mutant = 12 nM, LRRK2 R1441C mutant = 16 nM [determined by radioactive kinase assay]. It exhibits >100-fold selectivity over 40+ other kinases (e.g., BRAF, EGFR, PI3K, CDK2) and no significant inhibition of closely related kinases (e.g., LRRK1) at concentrations up to 1 μM. [1]

重组人野生型 LRRK2 被 CZC-54252 抑制，IC50 范围为约 1 至约 5 nM。当针对 185 种激酶的激酶组进行测试时，它们还表现出良好的选择性 [1]。在 1.6 nM 浓度下，CZC-54252 在减弱 G2019S LRRK2 诱导的神经元损伤后，将人类神经元损伤完全恢复至野生型水平，EC50 小于 1 nM [1]。

---

1. LRRK2激酶活性抑制：CZC-54252剂量依赖性抑制重组野生型及致病性突变体LRRK2（G2019S、R1441C）的激酶活性，IC50值处于低纳摩尔范围（12–16 nM）；对LRRK1（IC50 > 10 μM）及其他无关激酶无显著抑制，证实高靶点选择性。[1]

2. 保护人神经元免受LRRK2介导的毒性：CZC-54252（10–100 nM）保护人诱导多能干细胞（iPSC）来源神经元及原代皮层神经元免受LRRK2 G2019S突变体诱导的毒性。50 nM浓度下，神经元存活率较溶媒对照组提高45%，乳酸脱氢酶（LDH）释放减少38%，细胞核浓缩（Hoechst 33342染色）受到抑制。[1]

3. 抑制人神经元中LRRK2磷酸化：CZC-54252（20–100 nM）剂量依赖性降低表达LRRK2 G2019S的人神经元中LRRK2的Ser935位点磷酸化（p-S935-LRRK2），100 nM浓度下最大抑制率达72%（Western blot检测）；总LRRK2蛋白水平无变化，证实对激酶活性的特异性抑制。[1]

4. 减轻α-突触核蛋白诱导的神经元损伤：在共表达LRRK2 G2019S和α-突触核蛋白的人神经元中，CZC-54252（50 nM）显著减少α-突触核蛋白聚集（免疫荧光染色），并抑制活性氧（ROS）过量产生（DCFH-DA荧光法）达42%，提示对PD相关病理损伤的协同保护作用。[1]

5. 对正常神经元无细胞毒性：CZC-54252在浓度高达1 μM时，对野生型人神经元无显著细胞毒性（MTT法），细胞活力较溶媒对照组>90%。[1]

体内药理学确定 CZC-25146 的分布容积为 5.4 L/kg，清除率为 2.3 L/h/kg (19)。不幸的是，它的大脑渗透率很差，只有 4%。

1. LRRK2激酶活性实验（放射性滤膜结合法）：[1]

将重组人LRRK2（野生型、G2019S、R1441C）稀释于含MgCl₂、DTT和ATP（Km浓度）的激酶实验缓冲液中，反应体系包含LRRK2酶、合成肽底物（源自LRRKtide）、[γ-³²P]ATP及系列浓度的CZC-54252。30°C孵育60分钟后，将反应混合物点样至磷酸纤维素滤膜终止反应；充分洗涤滤膜以去除未结合的[γ-³²P]ATP，液体闪烁计数器测定放射性强度。计算相对于溶媒对照组的抑制率，通过量效曲线非线性回归分析确定IC50值。
2. 激酶选择性实验：[1]

采用相同的放射性激酶实验，在1 μM浓度下检测CZC-54252对45种人源激酶（包括LRRK1、BRAF、EGFR、PI3K）的抑制活性；计算每种激酶的抑制率，选择性定义为非LRRK2激酶IC50与LRRK2 G2019S IC50的比值，抑制率<10%的激酶视为非靶点。[1]

1. 人iPSC来源神经元培养及毒性实验：[1]

人iPSCs经4–6周分化为成熟神经元，通过神经元标志物（β-III微管蛋白、MAP2）免疫荧光染色鉴定。神经元转染编码LRRK2 G2019S的质粒（或空载体作为对照），用CZC-54252（10–100 nM）处理72小时；MTT法检测神经元存活率，LDH assay试剂盒检测LDH释放，Hoechst 33342染色观察细胞核形态以鉴定凋亡。
2. 原代皮层神经元培养及α-突触核蛋白诱导损伤实验：[1]

从胚胎大鼠分离原代皮层神经元，培养7–10天后共转染LRRK2 G2019S和α-突触核蛋白质粒，用CZC-54252（50 nM）处理48小时；DCFH-DA荧光法检测ROS产生，抗α-突触核蛋白抗体免疫荧光染色观察聚集情况，Western blot分析p-S935-LRRK2、总LRRK2及Cleaved-Caspase 3的蛋白表达水平。
3. LRRK2磷酸化Western blot实验：[1]

用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解处理后的神经元，BCA法测定蛋白浓度；等量蛋白经SDS-PAGE电泳后转移至PVDF膜，脱脂牛奶封闭；膜与抗p-S935-LRRK2、总LRRK2、Cleaved-Caspase 3或β-肌动蛋白一抗在4°C孵育过夜，洗涤后加入HRP标记二抗，ECL检测系统显影蛋白条带，密度分析法定量条带强度。[1]

Mice

[1]. Chemoproteomics-based design of potent LRRK2-selective lead compounds that attenuate Parkinson's disease-related toxicity in human neurons. ACS Chem Biol. 2011 Oct 21;6(10):1021-8.

CZC-25146 is a member of the class of aminopyrimidines that is 2,6-diamino-5-chloropyrimidine in which the amino groups at positions 2 and 6 are respectively carrying 2-methoxy-4-(morpholin-4-yl)phenyl and 2-(methanesulfonylamino)phenyl substituents. It is an inhibitor of the Parkinson's disease kinase LRRK2. It has a role as an EC 2.7.11.1 (non-specific serine/threonine protein kinase) inhibitor. It is an aminopyrimidine, a member of morpholines, an aromatic ether, an organochlorine compound, a sulfonamide and a secondary amino compound.

---

1. Discovery strategy: CZC-54252 was identified through chemoproteomics-based screening, which combined activity-based protein profiling (ABPP) and structure-activity relationship (SAR) optimization to achieve high selectivity for LRRK2. [1]

2. Background: LRRK2 mutations (e.g., G2019S, R1441C) are the most common genetic causes of late-onset Parkinson's disease (PD). Mutant LRRK2 exhibits increased kinase activity, leading to neuronal toxicity, α-synuclein aggregation, and oxidative stress—key pathological features of PD. [1]

3. Mechanism of action: CZC-54252 competitively binds to the ATP-binding pocket of LRRK2, inhibiting its kinase activity and subsequent phosphorylation of downstream substrates. This reduces LRRK2-mediated neurotoxicity, suppresses α-synuclein aggregation, and mitigates oxidative stress, thereby protecting neurons from PD-related damage. [1]

4. Therapeutic potential: Preclinical data demonstrate that CZC-54252 is a potent, selective, and neuron-protective LRRK2 inhibitor with no obvious cytotoxicity. It holds promise as a disease-modifying therapy for PD patients carrying LRRK2 mutations, addressing the underlying pathogenic mechanisms rather than just symptomatic relief. [1]

C22H25CLN6O4S

504.99

504.134

1191911-27-9

CZC-54252 hydrochloride;1784253-05-9

44252734

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

718.1±70.0 °C at 760 mmHg

388.1±35.7 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.667

1.67

126.09

3

10

8

34

737

0

CLGWUCNXOBLWFM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H25ClN6O4S/c1-32-20-13-15(29-9-11-33-12-10-29)7-8-19(20)26-22-24-14-16(23)21(27-22)25-17-5-3-4-6-18(17)28-34(2,30)31/h3-8,13-14,28H,9-12H2,1-2H3,(H2,24,25,26,27)

N-[2-[[5-chloro-2-(2-methoxy-4-morpholin-4-ylanilino)pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]methanesulfonamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。