D-609

PC-PLC (competitive inhibitor; no IC50/Ki/EC50/DC50 values reported in this study)
SMS1 and SMS2 (inhibitor; no IC50/Ki/EC50/DC50 values reported in this study) [2]
D-609 targets phosphatidylcholine-specific phospholipase C (PC-PLC) as a selective competitive inhibitor. The compound also inhibits sphingomyelin synthase (SMS1 and SMS2). By inhibiting PC-PLC and SMS, D-609 affects cell signaling pathways involved in proliferation, differentiation, apoptosis, and inflammation. PC-PLC generates diacylglycerol (DAG) and phosphocholine from phosphatidylcholine, while SMS converts ceramide to sphingomyelin, regulating the balance of bioactive lipids. The compound's inhibition of these enzymes leads to modulation of signal transduction pathways that are important for viral replication, tumor growth, and inflammatory responses.

D609 浓度为 100 μM，作用两小时可显著降低多种细胞系的细胞水肿[2]。在 200 μM 浓度下激活 caspase-3 两小时后，D609（100 μM；两小时）浓度为 50 μM 和 100 μM 时，可显著抑制 BV-2 星形胶质细胞中的 BrdU 表达。这种现象每年都会发生，导致 S 期细胞数量减少，G1 期细胞数量增加[2]。100 μM；用D609处理2小时，然后再处理2小时，或者处理22小时（不使用D609），均可提高神经酰胺水平，促进p21表达，并导致磷酸化Rb水平下降[2]。

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D609（100 μM，处理2小时+追踪22小时）显著抑制RAW 264.7巨噬细胞、N9和BV-2小胶质细胞以及DITNC1星形胶质细胞的增殖，且不影响细胞活力（台盼蓝染色排除法检测，细胞活力>90%）。[2]
D609（100 μM，处理2小时+追踪2小时）显著抑制BV-2小胶质细胞中BrdU的掺入，表明进入S期的细胞数量减少。 [2]
流式细胞术分析：D609（100 μM，处理 2 小时 + 追踪 2 小时）导致 BV-2 细胞在 G1 期积累（54.3±1.5% vs 对照组 43.4±3.9%），S 期细胞减少（39.9±3.3% vs 对照组 48.8±2.4%）。[2]
D609（100 μM，2 小时）显著增加 BV-2 小胶质细胞中的神经酰胺水平（主要为棕榈酸 C16:0、木蜡酸 C24:0 和神经酰胺 C24:1），去除 D609 后 2 小时仍保持较高水平，22 小时后恢复至对照水平。 [2]
蛋白质印迹分析：D609（100 μM，2 小时）可增加 BV-2 小胶质细胞中 Cdk 抑制剂 p21 的表达，并下调磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 (Rb) 的表达；去除 D609 22 小时后，二者均恢复至基线水平。[2]
D609 在 50 或 100 μM 浓度下处理 2 小时未诱导 caspase-3 裂解，但 200 μM 浓度处理 2 小时可诱导细胞凋亡。100 μM D609 处理 8 小时或更长时间可诱导 caspase-3 激活。 [2]
D609 处理显著提高了 BV-2 细胞中的 DAG 水平（对照组 1.77±0.17 nmol/mg 蛋白 vs D609 处理 2 小时后 2.14±0.08 nmol/mg 蛋白，p<0.05）。[2]
外源性 C8-神经酰胺（30 μM，24 小时）显著抑制了 BV-2 细胞的增殖，且未诱导细胞死亡（细胞活力：对照组 94±0.2% vs C8-神经酰胺处理组 93±0.5%）；20 μM 无抑制作用，40 μM 则导致显著的细胞死亡。[2]
C8-神经酰胺（30 μM，6 小时 + 2 小时 BrdU 追踪）显著抑制了 BrdU 的掺入；2 小时或 4 小时处理无显著抑制作用。 [2]
体外实验表明，D-609 具有抗病毒和抗肿瘤特性。该化合物能抑制 LPS 和 IFNγ 诱导的 NO 生成，IC50 值为 20 mg/mL。它还能通过抑制基底膜合成来抑制血管生成。在用 53 μg/mL 的 D-609 处理 OVCAR3 细胞 24 小时后，D-609 对细胞活力和信号传导产生了影响。已有报道指出该化合物具有抗氧化活性。研究还考察了其对多种细胞系中 PC-PLC 活性、鞘脂代谢和下游信号通路的影响。

在apoE-/-小鼠中，D609（2.5、10 mg/kg/天；腹腔注射；持续6周）可抑制已存在的动脉粥样硬化病变的进展，并将事件成分转变为更稳定的表型[3]。在Island Wistar小鼠中，于LPS（3 mg/kg）给药前30分钟，经气管内（30 mg/kg；腹腔注射；单次剂量）给予LPS，可预防LPS诱导的肺动脉高压[4]。C57BL/6 WT和apoE-/- 26周龄小鼠[3]。同一研究小组之前的研究表明，D609治疗可减少大鼠大脑中动脉闭塞卒中模型中的脑梗死体积，这归因于p21上调介导的细胞周期调控。这种保护作用与细胞周期进程的抑制有关。 （本文未详细描述体内实验方案；请参阅 Adibhatla 和 Hatcher 2010 Mol Neurobiol 41:206-217）[2]
体内研究已证实 D-609 具有抗病毒和抗肿瘤活性。该化合物在病毒感染和癌症动物模型中均显示出疗效。其抑制血管生成的能力提示其具有治疗实体瘤的潜力。该化合物的抗炎作用已在炎症模型中得到评估。研究考察了其对肿瘤生长、病毒复制和炎症反应的影响。该化合物的药代动力学特性和安全性已在临床前研究中得到表征。

在野生型 (WT) 和 apoE-/- 小鼠的血清样本中测定了 PC-PLC 酶活性。WT 小鼠血清 PC-PLC 活性的平均值标准化为 1.0；apoE-/- 小鼠的活性高出 2.6±0.56 倍 (P<0.05)。[3] 在 HUVEC 细胞的总细胞裂解液中测定了 PC-PLC 酶活性。在用 D609 预处理的 HUVEC 细胞中，oxLDL 介导的 PC-PLC 酶活性被完全抑制。[3] 使用 Amplex Red 检测法检测 PC-PLD 酶活性，以确认 D609 抑制的特异性。oxLDL 处理后 PC-PLD 活性没有增加，且不受 D609 的影响。[3] 在无细胞生化分析中，评估了 D-609 对 PC-PLC 的抑制活性。酶活性测定用于测量化合物抑制PC-PLC介导的磷脂酰胆碱水解的能力。使用纯化的酶制剂测定Ki值为5-10 µM（6.4 µM）。通过证明该化合物不抑制磷脂酰肌醇特异性PLC、PLA2和PLD，证实了其选择性。此外，还对其抑制SMS活性进行了表征。这些测定证实了该化合物作为选择性PC-PLC和SMS抑制剂的作用机制。

细胞增殖测定[2]
细胞类型： RAW 264.7 巨噬细胞、N9 和 BV-2 小胶质细胞以及 DITNC1 星形胶质细胞
测试浓度： 100 μM
孵育时间： 2 小时
实验结果： 显著抑制 RAW 264.7 巨噬细胞、N9 和 BV-2 小胶质细胞以及 DITNC1 星形胶质细胞的增殖，但不影响细胞活力。

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细胞凋亡分析[2]
细胞类型： BV-2 细胞
测试浓度： 50、100 和 200 μM
孵育时间： 2 小时
实验结果： caspase-3 的激活呈剂量和时间依赖性。

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细胞周期分析[2]
细胞类型： BV-2 细胞
测试浓度： 100 μM
孵育时间： 2 小时
实验结果： 显著抑制 BV-2 小胶质细胞对 BrdU 的掺入，导致 G1 期细胞聚集和 S 期细胞数量减少。

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蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： BV-2 细胞
测试浓度： 100 μM
孵育时间： 2 小时
实验结果： 神经酰胺水平升高，p21 表达上调，导致磷酸化 Rb 减少。

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细胞培养：所有细胞系（BV-2 小胶质细胞、N9 小胶质细胞、RAW 264.7 巨噬细胞、DITNC1 星形胶质细胞）均培养于含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素的 DMEM/高糖培养基中。细胞接种后，过夜贴壁，次日进行处理。将D609溶解于无菌生理盐水中，并加入到培养物中至所需浓度。[2]
细胞增殖实验：用100 μM D609处理细胞2小时，然后更换培养基。离心收集未贴壁细胞，并将细胞重新接种到相应的培养皿中。使用血细胞计数器计数细胞，并在不添加D609的情况下孵育22小时后，通过台盼蓝染色排除法测定细胞活力。[2]
BrdU标记实验：将BV-2小胶质细胞以2×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中。用100 μM D609处理细胞2小时，或用30 μM C8-神经酰胺处理细胞2小时、4小时和6小时。在 37°C 下用 5 μM BrdU 处理 2 小时进行追踪实验，随后用冰冷的甲醇固定 10 分钟。用 2 N HCl 变性 30 分钟。每一步后均用 PBS 洗涤细胞 4 次。用含 0.5% BSA 和 0.4% Triton X-100 的 10% 正常驴血清在室温下封闭非特异性位点 45 分钟。将细胞与抗 BrdU 一抗（1:50）在 4°C 下孵育过夜。洗涤 4 次后，将细胞与 Alexa Fluor 488 标记的二抗（1:500）孵育 1 小时。用 DAPI（10 μg/mL）对细胞核进行复染。使用落射荧光显微镜采集图像，并使用 ImageJ 软件进行分析；结果以 BrdU 阳性细胞核的百分比表示。 [2]
细胞周期分析：BV-2细胞用D609处理，PBS洗涤后用胰蛋白酶消化。细胞沉淀后，浓度调整至1-2×10⁶个细胞/mL。将3 mL 100%乙醇逐滴加入1 mL细胞悬液中，持续涡旋混匀固定细胞。-20℃过夜固定后，细胞沉淀并重悬于含1% BSA的PBS中。洗涤两次后，将细胞悬浮于碘化丙啶染色液（50 μg/mL PI，1 mg/mL RNase，0.5% Triton X-100）中，避光于37℃孵育30分钟，然后用流式细胞仪进行分析。数据采用MODFIT细胞周期分析程序进行分析。 [2]蛋白质印迹：细胞在蛋白提取缓冲液（20 mM Na₂HPO₄、50 mM NaF、10 mM Na₄P₂O₇、150 mM NaCl、5 mM EGTA、5 mM EDTA、2% Triton X-100、0.5% 脱氧胆酸钠、1 mM Na₃VO₄ 和蛋白酶抑制剂混合物）中裂解。细胞裂解液经超声处理后，于 4°C 下以 13,000 rpm 离心 10 分钟。取上清液，采用 Lowry 法测定蛋白浓度。取 50 μg 蛋白样品上样至 10% 或 12% 聚丙烯酰胺凝胶的每个孔中，并在 150 V 电压下进行 SDS-PAGE 电泳。然后将蛋白以 100 V 电压转移至硝酸纤维素膜，转移时间为 1 小时。用 5% 脱脂奶粉（溶于 TBST 缓冲液）在室温下封闭非特异性结合位点 1 小时。将印迹膜与一抗（用 5% BSA 或 5% 脱脂奶粉（溶于 TBST 缓冲液）稀释）于 4°C 孵育过夜，用 TBST 缓冲液洗涤，然后与相应的二抗在室温下孵育 1 小时。用化学发光试剂显色。将印迹膜剥离后，用 β-肌动蛋白作为上样对照进行重新探针检测。[2]
脂质分析：将细胞沉淀重悬于 0.5 mL 生理盐水中，取一部分用于蛋白质测定。将细胞悬液转移至 3 mL CHCl₃:MeOH (1:2) 混合溶液中，再加入生理盐水和 CHCl₃。将含有脂质提取物的 CHCl₃ 层在氮气下蒸发，并用 CHCl₃:MeOH (9:1) 混合溶液重新溶解。神经酰胺在以氯仿:甲醇:乙酸 (94:2:5) 为展开剂的硅胶 H 型薄层色谱板上进行分离。鞘磷脂 (SM) 在以氯仿:乙醇:乙腈:水 (30:35:35:7) 为展开剂的硅胶薄层色谱板上进行分离。脂质的鉴定采用标准品。将二酰甘油 (DAG)、神经酰胺和 SM 条带刮入含有 30 μL 硫酸和 10 nmol 十七烷酸 (17:0)（作为内标）的 1.5 mL 甲醇溶液中。SM 和神经酰胺在 100°C 加热 2 小时进行甲基化；DAG 在 70°C 加热 30 分钟进行甲基化。脂肪酸甲酯用己烷萃取，并通过气相色谱法进行分析。对于培养基中 C8-神经酰胺的分析，取 0.5 mL 培养基样品，萃取后在硅胶 H 型薄层色谱板上进行分离，并通过气相色谱法进行分析。 [2]
C8-神经酰胺处理：将溶于100%乙醇的C8-神经酰胺先用涡旋振荡器轻轻分散于少量培养基中，然后加入BV-2细胞培养物中。[2]
D-609的细胞活性测定包括评估其对多种细胞系中PC-PLC活性、鞘脂代谢和下游信号传导的影响。该化合物对细胞增殖、凋亡和分化的影响也已被研究。其抗病毒活性已在病毒感染的细胞培养物中得到评估。该化合物抑制LPS和IFNγ刺激的细胞中NO生成的能力也已得到评估。研究还考察了其对内皮细胞血管生成相关过程的影响。该化合物的抗氧化活性已在氧化应激细胞模型中得到表征。

动物/疾病模型： 26周龄apoE−/−和C57BL/6野生型小鼠[3]
剂量： 2.5、10 mg/kg
给药途径： 腹腔注射；每日一次，持续6周
实验结果：抑制apoE−/−小鼠体内已存在的动脉粥样硬化病变的进展，并将病变组成转变为更稳定的表型。
显著降低主动脉内皮细胞中血管细胞黏附分子-1和细胞间黏附分子-1的表达。

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6周龄apoE−/−小鼠断奶后喂以致动脉粥样硬化饮食。20周龄时，建立4个研究组。第一组小鼠被安乐死以确定基线病变情况。第二组和第三组分别腹腔注射D609，剂量分别为10 mg/kg/天（D609-HD）和2.5 mg/kg/天（D609-LD）。第四组对照组注射等体积（100 μL）的磷酸盐缓冲液。治疗6周后，采集血液和组织样本进行后续分析。所有小鼠在6周治疗期间均健康存活。[3]
组织采集与分析：采集主动脉根部和头臂动脉。制备组织切片（每个组织4-5张，每张切片至少分析3个部位），用于组织学和免疫荧光染色。主动脉用油红O染色，用于病变区域的正面分析。测定主动脉窦斑块体积。对主动脉根部和头臂动脉切片进行苏木精-伊红（H&E）染色。对Mac-3（巨噬细胞）、α-平滑肌肌动蛋白（平滑肌细胞）、LOX-1、VCAM-1、ICAM-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13进行了免疫染色。采用Masson三色染色法检测胶原蛋白。进行原位酶谱分析以检测MMP-2/MMP-9活性。[3]D-609的动物模型包括病毒感染、癌症和炎症模型。该化合物已在肿瘤异种移植模型中研究了其抗肿瘤作用。其抗病毒活性已在病毒性疾病动物模型中进行了评估。该化合物的抗血管生成作用已在血管生成模型中进行了评估。研究考察了其对肿瘤生长、病毒复制和炎症反应的影响。已证实该化合物能够通过抑制基底膜合成来抑制血管生成。

D609 在生理盐水和细胞培养基中均稳定，300 nm 处的吸收峰值显示其稳定性良好，24 小时后吸收值下降不足 10%；24 小时内未观察到 350 nm 处的吸收值，表明未形成二硫键。[2] D609（100 μM，处理 2 小时）可导致 BV-2 细胞中神经酰胺水平出现短暂且可逆的升高，停药 22 小时后恢复至对照水平。[2] C8-神经酰胺（30 μM）在 37°C 的培养基中可稳定保存长达 24 小时而未发生分解。然而，BV-2 细胞培养基中的 C8-神经酰胺水平迅速下降，24 小时后降至 1 μM 以下，表明其几乎被细胞完全代谢。细胞内C8-神经酰胺水平在2小时后达到6529±245 pmol/mg蛋白，24小时后下降至2小时水平的10%以下。内源性神经酰胺水平在24小时后也下降至2小时水平的一半以下。[2]
D-609的药代动力学数据显示，该化合物为钾盐，分子量为267.48 g/mol，分子式为C11H16OS2·K。CAS号为83373-60-8。该化合物应以粉末形式在-20°C下保存长达3年。以溶剂形式保存时，应在-80°C下保存长达1年。该化合物可溶于水和DMSO。临床前动物的标准药代动力学研究已对其吸收、分布、代谢和排泄进行了表征。该化合物的口服生物利用度和半衰期也已得到评估。

D609诱导的细胞凋亡与剂量和暴露时间相关。用50或100 μM D609处理BV-2小胶质细胞2小时，随后追踪22小时，细胞形态正常，无明显的台盼蓝染色（细胞活力>90%），而200 μM D609处理则导致细胞收缩和染色。Western blot结果显示，50或100 μM D609处理未检测到caspase-3裂解，但200 μM D609处理2小时后检测到caspase-3激活，表明发生了细胞凋亡。[2] 100 μM D609处理2小时后，无论是立即处理还是追踪22小时后，均未检测到caspase-3裂解；但处理8小时或更长时间后，则可诱导caspase-3激活。 [2]
外源性C8-神经酰胺：30 μM处理24小时可抑制细胞增殖而不诱导细胞死亡（细胞活力为93±0.5%，对照组为94±0.2%）；40 μM则导致显著的细胞死亡。[2]
D-609的毒性特征是PC-PLC抑制剂的典型特征。作为一种研究用化合物，应遵循实验室化学品操作的标准安全预防措施。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。现有文献中尚未报道具体的毒性研究；然而，作为一种强效酶抑制剂，应遵循适当的操作规程。在实验设计中应考虑该化合物对细胞信号传导和鞘脂代谢的影响。

[1]. The antiviral, antitumoural xanthate D609 is a competitive inhibitor of phosphatidylcholine-specific phospholipase C. Drugs Exp Clin Res. 1996;22(6):287-94.

[2]. Anti-proliferative effects of tricyclodecan-9-yl-xanthogenate (D609) involve ceramide and cell cycle inhibition.Mol Neurobiol. 2012 Jun;45(3):455-64. Epub 2012 Mar 14.

[3]. D609 inhibits progression of preexisting atheroma and promotes lesion stability in apolipoprotein e-/- mice: a role of phosphatidylcholine-specific phospholipase in atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010 Mar;30(3):411-8.

[4]. Role of acid sphingomyelinase and IL-6 as mediators of endotoxin-induced pulmonary vascular dysfunction. Thorax. 2017 May;72(5):460-471.

[5]. D609 inhibits the proliferation of neural progenitor cells.Neuroreport. 2010 Jul 14;21(10):700-3.

D609 是一种黄原酸酯类化合物，最初开发为广谱抗病毒药物。由于其硫醇基团，它具有抗氧化特性。[2] D609 可抑制 PC-PLC 和 SMS，从而将两种作用相反的脂质第二信使——神经酰胺（抑制细胞生长）和 DAG（促进细胞增殖）——联系起来。[2] 脑缺血后，星形胶质细胞和小胶质细胞的增殖会导致胶质瘢痕形成和炎症因子的释放。D609 可能通过神经酰胺介导的细胞周期阻滞来抑制胶质细胞增殖，从而在卒中后发挥治疗作用。 [2]D609 可能通过阻断成熟神经元早期再灌注（24 小时再灌注）时细胞周期的异常诱导来预防神经元死亡，同时不干扰小胶质细胞/巨噬细胞的增殖（72 小时再灌注），而这些细胞是中风修复阶段营养因子的来源。[2]神经酰胺的功能取决于其链长（例如 C16:0、C24:0、C24:1），这可能最终决定细胞事件，例如细胞凋亡、增殖或细胞周期阻滞。[2]D609 治疗在体内中风模型中上调了 p21 的表达（Adibhatla 和 Hatcher，2010）。[2]D-609 是一种选择性竞争性 PC-PLC 抑制剂，Ki 值为 6.4 μM。它还能抑制鞘磷脂合成酶（SMS1 和 SMS2）。该化合物具有抗病毒、抗肿瘤和抗氧化活性。它不抑制细菌PI-PLC、牛胰PLA2或PLD。D-609通过阻止基底膜的合成来抑制血管生成。它还能抑制LPS和IFNγ诱导的NO生成，IC50值为20 mg/mL。该化合物的分子量为267.48 g/mol，分子式为C11H16OS2.K。CAS号为83373-60-8。

C11H15KOS2

266.4583

266.02

83373-60-8

83373-60-8 (K+); 145764-52-9 (free);

4234241

White to off-white solid powder

1.24 g/cm3

303.8ºC at 760 mmHg

137.5ºC

3.31

66.62

0

3

2

15

271

0

[K].S=C(OC1C2C3C(C(C2)C1)CCC3)S

IGULCCCBGBDZKQ-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C11H16OS2.K/c13-11(14)12-10-5-6-4-9(10)8-3-1-2-7(6)8;/h6-10H,1-5H2,(H,13,14);/q;+1/p-1

potassium;8-tricyclo[5.2.1.02,6]decanyloxymethanedithioate

D609D-609 D609

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~375.29 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~7.51 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (11.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (11.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (11.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (93.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。