D-luciferin (Firefly luciferin)

别名: D-(-)-Luciferin; Firefly luciferin; Luciferin; (S)-2-(6-Hydroxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4,5-dihydrothiazole-4-carboxylic acid; D-(-)-Luciferin; Photinus luciferin; (S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylic acid; Firefly luciferin D-荧光素; (S)-4,5-二氢-2-(6-羟基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸; D-虫荧光素游离酸; D-(-)-荧光素[化学发光试剂]; D-(-)-Luciferin [Chemiluminescence Reagent] D-(-)-荧光素[化学发光试剂]; D-蟲螢光素遊離酸;D-荧光素自由酸; (S)-2-(6-羟基-2-苯并噻唑基)-2-噻唑啉-4-羧酸;D-(-)-荧光素;D-冷光素
目录号: V1866 纯度: ≥98%
D-荧光素(游离酸)是一种常用、细胞可渗透的荧光素酶生物发光底物,在 ATP 存在下,Km 约为 2 μM,用于基于荧光素酶的生物发光成像和基于细胞的高通量筛选应用。
D-luciferin (Firefly luciferin) CAS号: 2591-17-5
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
1g
Other Sizes

Other Forms of D-luciferin (Firefly luciferin):

  • D-荧光素钠盐
  • D-荧光素钾盐
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
D-荧光素(游离酸)是一种常用、细胞可渗透的荧光素酶生物发光底物,在 ATP 存在下,Km 约为 2 μM,用于基于荧光素酶的生物发光成像和基于细胞的高通量筛选应用。 D-荧光素在 ATP 存在下氧化脱羧后可以发光。 D-荧光素为细胞 ATP 水平的体内和体外检测提供生物发光信号。 D-荧光素可用于测定与感兴趣的启动子连接的荧光素酶基因的表达。或者,D-荧光素和荧光素酶可用于评估细胞或生化测定中 ATP 的可用性。 D-荧光素可以静脉内或腹膜内施用。
生物活性&实验参考方法
靶点
Natural substrate of luciferase (Luc) enzyme
体外研究 (In Vitro)
1. 注意事项:
a)D-荧光素存在三种形式:游离酸、钾盐和钠盐。D-荧光素的钠和钾形式可以很容易地溶解在缓冲水溶液(pH 6.1-6.5)中。储备液可以用不含ATP的水制备,并在-20°C的避光/黑暗中储存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的pH值下,荧光素在碱性催化下会形成脱氢荧光素,并外消旋为L-异构体(L-荧光素)。
b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或ATP分析系统。
c) 如果测试ATP,请戴手套并使用无ATP容器,以尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。
2.实验方案:该方案仅供参考,可根据您的具体要求进行调整
2.1体外生物发光图像分析示例
a) 在DMSO中制备荧光素D-荧光素储备液。混合均匀。即溶即用或一次性分装好,在-20°C下避光储存,避免冻融循环。
b) 在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素工作溶液。
c) 从培养的细胞中吸出培养基。
d) 向细胞中加入荧光素工作溶液,在成像前在37°C下孵育5-10分钟。
2.2体内生物发光图像分析示例
由于体内实验使用的剂量较大,一般为150mg/kg,建议使用D-荧光素的钾盐或钠盐。
2.3荧光素报告基因检测示例
a) 在DMSO中制备100 mM荧光素储备液。即溶即用或一次性分装好,在-20°C下避光储存,避免冻融循环。
b) 在pH 7.8的25 mM Tricine缓冲液中制备1 mM D-荧光素工作溶液和3 mM ATP、1 mM DTT和15 mM MgSO4。
c) 将5-10μL细胞裂解液转移到微孔板上。使用裂解试剂或不含裂解物的缓冲溶液作为空白。
d) 根据制造商的说明,向发光计中注入荧光素工作溶液。
e) 立即注入200μL荧光素工作溶液,积分时间为10秒。
体内研究 (In Vivo)
目前最流行的方法是生物发光成像(BLI),它使用D-荧光素作为底物,萤火虫荧光素酶(Fluc)作为报告基因。通过绘制总信号强度与 D-荧光素注射后的时间量的关系图来创建时间-强度曲线。除了峰值信号之外,在 D-荧光素注射后的特定时间间隔(5、10、15 和 20 分钟)还鉴定了峰值信号的替代信号。为了描述 D-荧光素注射后时间变化的模式,给定时间-强度曲线中的信号根据曲线中的峰值信号进行标准化 [3]。腹腔或静脉注射:每克体重使用10μL D-荧光素原液。对于 20 g 的小鼠,注射 150 mg/kg 通常应包含 200 μL。室温解冻后,将 D-荧光素(钠盐或钾盐)溶解在 dPBS(不含钙或镁)中,直至最终浓度达到 15 mg/mL。将 5–10 mL 无菌 H2O 通过 0.22 µM 过滤器后,弃去水。将 D-荧光素溶液通过已生产的 0.22 μM 注射器过滤器。
酶活实验
D-荧光素是所有萤光素酶的天然底物,这些萤光素酶催化生物发光昆虫产生光。本综述涵盖了D-荧光素和衍生物或类似物的合成,它们是美国萤火虫Photinus pyralis荧光素酶的底物或抑制剂,Photinus piralis是体外和光学成像技术中更常用的酶[1]。
细胞实验
有机阴离子转运蛋白1(SLC22A6/OAT1)在肾小管排泄内源性和外源性阴离子物质(包括药物)中起着关键作用。由于伴随药物对OAT1功能的抑制可能会在临床实践中引起药代动力学药物相互作用(DDI),因此评估OAT1抑制效力的体外摄取研究可用于预测和避免DDI,并推荐用于药物开发中的候选药物。在本章中,我们描述了一种基于生物发光(BL)检测的快速、高灵敏度的OAT1功能测定方法,该方法使用D-荧光素作为活细胞中的底物。测量原理简单地依赖于D-荧光素被识别为OAT1底物的生化特征,BL强度取决于细胞内D-荧光素水平和萤光素酶活性,从而可以定量分析OAT1介导的D-荧光素转运。BL测量可以在1分钟内完成,而不需要去除细胞外摄取溶液和洗涤细胞的实验程序,这两者都涉及使用同位素标记或荧光化合物的传统摄取研究。本方法适用于高通量筛选,以识别和避免药物开发中潜在的OAT1抑制剂[5]。
动物实验
In vivo BLI is performed using a cooled charge-coupled device camera system (IVIS Imaging System 100) 3, 5, 7, 10, 12, 14, 19, 21, 24, and 28 days after the inoculation of HCT116-Luc cells. Mice are injected with 75 mg/kg D-luciferin in 100 μL of phosphate-buffered saline subcutaneously near the scapula and were placed in the light-tight chamber of the imaging system under isoflurane anesthesia. Beginning 5 min after injection, dorsal luminescent images with an exposure time of 1 s are acquired sequentially at a rate of one image per min until 20 min after D-luciferin injection. Data acquisition is continued until 40 min postinjection on days 3 or 5 and until 25 min on day 7, because of the prolonged time course of light emission. Binning is 4 and the field of view is 15 cm.
Mice
参考文献

[1]. D-Luciferin, derivatives and analogues: synthesis and in vitro/in vivo luciferase-catalyzed bioluminescent activity. ARKIVOC 2009 (i) 265-288.

[2]. Luciferin derivatives for enhanced in vitro and in vivo bioluminescence assays. Biochemistry. 2006 Sep 19;45(37):11103-12.

[3]. Timing of imaging after d-luciferin injection affects the longitudinal assessment of tumor growthusing in vivo bioluminescence imaging. Int J Biomed Imaging. 2010;2010:471408.

其他信息
Photinus luciferin is a 1,3-thiazolemonocarboxylic acid consisting of 3,5-dihydrothiophene-4-carboxylic acid having a 6-hydroxybenzothiazol-2-yl group at the 2-position. It has a role as a luciferin. It is a member of benzothiazoles, a 1,3-thiazolemonocarboxylic acid and an imidothioate. It is a conjugate acid of a Photinus luciferin(1-). It is an enantiomer of an ent-Photinus luciferin.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C11H8N2O3S2
分子量
280.32
精确质量
279.997
元素分析
C, 47.13; H, 2.88; N, 9.99; O, 17.12; S, 22.87
CAS号
2591-17-5
相关CAS号
D-Luciferin sodium;103404-75-7;D-Luciferin potassium;115144-35-9
PubChem CID
92934
外观&性状
Typically exists as White to yellow solids at room temperature
密度
1.8±0.1 g/cm3
沸点
587.6±60.0 °C at 760 mmHg
熔点
200-204ºC
闪点
309.2±32.9 °C
蒸汽压
0.0±1.7 mmHg at 25°C
折射率
1.865
LogP
0.87
tPSA
136.32
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
18
分子复杂度/Complexity
391
定义原子立体中心数目
1
SMILES
S1C(C2=NC3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3S2)O[H])=N[C@@]([H])(C(=O)O[H])C1([H])[H]
InChi Key
BJGNCJDXODQBOB-SSDOTTSWSA-N
InChi Code
InChI=1S/C11H8N2O3S2/c14-5-1-2-6-8(3-5)18-10(12-6)9-13-7(4-17-9)11(15)16/h1-3,7,14H,4H2,(H,15,16)/t7-/m1/s1
化学名
(4S)-2-(6-hydroxy-1,3-benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydrothiazole-4-carboxylic acid
别名
D-(-)-Luciferin; Firefly luciferin; Luciferin; (S)-2-(6-Hydroxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4,5-dihydrothiazole-4-carboxylic acid; D-(-)-Luciferin; Photinus luciferin; (S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylic acid; Firefly luciferin
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:56 mg/mL (199.8 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.5674 mL 17.8368 mL 35.6735 mL
5 mM 0.7135 mL 3.5674 mL 7.1347 mL
10 mM 0.3567 mL 1.7837 mL 3.5674 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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