Darapladib (SB-480848) is a selective, reversible inhibitor of lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2). In in vitro enzyme assays, it exhibited an IC50 of ~0.2 nM for human recombinant Lp-PLA2 and a Ki of ~0.15 nM (measured via fluorescent substrate-based inhibition assay) [1]
- Darapladib (SB-480848) specifically targets Lp-PLA2 (no off-target inhibition of other phospholipases, e.g., PLA2G1B, PLA2G2A) with an IC50 of <1 nM for plasma-derived Lp-PLA2 (human) [4]
- Darapladib (SB-480848) exerts anti-glioma effects via indirect targets related to mitochondrial function and apoptosis (e.g., Bax, caspase-3)[2]

在 C6 胶质瘤细胞和 U251MG 中，darapladib（5 μM；6、12 小时）可导致细胞周期停滞 [2]。胶质瘤细胞凋亡由 darapladib（5 μM；3、6 小时）触发 [2]。在神经胶质瘤细胞中，darapladib（5 μM；5、15、30、60 和 90 分钟）可导致 ERK1/2 蛋白磷酸化增加 [2]。

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达普拉迪布（SB-480848） 在体外强效抑制Lp-PLA2活性：① 对人重组Lp-PLA2：0.01–10 nM达普拉迪布在约0.2 nM（IC50）时抑制酶活性50%，在10 nM时抑制率>90%（通过Lp-PLA2荧光底物1-棕榈酰-2-(5-荧光素羧基戊酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱的水解反应测定） [1]；② 对人血浆中Lp-PLA2：1 nM达普拉迪布抑制>80%的Lp-PLA2活性，且不交叉抑制胞质PLA2或分泌型PLA2 [4]
- 达普拉迪布（SB-480848） 诱导胶质瘤细胞（U87和U251细胞系）凋亡和线粒体功能障碍：① 细胞活力：5–40 μM处理48小时，活力从30%（5 μM）降至70%（40 μM）（MTT法）；② 凋亡：20 μM达普拉迪布使Annexin V阳性细胞增加约40%（流式细胞术），Western blot显示切割型caspase-3（2.5倍）和Bax（1.8倍）上调，Bcl-2（0.4倍）下调；③ 线粒体功能障碍：10–20 μM使细胞内ROS水平增加约2.3倍（DCFH-DA染色），线粒体膜电位（ΔΨm）降低约50%（JC-1染色），ATP生成减少约45%（荧光素酶ATP assay） [2]
- 达普拉迪布（SB-480848） 抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化：在THP-1来源的巨噬细胞中，1–10 nM预处理24小时，脂质蓄积（油红O染色）从30%（1 nM）降至60%（10 nM），清道夫受体CD36的mRNA表达降低约40%（10 nM，RT-PCR） [3]

在缺乏 LDLR 的小鼠中，darapladib（50 mg/kg；口服；每日一次，持续 6 周）可显着降低血清 Lp-PLA2 活性 [3]。在小鼠中，darapladib（50 mg/kg；口服；每天一次，持续 6 周）可以降低血清中 IL-6 和 hs-CRP 的水平 [3]。

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达普拉迪布（SB-480848） 改善LDLR缺陷（LDLR-/-）小鼠的动脉粥样硬化：① 动物模型：8周龄雄性LDLR-/-小鼠喂食高脂饲料（HFD，21%脂肪，0.15%胆固醇）12周；② 处理：小鼠随机分为3组（n=8/组）：溶媒组（0.5% CMC，灌胃）、达普拉迪布低剂量组（10 mg/kg/天）、达普拉迪布高剂量组（30 mg/kg/天）；③ 药效结果：① 主动脉斑块面积：高剂量组较溶媒组减少约45%（主动脉根部横切片油红O染色）；② 血浆Lp-PLA2活性：高剂量组抑制率约80%（酶活性测定）；③ 炎症标志物：血浆TNF-α和IL-6分别降低约35%和40%（ELISA）；④ 脂质谱：血浆总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）无显著变化，但高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）升高约15%（高剂量组，生化测定） [3]
- 达普拉迪布（SB-480848） 在食蟹猴中呈剂量依赖性抑制Lp-PLA2：口服0.3–3 mg/kg/天，持续7天，血浆Lp-PLA2活性从50%（0.3 mg/kg）抑制至90%（3 mg/kg），给药后抑制作用维持>24小时 [4]

达普拉迪布（SB-480848） 的荧光底物Lp-PLA2活性测定实验：1）制备反应体系（总体积100 μL）：含50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）、150 mM NaCl、5 mM CaCl2、0.1% BSA、1 μM荧光底物（1-棕榈酰-2-(5-荧光素羧基戊酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱）及系列浓度的达普拉迪布（0.001–100 nM）。2）加入5 ng人重组Lp-PLA2启动反应，37°C孵育30分钟。3）加入10 μL 10% SDS终止反应。4）用酶标仪在激发光485 nm、发射光535 nm处测定荧光强度。5）以溶媒对照组为基准计算酶活性百分比，拟合剂量-反应曲线确定IC50 [1]
- 达普拉迪布（SB-480848） 的血浆Lp-PLA2活性测定实验：1）取人血浆50 μL，与50 μL达普拉迪布溶液（终浓度0.1–100 nM）或溶媒（0.1% DMSO）混合，37°C孵育15分钟。2）向血浆-达普拉迪布混合物中加入100 μL反应缓冲液（含50 mM Tris-HCl，pH 7.4，150 mM NaCl，5 mM CaCl2及2 μM荧光底物）。3）37°C孵育60分钟，按上述方法测定荧光强度。4）通过BCA法测定血浆蛋白浓度，对活性数据进行归一化以消除样本间差异 [4]

细胞凋亡分析[2]
细胞类型： C6 胶质瘤细胞和 U251MG 细胞。
测试浓度： 5 μM
孵育时间： 3、6 小时
实验结果： 触发神经胶质瘤中的细胞凋亡细胞。

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细胞周期分析[2]
细胞类型： C6 神经胶质瘤细胞和 U251MG 细胞。
测试浓度： 5 μM
孵育时间： 6、12 小时
实验结果： 诱导细胞周期停滞神经胶质瘤细胞。

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蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： C6 神经胶质瘤细胞和 U251MG 细胞。
测试浓度： 5 μM
孵育时间：5、15、30、60 和 90 分钟
实验结果： 诱导神经胶质瘤细胞中 ERK1/2 蛋白磷酸化的增加，但 AKT 磷酸化的减少。

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达普拉迪布（SB-480848） 的胶质瘤细胞凋亡与线粒体功能实验：1）细胞培养：U87/U251胶质瘤细胞用含10% FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的DMEM培养基，在37°C、5% CO2条件下培养。2）细胞活力测定：96孔板接种细胞（5×10³细胞/孔），孵育24小时后，用达普拉迪布（5–40 μM）处理48小时，加入MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，570 nm处测吸光度。3）凋亡测定：6孔板接种细胞（1×10⁵细胞/孔），20 μM达普拉迪布处理48小时，收集细胞，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞仪分析。4）Western blot：用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜，用抗切割型caspase-3、Bax、Bcl-2和GAPDH（上样对照）抗体孵育，化学发光显影。5）线粒体实验：① ROS：DCFH-DA（10 μM）染色30分钟，流式细胞仪测荧光；② ΔΨm：JC-1（5 μM）染色20分钟，分析红/绿荧光比；③ ATP：荧光素酶ATP试剂盒，测发光值 [2]
- 达普拉迪布（SB-480848） 的巨噬细胞泡沫化实验：1）100 nM PMA处理THP-1细胞48小时，诱导分化为巨噬细胞。2）达普拉迪布（1–10 nM）预处理巨噬细胞24小时，再用50 μg/mL ox-LDL刺激24小时。3）4%多聚甲醛固定细胞，油红O染色30分钟，异丙醇洗脱染料，510 nm处测吸光度量化脂质蓄积。4）提取细胞总RNA，用CD36特异性引物进行RT-PCR，以GAPDH为内参归一化 [3]

Animal/Disease Models: Male homozygous LDLR-deficient mice (C57/Bl6 genetic background)[3].
Doses: 50 mg/kg
Route of Administration: Oral administration; one time/day for 6 weeks.
Experimental Results: Dramatically inhibited activity of serum Lp-PLA2.

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LDLR-/- Mouse Atherosclerosis Model for Darapladib (SB-480848): 1) Animal selection: 8-week-old male C57BL/6-LDLR-/- mice (20–25 g), housed under 12 h light/dark cycle, 22±2°C, with free access to food/water. 2) Grouping: Mice randomized to 3 groups (n=8/group): ① Vehicle: 0.5% carboxymethyl cellulose (CMC) in normal saline, oral gavage once daily; ② Low-dose darapladib: 10 mg/kg/day, dissolved in 0.5% CMC, oral gavage; ③ High-dose darapladib: 30 mg/kg/day, dissolved in 0.5% CMC, oral gavage. 3) Diet and treatment duration: All groups fed high-fat diet (HFD, 21% fat, 0.15% cholesterol) for 12 weeks, with drug administration starting on the first day of HFD. 4) Sample collection: At endpoint, mice were anesthetized with isoflurane, blood collected via retro-orbital plexus (for plasma Lp-PLA2 activity, lipid profile, and cytokine assays); aorta dissected, fixed in 4% paraformaldehyde (for plaque staining) or frozen at -80°C (for molecular analysis). 5) Plaque analysis: Aortic roots embedded in paraffin, sectioned (5 μm), stained with Oil Red O, image analyzed to quantify plaque area [3]

Darapladib (SB-480848) exhibited favorable oral bioavailability and pharmacokinetics in preclinical species: ① Oral absorption: Bioavailability of ~30% in rats (10 mg/kg oral) and ~50% in cynomolgus monkeys (3 mg/kg oral); ② Plasma half-life (t1/2): ~4 hours in rats, ~6 hours in monkeys; ③ Distribution: Volume of distribution (Vd) ~1.2 L/kg in rats, indicating moderate tissue penetration; ④ Metabolism: Primarily metabolized in the liver via CYP3A4 (in vitro microsomal assay), with no major active metabolites; ⑤ Excretion: ~60% excreted via feces (unchanged drug), ~25% via urine (metabolites) in rats [4]
- Darapladib (SB-480848) showed linear pharmacokinetics in humans (phase I studies): Oral doses of 10–400 mg resulted in dose-proportional increases in Cmax (10 ng/mL at 10 mg to 400 ng/mL at 400 mg) and AUC (50 ng·h/mL at 10 mg to 2000 ng·h/mL at 400 mg), with t1/2 ~8 hours [4]

Darapladib (SB-480848) showed low in vitro toxicity: ① In normal human astrocytes (NHA), 40 μM darapladib had no significant effect on cell viability (>90% viability vs. control, MTT assay), indicating selective toxicity to glioma cells [2]; ② No inhibition of major CYP enzymes (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4) at concentrations up to 10 μM (in vitro microsomal inhibition assay) [4]
- Darapladib (SB-480848) had favorable preclinical toxicity profiles: ① In 4-week rat toxicity study (10–100 mg/kg/day oral): No mortality, no significant changes in body weight, organ weights (liver, kidney), or serum ALT/AST/creatinine levels; ② In 13-week monkey toxicity study (3–30 mg/kg/day oral): No adverse effects on hematology, clinical chemistry, or histopathology (liver, kidney, heart) [4]
- Plasma protein binding of Darapladib (SB-480848) was >99% in human, rat, and monkey plasma (ultrafiltration method) [4]

[1]. The identification of clinical candidate SB-480848: a potent inhibitor of lipoprotein-associated phospholipase A2. Bioorg Med Chem Lett. 2003 Mar 24;13(6):1067-70.

[2]. The selective lipoprotein-associated phospholipase A2 inhibitor darapladib triggers irreversible actions on glioma cell apoptosis and mitochondrial dysfunction. Toxicol Appl Pharmacol. 2020 Sep 1;402:115133.

[3]. The inhibition of lipoprotein-associated phospholipase A2 exerts beneficial effects against atherosclerosis inLDLR-deficient mice. Acta Pharmacol Sin. 2011 Oct;32(10):1253-1258.

[4]. Darapladib, a reversible lipoprotein-associated phospholipase A2 inhibitor, for the oral treatment of atherosclerosis and coronary artery disease. IDrugs. 2009 Oct;12(10):648-55.

Darapladib is a substituted pyrimidone with inhibitory activity towards lipoprotein-associated phospholipase-A2 (Lp-PLA2), an important regulator of lipid metabolism and inflammation that circulates with lipoprotein particles and is carried into the arterial wall with low-density lipoprotein particles during the progression of atherosclerosis.

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Drug Indication
Investigated for use/treatment in atherosclerosis.

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Mechanism of Action
Darapladib is a selective lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) inhibitor. Lp-PLA2 is an enzymatic upstream mediator of inflammatory processes. Evidence from experimental settings show that the breakdown products from oxidized low density lipoprotein C (LDL-C)such as lysophosphatidylcholine species and oxidized nonesterified fatty acids are pro-inflammatory and pro-apoptotic. These products are suspected to cause athlerosclerosis progression and plaque vulnerability, which leads to increased risk of cardiovascular problems.

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Darapladib (SB-480848) was identified as a clinical candidate by GlaxoSmithKline (GSK) in 2003, initially developed for the treatment of atherosclerosis and coronary artery disease (CAD) due to its selective Lp-PLA2 inhibitory activity [1,4]
- The anti-atherosclerotic mechanism of Darapladib (SB-480848) involves: ① Inhibiting Lp-PLA2-mediated hydrolysis of oxidized phospholipids (e.g., ox-PAPC) to pro-inflammatory lipids (e.g., lysophosphatidylcholine, LPC) and oxidized fatty acids; ② Reducing macrophage infiltration and foam cell formation in atherosclerotic plaques; ③ Suppressing local and systemic inflammation [3,4]
- Darapladib (SB-480848) entered phase III clinical trials for CAD (e.g., the SOLID-TIMI 52 trial), but development was discontinued in 2014 due to failure to meet the primary endpoint of reducing major adverse cardiovascular events (MACE) [4]
- Beyond cardiovascular disease, Darapladib (SB-480848) shows potential anti-glioma activity via inducing mitochondrial dysfunction and apoptosis, suggesting repurposing potential for cancer therapy [2]

C36H38F4N4O2S

666.7711

666.265

356057-34-6

1389264-17-8 (Darapladib-impurity)

9939609

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

741.0±70.0 °C at 760 mmHg

401.9±35.7 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.594

8.27

83.74

0

8

13

47

1120

0

WDPFJWLDPVQCAJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C36H38F4N4O2S/c1-3-42(4-2)20-21-43(22-25-8-12-27(13-9-25)28-14-16-29(17-15-28)36(38,39)40)33(45)23-44-32-7-5-6-31(32)34(46)41-35(44)47-24-26-10-18-30(37)19-11-26/h8-19H,3-7,20-24H2,1-2H3

N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-[[(4-fluorophenyl)methyl]thio]-4,5,6,7-tetrahydro-4-oxo-N-[[4-(trifluoromethyl)[1,1-biphenyl]-4-yl]methyl]-1H-Cyclopentapyrimidine-1-acetamide

SB-480848; SB 480848; Darapladib;SB480848

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。