| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Melanoma cells accumulate autophagic vesicles when exposed to DC661 at concentrations of 0.1 and 10 µM [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
当接触浓度为 0.1 和 10 µM 的 DC661 时，黑色素瘤细胞会积聚自噬囊泡 [1]。
用 DC661 处理 A375P 黑色素瘤细胞，在浓度低至 0.1 µM 时即可导致自噬囊泡标记物 LC3BII 的积累，浓度高于 10 µM 时导致细胞完全死亡。相比之下，Lys05 和 HCQ 在这些浓度下不会导致细胞死亡。[1] 在表达 mCherry-eGFP-LC3B 报告基因的黑色素瘤细胞中，DC661 比 HCQ 或 Lys05 能更有效地抑制自噬流。[1] 通过 LysoSensor 染色检测，在 A375P 细胞中，DC661 比 HCQ 或 Lys05 引起更显著的溶酶体去酸化。[1] 与 Lys05 或 HCQ 相比，DC661 在更高比例的癌细胞中诱导溶酶体膜透化，表现为 galectin-3 点状结构的形成。[1] 在包括结肠癌和胰腺癌细胞系在内的多种癌细胞系中，DC661 在 72 小时 MTT 实验中的 IC₅₀ 比 HCQ 低约 100 倍。[1] 在克隆形成实验中，DC661 比 HCQ 或 Lys05 更有效地抑制黑色素瘤细胞的长期克隆生长。[1] 在 BRAF 突变黑色素瘤细胞中，DC661 诱导的凋亡显著多于 Lys05、HCQ 或 BRAF 与 MEK 联合抑制剂。[1] 当癌细胞在酸性条件下培养时，DC661 是测试化合物中唯一能够抑制自噬（通过 LC3BII 积累显示）并降低细胞活力的化合物。[1] 用 DC661 处理 A375P 细胞导致 CD44 的棕榈酰化形式积累，表明其抑制了 PPT1 依赖的去棕榈酰化。[1] 在 A375P 细胞中通过 CRISPR-Cas9 敲除 PPT1，显著削弱了 DC661 引起溶酶体去酸化、LC3II 脂化（自噬体积累）和抑制细胞增殖的能力。KO PPT1 细胞对 DC661 的抗增殖作用敏感性显著降低。[1] 在小鼠黑色素瘤 B16 细胞中敲除 Ppt1 也观察到对 DC661 引起的 LC3B 脂化作用的类似抵抗。[1] 在 3D 球体培养中，A375P KO PPT1 细胞形成的球体显著小于 WT PPT1 细胞。B16 细胞中 Ppt1 的缺失严重限制了球体的活力。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在 NSG 小鼠中建立的 HT29 结直肠癌异种移植模型中，每天两次腹腔注射 DC661 可导致显著且持续的肿瘤生长抑制，而同等剂量的 Lys05 仅产生短暂效果。然而，所有接受 10 mg/kg DC661 治疗的小鼠均因嗜睡被实施安乐死。[1]
在后续的 HT29 异种移植实验中，每天腹腔注射降低剂量至 3 mg/kg 的 DC661，与载体对照组相比，可显著减小肿瘤体积并几乎完全抑制每日肿瘤生长率，且未显著影响小鼠体重。肿瘤裂解液的免疫印迹分析显示了体内自噬抑制和凋亡诱导的证据。[1] 由 A375P KO PPT1 细胞产生的异种移植瘤，其生长受到显著抑制，生长速度慢于由 WT PPT1 细胞产生的肿瘤。[1] |
| 酶活实验 |
使用纯化的重组 PPT1 蛋白，在有或无 4 倍摩尔过量 DC661 存在下进行差示扫描量热法分析。在 DC661 存在下，观察到 PPT1 的熔解温度有统计学意义上的显著降低，这与直接结合一致。[1]
用 DC661 处理 A375P 细胞 1 小时，进行 PPT1 酶活性测定。DC661 以剂量依赖的方式抑制 PPT1 酶活性，其效力高于 HCQ 和 Lys05。[1] |
| 细胞实验 |
使用 mCherry-eGFP-LC3B 报告基因进行自噬流分析：用 DC661 处理表达该报告基因的 A375P 细胞 1 小时，通过荧光显微镜观察并量化自噬流抑制情况。[1]
溶酶体 pH 值测量：用 DC661 处理 A375P 细胞 6 小时，用 LysoSensor 染料染色，并通过荧光显微镜成像。量化荧光强度以评估溶酶体去酸化程度。[1] 溶酶体膜透化实验：用 DC661 处理 A375P 细胞 6 小时，固定后对 galectin-3 进行免疫染色。通过荧光显微镜成像，并量化具有 galectin-3 点状结构的细胞百分比。[1] 自噬标记物免疫印迹分析：用指定浓度和时间的 DC661 处理细胞，裂解后通过 SDS-PAGE 分离蛋白。用 LC3B 抗体进行免疫印迹以评估 LC3II 的积累。[1] MTT 细胞活力实验：将细胞接种于 96 孔板，用指定浓度的 DC661 处理 72 小时。加入 MTT 试剂，孵育后溶解甲臜晶体，测量吸光度。[1] 克隆形成实验：用 DC661 长期处理细胞 2 周，每 3-4 天更换含药新鲜培养基。用结晶紫染色克隆并成像。[1] 使用硫酯酶模拟物进行挽救实验：在存在或不存在 N-叔丁基羟胺 的情况下，用 DC661 处理表达 mCherry-eGFP-LC3B 报告基因的 A375P 细胞 1 小时，并通过显微镜分析以评估对自噬抑制的挽救作用。[1] 酰基生物素交换实验：用 DC661 处理 A375P 细胞 1 小时。按照先前描述的方法进行实验，检测棕榈酰化蛋白的积累，以表明去棕榈酰化受到抑制。[1] |
| 动物实验 |
在HT29异种移植疗效研究中：将HT29结直肠癌细胞（1 × 10⁶）与Matrigel基质胶混合后皮下注射至NSG小鼠右侧腹部。待肿瘤可触及后开始治疗。每日腹腔注射DC661，剂量为3 mg/kg。对照组注射水。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并计算公式为（长 × 宽² × 0.5）。研究持续时间直至肿瘤达到终点标准。[1]
在PPT1基因敲除肿瘤生长研究中：将A375P野生型PPT1或敲除型PPT1细胞（1 × 10⁶个细胞/只小鼠）注射至NSG小鼠侧腹部。每三天测量一次肿瘤体积。该基因模型实验中未给予任何药物治疗。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在最初的HT29异种移植研究中，所有接受10 mg/kg（腹腔注射，两次）DC661治疗的小鼠均因嗜睡而被安乐死，表明该剂量具有显著毒性。[1]
在随后的研究中，使用降低的剂量3 mg/kg（腹腔注射，每日一次），DC661治疗并未对小鼠体重产生显著影响。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DC661 是一种新型二聚体氯喹 (CQ) 衍生物。它的设计基于先前报道的二聚体 CQ (Lys05) 的结构，通过延长连接基团的长度（氮原子之间连接六个碳原子）和中心氮原子甲基化，这些修饰已被证明可以增强溶酶体定位和效力。[1]
DC661 被鉴定为一种有效的自噬和溶酶体功能抑制剂，其活性优于单体 HCQ 和二聚体前体 Lys05。[1] DC661 以及 HCQ 和 Lys05 的分子靶点被鉴定为 PPT1，一种溶酶体脱棕榈酰酶。这将这些氯喹衍生物重新归类为靶向治疗药物，而非非特异性溶酶体靶向药物。[1] DC661 对 PPT1 的抑制作用会破坏 Ragulator 复合物（通过 LAMTOR1/p18）与 v-ATPase（通过 ATP6V1A）之间的相互作用，导致 mTORC1 从溶酶体膜上移位并抑制 mTORC1 信号传导。[1] 癌症基因组图谱 (TCGA) 数据的分析表明，与正常组织相比，PPT1 在许多肿瘤类型中表达升高，并且与食管癌、肝细胞癌、透明细胞肾细胞癌和头颈癌等癌症的较差总生存期相关。[1] PPT1 也是神经退行性疾病婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症 (INCL) 中的缺陷酶。观察到氯喹衍生物可引起视网膜病变，其症状与INCL视网膜病变的部分症状相似，这为这些药物已知的毒性特征提供了机制上的联系。[1] |
| 分子式 |
C31H39CL2N5
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|---|---|
| 分子量 |
552.58
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| 精确质量 |
551.258
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| CAS号 |
1872387-43-3
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| PubChem CID |
130467298
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| LogP |
8.3
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| tPSA |
53.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
16
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
587
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC2C(C=1)=NC=CC=2NCCCCCCN(C)CCCCCCNC1C=CN=C2C=C(C=CC=12)Cl
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| InChi Key |
VJKCWFZTSDXOBS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C31H39Cl2N5/c1-38(20-8-4-2-6-16-34-28-14-18-36-30-22-24(32)10-12-26(28)30)21-9-5-3-7-17-35-29-15-19-37-31-23-25(33)11-13-27(29)31/h10-15,18-19,22-23H,2-9,16-17,20-21H2,1H3,(H,34,36)(H,35,37)
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| 化学名 |
N-(7-chloroquinolin-4-yl)-N'-[6-[(7-chloroquinolin-4-yl)amino]hexyl]-N'-methylhexane-1,6-diamine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~113.11 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8097 mL | 9.0485 mL | 18.0969 mL | |
| 5 mM | 0.3619 mL | 1.8097 mL | 3.6194 mL | |
| 10 mM | 0.1810 mL | 0.9048 mL | 1.8097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Tepotinib hydrochloride monohydrate
BKN-1
NEO214
MJO445
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