Demeclocycline exerts its antibacterial effect by binding to the 30S subunit of the bacterial ribosome, specifically the 16S rRNA molecule, which prevents the binding of aminoacyl-tRNA to the ribosome A-site and thereby inhibits bacterial protein synthesis . This mechanism is bacteriostatic rather than bactericidal. In mammalian cells, tetracyclines including demeclocycline target the 28S small subunit of the mitochondrial ribosome (specifically the 12S rRNA), thereby deactivating mitochondrial protein synthesis and exerting cytotoxic effects on metabolically active cells . Additionally, demeclocycline has been identified as an inhibitor of EphB kinases (EphB1, EphB2, EphB3, EphB4), with varying IC₅₀ values in the low micromolar range . For the treatment of SIADH, demeclocycline acts on the renal collecting duct cells to induce nephrogenic diabetes insipidus by inhibiting the action of antidiuretic hormone (ADH) on the V2 receptor, an effect independent of its antibiotic activity.
Aquaporin-2 (AQP2) water channel in renal collecting duct principal cells – demeclocycline decreases AQP2 abundance and gene transcription. [1]
Adenylate cyclase 3 (AC3) and adenylate cyclase 5/6 (AC5/6) – demeclocycline reduces their abundance. [1]

在 mpkCCD 细胞中，用地甲环素 (0-100 μM) 处理 24 小时会降低 AQP2 的量 [3]。地美环素（10 μM；24 小时）治疗可增强单核细胞和巨噬细胞的活性 [4]。地美环素（1-10 μM；72 小时）治疗直接影响引发脑肿瘤的细胞的发育 [4]。

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在mpkCCD细胞（小鼠皮质集合管细胞）中，地美环素以浓度依赖性方式降低AQP2丰度，在50 μM浓度下观察到显著效应。在100 μM浓度下，跨上皮电阻显著降低。电位差（依赖于ENaC）在50和100 μM 地美环素下均显著降低。[1]
免疫印迹分析显示，地美环素（50 μM）孵育8小时后显著降低AQP2丰度。考马斯亮蓝染色证实蛋白等量上样，表明该效应不是由于细胞丢失所致。[1]
在蛋白质合成抑制剂放线菌酮存在下，地美环素不影响AQP2丰度，而在对照细胞中降低AQP2丰度，表明地美环素不增加AQP2降解，而是影响AQP2转录或RNA稳定性。[1]
在稳定转染3.0 kb AQP2启动子-荧光素酶构建体的mpkCCD细胞中，dDAVP诱导荧光素酶活性增加2倍。地美环素降低荧光素酶活性，表明其影响AQP2转录。[1]
地美环素（50 μM）在未刺激和dDAVP刺激的mpkCCD细胞中（存在IBMX）均显著降低cAMP水平。[1]
地美环素在孵育24小时后将AC3丰度降至对照水平的40%以下，降低作用在孵育8小时时开始出现。地美环素在24小时后将AC5/6水平降至对照水平的25%以下。AC5/6表达在8小时后显著降低，与AQP2降低的时间一致。[1]
地美环素影响AQP2定位；用dDAVP处理4天的细胞显示以顶膜AQP2表达为主，而在最后24小时用地美环素孵育的细胞显示AQP2丰度降低，AQP2散布于整个细胞且顶膜表达减少。[1]
向地美环素处理的细胞中加入8-Br-cAMP（100 μM）可诱导AQP2易位至顶膜并将AQP2丰度增加至对照水平，但AQP2丰度仍显著低于仅用8-Br-cAMP处理的细胞，表明地美环素可能还在AC后水平影响AQP2丰度。[1]
地美环素（10 μM）增强了经IL-1β/IFN-γ（各100 ng/ml）或LPS（100 ng/ml）刺激的人单核细胞的TNF-α产生，与单独刺激相比。单独使用地美环素不增加未刺激单核细胞的TNF-α分泌。[4]
地美环素（10 μM）在IL-1β/IFN-γ预刺激条件下促进人单核细胞向CCL2梯度（10 ng/ml）的趋化运动。[4]
来自地美环素处理单核细胞的条件培养基（Demec/MonoCM）在神经球实验中显著降低BTIC（BT025和BT048细胞系）生长，与来自未处理单核细胞的条件培养基相比。[4]
地美环素（5和10 μM）直接降低BTIC的球形成和细胞数量。在1 μM浓度下，alamarBlue测定显示地美环素降低BTIC生长。[4]
在单个细胞解离形成BTIC球后3天加入地美环素（10 μM）仍可降低BT025和BT048细胞系球的进一步生长。[4]
地美环素（10 μM）对培养的人MAP-2阳性神经元无毒性。[4]
对三种BTIC细胞系用地美环素（10 μM处理6小时）进行的微阵列分析鉴定了301个共同受影响的基因（变化倍数≥1.3或≤-1.3）。下调的基因包括TGFB1I1、FZD5、EMR2、ROMO1和BCL3。上调的基因包括CHAC1、DDIT4和CLEC2A。[4]
在10 μM浓度下测试的几种四环素衍生物中，只有地美环素在所有三种BTIC细胞系中一致地抑制球形成能力，而四环素和土霉素在不同细胞系中对球形成能力的降低程度不同。[4]

地美环素（腹腔注射；40 mg/kg；每天一次；48 小时）治疗可显着减少低钠血症，并显着纠正低渗透压，且无肾毒性 [3]。

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在SIADH大鼠模型（通过皮下植入渗透微泵以5 ng/小时速率输注dDAVP，并给予液体饮食8天诱导）中，每天腹腔注射地美环素（40 mg/kg体重）的大鼠显示：低钠血症显著减轻（对照组血清Na⁺ 98.7 ± 0.8 mmol/l vs 地美环素组 117.3 ± 4.5 mmol/l，p<0.01）；低渗压几乎显著纠正；尿量显著增加（对照组44.8 ± 9.3 vs 地美环素组91.3 ± 15.9 ml•kg⁻¹•24 h⁻¹，p<0.05）；尿渗透压显著降低（对照组1374 ± 117 vs 地美环素组820 ± 148 mosM/kg，p<0.05）；水排泄分数显著增加（对照组0.53 ± 0.14 vs 地美环素组2.07 ± 0.44，p<0.01）；Na⁺排泄分数显著增加（对照组0.17 ± 0.06 vs 地美环素组0.59 ± 0.13，p<0.05）。血K⁺水平显著升高（对照组3.67 ± 0.29 vs 地美环素组4.56 ± 0.23 mmol/l，p<0.05）。[1]
免疫印迹分析显示，与对照组相比，地美环素治疗大鼠肾内髓中AQP2丰度显著降低75%。地美环素治疗导致外髓和皮质中AQP2丰度分别显著增加2.5倍和2.0倍。[1]
免疫组化显示，地美环素治疗大鼠肾切片中AQP2标记强度降低，AQP2在顶膜和基底侧膜的分布减少，观察到更多AQP2阳性的细胞内囊泡。与对照组相比，地美环素治疗大鼠的pS256 AQP2标记强度显著降低。[1]
地美环素治疗大鼠肾内髓中AC5/6丰度降低50%。在外髓中，AC5/6表达增加。[1]
地美环素治疗组和对照组大鼠肾脏之间未观察到明显的形态学差异。天狼星红染色（胶原蛋白，在毒性/纤维化时增加）和诱导型一氧化氮合酶染色（炎症）在两组之间没有差异。两组的AQP4和β-连环蛋白丰度和分布相似。[1]

EphB激酶抑制实验方法： 使用放射性体外蛋白激酶测定法测定地美环素对EphB激酶的抑制活性。将四种不同的EphB激酶结构域（EphB1、EphB2、EphB3、EphB4）与浓度范围为3 × 10⁻⁹ M至1 × 10⁻⁴ M的地美环素在含有肽底物和[γ-³³P]ATP的条件下共孵育。反应在含有50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT和0.01% Triton X-100的缓冲液中进行。在30°C孵育30分钟后，加入磷酸终止反应。磷酸化肽被捕获在P81滤纸上，充分洗涤后，通过液体闪烁计数测量掺入的放射性。IC₅₀值通过使用非线性回归分析拟合残留活性百分比，从浓度-反应曲线计算得出。

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cAMP测量：mpkCCD细胞在有或无dDAVP（1 nM，4天）、有或无地美环素（50 μM，最后1天）的条件下培养，最后30分钟联合使用磷酸二酯酶抑制剂IBMX（0.5 mM）。裂解后，按照制造商说明使用cAMP-Glo测定或cAMP酶免疫测定试剂盒测量细胞内cAMP水平。结果与基于定义cAMP溶液测量的标准曲线相关。[1]
荧光素酶测定：将含有3.0 kb AQP2启动子-荧光素酶构建体的mpkCCD细胞培养，并在有或无dDAVP（1 nM，4天）、有或无地美环素（50 μM，最后24小时）的条件下处理。裂解细胞，使用荧光素酶测定系统测量荧光素酶活性。发光测量时间为10秒。测定蛋白浓度以验证每个样品的蛋白量相等。[1]

蛋白质印迹分析 [3]
细胞类型： MpkCCD 细胞
测试浓度： 0-100 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： mpkCCD 细胞中 AQP2 丰度减少，50 μM 时效果显着。

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细胞活力测定 [4]
细胞类型：小鼠骨髓来源的巨噬细胞和单核细胞
测试浓度： 10 μM
孵育持续时间：24 小时
实验结果：增强 TNF-α 的产生并调节单核细胞功能。

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细胞活力测定[4]
细胞类型：脑肿瘤起始细胞
测试浓度：1、5 和 10 μM
孵育持续时间：72小时
实验结果：以两种方式抑制细胞生长：由单核细胞介导，以及直接通过影响增殖和增殖来抑制细胞生长。脑肿瘤起始细胞的球体形成能力。

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MpkCCD细胞培养：细胞以1.5 × 10⁵ cells/cm²的密度接种在半透膜滤器（孔径0.4 μm）上，培养8天。除非另有说明，细胞在最后4天在基底外侧暴露于1 nM dDAVP以诱导AQP2表达。在最后2-24小时将地美环素加入滤器两侧，有或无放线菌酮（50 μM）、福斯高林（10 μM）或8-Br-cAMP（100 μM）。实验结束时使用电阻仪测量跨上皮电阻和电位差。[1]
免疫印迹分析：将来自1.13 cm²滤器的mpkCCD细胞或5-10 μg肾组织在Laemmli缓冲液中裂解，超声处理，并在37°C变性30分钟。对于PNGase-F消化，将细胞裂解物与PNGase-F在37°C孵育1小时。样品进行PAGE、转膜，并封闭膜。将膜在4°C与一抗（抗AQP2、抗AC3、抗AC5/6）在含1%脱脂奶粉的TBST中孵育16小时。将膜与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育1小时。使用增强化学发光法可视化蛋白。进行光密度分析。通过考马斯亮蓝染色确认等量上样。[1]
免疫细胞化学：mpkCCD细胞在3%多聚甲醛PBS溶液中固定。对于AQP2检测，将固定的细胞与亲和纯化的兔AQP2抗体（1:100）和Alexa 488偶联的山羊抗兔抗体（1:100）孵育。对于V2R-GFP定位，通过共聚焦显微镜分析GFP表达。[1]
人单核细胞分离和培养：从健康成年人的静脉血中分离人单核细胞。将单核细胞（100,000 cells/well/100 μl）接种于含20%人血清的RPMI培养基的96孔板中。24小时后，将细胞换为BTIC培养基。处理包括在有无LPS（100 ng/ml）、IL-1β（100 ng/ml）或IFN-γ（100 ng/ml）的情况下给予地美环素（10或1 μM）48小时，并收集条件培养基。通过ELISA测量TNF-α水平。[4]
趋化性实验：用地美环素（10 μM）处理人单核细胞1小时，然后加入IFN-γ/IL-1β（各100 ng/ml）。24小时后，将200,000个细胞接种到ChemoTx板的滤器（孔径5 μm）上。在滤器下方加入重组人CCL2（10 ng/ml）作为趋化刺激。细胞孵育16小时。加入alamarBlue（1:10）4小时，在570 nm读取信号。[4]
BTIC培养：从切除的胶质母细胞瘤标本中分离BTIC。将细胞解离并接种于补充了EGF和FGF-2的无血清培养基中。对于神经球实验，将BTIC细胞（10,000 cells/well/100 μl）接种到96孔板中。72小时后监测直径超过60 μm的球体数量。对于总细胞计数，收集BTIC球，离心，重悬于Accumax中，与台盼蓝（1:1）混合，并使用自动细胞计数器计数。也使用alamarBlue测定：加入染料（1:10）4-6小时，在激发544 nm/发射590 nm处读取读数。[4]
人神经元毒性实验：分离并培养人胎儿脑神经元（15-20周）。将地美环素（10 μM）加入神经元中24小时。用4%多聚甲醛固定细胞，并对MAP-2和Hoechst进行染色。对细胞进行成像和定量。[4]
微阵列：用地美环素（10 μM）处理BTIC细胞（BT012、BT025、BT048）6小时。提取RNA，纯化并标记。将样品在45°C下与GeneChip Human Gene 2.0 ST Array杂交16小时。对芯片进行染色、洗涤和扫描。分析处理组与对照组之间的变化倍数数据（t检验p<0.05）。[4]

动物/疾病模型：雄性Wistar大鼠低钠血症[3]
剂量：40 mg/kg
给药途径：腹腔注射(ip)；40 mg/kg；每日一次；持续48小时
实验结果：尿量增加，尿渗透压降低，水的排泄分数显著增加。

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动物/疾病模型：雄性Wistar大鼠低钠血症[3]
剂量：40 mg/kg
给药途径：腹腔注射(ip)；40 mg/kg；每日一次； 48 小时（小时）
实验结果： 特别证实了肾髓质对 AQP2 和 AC5/6 的作用，且无继发性毒性作用。

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为了在雄性Wistar大鼠（150-200 g）中诱导低钠血症，通过皮下植入渗透微泵（型号1002）以5 ng/小时的速率输注dDAVP（溶于等渗盐水），并给予营养平衡的啮齿动物液体配方饮食（1.0 kcal/ml），共8天。对于地美环素治疗，大鼠每天腹腔注射溶于PBS的地美环素盐酸盐（40 mg/kg体重）。在最后48小时，将大鼠置于代谢笼中，以测量最后24小时的饮水量和尿量。用异氟烷麻醉大鼠，通过心脏穿刺取血，然后通过颈椎脱臼处死大鼠。迅速取出肾脏；一个肾脏通过在4%多聚甲醛PBS中过夜浸泡制备用于免疫组化，另一个肾脏分离内髓、外髓和皮质。[1]

地美环素的药代动力学特征与其他四环素类药物不同。口服给药后，吸收较四环素慢，达峰时间约为4小时。单次口服150 mg剂量后，1小时和3小时的平均血浆浓度分别为0.46 mcg/mL和1.22 mcg/mL。血清消除半衰期为10至16小时。血浆蛋白结合率因测定方法而异：透析平衡法约为40%，超滤法约为90%。肾清除率为35 mL/min/1.73 m²，不到四环素的一半。单次150 mg剂量后，96小时内44%的剂量经尿液排泄，13-46%以活性药物形式经粪便排泄。食物（特别是乳制品）以及含铝、钙或镁的抗酸剂可使吸收减少超过50%。该药物在肝脏中浓缩，并以高于血液的浓度排入胆汁。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
一些评论指出，由于可能导致婴儿牙釉质染色或骨骼沉积，四环素类药物在哺乳期禁用。然而，仔细查阅现有文献表明，哺乳期短期使用地美环素不太可能造成危害，因为乳汁中的药物浓度较低，且婴儿对药物的吸收会受到母乳中钙的抑制。哺乳期妇女短期使用地美环素是可以接受的。作为一项理论上的预防措施，应避免在哺乳期长期或重复用药。密切观察婴儿是否出现皮疹，以及可能对胃肠道菌群产生的影响，例如腹泻或念珠菌病（鹅口疮、尿布疹）。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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在mpkCCD细胞中，100 μM 地美环素显著降低跨上皮电阻，表明细胞单层受到严重影响。[1]
地美环素在10 μM浓度下对培养的人MAP-2阳性神经元无毒性。[4]
在SIADH大鼠模型中，地美环素治疗组和对照组大鼠肾脏之间未观察到明显的形态学差异。天狼星红染色（胶原蛋白，在毒性/纤维化时增加）和诱导型一氧化氮合酶染色（炎症）在两组之间没有差异。两组的AQP4和β-连环蛋白丰度和分布相似，表明在该模型中地美环素对AQP2和AC5/6具有特异性效应，无普遍肾毒性。[1]
尽管有人类肾毒性的临床报告（Miller et al. 1980; Roth et al. 1967），但在此大鼠模型中未观察到肾毒性效应。[1]

[1]. Tetracyclines, molecular and clinical aspects. J Antimicrob Chemother. 1992 Mar;29(3):245-77.
[2]. Tetracyclines: antibiotic action, uptake, and resistance mechanisms. Arch Microbiol. 1996 Jun;165(6):359-69.
[3]. Demeclocycline attenuates hyponatremia by reducing aquaporin-2 expression in the renal inner medulla. Am J Physiol Renal Physiol. 2013 Dec 15;305(12):F1705-18.
[4]. Demeclocycline Reduces the Growth of Human Brain Tumor-Initiating Cells: Direct Activity and Through Monocytes. Front Immunol. 2020 Feb 21;11:272.

地美环素是一种四环素类抗生素，其7位缺少甲基取代基，且酚羟基对位的氢被氯取代。与四环素一样，它也是一种抗生素，但由于其排泄速度较慢，因此能维持更长时间的有效血药浓度。它（主要以盐酸盐形式）用于治疗莱姆病、痤疮和支气管炎，以及由抗利尿激素分泌异常综合征（SIADH）引起的低钠血症（血钠浓度低），尤其适用于单纯限制液体摄入无效的情况。它具有抗菌、抗衰老和利尿作用。
地美环素是一种四环素类抗菌药物。
一种四环素类似物，具有7位氯原子和6位甲基。由于其排泄速度比四环素慢，因此能维持更长时间的有效血药浓度。

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地美环素是四环素类中的一种抑菌性抗生素。参考文献[1]的图1显示了地美环素、米诺环素和四环素的结构。[1]
四环素类抗生素（如地美环素和米诺环素）的利尿效应是通过下调AVP调节的水通道蛋白AQP2介导的。地美环素通过降低AC5/6表达和cAMP生成，并可能影响AC后靶点来减少AQP2基因转录，导致内髓中AQP2蛋白表达减少。这导致水分丢失增加并减轻SIADH中的低钠血症。[1]
地美环素是美他环素（具有显著毒性且仅限于局部使用）的衍生物。地美环素可全身性给药，并超说明书用于治疗慢性SIADH。[4]
地美环素是重新激活受损免疫细胞（单核细胞/巨噬细胞

C21H21N2O8CL

464.85304

464.098

C, 54.26; H, 4.55; Cl, 7.63; N, 6.03; O, 27.53

127-33-3

Demeclocycline hydrochloride;64-73-3; 127-33-3; 64-73-3 (HCl); 13215-10-6 (hydrate); 17146-81-5 (calcium)

54680690

Green to dark green solid powder

1.8±0.1 g/cm3

684.5±55.0 °C at 760 mmHg

367.8±31.5 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.761

0.57

181.62

6

9

2

32

961

5

NC(C1C(=O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]2C[C@@H]3[C@H](O)C4=C(C=CC(O)=C4C(O)=C3C(=O)[C@]2(O)C=1O)Cl)=O

GUXHBMASAHGULD-SEYHBJAFSA-N

InChI=1S/C21H21ClN2O8/c1-24(2)14-7-5-6-10(16(27)12-9(25)4-3-8(22)11(12)15(6)26)18(29)21(7,32)19(30)13(17(14)28)20(23)31/h3-4,6-7,14-15,25-27,30,32H,5H2,1-2H3,(H2,23,31)/t6-,7-,14-,15-,21-/m0/s1

(4S,4aS,5aS,6S,12aR)-7-chloro-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4H-tetracene-2-carboxamide

Demeclocycline; Demethylchlortetracycline; 127-33-3; DMCT; Ledermycin; Declostatin; Ledermycin; Bioterciclin; Deganol; Deteclo; Ledermycin; Declomycin; Demeclociclina; Demeclocyclinum; DMCTC; Detravis; Meciclin; Mexocine; Clortetrin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~53.78 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。