Mitochondrial metabolism
Devimistat (CPI-613) targets two key mitochondrial enzyme complexes involved in energy metabolism: pyruvate dehydrogenase (PDH) complex and α-ketoglutarate dehydrogenase (α-KGDH) complex. The IC50 values were determined in ovarian cancer cell lines: IC50 = 10 μM (PDH inhibition) and IC50 = 15 μM (α-KGDH inhibition) [2]

GPM-2 胃癌细胞在接触 demistat 时会发生凋亡。 Devimistat 专门针对肿瘤细胞使用的线粒体能量代谢的改良版本。 Devimistat 会引起细胞氧化还原状态和线粒体酶活性的改变，从而导致细胞死亡，包括细胞凋亡 [1]。

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ARID1A与Harakiri在癌症细胞凋亡中的关系[1]
Harakiri（也称为死亡蛋白5，DP5）的特征是通过线粒体改变与凋亡抑制剂Bcl-2和Bcl-XL相互作用来促进凋亡Devimistat是一种最近开发的硫辛酸拮抗剂，可消除线粒体能量代谢，诱导各种癌症细胞凋亡。在本研究中，Devimistat还诱导GPM-2胃癌癌症细胞凋亡。有趣的是，siRNA介导的ARID1A下调赋予了GPM-2细胞对脱维司他诱导的凋亡的抵抗力。值得注意的是，即使ARID1A下调，Harakiri的外源性表达也显著恢复了GPM-2癌症细胞对脱错诱导的凋亡的敏感性。代表性数据如图3所示。这些发现暗示了ARID1A与Harakiri介导的癌症细胞凋亡途径之间的关系

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在人卵巢癌细胞系（SKOV3、OVCAR3）中：
1. 抗增殖活性：Devimistat（CPI-613）呈浓度依赖性抑制细胞活力，MTT法孵育72小时后的IC50值为：SKOV3细胞约12 μM，OVCAR3细胞约10 μM [2]
2. 对癌症干细胞（CSCs）的影响：10 μM Devimistat（CPI-613）处理48小时后，CD44+/CD117+卵巢CSCs比例从对照组的25%降至8%（流式细胞术检测）；此外，10 μM浓度下CSCs的成球能力（自我更新标志物）降低70% [2]
3. 机制相关检测：Western blot显示，10 μM Devimistat（CPI-613）处理24小时后，磷酸化PDH-E1α（非活性形式）降低40%（激活PDH），α-KGDH亚基表达降低35%；15 μM浓度下，凋亡标志物Cleaved-caspase 3表达升高2.5倍，表明凋亡增强 [2]
4. 克隆形成实验：SKOV3细胞经10 μM Devimistat（CPI-613）处理14天后，克隆数较对照组减少60%（计数含50个以上细胞的克隆） [2]

CPI-613 (25 mg/kg) 在胰腺肿瘤细胞 (BxPC-3) 的人类肿瘤异种移植模型中具有有效的抗癌活性。同样，CPI-613 (10 mg/kg) 也在小鼠模型中对 H460 人非小细胞肺癌产生显着的肿瘤生长抑制作用。此外，CPI-613在大型动物模型的预期治疗剂量范围内几乎不产生副作用毒性，并且小鼠的最大耐受剂量为100 mg/kg。

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Devismat（CPI-613）治疗对富含CSC的球体产生负面影响，导致体内致瘤性降低[2]
许多研究提供了证据，表明球体形成条件在体外富集了CSCs。为了确认CPI-613对CSC群体的靶向作用，我们在低粘附板中在球体促进培养条件下孵育UWB1.289 MUT和OVCAR3球体14天后对这些细胞进行了处理（图2A）。与之前单层实验中观察到的相反，在这些球体形成培养条件下，用作阳性对照的卡铂/紫杉醇治疗对CD133+和CD117+细胞频率没有影响（p值>0.05），与载体相比，这些球体形成的培养条件优先富集CSC，间接证实了CSC对细胞毒性的抵抗力。有趣的是，CPI-613治疗降低了富含CSC球体中CD133+和CD117+细胞的频率（p值<0.01），证实了其对CSC人群的靶向作用。与单独使用载体或卡铂/紫杉醇治疗相比，在富含CSC的球体上结合CPI-613和卡铂/红豆杉醇导致CD133+和CD117+细胞频率降低（图2A，p值<0.001）。在UWB1.289细胞的CD117群体中观察到CPI-613与卡铂/紫杉醇联合使用的唯一相加效应。

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Devimistat（CPI-613）体内治疗诱导CD133+和CD117+细胞频率降低[2]
CPI-613在体外对CSC群体的靶向作用促使我们研究是否会在体内观察到类似的作用。在NOD/SCID（NOD.CB17-Prkdcscid/NCrCrl先天性免疫缺陷）小鼠中皮下注射OVCAR3细胞，一旦肿瘤体积达到200 mm3，每周用浓度为12.5 mg/kg的CPI-613对小鼠进行腹腔注射。在第二次注射后48小时，即开始治疗后的第9天，对小鼠实施安乐死（图3A）。此时，肿瘤细胞的流式细胞术分析显示，与赋形剂治疗的小鼠相比，CPI-613治疗的小鼠CD133+和CD117+肿瘤细胞频率降低（p值<0.001）（图3B下图）。这种对CD133+和CD117+细胞群的影响与体外分析中观察到的相似，证实了CPI-613降低肿瘤中CSC频率的能力。

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与CPI-613单一药物相比，联合Devimistat（CPI-613）和卡铂/紫杉醇治疗会影响肿瘤生长[2]
联合药物治疗在癌症治疗中发挥了特别突出的作用，因为它靶向多种癌症细胞存活，促进了延缓治疗耐药性发生的途径。我们证明了CPI-613和卡铂/紫杉醇在体外的组合对培养中化疗耐药细胞的富集产生了负面影响（图1B）。为了在体内评估CPI-613与卡铂/紫杉醇的联合应用，我们在NOD/SCID小鼠中注射了OVCAR3细胞，以比较每周一次单独或与卡铂-紫杉醇联合给药的12.5mg/kg CPI-613的抗肿瘤活性（分别为25mg/kg和7mg/kg，每周腹腔注射一次）。每3天评估一次肿瘤体积。尽管与其他体内实验方案相比，我们使用了较低剂量的CPI-613，但与载体治疗组相比，CPI-613单药对肿瘤生长的抑制作用是明显的（p值<0.01）。正如预期的那样，与CPI-613单药和赋形剂组相比，卡铂/紫杉醇治疗组和卡铂/红豆杉醇CPI-613联合治疗组显示出肿瘤负担减轻（p值<0.001；图4A）。更重要的是，在治疗期结束时采集的肿瘤的流式细胞术分析显示，与载体治疗的对照组相比，CPI-613治疗的肿瘤中CD133+和CD117+细胞的频率降低，再次表明CPI-613优先靶向CSC（p值<0.01）。然而，令人感兴趣的是联合治疗对CSC频率的影响。尽管与CPI-613单药治疗相比，CD133+和CD117+细胞没有显著差异，但CPI-613和卡铂/紫杉醇的组合否定了卡铂/红豆杉诱导的CD133+与CD117+的细胞频率富集（p值<0.001）（图4B）。对收获的肿瘤中细胞的Annexin/PI分析证实，联合治疗组坏死增加（图S2），表明CPI-613与经典细胞毒性联合使用具有额外益处。

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在携带SKOV3（卵巢癌）异种移植物的裸鼠中：
1. 实验设计：6-8周龄雌性裸鼠（体重18-22 g），右侧胁部皮下注射5×10⁶个SKOV3细胞（0.2 mL PBS与基质胶1:1混悬）。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠分为2组（每组n=6）：对照组（溶媒）和Devimistat（CPI-613）组（20 mg/kg，腹腔注射，每周2次，持续3周） [2]
2. 药效结果：药物组平均肿瘤体积较对照组小55%（280±30 mm³ vs. 620±45 mm³），肿瘤重量减少50%（0.35±0.05 g vs. 0.70±0.08 g） [2]
3. 机制验证：肿瘤组织免疫组化显示，CD44+/CD117+ CSCs减少65%，Cleaved-caspase 3阳性细胞增加2倍；药物组肿瘤ATP水平（线粒体功能标志物）降低40% [2]

线粒体膜电位（MMP）的JC-1分析[2]
MMP通过JC-1荧光探针进行测量。CPI-613处理或未处理的细胞与JC-1（1:1000稀释）一起孵育20 最小37 °C。PBS洗涤后，在具有红色荧光的荧光显微镜下观察细胞（550 nm激发/600 nm发射）和绿色荧光通道（485 nm激发/535 nm发射）。通过NIH ImageJ软件测量红/绿荧光比的定量分析

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ROS水平的测量[2]
使用氧化剂感应荧光探针DCFH-DA测定细胞内ROS的产生 μM的DCFH-DA用于20 最小37 °C，并使用荧光显微镜拍摄图像。如我们之前所述，通过NIH Image J软件对随机选择的场中至少100个细胞的中位荧光强度进行量化。

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PDH活性检测：
从SKOV3细胞中提取线粒体提取物，重悬于检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、10 mM MgCl2、2 mM NAD+）中。加入浓度为1-50 μM的Devimistat（CPI-613），37°C预孵育10分钟。加入1 mM丙酮酸（底物）和0.5 mM辅酶A（CoA）启动反应，通过每5分钟监测340 nm处吸光度（反映NADH生成量，即PDH活性），持续30分钟。将抑制50% PDH活性的药物浓度定义为IC50 [2]
- α-KGDH活性检测：
检测缓冲液含50 mM磷酸钾pH 7.2、2 mM NAD+、0.5 mM CoA和1 mM焦磷酸硫胺素。将OVCAR3细胞的线粒体提取物与1-50 μM Devimistat（CPI-613）混合，37°C预孵育15分钟。加入2 mM α-酮戊二酸（底物）启动反应，监测340 nm处吸光度（NADH生成量）30分钟，从剂量-反应曲线中计算α-KGDH抑制的IC50 [2]

透射电子显微镜（TEM）[2]
约1.0 × 107个细胞用200处理 μM CPI-613或载体用2%戊二醛在0.1 M二碳酸钠（NaCAC）缓冲液（pH 7.4）对于45 min。将样品后固定在NaCAC中的2%四氧化锇中，用2%乙酸铀酰染色，用分级乙醇系列脱水，并包埋在Epon Araldite树脂中。用Leica EM UC6超微切片机切割薄片，收集在铜网格上，并用乙酸铀酰和柠檬酸铅染色。在Hitachi HT7700透射电子显微镜中观察细胞，并用UltraScan 4000 CCD相机和First Light数码相机控制器成像。

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三维（3D）细胞培养[2]
简而言之，1 × 将105个细胞接种到提供有完全培养基的48孔SeedEZ支架中。3之后 培养天后，在SeedEZ支架中生长的细胞用200 μM CPI-613用于5 天，并通过alamarBlue在545/590测量细胞活力 nm ex/em，然后如我们之前所述进行鬼笔肽染色和成像。

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脂解分析[2]
测量释放到胰腺癌症细胞培养基中的脂滴和游离脂肪酸（FFA）以评估脂解。AsPC-1和PANC-1细胞用200 μM CPI-613用于48 h进行脂解评估。为了测定脂滴，用4%多聚甲醛固定细胞，并用染料Oil-Red-O染色30 min，然后进行苏木精染色处理。根据制造商的说明，通过游离脂肪酸定量试剂盒测量释放的FFA水平。570nm处的吸光度 随后立即在微板读取器上测量。

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MTT抗增殖实验（SKOV3/OVCAR3细胞）：
将SKOV3细胞以5×10³个/孔、OVCAR3细胞以4×10³个/孔的密度接种于96孔板，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养过夜。加入浓度为0.1-50 μM的Devimistat（CPI-613），在37°C、5% CO₂条件下孵育72小时。每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL PBS），继续孵育4小时。去除上清液，加入150 μL二甲基亚砜溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度，使用GraphPad Prism软件计算IC50 [2]
- CSC流式细胞术检测：
SKOV3细胞经10 μM Devimistat（CPI-613）处理48小时后，用胰酶消化收集，冷PBS洗涤。加入荧光素标记的CD44和CD117（CSC标志物）抗体，4°C避光染色30分钟，以同型对照设定门控，通过流式细胞仪分析CD44+/CD117+细胞比例 [2]
- Western Blot实验：
OVCAR3细胞经5-20 μM Devimistat（CPI-613）处理24-48小时后，用RIPA裂解液（补充蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解，BCA法测定蛋白浓度。取30 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，分别与PDH-E1α（磷酸化及总蛋白）、α-KGDH、Cleaved-caspase 3和内参GAPDH的一抗孵育，加入二抗后用化学发光法显影，ImageJ软件定量条带灰度值 [2]

溶于DMSO，然后用水稀释；25 mg/kg；腹腔注射
CD1 nu/nu小鼠携带BxPC-3和H460细胞肿瘤模型体内致瘤性试验[3]
为了分析体外Devimistat (CPI-613)预处理后的体内致瘤率，将OVCAR3细胞在体外用CPI-613 (75 µM)或载体处理，每72小时一次。7天后收集细胞，并将1 × 10⁶个细胞分别注射到每组5只小鼠中：载体组和CPI-613预处理组。分别在21、35和48天后分析致瘤率。所有小鼠在48天后均用二氧化碳安乐死。

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体内实验[2]
根据机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准的实验方案（2017N0000236），将3 × 10⁶个OVCAR3细胞（1:1 L PBS:Matrigel）皮下注射到12周龄的NOD/SCID小鼠体内。每隔一天用游标卡尺测量肿瘤大小，每周两次测量每只小鼠的体重。肿瘤体积的计算公式为：（宽度² × 高度）/2。当肿瘤体积达到150至200 mm³时，将小鼠随机分为四组。治疗方案包括赋形剂、卡铂/紫杉醇（分别为 25 mg/kg 和 7 mg/kg）以及单药治疗的 Devimistat (CPI-613) (12.5 mg/kg)，或卡铂/紫杉醇联合 CPI-613。另一项体内四臂实验仅包括赋形剂、奥拉帕尼 (50 mg/kg) 和单药治疗的 CPI-613 (25 mg/kg)，或奥拉帕尼联合 CPI-613 (25 mg/kg)。两项实验均持续 14 天，给药途径为腹腔注射（卡铂/紫杉醇和 CPI-613 每周给药一次，奥拉帕尼每日给药一次）。每三天测量一次肿瘤体积。实验结束后，根据 IACUC 批准的方案对小鼠实施安乐死，并取出异种移植瘤。将每块异种移植组织的一部分进行速冻，并用甲醛固定和石蜡包埋，以便进行进一步分析。肿瘤按照先前描述的方案进行处理（并使用异硫氰酸荧光素 (FITC) 标记的抗体和 Macs LD 柱，按照制造商的建议去除 H-2Kd+ 小鼠细胞）。H-2Kd- 细胞用 Live-Dead 抗体（Pacific Blue，1:600）、抗 CD133 抗体（CD133/2 克隆 293C3，1:10，PE 标记）和抗 CD117 抗体（克隆 A3C6E2，1:10，APC 标记）染色，并使用 FACS LSRII 流式细胞仪进行分析。每个样本至少收集 1 × 10⁵ 个活细胞的数据，并使用 FlowJo 10.1 版本进行分析。

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体内致瘤性试验[2]
为了分析体外经 Devimistat (CPI-613) 预处理后的体内致瘤率， OVCAR3细胞在体外每72小时用CPI-613（75 µM）或载体处理一次。7天后收集细胞，并将1 × 10⁶个细胞分别注射到每组5只小鼠体内：载体组和CPI-613预处理组。分别在21、35和48天后分析肿瘤发生率。所有小鼠在48天后用CO₂处死。

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SKOV3异种移植模型（裸鼠）：
1. 小鼠准备：雌性裸鼠（6-8周龄，18-22 g）在特定病原体清除（SPF）条件下适应1周[2]
2. 肿瘤诱导：将5×10⁶个SKOV3细胞悬浮于0.2 mL PBS和Matrigel（1:1）混合液中，并皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。 [2]
3. 药物配制：将Devimistat (CPI-613)溶解于5%二甲基亚砜(DMSO) + 95%无菌生理盐水中，配制成10 mg/mL的储备液。[2]
4. 治疗方案：当肿瘤平均体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：- 对照组：5% DMSO + 生理盐水（腹腔注射，每周两次，持续3周）；- Devimistat (CPI-613)组：20 mg/kg（腹腔注射，每周两次，持续3周）。[2]
5. 监测和样本采集：每周两次测量肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤进行重量测量、免疫组织化学染色和ATP检测。液位检测[2]

背景：本文描述了利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，开发并验证了一种用于定量分析人血浆基质中CPI-613及其主要代谢物CPI-2850和CPI-1810的生物分析方法。方法：首先采用乙腈沉淀法对血浆进行蛋白质沉淀，然后优化样品提取步骤，以最大程度地提取血浆中的所有三种分析物。将最终提取的上清液用水稀释后，注入Xbridge C18（50 × 2.1 mm；5 μm）色谱柱进行分析。采用梯度洗脱法分离分析物，并在负离子模式下使用三重四极杆质谱仪（Sciex API 5000）进行检测。结果：CPI-613、CPI-2850 和 CPI-1810 的线性范围分别为 50-50,000 ng/ml、250-250,000 ng/ml 和 10-10,000 ng/ml。室温稳定性实验结果显示，CPI-613 及其代谢物可稳定保存 24 小时，并经受了四次冻融循环。此外，本验证还证实了该方法在 -60 至 -80°C 的低温冰箱中可稳定保存约 127 天。所有分析物的平均基质回收率均高于 80%。结论：本研究开发了一种稳健的 LC-MS/MS 方法，用于定量分析 CPI-613 及其主要代谢物。该方法将用于支持正在进行和未来的 CPI-613 临床试验。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35172610/

体外毒性：Devimistat (CPI-613) 对正常人卵巢上皮细胞 (IOSE-80) 的毒性较低，IC50 为 35 μM（72 小时 MTT 法），比卵巢癌细胞系（SKOV3：12 μM；OVCAR3：10 μM）高 3-4 倍 [2]。体内毒性：裸鼠接受 Devimistat (CPI-613)（20 mg/kg，每周两次）治疗后，在治疗的第一周观察到短暂的体重下降（8%），并在第二周恢复。血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 和肌酐（肝肾功能标志物）水平与对照组相比无显著差异 (p > 0.05)。肝脏、肾脏或脾脏组织未发现组织学异常[2]

[1]. Downregulation of ARID1A in gastric cancer cells: a putative protective molecular mechanism against the Harakiri-mediated apoptosis pathway. Virchows Arch. 2021;478(3):401-411.

[2]. The Metabolic Inhibitor CPI-613 Negates Treatment Enrichment of Ovarian Cancer Stem Cells. Cancers (Basel). 2019 Oct 29;11(11):1678.

Devimistat (CPI-613) 已用于多种癌症的治疗试验，包括淋巴瘤、实体瘤、晚期癌症和胰腺癌等。
Devimistat 是一种合成的α-硫辛酸类似物的对映异构体外消旋混合物，具有潜在的化学预防和抗肿瘤活性。尽管其确切的作用机制尚不清楚，但 Devimistat 已被证明能够抑制实体瘤细胞生长所需的代谢和调控过程。外消旋混合物中的两种对映异构体均表现出抗肿瘤活性。

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本研究旨在揭示 ARID1A 表达受损在胃癌发生中的病理生物学作用。我们采用免疫组织化学方法检测了 98 例胃癌组织标本中 ARID1A 的表达，并分析了其与临床病理特征的关系。根据癌侵袭前沿 ARID1A 免疫反应的比例和强度，我们将标本分为 ARID1A 低表达组和高表达组。值得注意的是，ARID1A低表达与患者的总生存期显著相关。随后，我们确定了区分ARID1A低表达/预后不良胃癌和ARID1A高表达/预后良好胃癌的分子特征。全面的基因谱分析和免疫印迹实验表明，线粒体凋亡介质Harakiri在ARID1A低表达/预后不良胃癌中的表达低于ARID1A高表达/预后良好胃癌。siRNA介导的ARID1A下调显著降低了培养的胃癌细胞中Harakiri分子的表达。有趣的是，ARID1A下调赋予了细胞对线粒体代谢抑制剂devimistat诱导的凋亡的抵抗力。相反，在ARID1A下调的胃癌细胞中，Harakiri的过表达恢复了其对devimistat诱导的凋亡的敏感性。目前的研究结果表明，ARID1A表达受损可能导致胃癌的发生，推测其机制是通过获得对Harakiri介导的细胞凋亡途径的耐药性。[1]

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卵巢癌治疗中最具挑战性的难题之一是铂类耐药复发性疾病的发生。癌症干细胞（CSCs）被认为与复发性和铂类耐药性卵巢癌（OvCa）的发生密切相关。选择性靶向CSCs的药物可以增强标准细胞毒性药物的疗效，并有可能预防和/或延缓复发。与非CSCs相比，CSCs对代谢途径调控的依赖性更高，这为治疗提供了可能的机会。我们证明，在体外使用代谢抑制剂CPI-613（devimistat，一种三羧酸循环（TCA循环）抑制剂）处理可降低CD133+和CD117+细胞的频率，而对非CSC细胞的活力几乎没有影响。此外，CPI-613 处理的细胞在体内形成球体的能力和致瘤性均降低。综上所述，这些结果表明 CPI-613 处理对卵巢癌干细胞群有负面影响。此外，CPI-613 抑制了奥拉帕尼或卡铂/紫杉醇治疗后 CSC 的非预期富集。综上所述，我们的结果表明 CPI-613 优先靶向卵巢癌干细胞，并可能成为增强现有治疗策略、延长卵巢癌患者无进展生存期或总生存期的候选药物。[2]

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Devimistat (CPI-613) 是一种线粒体代谢抑制剂，特异性靶向丙酮酸脱氢酶 (PDH) 和 α-酮戊二酸脱氢酶 (α-KGDH)——三羧酸循环 (TCA 循环) 中的关键酶。通过抑制这些酶，它能破坏线粒体能量代谢（减少ATP生成），并选择性地杀死代谢需求高于正常细胞的癌细胞[2]。2019年的一项研究表明，Devimistat (CPI-613) 不仅能抑制卵巢癌细胞增殖，还能减少癌症干细胞 (CSC) 的数量——癌症干细胞是化疗耐药和复发的主要原因。这一发现支持了Devimistat (CPI-613) 作为克服卵巢癌耐药性的治疗药物的潜力[2]。

C22H28O2S2

388.59

388.153

C, 68.00; H, 7.26; O, 8.23; S, 16.50

95809-78-2

Devimistat-d10;2586055-61-8

24770514

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

553.0±50.0 °C at 760 mmHg

63-65℃

288.3±30.1 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.595

5.66

87.9

1

4

13

26

363

0

O=C(CCCCC(CCSCC1C=CC=CC=1)SCC1C=CC=CC=1)O

ZYRLHJIMTROTBO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H28O2S2/c23-22(24)14-8-7-13-21(26-18-20-11-5-2-6-12-20)15-16-25-17-19-9-3-1-4-10-19/h1-6,9-12,21H,7-8,13-18H2,(H,23,24)

6,8-bis(benzylthio)octanoic acid

CPI613; CPI-613; Devimistat; CPI 613

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2 mg/mL (5.15 mM) in 2% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 53% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.15 mM) (饱和度未知) in 2% DMSO 98% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80:30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。