| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Spinach2 RNA aptamer, Broccoli RNA aptamer [1][2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
指导原则（推荐采用以下实验方案。该方案仅作指导，需根据具体实验需求进行调整。）
1.1 储备液制备 [1] 在无水二甲基亚砜（DMSO）中配制50 mM的DFHBI-1T储备液。 注意：建议将储备液分装，于-20°C或-80°C避光保存。 1.2 工作液制备 用无血清培养基稀释储备液，获得20 μM的DFHBI-1T工作液。 注意：工作液浓度应根据具体实验条件调整，并在使用前现配现用。 2. 染色步骤 1）将表达Spinach2标记RNA的细胞接种至合适的培养皿或培养板中，在标准细胞培养条件下培养。 2）弃去旧培养基，用预热的PBS轻柔洗涤细胞两次，去除残留血清及细胞碎片。 3）向细胞中加入20 μM的DFHBI-1T工作液，确保完全覆盖细胞单层。 4）将细胞与染料在37°C、5% CO₂、湿润培养箱中孵育10分钟。 5）孵育结束后，弃去含染料的培养基，用预热的PBS洗涤细胞三次，去除未结合的DFHBI-1T。 6）用新鲜细胞培养基或成像缓冲液替换PBS。 7）立即使用配备GFP滤光片的荧光显微镜对细胞成像，检测Spinach2-DFHBI-1T复合物的荧光信号。 当与Spinach2结合时，与DFHBI相比，DFHBI-1T 的激发峰红移了35 nm，发射峰也有轻微红移。Spinach2-DFHBI-1T 复合物还表现出整体亮度的增加，这反映了消光系数的轻微增加和量子产率的提高。 [1] Spinach2-DFHBI-1T 复合物的光物理性质为：最大吸收波长为426 nm，最大激发波长为472 nm，最大发射波长为507 nm，消光系数为29,600 M⁻¹ cm⁻¹，量子产率为0.94，亮度为28（相对于Spinach2-DFHBI），Kd为560 nM，熔解温度（Tm）为37°C。 [1] Broccoli-DFHBI-1T 复合物的光物理性质为：最大吸收波长为469 nm，最大激发波长为472 nm，最大发射波长为507 nm，消光系数为29,600 M⁻¹ cm⁻¹，量子产率为0.94，亮度为28（相对于Spinach2-DFHBI），Kd为480 nM，熔解温度（Tm）为48°C。 [2] 体外折叠分析显示，与Spinach2相比，Broccoli在低镁离子浓度下表现出改善的折叠能力。 [2] 与DFHBI相比，DFHBI-1T 在与细胞孵育时表现出更低的本底荧光。与DFHBI相比，DFHBI-1T在细胞中和培养基中表现出的非特异性荧光激活作用降低。 [1] 在表达 (CGG) 60-Spinach2 的 COS7 细胞中，与 DFHBI (20 μM) 相比，DFHBI-1T (20 μM；10 分钟) 会增加荧光素[1]。 Broccoli-DFHBI-1T 的 ex/em 为 472 nm/507 nm，spinach-2-DFHBI-1T 的 ex/em 为 482 nm/505 nm[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞中，用DFHBI-1T（20 μM）替代DFHBI（20 μM）后，使用GFP滤光片组成像时，荧光 foci的亮度提高了约60%。用DFHBI-1T处理的细胞比用相同浓度DFHBI处理的细胞表现出更低的本底荧光。 [1]
在表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞中，用DFHBI-1T处理的细胞在使用GFP滤光片组成像时，可轻易检测到核内foci，与DFHBI相比，特异性荧光信号增强，本底荧光显著降低。使用DFHBI-1T时，S5-Spinach2信号无需背景减除即可轻易检测到。 [1] 在表达tBroccoli或tSpinach2的大肠杆菌中，使用DFHBI-1T（40 μM）进行荧光成像。表达tBroccoli的细胞的荧光强度约为表达tSpinach2的细胞的两倍。 [2] 在表达5S-tBroccoli或5S-tdBroccoli的HEK293T细胞中，DFHBI-1T（20 μM）处理导致在未添加镁离子的情况下出现清晰可见的细胞质RNA foci。通过流式细胞术测量，tdBroccoli比tBroccoli亮70%。 [2] 在表达5S-Broccoli或5S-dBroccoli（不含tRNA支架）的HEK293T细胞中，DFHBI-1T（20 μM）处理导致通过流式细胞术和荧光显微镜可轻易检测到荧光。 [2] |
| 细胞实验 |
Spinach2融合RNA的活细胞成像：将表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞在含有20 μM DFHBI-1T的培养基中培养10分钟。使用GFP滤光片组以100 ms曝光时间采集图像。定量10个foci的荧光强度，并相对于DFHBI的亮度进行标准化。 [1]
HEK293T细胞的流式细胞术分析：用表达5S与适配体（tBroccoli、tdBroccoli或tSpinach2）融合的质粒转染的细胞，用20 μM DFHBI-1T处理，并在两个通道进行分析：绿色通道（激发=488 nm，发射=525 ± 50 nm）和红色通道（激发=561 nm，发射=610 ± 20 nm）。使用mCherry作为转染对照。在指定条件下，细胞还用5 mM MgSO₄预处理。 [2] HEK293T细胞的荧光显微镜检查：细胞用20 μM DFHBI-1T、5 μg/mL Hoechst 33258和0.3 M蔗糖预处理，并在指定条件下用5 mM MgSO₄处理。绿色荧光曝光时间为0.5秒，mCherry和Hoechst曝光时间为200毫秒。比例尺为10 μm。 [2] 大肠杆菌的荧光显微镜检查：将表达tSpinach2、tBroccoli或tdBroccoli的细菌贴附在多聚-D-赖氨酸包被的玻璃底培养皿上，用200 μM DFHBI-1T预孵育，并在荧光显微镜下成像，曝光时间100毫秒。细胞在不含镁离子的PBS中成像。比例尺为2 μm。 [2] 细菌荧光的定量：使用酶标仪测量悬浮液中细菌细胞的荧光信号。误差线表示标准差（n = 3）。 [2] |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C13H9F5N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
320.214780569077
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| 精确质量 |
320.058
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| CAS号 |
1539318-36-9
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| 相关CAS号 |
DFHBI-2T;1539318-40-5
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| PubChem CID |
101889712
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.49±0.1 g/cm3(Predicted)
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| 沸点 |
327.9±52.0 °C(Predicted)
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| 闪点 |
152.1±30.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.527
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| LogP |
2.96
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| tPSA |
52.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
505
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=N/C(=C\C2=CC(=C(C(=C2)F)O)F)/C(=O)N1CC(F)(F)F
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| InChi Key |
AWYCLBWNRONMQC-WMZJFQQLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H9F5N2O2/c1-6-19-10(12(22)20(6)5-13(16,17)18)4-7-2-8(14)11(21)9(15)3-7/h2-4,21H,5H2,1H3/b10-4-
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| 化学名 |
(5Z)-5-[(3,5-Difluoro-4-hydroxyphenyl)methylene]-3,5-dihydro-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-4H-imidazol-4-one
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| 别名 |
DFHBI-1T; DFHBI1T; 1539318-36-9; (Z)-5-(3,5-Difluoro-4-hydroxybenzylidene)-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,5-dihydro-4H-imidazol-4-one; (5Z)-5-[(3,5-Difluoro-4-hydroxyphenyl)methylene]-3,5-dihydro-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-4H-imidazol-4-one; DFHBI 1T; DF-HBI-1T; DF HBI 1T
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~156.15 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5.5 mg/mL (17.18 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 55.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1230 mL | 15.6148 mL | 31.2295 mL | |
| 5 mM | 0.6246 mL | 3.1230 mL | 6.2459 mL | |
| 10 mM | 0.3123 mL | 1.5615 mL | 3.1230 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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