| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Spinach2 RNA aptamer, Broccoli RNA aptamer [1][2]
The target of DFHBI-1T is not a protein or enzyme, but specific RNA aptamers. Its fluorescence is "turned on" by binding to specific RNA sequences. The primary RNA targets it recognizes include the series of fluorescent RNA aptamers such as Spinach, Spinach2, iSpinach, and Broccoli. Upon binding to these aptamers, the intramolecular rotation of DFHBI-1T is restricted, leading to a highly fluorescent state. Specifically, the Broccoli-DFHBI-1T complex exhibits an excitation/emission wavelength of 472 nm/507 nm, while the Spinach2-DFHBI-1T complex shows 482 nm/505 nm. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
指导原则（推荐采用以下实验方案。该方案仅作指导，需根据具体实验需求进行调整。）
1.1 储备液制备 [1] 在无水二甲基亚砜（DMSO）中配制50 mM的DFHBI-1T储备液。 注意：建议将储备液分装，于-20°C或-80°C避光保存。 1.2 工作液制备 用无血清培养基稀释储备液，获得20 μM的DFHBI-1T工作液。 注意：工作液浓度应根据具体实验条件调整，并在使用前现配现用。 2. 染色步骤 1）将表达Spinach2标记RNA的细胞接种至合适的培养皿或培养板中，在标准细胞培养条件下培养。 2）弃去旧培养基，用预热的PBS轻柔洗涤细胞两次，去除残留血清及细胞碎片。 3）向细胞中加入20 μM的DFHBI-1T工作液，确保完全覆盖细胞单层。 4）将细胞与染料在37°C、5% CO₂、湿润培养箱中孵育10分钟。 5）孵育结束后，弃去含染料的培养基，用预热的PBS洗涤细胞三次，去除未结合的DFHBI-1T。 6）用新鲜细胞培养基或成像缓冲液替换PBS。 7）立即使用配备GFP滤光片的荧光显微镜对细胞成像，检测Spinach2-DFHBI-1T复合物的荧光信号。 当与Spinach2结合时，与DFHBI相比，DFHBI-1T 的激发峰红移了35 nm，发射峰也有轻微红移。Spinach2-DFHBI-1T 复合物还表现出整体亮度的增加，这反映了消光系数的轻微增加和量子产率的提高。 [1] Spinach2-DFHBI-1T 复合物的光物理性质为：最大吸收波长为426 nm，最大激发波长为472 nm，最大发射波长为507 nm，消光系数为29,600 M⁻¹ cm⁻¹，量子产率为0.94，亮度为28（相对于Spinach2-DFHBI），Kd为560 nM，熔解温度（Tm）为37°C。 [1] Broccoli-DFHBI-1T 复合物的光物理性质为：最大吸收波长为469 nm，最大激发波长为472 nm，最大发射波长为507 nm，消光系数为29,600 M⁻¹ cm⁻¹，量子产率为0.94，亮度为28（相对于Spinach2-DFHBI），Kd为480 nM，熔解温度（Tm）为48°C。 [2] 体外折叠分析显示，与Spinach2相比，Broccoli在低镁离子浓度下表现出改善的折叠能力。 [2] 与DFHBI相比，DFHBI-1T 在与细胞孵育时表现出更低的本底荧光。与DFHBI相比，DFHBI-1T在细胞中和培养基中表现出的非特异性荧光激活作用降低。 [1] 在表达 (CGG) 60-Spinach2 的 COS7 细胞中，与 DFHBI (20 μM) 相比，DFHBI-1T (20 μM；10 分钟) 会增加荧光素[1]。 Broccoli-DFHBI-1T 的 ex/em 为 472 nm/507 nm，spinach-2-DFHBI-1T 的 ex/em 为 482 nm/505 nm[2]。 在体外实验中，DFHBI-1T相较于第一代DFHBI显示出显著增强的荧光性能。当与Spinach2适配体结合时，DFHBI-1T具有更高的摩尔消光系数和量子产率，其峰值激发波长为482 nm，峰值发射波长为505 nm，光谱特性适配标准的GFP滤光片组。重要的是，与Spinach2适配体结合时，DFHBI-1T表现出更高的特异性荧光强度和更低的背景荧光，这使其信噪比远优于DFHBI。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞中，用DFHBI-1T（20 μM）替代DFHBI（20 μM）后，使用GFP滤光片组成像时，荧光 foci的亮度提高了约60%。用DFHBI-1T处理的细胞比用相同浓度DFHBI处理的细胞表现出更低的本底荧光。 [1]
在表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞中，用DFHBI-1T处理的细胞在使用GFP滤光片组成像时，可轻易检测到核内foci，与DFHBI相比，特异性荧光信号增强，本底荧光显著降低。使用DFHBI-1T时，S5-Spinach2信号无需背景减除即可轻易检测到。 [1] 在表达tBroccoli或tSpinach2的大肠杆菌中，使用DFHBI-1T（40 μM）进行荧光成像。表达tBroccoli的细胞的荧光强度约为表达tSpinach2的细胞的两倍。 [2] 在表达5S-tBroccoli或5S-tdBroccoli的HEK293T细胞中，DFHBI-1T（20 μM）处理导致在未添加镁离子的情况下出现清晰可见的细胞质RNA foci。通过流式细胞术测量，tdBroccoli比tBroccoli亮70%。 [2] 在表达5S-Broccoli或5S-dBroccoli（不含tRNA支架）的HEK293T细胞中，DFHBI-1T（20 μM）处理导致通过流式细胞术和荧光显微镜可轻易检测到荧光。 [2] 在活细胞水平，DFHBI-1T展现出优异的RNA成像能力。研究表明，在表达（CGG）₆₀-Spinach2的COS7细胞中，使用20 μM DFHBI-1T处理10分钟即可显著增强荧光信号，其效果优于同等条件下的DFHBI。该探针可透过细胞膜，能够对活细胞中的RNA进行实时动态成像，包括检测tRNA内含子生成的环状RNA（tricRNA）在细胞内的定位。流式细胞术分析表明，DFHBI-1T染色结合荧光激活细胞分选（FACS），可有效区分表达目标RNA的细胞与对照组。 |
| 酶活实验 |
DFHBI-1T属于RNA适配体激活的荧光探针，通常需要与RNA结合才能表现荧光特性。其结合盒的核心实验流程如下：在无细胞体系中，将纯化后的RNA适配体（如Broccoli或Spinach2）与DFHBI-1T混合于结合缓冲液中（通常包含40 mM HEPES pH 7.4、100 mM KCl、1 mM MgCl₂），在室温或37°C孵育5-30分钟。使用荧光分光光度计检测特定波长的荧光强度（Broccoli-DFHBI-1T使用激发波长472 nm/发射波长507 nm；Spinach2-DFHBI-1T使用482 nm/505 nm）。通过改变DFHBI-1T浓度测定结合亲和力，通常Kd值在纳摩尔至低微摩尔范围。
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| 细胞实验 |
Spinach2融合RNA的活细胞成像：将表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞在含有20 μM DFHBI-1T的培养基中培养10分钟。使用GFP滤光片组以100 ms曝光时间采集图像。定量10个foci的荧光强度，并相对于DFHBI的亮度进行标准化。 [1]
HEK293T细胞的流式细胞术分析：用表达5S与适配体（tBroccoli、tdBroccoli或tSpinach2）融合的质粒转染的细胞，用20 μM DFHBI-1T处理，并在两个通道进行分析：绿色通道（激发=488 nm，发射=525 ± 50 nm）和红色通道（激发=561 nm，发射=610 ± 20 nm）。使用mCherry作为转染对照。在指定条件下，细胞还用5 mM MgSO₄预处理。 [2] HEK293T细胞的荧光显微镜检查：细胞用20 μM DFHBI-1T、5 μg/mL Hoechst 33258和0.3 M蔗糖预处理，并在指定条件下用5 mM MgSO₄处理。绿色荧光曝光时间为0.5秒，mCherry和Hoechst曝光时间为200毫秒。比例尺为10 μm。 [2] 大肠杆菌的荧光显微镜检查：将表达tSpinach2、tBroccoli或tdBroccoli的细菌贴附在多聚-D-赖氨酸包被的玻璃底培养皿上，用200 μM DFHBI-1T预孵育，并在荧光显微镜下成像，曝光时间100毫秒。细胞在不含镁离子的PBS中成像。比例尺为2 μm。 [2] 细菌荧光的定量：使用酶标仪测量悬浮液中细菌细胞的荧光信号。误差线表示标准差（n = 3）。 [2] 活细胞RNA成像的典型实验流程如下：将表达目标RNA适配体（如Broccoli或Spinach2）的细胞在激光共聚焦培养皿中培养至适宜密度。成像前30分钟，将培养基更换为含有20 μM DFHBI-1T的成像培养基（如无酚红的Fluorobrite培养基），同时加入25 mM HEPES和1% FBS以维持细胞状态。细胞在37°C、5% CO₂条件下孵育30分钟后即可进行成像。使用配置488 nm激光器的共聚焦显微镜采集图像，Broccoli-DFHBI-1T复合物的发射峰位于507 nm（绿色通道）。设置不表达适配体的细胞作为阴性对照以扣除背景自发荧光。 |
| 动物实验 |
与DFHBI-1T相关的公开文献中描述体内动物实验的信息较为有限。由于该探针主要用于基础细胞生物学研究，其体内动物实验流程通常涉及将携带目标RNA适配体序列的基因通过病毒载体（如腺相关病毒AAV）或质粒递送至动物体内（如局部注射）。确认基因表达后，向动物体内给药DFHBI-1T（给药途径可能包括局部注射、腹腔注射或静脉注射，具体剂量需优化），随后在麻醉状态下采用活体成像系统或带有荧光成像功能的内窥镜对目标组织中的荧光信号进行检测。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
关于DFHBI-1T药代动力学参数的详细研究数据在公开文献中较为有限。已知该探针具有良好的细胞膜穿透性，能够快速进入活细胞并与细胞内的RNA适配体结合。该化合物分子量较小（320.21），具有一定的亲脂性。在溶剂中，DFHBI-1T在DMSO中的溶解度可达100 mg/mL (312.30 mM)，便于配制母液。用于动物实验的制剂方案已有报道：将储存液依次用10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80和45%生理盐水稀释，可获得5.5 mg/mL的均匀悬浊液，适用于口服或腹腔注射给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有研究表明，DFHBI-1T在活细胞中具有可忽略不计的细胞毒性，这使其成为理想的长期活细胞RNA成像探针。供应商提供的数据显示，DFHBI-1T的纯度超过98%。与许多荧光染料不同，DFHBI-1T本身无荧光特性，其荧光激活仅发生在与目标RNA特异性结合后，这种机制避免了非特异性背景荧光的产生和对细胞正常代谢的干扰。然而，具体的安全毒理学数据和长期暴露风险等信息尚未有系统的报道，该化合物仅供科研使用。
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C13H9F5N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
320.214780569077
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| 精确质量 |
320.058
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| CAS号 |
1539318-36-9
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| 相关CAS号 |
DFHBI-2T;1539318-40-5
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| PubChem CID |
101889712
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.49±0.1 g/cm3(Predicted)
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| 沸点 |
327.9±52.0 °C(Predicted)
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| 闪点 |
152.1±30.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.527
|
| LogP |
2.96
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| tPSA |
52.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
505
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=N/C(=C\C2=CC(=C(C(=C2)F)O)F)/C(=O)N1CC(F)(F)F
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| InChi Key |
AWYCLBWNRONMQC-WMZJFQQLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H9F5N2O2/c1-6-19-10(12(22)20(6)5-13(16,17)18)4-7-2-8(14)11(21)9(15)3-7/h2-4,21H,5H2,1H3/b10-4-
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| 化学名 |
(5Z)-5-[(3,5-Difluoro-4-hydroxyphenyl)methylene]-3,5-dihydro-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-4H-imidazol-4-one
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| 别名 |
DFHBI-1T; DFHBI1T; 1539318-36-9; (Z)-5-(3,5-Difluoro-4-hydroxybenzylidene)-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,5-dihydro-4H-imidazol-4-one; (5Z)-5-[(3,5-Difluoro-4-hydroxyphenyl)methylene]-3,5-dihydro-2-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-4H-imidazol-4-one; DFHBI 1T; DF-HBI-1T; DF HBI 1T
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~156.15 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5.5 mg/mL (17.18 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 55.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1230 mL | 15.6148 mL | 31.2295 mL | |
| 5 mM | 0.6246 mL | 3.1230 mL | 6.2459 mL | |
| 10 mM | 0.3123 mL | 1.5615 mL | 3.1230 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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