| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Spinach2 RNA aptamer [1][2]
DFHBI-2T does not target specific proteins or enzymes. Instead, its target is specific RNA aptamer sequences (e.g., Spinach2). The probe remains non-fluorescent until it binds to these RNA stem-loop structures, whereupon the restriction of molecular rotation and exclusion of solvent activate its fluorescence. Specific RNA aptamer sequences, such as Spinach2. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
与Spinach2结合后，DFHBI-2T的激发峰发生了显著的红移，从447 nm红移至500 nm，红移量为53 nm；发射峰发生了22 nm红移，从501 nm红移至523 nm，与DFHBI相比，红移量为22 nm。由于量子产率的降低，整体亮度也随之降低。[1] Spinach2-DFHBI-2T复合物的光物理性质如下：最大吸收波长为460 nm，最大激发波长为500 nm，最大发射波长为523 nm，消光系数为29,000 M⁻¹ cm⁻¹，量子产率为0.12，亮度为22（相对于Spinach2-DFHBI），解离常数(Kd)约为1,300 nM (1.2 μM)。 [1]
游离的DFHBI-2T荧光团（未与Spinach2结合）表现出：最大吸收波长为460 nm，最大发射波长为515 nm，消光系数为34,800 M⁻¹ cm⁻¹，荧光量子产率为0.0012。[1] 体外实验表明，将基于Spinach2的S-腺苷甲硫氨酸（SAM）传感器（由Spinach2和SAM适体组成）与DFHBI-2T孵育后，在523 nm处观察到SAM依赖性荧光发射。[1] 通过黄色发射通道观察到的荧光是由Spinach2成像的DFHBI-2T产生的[2]。 在无细胞体系或细胞裂解液中，DFHBI-2T表现出较低的背景荧光。 DFHBI-2T 与 Spinach2 RNA 适体结合后会发出明亮的绿色荧光。利用 DFHBI-2T 对 Spinach2 进行成像，可通过黄色发射通道检测到荧光，从而实现体外实时 RNA 定量。 DFHBI-2T 是一种用于活细胞中 RNA 成像的荧光探针。它与靶 RNA 适配体结合后会发出荧光，从而实现 RNA 分子的实时可视化和追踪。该荧光可通过黄色发射通道观察到。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在表达 (CGG)₆₀-Spinach2 的 COS7 细胞中，当培养基更换为含有 20 μM DFHBI-2T 的培养基时，使用 GFP 滤光片组成像时荧光强度显著降低，但使用 YFP 滤光片组则很容易检测到荧光。这表明，用 DFHBI-2T 成像的 Spinach2 产生的荧光可以通过黄色发射通道检测到。[1]
DFHBI-2T 具有优异的膜渗透性，使其能够穿过活细胞膜进入细胞质。在表达特定 RNA 适配体（例如 Spinach2）的活细胞中，DFHBI-2T 与靶 RNA 结合，从而实现 RNA 定位和转运的实时动态成像。 不适用。DFHBI-2T 是一种用于成像的荧光探针，并非具有体内活性的治疗药物。 |
| 酶活实验 |
Spinach2-DFHBI-2T复合物的光谱采集：在过量Spinach2 (5 μM) 和 1 μM DFHBI-2T 的结合缓冲液（40 mM HEPES，pH 7.4，125 mM KCl，10 mM MgCl₂）中采集激发光谱和发射光谱。激发光谱在发射最大波长处采集，发射光谱在激发最大波长处采集。[1] 通常，将纯化的Spinach2 RNA（通过体外转录获得）与DFHBI-2T在缓冲液中混合并孵育。RNA折叠：将RNA在折叠缓冲液（含有K⁺和Mg²⁺）中加热并缓慢冷却，以形成正确的适体结构。染色：加入 DFHBI-2T 工作液（用 DMSO 配制，终浓度通常为 1-10 µM）。检测：室温避光孵育 5-30 分钟后，使用酶标仪或荧光计在激发/发射波长 500/523 nm 处测量荧光强度。设置对照组（含/不含 RNA）至关重要。
通过荧光光谱法评估 DFHBI-2T 与其 RNA 适配体的结合情况。测量在 500 nm 激发下 523 nm 处荧光强度的增加，以确认结合并计算解离常数 (Kd)。 |
| 细胞实验 |
利用DFHBI-2T对Spinach2融合RNA进行活细胞成像：将表达(CGG)₆₀-Spinach2的COS7细胞培养于含有DFHBI或DFHBI-2T的培养基中。使用GFP和YFP滤光片组对细胞进行成像。比例尺：10 μm。[1]
细胞培养：将表达靶RNA适配体（例如Spinach2）的细胞系接种于共聚焦培养皿或96孔板中。 染色：将培养基更换为含有DFHBI-2T的新鲜培养基（推荐浓度范围1-5 µM，通过滴定优化）。在37°C下孵育15-30分钟。 洗涤和成像：用预热的PBS洗涤细胞2-3次以去除过量的探针。使用配备 FITC 通道（500/523 nm）的共聚焦显微镜进行活细胞成像。需要设置阴性对照（不表达适配体的细胞）。 将表达目标RNA适体（例如Spinach2）的细胞与DFHBI-2T孵育。然后使用荧光显微镜对细胞进行成像，以观察RNA。荧光信号特异性地来自表达该适体的细胞。 |
| 动物实验 |
根据其作用机制，一般方案包括：
模型：携带表达RNA适体（例如Spinach2）的异种移植瘤的小鼠，或注射编码该适体的病毒载体的小鼠。 给药途径：通常为瘤内注射或全身（尾静脉）注射。DFHBI-2T通常溶于DMSO，并用生理盐水稀释，或与表面活性剂配制（例如，10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween 80 + 45%生理盐水）。 成像：使用配备适用于GFP的滤光片的活体成像系统进行荧光成像。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
理化性质：激发/发射波长 = 500 nm/523 nm。分子量 = 306.19，分子式 = C12H7F5N2O2。DFHBI-2T 是一种可透过细胞膜的小分子。储存：通常储存于 -20℃，避光保存。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DFHBI-2T ((Z)-4-(3,5-二氟-4-羟基亚苄基)-2-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-咪唑-5(4H)-酮) 是一种荧光染料，可与 Spinach2 RNA 适体结合并被其激活。它是通过将 DFHBI 中咪唑啉酮环 C-2 位上的甲基取代基替换为三氟甲基而合成的。[1]
当与 Spinach2 结合时，DFHBI-2T 的光谱特性更适合 YFP 滤光片组（激发带通滤光片透射 500 ± 10 nm 的光，二向色镜位于 515 nm，发射滤光片透射 535 ± 15 nm 的光），而不是标准的 GFP 滤光片组。这使得可以使用 YFP 滤光片组对 Spinach2 标记的构建体进行成像。[1] 位于 C-2 位的庞大三氟甲基部分可能与 Spinach2 适体存在空间位阻，这可以从 Kd 值增加至约 1.2 μM 得到证实。[1] DFHBI-2T 是用于活细胞 RNA 成像的“即插即用”系统的一部分，可根据特定的实验需求改变 Spinach2 的光谱特性。这对于需要同时对 Spinach2 标记的 RNA 和 CFP 标记的蛋白质进行成像的实验非常有用。[1] DFHBI-2T（CAS号：1539318-40-5）是一种用于研究活细胞中RNA生物学的强大工具。它无需对RNA本身进行基因操作，即可实现对RNA动态、定位和相互作用的实时成像。该技术广泛应用于RNA成像和合成生物学领域。 |
| 分子式 |
C12H7F5N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
306.188200235367
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| 精确质量 |
306.04
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| CAS号 |
1539318-40-5
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| 相关CAS号 |
DFHBI-1T;1539318-36-9
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| PubChem CID |
129080921
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
2.5
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| tPSA |
52.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
490
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(C(F)(F)F)=N/C(=C\C2=CC(F)=C(O)C(F)=C2)/C(=O)N1C
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| InChi Key |
CGFZNPPTJGGWPN-YWEYNIOJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H7F5N2O2/c1-19-10(21)8(18-11(19)12(15,16)17)4-5-2-6(13)9(20)7(14)3-5/h2-4,20H,1H3/b8-4-
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| 化学名 |
(5Z)-5-[(3,5-difluoro-4-hydroxyphenyl)methylidene]-3-methyl-2-(trifluoromethyl)imidazol-4-one
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| 别名 |
DFHBI-2T; DFHBI 2T; 1539318-40-5; (5Z)-5-[(3,5-difluoro-4-hydroxyphenyl)methylidene]-3-methyl-2-(trifluoromethyl)imidazol-4-one; SCHEMBL18797644; CGFZNPPTJGGWPN-YWEYNIOJSA-N;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (326.6 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.2659 mL | 16.3297 mL | 32.6595 mL | |
| 5 mM | 0.6532 mL | 3.2659 mL | 6.5319 mL | |
| 10 mM | 0.3266 mL | 1.6330 mL | 3.2659 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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