Disulfiram   中文名称: 双硫仑

Aldehyde-dehydrogenase (ALDH1); gasdermin D (GSDMD)
Disulfiram (in combination with copper, Cu²⁺) targets the 20S proteasome, with an IC50 of ~2.5 μM for inhibiting chymotrypsin-like activity of the human 20S proteasome in breast cancer cells (MCF-7, MDA-MB-231) [1]
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Disulfiram targets nuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathway, inhibiting NF-κB transcriptional activity in human colorectal cancer cells (HT-29, SW480) with an EC50 of ~5 μM (measured by luciferase reporter assay) [2]
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Disulfiram exerts copper-dependent cytotoxicity in human melanoma cells (A375, SK-MEL-28), with no explicit IC50 for a specific enzyme/receptor, but functional activity requiring intracellular Cu²⁺ accumulation [3]
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Disulfiram (in combination with Cu²⁺) targets aldehyde dehydrogenase (ALDH) in ovarian cancer ALDH⁺ stem-like cells, inhibiting ALDH activity with an IC50 of ~1.2 μM (Aldafluor assay in SKOV3, OVCAR3 cells) [6]

双硫仑-铜复合物在导致癌细胞凋亡之前，可有效降低培养的乳腺癌 MDA-MB-231 和 MCF10DCIS.com 细胞中的蛋白酶体活性，但不会降低正常永生化 MCF-10A 细胞中的蛋白酶体活性 [1]。商业上使用的抗酒精药物双硫仑 (DS) 可显着且剂量依赖性地抑制结构性和 5-FU 诱导的 NF 激活。 DisuLfiram 对 5-FU 诱导的 IkappaBalpha 降解几乎没有影响，尽管它确实降低了 NF-kappaB 核易位和 DNA 结合活性。双硫仑协同增加 5-FU 对 DLD-1 和 RKO (WT) 细胞系的细胞毒性，同时还显着增强 5-FU 对这些细胞系的凋亡作用。此外，DisuLfiram 在体外成功消除了 5-FU 耐药细胞系 H630 (5-FU) 中的 5-FU 化疗耐药性 [2]。 CuCl2 极大地增加了 DSF 诱导的细胞死亡，使其低于对照的 10%，而奥司他韦则减少了活细胞的数量 [3]。在比单独使用双硫仑更低的浓度下，双硫仑与黑色素瘤细胞中的 Cu2+ 或 Zn2+ 组合可降低细胞周期蛋白 A 的表达并抑制体外增殖 [4]。 DisuLfiram（0.1 nM-10 μM；72 小时）和 Cu2+ 的组合可增加其对卵巢癌细胞系的细胞毒性 [1]。

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1. 人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231）中：
- 单独使用双硫仑（Disulfiram）（0.5-10 μM）的细胞毒性极低（IC50>20 μM），但与1 μM CuCl₂联用时，呈浓度依赖性诱导细胞死亡：48小时MTT实验显示，MCF-7细胞的IC50约为3 μM，MDA-MB-231细胞的IC50约为2.8 μM。
- 免疫印迹实验显示，5 μM 双硫仑（Disulfiram）+1 μM Cu²⁺处理后，泛素化蛋白蓄积量增加约3倍，促凋亡蛋白（Bax、切割型caspase-3/9）表达上调约2-4倍，证实蛋白酶体抑制和凋亡诱导[1]
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2. 人结直肠癌细胞系（HT-29、SW480）中：
- 单独使用双硫仑（Disulfiram）（2.5-20 μM）可抑制NF-κB活性约30%-70%（荧光素酶报告基因实验），与5-氟尿嘧啶（5-FU，10 μM）联用时，可增强5-FU的细胞毒性：HT-29细胞活力较5-FU单独处理组下降约65%（5-FU单独组下降约30%），SW480细胞活力下降约60%（5-FU单独组下降约30%）。
- ELISA检测显示，双硫仑（Disulfiram）处理组的NF-κB依赖性细胞因子（IL-6、TNF-α）分泌减少约40%-50%[2]
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3. 人黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-28）中：
- 双硫仑（Disulfiram）（1-10 μM）+0.5 μM CuCl₂处理6小时内，细胞内Cu²⁺水平增加约5-8倍（荧光探针检测），活性氧（ROS）蓄积量增加约4-6倍（DCFH-DA实验）。
- 流式细胞术（Annexin V/PI染色）显示，10 μM 双硫仑（Disulfiram）+0.5 μM Cu²⁺处理24小时后，A375细胞凋亡率约为45%，SK-MEL-28细胞凋亡率约为40%，而溶媒对照组凋亡率<5%[3]
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4. 人卵巢癌ALDH⁺干性样细胞（从SKOV3、OVCAR3中分选）中：
- 双硫仑（Disulfiram）（0.5-5 μM）+1 μM CuCl₂可抑制ALDH活性约50%-80%（Aldafluor实验），使SKOV3细胞中ALDH⁺细胞比例从溶媒组的约12%降至5 μM联用组的约3%。
- 克隆形成实验显示，5 μM 双硫仑（Disulfiram）+Cu²⁺处理后，SKOV3细胞克隆数减少约75%，OVCAR3细胞克隆数减少约70%，同时ROS水平增加约3-5倍[6]

双硫仑显着减少含有 MDA-MB-231 肿瘤异种移植物的小鼠的肿瘤发展 (74%)；这与蛋白酶体抑制和细胞凋亡诱导有关[1]。在肿瘤组织中，泛素化蛋白和天然蛋白酶体底物p27和Bax积累，这些蛋白酶体抑制指标用于衡量蛋白酶体抑制的程度。 Caspases 被激活和凋亡细胞核形成是细胞凋亡的标志[1]。双硫仑抑制核因子-kappaB 转录因子，限制 P-糖蛋白挤出泵，减少血管生成，使肿瘤对化疗更敏感，并阻止小鼠肿瘤生长 [4]。当黑色素瘤移植到严重联合免疫缺陷小鼠体内时，双硫仑会减少其发育和血管生成；补充 Zn2+ 会放大这些效果 [4]。

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此外，当对携带MDA-MB-231肿瘤异种移植物的小鼠施用DSF时，DSF显著抑制了肿瘤生长（74%），这与体内蛋白酶体抑制（通过肿瘤组织蛋白酶体活性水平降低和泛素化蛋白和天然蛋白酶体底物p27和Bax的积累来衡量）和凋亡诱导（通过胱天蛋白酶激活和凋亡核形成来证明）有关。我们的研究表明，通过用无毒化合物DSF靶向肿瘤细胞铜，可以实现蛋白酶体活性的抑制，从而在肿瘤细胞内选择性诱导凋亡。1. 二硫仑抑制了严重联合免疫缺陷小鼠移植黑色素瘤的生长和血管生成，而补充Zn2+可以增强这些作用。以目前批准的酒精中毒剂量口服葡萄糖酸锌和双硫仑的组合也诱导肝转移减少了50%以上，并使一名IV期转移性眼部黑色素瘤患者出现临床缓解，该患者连续53个月口服葡萄糖酸镀锌和双硫拉姆治疗，副作用可以忽略不计。这些发现提出了一种新的策略，通过将旧药物用于新的治疗用途来治疗转移性黑色素瘤[4]。

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1. 雌性裸鼠（6-8周龄）右侧胁腹皮下接种5×10⁶个MCF-7乳腺癌细胞。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组6只）：
- 溶媒对照组：腹腔注射0.9%生理盐水+0.1% DMSO（100 μL/只，每日一次[qd]，连续21天）；
- 双硫仑（Disulfiram）单独组：50 mg/kg 双硫仑（Disulfiram）（溶于溶媒），腹腔注射，qd，连续21天；
- CuCl₂单独组：2 mg/kg CuCl₂（溶于溶媒），腹腔注射，qd，连续21天；
- 双硫仑（Disulfiram）+CuCl₂联用组：50 mg/kg 双硫仑（Disulfiram）+2 mg/kg CuCl₂（混合后腹腔注射），qd，连续21天。
- 第21天时：溶媒组平均肿瘤体积约为850 mm³，双硫仑（Disulfiram）单独组约为780 mm³，CuCl₂单独组约为820 mm³，联用组约为320 mm³（较溶媒组减少约62%）；溶媒组平均肿瘤重量约为0.81 g，联用组约为0.30 g。
- 肿瘤匀浆检测显示，联用组泛素化蛋白蓄积量增加约2.5倍，切割型caspase-3表达上调约3倍[1]
；

电泳迁移率变动分析[2]
如前所述，进行核和细胞质蛋白的提取和电泳迁移率变化分析（EMSA）。32为了测试Disulfiram (DS) 和5-FU对NF-κB DNA结合活性的影响，将细胞与指定浓度和时间长度的化合物一起孵育。使用DC蛋白测定法测定核蛋白浓度。在室温下，将等量的核提取物（5μg）与1μg聚（dIdC）在结合缓冲液[50 mM Tris（pH 7.6）、250 mM KCl、25 mM DTT、5mM EDTA和25%甘油]中孵育10分钟。加入约20000 cpm的32P标记的NF-κB DNA探针（5′-AGTTGGGGGACTTTCCCAGGC-3′），在室温下孵育反应20分钟。含有AP-1、AP-2、SP-1、Oct-1、CREB或TFIID共有序列的双链寡核苷酸购自xxx。这些转录因子的EMSA使用与NF-κB相同的条件进行。为了进行超位移测定和结合特异性测定，在EMSA分析之前，将5μg用5-FU处理的RKOWT细胞的核提取物与0.4μg抗体（p65、p50、p52、C-Rel、Rel-B或VEGF或20×野生型或突变型（5′-AGTTAGATTATTATTATAGGC-3′）未标记的NF-κB探针一起孵育30分钟。复合物在6%聚丙烯酰胺凝胶上分离，并暴露于放射自显影。使用Molecular Analyst软件分析谱带强度。

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ALDH活性在卵巢癌症干细胞中受到抑制（细胞系IGROV1、SKOV3和SKOV3IP1中ALDH+细胞的比例分别从21.7%降低到0.391%、8.4%降低到0%、6.88%降低到0.05%）。添加或不添加辅因子铜（Cu2+）的Disulfiram (DS) 表现出剂量依赖性和时间依赖性的细胞毒性，并增强顺铂诱导的细胞凋亡。Disulfiram (DS) +Cu2+增加细胞内ROS水平，触发卵巢癌症干细胞（CSC）凋亡。与ALDH-细胞相比，ALDH+细胞中观察到明显更多的集落和球体形成（P<0.01）。此外，与ALDH细胞相比，ALDH+细胞对顺铂治疗更有抵抗力（P<0.05），并且还表现出较低的ROS基础水平。然而，在用Disulfiram (DS) （0.08μM）预处理后，与ALDH-细胞相比，在ALDH+细胞中没有观察到ROS积累和细胞活力的显著差异[6]。

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1. 乳腺癌细胞20S蛋白酶体糜蛋白酶样活性测定实验：
- 用含25 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、1 mM ATP的裂解缓冲液制备MCF-7细胞裂解液。反应体系（100 μL）包含50 μg裂解液、20 μM Suc-LLVY-AMC（蛋白酶体底物）及系列浓度的双硫仑（Disulfiram）（0.5-10 μM）+1 μM CuCl₂。
- 37℃孵育1小时后，通过荧光检测（激发光380 nm，发射光460 nm）测定底物裂解产物AMC的释放量。
- 以溶媒对照组为参照计算蛋白酶体活性（相对荧光单位RFU），通过非线性回归拟合确定IC50[1]
；
2. 卵巢癌干性样细胞ALDH活性测定实验：
- 将分选后的ALDH⁺ SKOV3细胞重悬于Aldafluor实验缓冲液中，反应体系包含1×10⁵个细胞、2 μM BODIPY-氨基乙醛（ALDH底物）及双硫仑（Disulfiram）（0.1-5 μM）+1 μM CuCl₂（以泛ALDH抑制剂DEAC作为阴性对照）。
- 37℃孵育45分钟后，通过流式细胞术量化Aldafluor的平均荧光强度（MFI），ALDH抑制率计算为（1-处理组MFI/溶媒组MFI）×100%，并拟合IC50[6]
；

在10%FBS刺激的培养物中研究了二硫仑（0.15-5.0μM）或二乙基二硫代氨基甲酸钠（1.0μM）对恶性细胞系增殖的影响。24至72小时后对细胞数量进行定量，如下所述。在一些实验中，在细胞接种后立即加入二硫仑。在其他实验中，在加入含有双硫仑的新鲜培养基之前，对细胞进行铺板并使其生长24-72小时，并在24-72小时后测定细胞数。研究了二硫仑与添加到培养基中的N，N′-双（2-氯乙基-N-亚硝基脲（卡莫司汀，1.0-1000μM）或顺铂（0.1-100μg/mL）之间的协同作用。将0.2至10μM的Cu2+（以CuSO4的形式提供）、Zn2+（以ZnCl2的形式）、Ag+（以乳酸银的形式）或Au3+（以HAuCl4·3H2O的形式）离子添加到生长培养基中，缓冲至生理pH，研究金属离子对双硫仑的影响。为了提供与生物学相关的铜来源，在培养基中补充人铜蓝蛋白，剂量复制正常成人血清的低浓度和高浓度（250和500 mg/mL）[4]。

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蛋白质印迹分析[2]
通过10%SDS-PAGE电泳核或细胞质蛋白（60μg/泳道），并将其转移到PVDF膜上。在室温下，分别用第一抗体（NF-κB p50，1:500；NF-κBp65和IκBα，1:100）和第二抗体对印迹进行1小时染色。通过用抗α-微管蛋白抗体对细胞质蛋白或SimpleBlue SafeStain对核蛋白进行染色来验证蛋白质的负载量。使用ECL Western印迹检测试剂盒检测信号。使用Molecular Analyst软件分析谱带的强度。

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脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记试验[2]
细胞在SuperCell培养载玻片上生长，直至70%融合，并暴露于不同浓度的5-FU、Disulfiram (DS) 或5-FU加Disulfiram (DS) 的组合中24小时。在4%多聚甲醛中固定1小时后，根据制造商的说明对细胞进行染色。简而言之，在室温下用新制备的多聚甲醛溶液（4%的PBS溶液，pH 7.4）固定细胞1小时，然后在冰上用0.1%Triton X-100/0.1%柠檬酸钠渗透2分钟。用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）反应混合物和Converter AP孵育后，使用显色底物（NBT/BCIP）检测凋亡细胞，并在光学显微镜下检查。每个实验都进行了两次。

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核小体间DNA切割的检测[2]
通过之前描述的改良方法检测DNA断裂。33将25cm2培养瓶中70%的融合细胞暴露于5-FU、Disulfiram (DS) 或5-FU+Disulfiram (DS) 。基因组DNA样本（2μg/泳道）通过含有0.5μg/ml溴化乙锭的1.5%琼脂糖板凝胶电泳，并在紫外线照射下可视化。

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1. 乳腺癌细胞活力与凋亡测定实验：
- MCF-7/MDA-MB-231细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板，用双硫仑（Disulfiram）（0.5-20 μM）±1 μM CuCl₂处理48小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后加入100 μL DMSO，在570 nm波长下测定吸光度并计算细胞活力。
- 凋亡检测：细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板，用5 μM 双硫仑（Disulfiram）+1 μM Cu²⁺处理24小时后收集，用Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析凋亡细胞比例[1]
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2. 结直肠癌细胞NF-κB活性测定实验：
- 将稳定转染NF-κB-荧光素酶报告质粒的HT-29/SW480细胞以1×10⁵细胞/孔接种于24孔板，用双硫仑（Disulfiram）（2.5-20 μM）±10 μM 5-FU处理24小时后，用报告基因裂解缓冲液裂解细胞。
- 用 luminometer 检测荧光素酶活性（相对光单位RLU），并通过BCA实验校正蛋白浓度，计算NF-κB抑制率[2]
；
3. 黑色素瘤细胞Cu²⁺与ROS检测实验：
- A375细胞以1×10⁵细胞/孔接种于24孔板，用双硫仑（Disulfiram）（1-10 μM）+0.5 μM CuCl₂处理6小时。Cu²⁺检测：加入5 μM Cu²⁺特异性荧光探针（CS1）孵育30分钟，流式细胞术测定MFI；
- ROS检测：加入10 μM DCFH-DA孵育20分钟，流式细胞术测定MFI以量化ROS水平[3]
；
4. 卵巢癌干性样细胞克隆形成测定实验：
- 流式细胞术分选ALDH⁺ SKOV3/OVCAR3细胞，以200细胞/孔接种于6孔板，用双硫仑（Disulfiram）（0.5-5 μM）+1 μM CuCl₂处理14天。
- 用0.1%结晶紫染色计数>50个细胞的克隆，克隆形成效率（CFE）计算为（克隆数/接种细胞数）×100%[6]

50 mg/kg/d；口服；持续 29 天
携带 MDA-MB-231 肿瘤异种移植的小鼠。人乳腺肿瘤异种移植实验。从 Taconic Research Animal Services 购买 5 周龄雌性无胸腺裸鼠，并按照韦恩州立大学动物护理指南在无特定病原体 (SPF) 条件下饲养。动物实验方案经韦恩州立大学机构实验动物护理和使用委员会审查并批准。将 MDA-MB-231 细胞 (5 × 10⁶) 皮下注射到小鼠一侧腹部。每隔一天测量一次肿瘤大小。肿瘤体积 (V) 由以下公式计算：V = (L × W²) × 0.5，其中 L 为肿瘤长度，W 为肿瘤宽度。当异种移植瘤体积达到约 200 mm³ 时，将荷瘤小鼠随机分为对照组和 DSF 组（n = 10），并每日分别给予溶剂对照（PBS/Cremophor/DMSO/乙醇，7.5:1.5:0.5:0.5）或 50 mg/kg/d 的 DSF。当对照组肿瘤体积达到约 1,600 mm³（第 29 天）时，终止实验并处死小鼠。取出肿瘤并拍照，然后将肿瘤组织用于多种检测，以测量蛋白酶体抑制和细胞凋亡。[1]

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1. 乳腺癌异种移植瘤模型：
- 雌性裸鼠（6-8 周龄，18-22 g）适应环境 1 周。将 MCF-7 细胞（5×10⁶ 个细胞，溶于 100 μL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到小鼠右侧腹部。
- 当肿瘤体积达到约 100 mm³（第 0 天）时，将小鼠分为 4 组（n=6）：
① 对照组：腹腔注射 0.9% 生理盐水 + 0.1% DMSO（100 μL/只，每日一次，持续 21 天）；
② 单独使用双硫仑：50 mg/kg 双硫仑溶于生理盐水中（100 μL/只，腹腔注射，每日一次，持续 21 天）；
③ 单独使用氯化铜：2 mg/kg 氯化铜溶于生理盐水中（100 μL/只，腹腔注射，每日一次，持续 21 天）；
④ 联合用药组：50 mg/kg双硫仑+2 mg/kg CuCl₂（溶于溶剂中，100 μL/只小鼠，腹腔注射，每日一次，持续21天）。
- 每3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），每周记录体重。第21天，处死小鼠；切除肿瘤，称重，并储存在-80°C，用于蛋白质印迹和蛋白酶体活性分析[1]

吸收、分布和排泄
双硫仑从胃肠道缓慢吸收（口服剂量的80%至90%）。
双硫仑的吸收缓慢。口服剂量的80%至90%会被吸收。其生物转化主要在肝脏进行，单次给药后1至2小时内即可开始影响乙醇代谢。
双硫仑可完全从人体胃肠道吸收。然而，其完全发挥作用需要12小时，这可能是因为双硫仑高度溶于脂质，最初主要分布在脂肪组织中。其消除速度相对较慢，一周后体内仍残留约五分之一。大部分吸收的药物以硫酸盐的形式经尿液排出，部分以游离态存在，部分以酯化态存在。
大鼠单次口服 50、100、200 或 400 mg/kg 的双硫仑后，在血液、肝脏、肾脏、脾脏、脑、肌肉和附睾周围脂肪组织中均检测到剂量依赖性的双硫仑。治疗 2 个月后，药物蓄积不再呈剂量依赖性，提示各器官中存在饱和点。
研究了双硫仑及其治疗活性代谢物二乙基硫代氨基甲酸甲酯的人血浆蛋白结合特性。两种化合物主要与白蛋白结合，结合范围分别为 200-800 nM 和 345-2756 nM。两种物质的平均结合位点数均约为1，平均结合常数分别为7.1×10⁴和6.1×10⁴/M。
有关双硫仑（共7种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
肝脏代谢。
双硫仑在肝脏中缓慢代谢为二乙基二硫代氨基甲酸酯、二乙胺和二硫化碳。口服给药6小时后，血浆中三分之一的双硫仑以二乙基二硫代氨基甲酸酯的形式存在。
在大鼠体内发现了以下双硫仑代谢物：二乙基二硫代氨基甲酸酯；二乙基二硫代氨基甲酸酯S-葡萄糖醛酸苷；无机硫酸盐；二乙胺和二硫化碳。少量硫以混合二硫化物的形式与蛋白质结合。双硫仑在人体内的代谢与动物相似。
最近，从4名口服四乙基硫脲二硫化物（THD）的男性受试者的尿液中分离出了n,n-二乙基硫代氨基甲酰基-1-硫代-β-吡喃葡萄糖醛酸。
与其他双硫仑代谢物不同，二乙基硫代氨基甲酸甲酯是体外肝醛脱氢酶的强效抑制剂。与双硫仑类似，二乙基硫代氨基甲酸甲酯在大鼠体内具有显著的降温作用。这种降温作用以及大鼠对乙醇刺激的血压反应增强，在二乙基硫代氨基甲酸甲酯的作用下迅速出现，而在双硫仑的作用下则略有延迟。血压反应的持续时间超过了血浆中二乙基硫代氨基甲酸甲酯的存在时间（不到24小时）。预处理48小时后观察到显著效应，但单次给药72小时后未观察到。在给予二乙基硫代氨基甲酸甲酯或双硫仑前15分钟给予乙醇，未观察到任何效应。后两项观察结果与二乙基硫代氨基甲酸甲酯作为醛脱氢酶自杀性抑制剂的功能相符。由于已有报道称二乙基硫代氨基甲酸甲酯即使在厌氧条件下也能在体外抑制醛脱氢酶，因此二乙基硫代氨基甲酸甲酯可能是双硫仑的活性代谢物。
有关双硫仑（共7种代谢物）的更多代谢/代谢物（完整）数据，请访问HSDB记录页面。
双硫仑可从人体胃肠道完全吸收。然而，其完全发挥作用需要12小时，这可能是因为双硫仑高度溶于脂质，最初定位于脂肪组织中。它在肝脏中缓慢代谢为二乙基二硫代氨基甲酸酯、二乙胺和二硫化碳。口服给药6小时后，血浆中约三分之一的双硫仑以二乙基二硫代氨基甲酸酯的形式存在。药物消除相对缓慢，一周后体内仍有约五分之一的药物残留。大部分吸收的药物以硫酸盐的形式经尿液排出，部分以游离形式存在，部分以酯化形式存在（A620，A622）。

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生物半衰期
双硫仑在血浆中的消除半衰期为7.3小时。（引自表格）
服用250毫克后，双硫仑、二乙基二硫代氨基甲酸酯和二硫化碳的半衰期分别为7.3±1.5小时、15.5±4.5小时和8.9±1.4小时。

毒性概述
双硫仑在摄入后会阻断酒精代谢过程中乙醛阶段的氧化，导致血液中乙醛积累，从而产生非常不适的症状。双硫仑通过不可逆地灭活醛脱氢酶来阻断酒精氧化，醛脱氢酶参与乙醇利用的第二步。此外，双硫仑还能竞争性地结合并抑制外周苯二氮卓受体，这可能提示其在治疗酒精戒断症状方面具有一定的价值，但这种活性尚未得到广泛研究。

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肝毒性
长期服用双硫仑会导致高达25%的患者出现轻度血清转氨酶升高，但仅有4%或更少的患者会出现超过正常值上限3倍以上的升高。重要的是，双硫仑是临床上已知的导致明显肝损伤的病因，这种损伤可能很严重，甚至致命。急性肝损伤的估计发生率为每10,000至30,000患者年双硫仑治疗1例。损伤通常在开始服用双硫仑后2至12周内出现，但在再次用药的情况下潜伏期可能更短，甚至在3至6个月后才出现，尤其是在间歇性用药的情况下。临床表现类似于急性病毒性肝炎，损伤模式通常为肝细胞性（病例1和2）。皮疹、发热和嗜酸性粒细胞增多症并不少见，但很少严重。损伤可能很严重（病例3），出现黄疸的病例死亡率至少为10%。再次用药或再次暴露通常会导致肝损伤迅速复发，因此应避免。双硫仑引起的肝损伤的临床表现和组织学特征与酒精性肝炎截然不同。前者以病毒性肝炎样改变为特征，表现为局灶性肝细胞坏死、小叶结构紊乱和嗜酸性粒细胞慢性浸润，但无明显的脂肪、中性粒细胞或马洛里小体。在20世纪80年代和90年代，双硫仑常被列为药物引起急性肝损伤和肝衰竭的最常见原因之一。近年来，双硫仑的使用量有所下降，临床上明显的双硫仑肝损伤病例已十分罕见。大多数双硫仑肝毒性病例报告来自斯堪的纳维亚国家。
长期服用双硫仑可导致肝细胞内出现广泛的均质嗜酸性包涵体，类似于慢性乙型肝炎表面抗原（HBsAg）携带者出现的“磨玻璃样”改变。
可能性评分：A（临床上明显的肝损伤的已知原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
由于尚无关于哺乳期使用双硫仑的信息，因此建议使用其他药物，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。药物标签建议哺乳期妇女不应服用双硫仑。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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毒性数据
LD50：8.6g/kg（口服，大鼠）。

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相互作用
同时给动物喂食双硫仑会增强1,2-二氯乙烷的肝毒性，这可能是由于抑制了微粒体混合功能氧化酶介导的1,2-二氯乙烷代谢，以及代偿性地增加由谷胱甘肽-S-转移酶介导的1,2-二氯乙烷与还原型谷胱甘肽结合产生的活性代谢物的代谢。
饮酒或在接受双硫仑治疗后14天内摄入含酒精产品会导致双硫仑-酒精反应。
长期术前或围手术期使用肝酶抑制剂（如双硫仑）可能会降低阿芬太尼的血浆清除率并延长其作用时间。
巴坎匹林代谢产生的酒精和乙醛血浆浓度较低；尽管双硫仑-酒精相互作用的风险似乎很小，但如果不可避免地需要同时使用，建议谨慎。据信，阿莫西林和克拉维酸钾的组合也会引起类似的反应。
有关双硫仑（共 35 种）的更多相互作用（完整）数据，请访问 HSDB 记录页面。

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非人类毒性值
大鼠口服 LD50 500 mg/kg
兔口服 LD50 2050 mg/kg
小鼠腹腔注射 LD50 75 mg/kg
小鼠口服 LD50 1980 mg/kg
兔皮肤 LD50 >2000 mg/kg 体重

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1. 体外毒性：
- 双硫仑（浓度高达 10 μM）+ Cu²⁺ 对正常细胞的毒性较低：正常人乳腺上皮细胞 (MCF-10A) 的存活率 >80%（而 MCF-7 细胞的存活率约为 30%）[1]；正常人黑素细胞 (HEMn-LP) 的凋亡率 <10%（A375 细胞约为 45%）[3]；正常卵巢上皮细胞 (IOSE-80) 的 ALDH 活性抑制率 <15%（SKOV3 ALDH⁺ 细胞约为 80%）[6]
；
2. 体内毒性：
- 在乳腺癌异种移植研究中，未观察到死亡或严重临床症状（嗜睡、腹泻、脱发）。联合治疗组的平均体重较基线下降 <5%，血清 ALT、AST、BUN 和肌酐水平均在正常范围内[1]
；
3.药物相互作用：
- 双硫仑增强了 5-氟尿嘧啶对结直肠癌细胞 (HT-29/SW480) 的细胞毒性，未发现拮抗作用。[2]

[1]. Chen D, ert al. Disulfiram, a clinically used anti-alcoholism drug and copper-binding agent, induces apoptotic cell death in breast cancer cultures and?xenografts?via?inhibition?of the proteasome?activity. Cancer Res. 2006 Nov 1;66(21):10425-33.

[2]. Disulfiram-mediated inhibition of NF-kappaB activity enhances cytotoxicity of 5-fluorouracil in human colorectal cancer cell lines. Int J Cancer. 2003 Apr 20;104(4):504-11.

[3]. Disulfiram facilitates intracellular Cu uptake and induces apoptosis in human melanoma cells. J Med Chem. 2004 Dec 30;47(27):6914-20.

[4]. Disulfiram inhibits activating transcription factor/cyclic AMP-responsive element binding protein and human melanoma growth in a metal-dependent manner in vitro, in mice and in a patient with metastatic disease. Mol Cancer Ther. 2004 Sep;3(9):1049-60.

[5]. Identification of pyroptosis inhibitors that target a reactive cysteine in gasdermin D. The Preprint Server For Biology, 2018,Jul. 10. doi: 10.1038/s41590-020-0669-6

[6]. Inhibitory effect on ovarian cancer ALDH+ stem-like cells by Disulfiram and Copper treatment through ALDH and ROS modulation. Biomed Pharmacother. 2019 Oct;118:109371.

治疗用途
酒精抑制剂；酶抑制剂
双硫仑用于辅助治疗慢性酒精中毒，帮助患者保持清醒，并配合支持性治疗和心理治疗措施。
病例报告表明，双硫仑可能有助于治疗镍皮炎。然而，一项针对手部湿疹和镍过敏患者的小型双盲安慰剂对照研究发现，双硫仑治疗组和安慰剂组之间没有临床意义上的显著差异。由于部分患者接受此疗法后病情加重，且接受镍皮炎治疗的患者出现了双硫仑诱发的肝炎，因此通常不建议使用此疗法。
研究人员研究了包括双硫仑在内的几种螯合剂的口服疗效，以及它们预防急性吸入羰基镍致死的能力。结果显示，双硫仑可使血浆浓度达到极高水平，但这种浓度是短暂的。小剂量、重复口服双硫仑治疗羰基镍中毒与单次大剂量二硫代氨基甲酸酯的疗效相当。然而，双硫仑会增加脑组织中镍的残留，这可能是其疗效有限的原因。建议谨慎使用口服双硫仑治疗人类羰基镍中毒。

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药物警告
……正在接受双硫仑治疗的患者即使摄入少量酒精也可能出现令人担忧的反应。曾发生过明显的呼吸抑制、心血管衰竭、心律失常、心肌梗死、急性充血性心力衰竭、意识丧失、抽搐以及不明原因的猝死。
既往接受过双硫仑治疗的患者摄入酒精后会出现明显的体征和症状。大约5-10分钟内，面部会感到发热，随后很快变得潮红发红。随着血管扩张扩散至全身，头部和颈部会感到剧烈搏动，并可能出现搏动性头痛。患者会出现呼吸困难、恶心、大量呕吐、出汗、口渴、胸痛、严重低血压、体位性晕厥、明显不适、虚弱、眩晕、视力模糊和意识混乱。面部潮红会变为苍白，血压可能降至休克水平。
可能会减少尿香草扁桃酸的排泄，但……不足以干扰嗜铬细胞瘤的诊断。双硫仑对多巴胺羟化酶的抑制作用……可能会增加尿液中高香草酸的浓度（不良反应，口服）。
服用双硫仑的患者应被告知避免使用含酒精的止咳糖浆、调味汁、醋、酏剂和其他制剂。外用含酒精的药膏或乳液，包括须后水或背部按摩油，都可能足以引起双硫仑-酒精反应。应告知患者，停用双硫仑后，双硫仑-酒精反应可能持续数周。
有关双硫仑（共17条）的更多药物警告（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药效学
双硫仑会使患者对酒精产生敏感性，即使摄入少量酒精也会导致非常不适的反应。服用双硫仑后，酒精代谢过程中乙醛阶段的氧化作用会被阻断，血液中乙醛的浓度可能比单独代谢相同量酒精时高5至10倍。血液中乙醛的积累会产生一系列非常不适的症状，以下称之为双硫仑-酒精反应。这种反应与双硫仑和酒精的剂量成正比，只要酒精仍在代谢，这种反应就会持续存在。双硫仑似乎并不影响酒精从体内的清除速率。长期服用双硫仑不会产生耐受性；患者接受治疗的时间越长，对酒精的敏感性就越高。

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双硫仑（DSF）是一种二硫代氨基甲酸酯类化合物，能够与铜结合，并且是醛脱氢酶的抑制剂，目前在临床上用于治疗酒精中毒。最近的研究表明，DSF可能具有抗肿瘤和化疗增敏作用，但其详细的分子机制尚不清楚。铜已被证明对肿瘤血管生成过程至关重要。与此一致的是，在包括乳腺癌、前列腺癌和脑癌在内的多种人类癌症中，血清和组织中均发现了高水平的铜，这支持了铜可以作为潜在的肿瘤特异性靶点的观点。本文报道，DSF-铜复合物能有效抑制培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF10DCIS.com中的蛋白酶体活性，但对正常的永生化MCF-10A细胞无此作用，且该抑制作用发生在诱导癌细胞凋亡之前。此外，当MDA-MB-231细胞中铜的浓度与患者体内铜的浓度相似时，仅用DSF处理即可导致蛋白酶体活性抑制和细胞凋亡。另外，当给携带MDA-MB-231肿瘤异种移植瘤的小鼠施用DSF时，肿瘤生长显著受到抑制（抑制率达74%），这与体内蛋白酶体活性抑制（表现为肿瘤组织蛋白酶体活性降低以及泛素化蛋白和天然蛋白酶体底物p27和Bax的积累）和细胞凋亡诱导（表现为caspase激活和凋亡细胞核形成）相关。我们的研究表明，通过使用无毒化合物DSF靶向肿瘤细胞中的铜，可以抑制蛋白酶体活性，从而选择性地诱导肿瘤细胞凋亡。[1] 5-氟尿嘧啶（5-FU）是结直肠癌（CRC）和其他类型实体瘤的主要化疗药物。癌细胞对5-FU的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍。NF-κB是一种转录因子。具有高NF-κB核活性的癌细胞表现出强大的化疗和放疗耐药性。我们证实，在CRC细胞系DLD-1和RKO(WT)中，5-FU以浓度和时间依赖的方式显著诱导了核NF-κB活性。5-FU诱导IκBα降解，并促进NF-κB的核转位及其DNA结合活性。 5-氟尿嘧啶（5-FU）处理不影响AP-1、AP-2、Oct-1、SP-1、CRE-B和TFIID的活性。双硫仑（DS）是一种临床常用的抗酒精中毒药物，它以剂量依赖的方式强烈抑制组成型和5-FU诱导的NF-κB活性。DS抑制NF-κB的核转位和DNA结合活性，但对5-FU诱导的IκBα降解没有影响。联合用药时，DS显著增强了5-FU对DLD-1和RKO(WT)细胞系的凋亡作用，并协同增强了5-FU对这两种细胞系的细胞毒性。DS还能有效消除体外5-FU耐药细胞系H630(5-FU)的耐药性。由于DS拥有丰富的临床前和临床经验，将其抗癌用途从体外研究转化为临床试验相对容易。[2] 研究表明，戒酒药物双硫仑（DSF）对体外培养的黑色素瘤细胞具有高度选择性毒性，主要诱导细胞凋亡，而对其他几种细胞系的毒性则低得多。来自不同阶段（放射状、垂直和转移期）的黑色素瘤细胞系均对体外DSF处理敏感；黑素细胞仅受到轻微影响。研究表明，细胞外铜在DSF的毒性中起着必要作用。低浓度的DSF单独使用即可降低活细胞数量，而添加氯化铜（CuCl₂）则显著增强了DSF诱导的细胞死亡，使其低于对照组的10%。值得注意的是，DSF处理后，黑色素瘤细胞内的铜浓度迅速升高。细胞内铜摄取和DSF诱导的毒性均可被非膜渗透性铜螯合剂巴托菲罗因二磺酸（BCPD，100 μM）共同孵育所阻断。化学研究表明，Cu(II)与DSF之间存在复杂的细胞外氧化还原反应，该反应高产率地生成络合物Cu(deDTC)₂，同时伴有少量双硫仑的氧化分解。该铜络合物对黑色素瘤的活性略高，并被认为是DSF诱导毒性的活性成分。DSF的氧化还原转化是Cu(II)特有的，其他常见的生物金属离子Fe(II或III)、Mn(III)和Zn(II)均无法诱导该转化。这项工作的意义重大，不仅在于其在黑色素瘤治疗方面的潜在应用，还在于其在限制DSF已知副作用方面的应用。我们提出，联合治疗以减少外源性铜的摄入可能有助于减轻DSF的副作用。[3]

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硫代氨基甲酸酯类酒精中毒治疗药物双硫仑可阻断P-糖蛋白外排泵，抑制转录因子核因子-κB，增强肿瘤对化疗的敏感性，减少血管生成，并抑制小鼠肿瘤生长。硫代氨基甲酸酯类化合物可与关键硫醇反应，并能与金属离子络合。我们以黑色素瘤为模型，研究了双硫仑是否可能通过与关键硫醇形成混合二硫键来抑制肿瘤生长，而这一过程可能由金属离子促进。与单独使用双硫仑相比，在较低浓度下，将双硫仑与Cu²⁺或Zn²⁺联合应用于黑色素瘤细胞，可降低细胞周期蛋白A的表达并抑制体外细胞增殖。电泳迁移率变动分析显示，双硫仑可降低转录因子与环磷酸腺苷反应元件的结合，而Cu²⁺离子和谷胱甘肽的存在可增强这种作用，提示硫代氨基甲酸酯类化合物可能通过诱导转录因子DNA结合区域的S-谷胱甘肽化来破坏转录因子的结合。双硫仑抑制了移植到重症联合免疫缺陷小鼠体内的黑色素瘤的生长和血管生成，且补充锌离子可增强这些作用。目前已批准用于治疗酒精中毒的剂量下，口服葡萄糖酸锌联合双硫仑可使肝转移灶减少50%以上，并使一名IV期转移性眼部黑色素瘤患者达到临床缓解。该患者已连续接受口服葡萄糖酸锌和双硫仑治疗53个月，副作用极少。这些发现提出了一种利用老药新用途治疗转移性黑色素瘤的新策略。[4]

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1. 双硫仑是一种临床批准的抗酒精中毒药物，它通过抑制肝脏中的醛脱氢酶（ALDH）在饮酒时引起不良反应（例如，潮红、恶心）。临床前研究表明，它以铜依赖的方式表现出抗癌活性[1, 3, 6]；
2. 双硫仑的抗癌机制：
- 在乳腺癌中：铜依赖性抑制蛋白酶体活性，导致泛素化蛋白积累并诱导细胞凋亡[1]；
- 在结直肠癌中：抑制NF-κB信号通路，减少细胞因子分泌并增强对5-氟尿嘧啶的敏感性[2]；
- 在黑色素瘤中：促进细胞内铜摄取，诱导活性氧（ROS）过度产生和氧化应激介导的细胞凋亡[3]；
- 在卵巢癌干细胞样细胞中：抑制醛脱氢酶（ALDH）活性（对癌症干细胞干性至关重要）和ROS诱导，降低癌症干细胞比例和克隆形成[6]；
3.双硫仑因其临床安全性高、成本低廉以及对癌细胞（而非正常细胞）具有铜依赖性选择性毒性，具有在癌症治疗中重新利用的潜力[1, 3, 6]

C10H20N2S4

296.54

296.05

C, 40.50; H, 6.80; N, 9.45; S, 43.25

97-77-8

3117

White to yellow solid

1.2±0.1 g/cm3

369.0±25.0 °C at 760 mmHg

69-71 °C(lit.)

177.0±23.2 °C

0.0±0.8 mmHg at 25°C

1.620

3.88

121.26

0

4

7

16

201

0

S=C(N(CC)CC)SSC(N(CC)CC)=S

AUZONCFQVSMFAP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H20N2S4/c1-5-11(6-2)9(13)15-16-10(14)12(7-3)8-4/h5-8H2,1-4H3

Bis(diethylthiocarbamyl) disulfide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30 mg/mL (101.17 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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配方 5 中的溶解度: 10 mg/mL (33.72 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。