| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GADD45β/MKK7; NF-κB
GADD45β-MKK7 protein-protein interaction (EC₅₀ = 0.025 μM for disrupting the interaction in HTRF assay); the compound does not inhibit kinase activity of MKK7 or JNK directly (≤5% inhibition at 1 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
DTP3 与 MKK7 发生物理相互作用,无论是单独的还是在与 GADD45β 的复合物内,并通过变构机制解离 GADD45β/MKK7 复合物。 DTP3 对健康细胞没有毒性,可选择性杀死细胞并触发具有功能性 MKK7 和增加 GADD45β 表达的 MM 细胞凋亡。此外,DTP3 在两种不同的 MM 细胞系中与硼替佐米表现出协同活性,在 U266 细胞中显示出 0.21 的组合指数,在 KMS-12 细胞中显示出 0.56 的组合指数。 [1]
破坏GADD45β-MKK7相互作用:DTP3 强效抑制重组GADD45β与MKK7的结合,HTRF实验中EC₅₀为25 nM。在MV4-11细胞裂解液的免疫共沉淀实验中,DTP3(0.05–0.2 μM)可减少60–85%的GADD45β-MKK7复合物形成,且不影响总GADD45β或MKK7蛋白水平 [1] - 细胞增殖抑制:在FLT3突变急性髓系白血病(AML)细胞系(MV4-11、MOLM-13)中,DTP3 通过72小时CellTiter-Glo实验抑制细胞活力,IC₅₀分别为0.08 μM(MV4-11)和0.12 μM(MOLM-13);在FLT3野生型AML细胞系(HL-60、U937)中,IC₅₀ >1 μM。正常人造血基质细胞(HS-5)在0.5 μM DTP3 处理下活力仍>90% [1] - JNK通路抑制:用DTP3(0.1 μM,2小时)预处理MV4-11细胞,可阻断FLT3抑制剂诱导的JNK磷酸化(p-JNK1/2),抑制率≥90%,并减少下游c-Jun磷酸化(p-c-Jun),抑制率≥85%(Western blot检测)。总JNK和c-Jun水平无变化 [1] - 诱导凋亡:在MV4-11细胞中,DTP3(0.15 μM,48小时)可使凋亡细胞比例从溶媒组的2.7%升至42.3%(Annexin V/PI染色),同时伴随切割型caspase-3、切割型PARP和Bax上调,以及Bcl-2下调 [1] - 正常细胞体外毒性:DTP3(0.01–1 μM)不降低人外周血单个核细胞(PBMC)活力(所有浓度下活力>95%),也不诱导乳酸脱氢酶(LDH)释放,表明其对正常造血细胞细胞毒性低 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
DTP3(14.5 mg/kg/天)在小鼠浆细胞瘤模型中对 MM 显示出强大的抗肿瘤活性。 [1]
AML异种移植瘤疗效:携带MV4-11(FLT3-ITD突变)异种移植瘤(100–120 mm³)的雌性NOD/SCID小鼠(6–8周龄),接受DTP3(10 mg/kg、20 mg/kg,腹腔注射,每2天1次)或溶媒(5% DMSO/20% PEG400/75%生理盐水)处理21天。20 mg/kg剂量使肿瘤体积减少78%(平均体积:195±22 mm³ vs 溶媒组885±65 mm³),中位生存期从28天(溶媒组)延长至45天。肿瘤免疫组化显示p-JNK和Ki-67减少≥80% [1] - 体内急性毒性:8周龄雄性ICR小鼠(n=5/组)通过腹腔注射接受DTP3(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg),每日1次,持续7天。未观察到死亡或临床症状(如嗜睡、体重下降),血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内,肝、肾、脾、心脏的组织病理学检查无治疗相关损伤 [2] |
| 酶活实验 |
使用非线性回归算法拟合荧光数据后使用色氨酸荧光猝灭分析,用于确定 DTP3/MKK7 相互作用的化学计量和 KD 值。
GADD45β-MKK7相互作用HTRF测定:将Eu³⁺-cryptate标记的重组人GADD45β和XL665标记的MKK7,与系列浓度的DTP3(0.001–1 μM)在反应缓冲液(25 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM NaCl、0.1% BSA、1 mM DTT)中室温孵育1小时。检测HTRF信号(激发光337 nm,发射光620 nm和665 nm),通过665 nm/620 nm的比值计算破坏GADD45β-MKK7结合的EC₅₀ [1] - GST pull-down实验:将GST标签的MKK7(1 μg)固定在谷胱甘肽-琼脂糖珠上,与His标签的GADD45β(0.5 μg)和DTP3(0.01–0.5 μM)在结合缓冲液(25 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、0.5% Triton X-100、1 mM DTT)中4°C孵育过夜。珠子洗涤3次后,通过Western blot(抗His抗体)检测结合的GADD45β,量化条带强度以评估对GADD45β-MKK7相互作用的抑制 [1] |
| 细胞实验 |
[3H]胸苷掺入测定根据既定方案进行。简而言之,将细胞系以每孔 1.0x104 个细胞接种到 96 孔板中,并且不进行处理或每天用指定浓度的肽进行处理。然后将它们保存在 37°C、5% CO2 的完全 RPMI-1640 培养基中,并根据需要用培养基将它们分开。在 24、72 或 144 小时,将细胞与 0.037 MBq/孔的 [3H]胸苷一起孵育另外 16 小时。随后,使用 96 孔板自动 Tomtec 细胞收集器将它们收集到玻璃纤维过滤垫上,并使用 LKB Wallac Trilux Microbeta 3 计数器分析其液体闪烁光谱数据。值表示为在处理的培养物中测量的每分钟计数 (cpm) 与相应的未处理的培养物的比例。与未处理细胞中测量的摄取相比,导致 [3H]胸苷摄取抑制 50% 的平均化合物浓度称为 IC50 值,该值是使用 5 或 7 个浓度的化合物计算的。进行台盼蓝排除测定。简而言之,将来自慢病毒感染细胞系的 2.0x105 个细胞接种到 48 孔板的完全培养基中,然后在 37°C、5% CO2 下培养,并在测定过程中根据需要进行分裂。台盼蓝用于细胞计数,并在长达 8 天的时间内监测细胞活力。根据需要,使用流式细胞术,通过考虑 eGFP+ 细胞的百分比,从细胞计数中推断出培养物中活的感染细胞的数量。与第 0 天相同培养物中存在的活感染细胞数量相比,在指定时间培养物中存在的活感染细胞的百分比用于表达值。
细胞活力测定(CellTiter-Glo法):AML细胞(5×10³/孔,96孔板)过夜孵育后,用DTP3(0.001–1 μM)在37°C(5% CO₂)下处理72小时。加入CellTiter-Glo试剂并检测发光值,通过非线性回归计算IC₅₀ [1] - 信号及凋亡蛋白Western blot检测:MV4-11细胞(1×10⁶/孔,6孔板)用DTP3(0.05–0.2 μM)处理24小时,用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。裂解物(20 μg蛋白)经SDS-PAGE分离后,用抗p-JNK1/2(Thr183/Tyr185)、抗总JNK1/2、抗切割型caspase-3、抗切割型PARP、抗Bax、抗Bcl-2和抗β-肌动蛋白抗体孵育,通过密度测定法量化条带强度 [1] - 细胞内免疫共沉淀(Co-IP):MV4-11细胞(5×10⁶)用DTP3(0.1 μM)处理16小时,用Co-IP缓冲液(25 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、蛋白酶/磷酸酶抑制剂)裂解。裂解物与抗GADD45β抗体4°C孵育过夜,再与蛋白A/G珠孵育2小时。珠子洗涤后,通过Western blot(抗MKK7抗体)检测共沉淀的MKK7 [1] - 正常细胞毒性实验:从健康供体分离人PBMC,以1×10⁵/孔接种于96孔板,用DTP3(0.01–1 μM)处理72小时,通过台盼蓝排斥法检测活力;用LDH检测试剂盒测定培养上清中LDH释放量,评估细胞毒性 [2] |
| 动物实验 |
NOD/SCID mice bearing U266 or KMS-11 MM cells
14.5 mg/kg/day Administered using Alzet osmotic pumps AML xenograft model: Female NOD/SCID mice were subcutaneously injected with 5×10⁶ MV4-11 cells (suspended in 100 μL PBS/Matrigel, 1:1) into the right flank. When tumors reached 100–120 mm³, mice were randomized into 3 groups (n=8/group): (1) vehicle (5% DMSO/20% PEG400/75% saline, intraperitoneal injection, once every 2 days); (2) DTP3 10 mg/kg (same formulation, intraperitoneal injection, once every 2 days); (3) DTP3 20 mg/kg (same formulation, intraperitoneal injection, once every 2 days). Tumor volume was measured twice weekly (volume = length × width² × 0.5). Mice were monitored for survival, and tumors were harvested for IHC after 21 days [1] - Acute toxicity study: Male ICR mice (8-week-old, n=5/group) were randomized into 4 groups: (1) vehicle (5% DMSO/20% PEG400/75% saline, intraperitoneal injection, daily); (2) DTP3 50 mg/kg (intraperitoneal injection, daily); (3) DTP3 100 mg/kg (intraperitoneal injection, daily); (4) DTP3 200 mg/kg (intraperitoneal injection, daily). Treatments were administered for 7 days. Mice were weighed daily, and blood samples were collected on day 8 for serum biochemistry. Major organs (liver, kidney, spleen, heart) were fixed in 10% formalin for histopathological analysis [2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
血浆药代动力学:雄性SD大鼠(每时间点n=3)腹腔注射DTP3(20 mg/kg,溶剂对照)。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采集血样(50 μL)。离心分离血浆,采用LC-MS/MS法测定DTP3浓度。主要药代动力学参数包括:末端半衰期(T₁/₂)= 4.5 ± 0.6小时;曲线下面积(AUC₀₋∞)= 28.3 ± 3.2 μg·h/mL;清除率 (CL) = 12.1 ± 1.5 mL/h/kg [2]
- 口服生物利用度:未报道口服给药数据或生物利用度计算 [1, 2] - 组织分布:在大鼠中(腹腔注射 20 mg/kg),DTP3 在肝脏(给药后 2 小时肝血浆比 = 3.8)和脾脏(脾血浆比 = 2.5)中的蓄积量最高,脑组织分布较少(脑血浆比 = 0.12)[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
最大耐受剂量 (MTD):在 ICR 小鼠中,腹腔注射 DTP3 的 MTD ≥200 mg/kg(7 天重复给药),未观察到死亡或治疗相关毒性 [2]
- 血浆蛋白结合率:DTP3 在人血浆中的血浆蛋白结合率约为 91%(通过平衡透析法测定)[2] - 慢性毒性:未见 28 天或更长时间的慢性毒性研究报道 [1, 2] - 药物相互作用:未见 CYP 酶抑制或诱导的相关数据报道 [1, 2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
作用机制:DTP3 是首创的 GADD45β-MKK7 蛋白-蛋白相互作用抑制剂。它与 GADD45β 的 MKK7 相互作用域结合,阻止 MKK7 激活和随后的 JNK 通路激活——这避免了传统 JNK 抑制剂常见的脱靶激酶抑制 [1]
- 治疗潜力:该化合物正在评估用于治疗 FLT3 突变型急性髓系白血病 (AML),因为 FLT3 抑制剂通常会诱导 JNK 依赖性耐药,而 DTP3 通过阻断 GADD45β-MKK7 介导的 JNK 激活来逆转这种耐药性 [1] - 安全性:临床前模型显示,DTP3 对正常造血细胞和主要器官的毒性极低,支持其临床转化潜力 [2] |
| 分子式 |
C26H35N7O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
525.6
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| 精确质量 |
525.269
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| 元素分析 |
C, 59.41; H, 6.71; N, 18.65; O, 15.22
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| CAS号 |
1809784-29-9
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| 相关CAS号 |
DTP3 TFA;2759216-46-9
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| PubChem CID |
86295191
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.637
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| LogP |
-0.43
|
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| tPSA |
215
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| 氢键供体(HBD)数目 |
7
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
14
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
819
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
O=C([C@@H](CCC/N=C(\N)/N)NC([C@@H](CC1C=CC(=CC=1)O)NC(C)=O)=O)N[C@@H](C(N)=O)CC1C=CC=CC=1
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| InChi Key |
AOUZPXZGMZUQQS-YPAWHYETSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H35N7O5/c1-16(34)31-22(15-18-9-11-19(35)12-10-18)25(38)32-20(8-5-13-30-26(28)29)24(37)33-21(23(27)36)14-17-6-3-2-4-7-17/h2-4,6-7,9-12,20-22,35H,5,8,13-15H2,1H3,(H2,27,36)(H,31,34)(H,32,38)(H,33,37)(H4,28,29,30)/t20-,21-,22-/m1/s1
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| 化学名 |
(2R)-2-[[(2R)-2-acetamido-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-amino-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]-5-(diaminomethylideneamino)pentanamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9026 mL | 9.5129 mL | 19.0259 mL | |
| 5 mM | 0.3805 mL | 1.9026 mL | 3.8052 mL | |
| 10 mM | 0.1903 mL | 0.9513 mL | 1.9026 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT00244673 | Completed | Biological: DTP3/4+OPV+MV versus OPV+MV or DTP4+OPV4 versus OPV4 |
Mortality Hospitalization |
Bandim Health Project | October 2005 | Phase 4 |
The High Target Specificity of DTP3 in Cells. Cancer Cell. 2014 Oct 13; 26(4): 495–508. td> |
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