| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Autophagy
EACC targets the autophagosome-specific SNARE protein Stx17, selectively inhibiting its translocation onto autophagosomes without affecting RABs, tethers, or lysosomal SNAREs; this prevents the interaction of Stx17 with LC3 and blocks autophagosome-lysosome fusion. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
EACC不影响内溶酶体活性，但会抑制自噬体-溶酶体融合[1]。EACC通过阻止SNARE蛋白Stx17装载自噬体，从而限制自噬体融合[1]。RAB蛋白、系链蛋白和溶酶体功能性SNARE蛋白不受EACC影响，但EACC会阻止它们与LC3和Stx17相互作用[1]。
自噬是一种进化上保守的细胞内溶酶体降解途径。它是一个多步骤过程，包括双层膜自噬体的从头形成，自噬体捕获胞质成分（货物），最终与溶酶体融合，货物在溶酶体中被降解，产生的更简单的生物分子被回收利用。除了自噬功能外，一些自噬相关蛋白还参与其他囊泡运输途径的调控。因此，开发不干扰内体-溶酶体整体运输的特异性自噬调节剂面临着独特的挑战。本文报道了一种新型小分子EACC，它通过阻断自噬体-溶酶体融合来抑制自噬通量。值得注意的是，与其他后期抑制剂不同，EACC对溶酶体特性或内吞介导的EGF受体降解均无影响。EACC影响SNARE蛋白Stx17和SNAP29在自噬体上的转位，但不影响自噬体的形成。EACC处理还能降低Stx17与HOPS亚基VPS33A及其同源溶酶体R-SNARE蛋白VAMP8的相互作用。有趣的是，EACC的这种作用虽然相当显著，但却是可逆的，因此EACC可作为研究自噬体SNARE蛋白运输的工具。我们的研究结果提出了一种通过抑制自噬体SNARE蛋白的活性来阻断自噬通量的新方法。 体外研究表明，EACC通过阻断Stx17加载到自噬体上，有效抑制自噬，阻止自噬体与溶酶体的融合，而不影响溶酶体酸化、一般的内体-溶酶体运输或内吞作用介导的EGF受体降解。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，EACC 已被用于动物模型中，以研究自噬在各种生理和病理过程中的作用，尽管具体的体内疗效数据主要来源于基于细胞的研究，并且该化合物被用作研究自噬机制的工具。
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| 酶活实验 |
体外自噬测定包括用 EACC 处理细胞，并通过在有或无溶酶体抑制剂（例如，巴弗洛霉素 A1）的情况下测量 LC3-II 的积累来监测自噬通量，并通过 Western 印迹法检测 LC3-II 和 p62 水平，以及使用 GFP-LC3 或 RFP-GFP-LC3 报告系统的荧光显微镜来量化自噬抑制。
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| 细胞实验 |
CellTiter-Glo 细胞活力检测 [1]
使用 CellTiter-Glo 细胞活力检测法监测化合物的毒性。计数 HeLa 细胞，并将等量细胞（1500 个细胞/孔）接种于 384 孔板中，培养基为生长培养基。次日，将浓度范围为 100 nM 至 100 μM 的 EACC 与饥饿培养基混合，加入细胞中，孵育 5 小时。5 小时后，向每个孔中加入 CellTiter-Glo 试剂，并使用 Varioskan Flash 测量发光值。 EGFR 转运 [1] 将 HeLa 细胞接种于六孔板中，使其贴壁。次日，用 PBS 洗涤细胞，然后在 DMEM（无血清培养基）中饥饿 3 小时。用EACC预处理1小时后，用100 ng/ml EGF脉冲处理细胞，并在0、1、2和3小时间隔收集样本。 体外细胞培养研究采用多种细胞系（例如，HeLa细胞、MEF细胞、神经元细胞），用EACC处理细胞，通过LC3-II和p62蛋白质印迹法评估自噬抑制情况，通过电镜或荧光显微镜观察自噬体积累情况，并通过MTT或台盼蓝排除法检测细胞活力，以确定该化合物对细胞存活的影响。 |
| 动物实验 |
体内动物实验包括通过腹腔注射向小鼠或其他模型生物施用 EACC，然后通过蛋白质印迹法分析组织（如肝脏、大脑、肌肉）中的自噬标志物，并评估与神经退行性疾病、癌症或感染等疾病模型中自噬抑制相关的生理结果。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
EACC 是一种小分子抑制剂，对自噬途径具有特异性；它通常以粉末形式储存在 -20°C，并溶解在 DMSO 中用于体外研究，根据细胞类型和实验条件，推荐的自噬抑制浓度范围为 10 至 50 μM。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
EACC 的毒理学数据表明，它不会扰乱一般的内溶酶体运输或溶酶体酸化，这表明与晚期溶酶体靶向抑制剂相比，它具有选择性自噬抑制作用，且脱靶毒性降低；全面的体内毒性特征有限。
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| 参考文献 |
[1]. Vats S, et al. A reversible autophagy inhibitor blocks autophagosome-lysosome fusion by preventing Stx17 loading onto autophagosomes. Mol Biol Cell. 2019 Aug 1;30(17):2283-2295.
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| 其他信息 |
EACC介导的自噬通量阻断最显著的特征是Stx17向自噬体的装载受损。据我们所知，目前尚未报道其他自噬趋化因子能够选择性地阻止Stx17的转位，从而导致自噬体“丧失融合能力”。Stx17转位至完整自噬体的确切机制尚未完全阐明。最近一项研究表明，Stx17通过与小GTP酶IRGM和哺乳动物ATG8蛋白的相互作用被募集到自噬体（Kumar等，2018）。虽然我们尚未验证EACC是否影响Stx17与IRGM的相互作用，但我们认为，在有或无EACC的情况下鉴定Stx17结合蛋白可能有助于揭示EACC的靶点，并有助于鉴定其他可能参与Stx17募集至自噬体的辅助因子。此外，我们证实EACC的作用是可逆的。 EACC洗脱后，自噬通量阻断消失，因为Stx17能够转位至自噬体并参与进一步的融合事件。因此，由于其作用的可逆性，EACC可作为研究Stx17转运的有效工具。[1] 溶酶体抑制剂，例如BafA1和氯喹，常用于测定自噬通量。然而，这些处理方法并不理想，因为它们不仅会损害溶酶体功能，还会阻断所有其他溶酶体途径，包括内吞-溶酶体转运。我们的结果还表明，EACC的作用特异性针对自噬体，不影响溶酶体的pH值、功能或内吞转运。它也不影响溶酶体SNARE或RAB的定位。此外，即使是已知的早期自噬抑制剂，例如woumacil和3-甲基腺嘌呤，也缺乏特异性，因为它们会阻断所有磷脂酰肌醇3-激酶依赖的信号通路，从而导致一系列副作用。在这种情况下，使用EACC抑制Stx17转位，从而特异性地阻断自噬，可能是一种更精确的自噬通量实验方法。事实上，沉默Stx17的表达被认为是选择性抑制自噬通量的理想方法（Hegedus等人，2013）。总之，由于缺乏特异性自噬抑制剂，像EACC这样的分子可以填补该领域的空白。[1]
EACC是一种用于研究自噬机制以及自噬体-溶酶体融合在各种生物过程中的作用的研究化合物；它尚未获准用于临床，但可作为解析自噬分子机制（特别是SNARE蛋白在膜融合中的功能）的宝贵工具。 |
| 分子式 |
C13H11N3O6S2
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|---|---|
| 分子量 |
369.372940301895
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| 精确质量 |
369.008
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| 元素分析 |
C, 42.27; H, 3.00; N, 11.38; O, 25.99; S, 17.36
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| CAS号 |
864941-31-1
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| PubChem CID |
3704668
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| 外观&性状 |
Typically exists as Light yellow to yellow solid at room temperature
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| LogP |
3.3
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| tPSA |
187
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
526
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(OCC)NC(C1=C(NC(C2=CC=C([N+]([O-])=O)S2)=O)SC=C1)=O
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| InChi Key |
ISLJZDYAPAUORR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H11N3O6S2/c1-2-22-13(19)15-10(17)7-5-6-23-12(7)14-11(18)8-3-4-9(24-8)16(20)21/h3-6H,2H2,1H3,(H,14,18)(H,15,17,19)
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| 化学名 |
ethyl N-[2-[(5-nitrothiophene-2-carbonyl)amino]thiophene-3-carbonyl]carbamate
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| 别名 |
EACC; 864941-31-1; ethyl (2-(5-nitrothiophene-2-carboxamido)thiophene-3-carbonyl)carbamate; Ethyl N-[2-[(5-nitrothiophene-2-carbonyl)amino]thiophene-3-carbonyl]carbamate;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~16.88 mg/mL (~45.70 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.69 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.9 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7073 mL | 13.5366 mL | 27.0731 mL | |
| 5 mM | 0.5415 mL | 2.7073 mL | 5.4146 mL | |
| 10 mM | 0.2707 mL | 1.3537 mL | 2.7073 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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