| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
- EF5 is not a drug with a conventional pharmacological target. It is a substrate for one-electron reductases under hypoxia, primarily NADPH:cytochrome P450 oxidoreductase (CYPOR). The document does not provide IC50, Ki, or EC50 values for EF5 against specific enzymes. [1]
- EF5 binds covalently to cellular macromolecules (proteins, thiols) following hypoxia-dependent bioreduction, forming adducts recognized by the ELK3-51 monoclonal antibody. [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
- CYPOR 底物： 在 SiHa 和 HCT116 人肿瘤细胞系中，与亲本细胞相比，CYPOR 过表达导致乏氧条件下 [¹⁴C]-EF5 共价结合增加 2-4 倍。常氧条件下结合极少。[1]
- 与生物还原性前药代谢的相关性： 在 14 种人肿瘤细胞系中，EF5 的单电子还原（乏氧减去常氧）与乏氧激活前药替拉扎明和 CEN-209 的代谢还原呈强相关性。对于 CEN-209，R² = 0.64（P = 0.0005）；对于替拉扎明，R² = 0.65（P = 0.0005）。EF5 结合比单独 CYPOR 活性更能预测前药还原。[1] - 氧依赖性结合： [¹⁴C]-EF5 与细胞的结合高度依赖于氧浓度，常氧条件下结合可忽略，在乏氧条件下结合增加。结合速率与 pO₂ 成反比。[1][2] SiHa 和 HCT116 细胞系中 CYPOR 的过度表达导致 EF-5 结合增加 2 至 4 倍，替拉扎明和 CEN-209 的代谢减少，并增加 γH2AX 的产生。在 14 种缺氧肿瘤细胞系中，EF-5 结合减少与前药代谢显着相关 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 肿瘤缺氧成像（9L 胶质瘤模型）： 在携带腹壁上 9L 胶质瘤的大鼠中，静脉注射 EF5（100 µmol/kg，约 60 mg/kg）导致肿瘤内异质性结合。用 Cy3 标记的 ELK3-51 抗体染色的冰冻切片荧光显微镜检查显示，结合模式与慢性缺氧（扩散受限，距血管约 100-250 µm）和急性缺氧（更大、更均匀的区域）一致。光密度分析显示，单个肿瘤切片内亮区（缺氧）和暗区（常氧）之间的对比度高达 17 倍。[2]
- 与放射抵抗的相关性： 在同一 9L 模型中，EF5 结合高的肿瘤表现出显著的放射抵抗（1% 存活率时的氧增强比为 2.9）。空气呼吸大鼠的原位放射反应比安乐死大鼠（无氧合血流）更具抵抗力，且这种抵抗与 EF5 阳性的乏氧细胞相关。[2] - 与还原酶过表达的相关性（HCT116 异种移植物）： 在 CYPOR 过表达的 HCT116 肿瘤中，尽管乏氧分数（EF5 阳性细胞百分比）相似，但 EF5 结合（EF5 阳性细胞的平均荧光强度）显著高于野生型肿瘤。呼吸 10% 氧气增加了 EF5 结合，而高压氧（HBO， 2.25 atm 的 100% O₂）则减少了结合。[1] - 与 CEN-209 DNA 损伤的相关性： 在 HCT116 异种移植物中，EF5 结合（EF5 阳性细胞）与乏氧激活前药 CEN-209 诱导的 γH2AX 形成（DNA 损伤标志物）在单个肿瘤水平上呈强相关性（R² = 0.68， P < 0.0001）。CEN-209 诱导的 γH2AX 在 EF5 阳性细胞中选择性增加。[1] 苯并三嗪-N-氧化物生物可还原性前药的潜在分层生物标志物是 EF-5 结合。 CEN209 在个体肿瘤水平诱导的 DNA 损伤与 CYPOR 过表达之间存在很强的相关性，CYPOR 过表达也显着增加了 HCT116 异种移植物中的 EF-5 结合并减少了 CEN-209。此外，改变肿瘤缺氧会导致两种药物的生物还原激活发生类似的变化，从而导致 EF-5 结合。静脉注射EF-5后，单克隆抗体特异性结合并识别9L胶质瘤；这个过程依赖于氧气。在冷冻组织上，结合可以通过荧光显微镜来识别。对于光学显微镜检查，组织切片可以用苏木精和伊红复染。作为替代方案，流式细胞术方法可用于分析单个肿瘤细胞，以推断肿瘤内缺氧的分布[2]。 |
| 酶活实验 |
使用抗氰化物的 NADPH 依赖性细胞色素 c 还原法（在 550 nm 处测定吸光度）测定了细胞裂解液 S9 组分中的 CYPOR 酶活性。[1]
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| 细胞实验 |
- [¹⁴C]-EF5 共价结合实验（96 孔板）： 细胞（每孔 10⁵ 个）在常氧（空气/5% CO₂）或乏氧（90% N₂/5% H₂/5% CO₂）条件下，与 [¹⁴C]-EF5（20-60 μM）在 37°C 孵育 3-5 小时。孵育后，移去培养基，胰蛋白酶消化细胞，用冷的 15% 三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质。使用 Harvester 96 系统将沉淀收集到玻璃纤维滤膜上，用 1% TCA 洗涤，通过液体闪烁计数测量放射性。[1]
- EF5 结合的流式细胞术分析： 细胞或解离的肿瘤组织用 70% 乙醇固定，用 Cy5 标记的抗 EF5 加合物的小鼠单克隆抗体（ELK3-51， 75 µg/mL， 4°C 过夜）染色，并用 DAPI 复染。对于双重染色，细胞还用小鼠单克隆抗 γH2AX 抗体（1:4000）染色，然后用 Alexa-488 山羊抗小鼠 IgG 染色。使用 BD LSR II 流式细胞仪进行分析。[1] - 缺氧调节的辐照研究： 将 9L 肿瘤细胞解离，作为单细胞悬液（在空气中）或作为实体瘤（原位）在空气呼吸或安乐死的大鼠中进行辐照。通过铺板效率实验评估克隆存活（细胞与 50,000 个辐照的饲养细胞一起铺板，孵育 10-12 天，计数集落）。[2] |
| 动物实验 |
- 大鼠 9L 胶质瘤模型： 在大鼠腹壁动脉和静脉上以组织隔离植入物形式生长 9L 肿瘤。单次静脉注射 EF5（100 µmol/kg 体重，溶于 0.9% 生理盐水，体积为体重的 1%）。注射后三小时，切除肿瘤，快速冷却，一半用于组织学分析，另一半用于流式细胞术和铺板效率分析。对于放射研究，肿瘤在空气呼吸或安乐死的大鼠中用 0-30 Gy 辐照（正电压 X 射线，225 kVp，剂量率 4.0 Gy/min）。[2]
- 小鼠 HCT116 异种移植模型： 携带 HCT116（野生型或 CYPOR 过表达）异种移植物的裸鼠接受 EF5（60 mg/kg，腹腔注射）和/或 CEN-209（200 mg/kg，腹腔注射）给药。将小鼠置于通风盒中，呼吸空气、10% O₂ 或高压氧（2.25 atm 的 100% O₂）90-120 分钟。切除肿瘤和肝脏并冷冻用于 LC/MS-MS 分析，或解离用于流式细胞术和克隆形成实验。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
- 血清半衰期： EF5 在大鼠中的血清半衰期约为 150 分钟，需要快速冷却切除的组织以防止切除后结合。[2]
- 生物分布（小鼠）： EF5（使用 ¹⁴C 标记的 EF5）在注射后 0.5 小时的全身分布非常均匀（文中提及小鼠数据，未给出大鼠数据）。[2] - 剂量： 体内研究典型静脉或腹腔注射剂量为 60 mg/kg（约 100 µmol/kg）。[1][2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠或大鼠中，给药剂量（60 mg/kg，腹腔或静脉注射）下未报告明显的副作用。[1][2]
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| 参考文献 |
[1]. The 2-nitroimidazole EF5 is a biomarker for oxidoreductases that activate the bioreductive prodrug CEN-209 under hypoxia. Clin Cancer Res. 2012 Mar 15;18(6):1684-95.
[2]. Identification of hypoxia in cells and tissues of epigastric 9L rat glioma using EF5 [2-(2-nitro-1H-imidazol-1-yl)-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropyl) acetamide]. Br J Cancer. 1995 Oct;72(4):875-82 |
| 其他信息 |
- 作用机制（作为缺氧探针）： 在常氧条件下，EF5 的硝基被快速再氧化，阻止共价结合。在乏氧条件下，单电子还原生成一个反应性的自由基中间体（硝基自由基阴离子），该中间体进一步还原生成胺或羟胺衍生物，然后共价结合到硫醇和其他细胞亲核试剂上。这种结合是不可逆的，并与缺氧程度成正比。[1][2]
- 检测方法： EF5 加合物可通过特异性识别 EF5 的 ELK3-51 单克隆抗体结合荧光染料（如 Cy3、Cy5）进行流式细胞术和荧光显微镜检测，或通过 ¹⁸F 标记 EF5 后进行 PET 成像（[¹⁸F]-EF5）检测。[1][2] - 双重报告分子功能： EF5 结合既反映缺氧水平，也反映激活生物还原性前药所需的单电子还原酶（如 CYPOR）的表达。这使得 EF5 有可能成为乏氧激活前药（如 CEN-209 和替拉扎明）的伴随诊断工具。[1] - 结构特征： EF5 上的五氟丙基增强其亲脂性，并改善其组织穿透能力。它还允许与其他 2-硝基咪唑进行光谱区分。[1][2] - 与预后的相关性： 在头颈癌患者中，EF5 结合（通过免疫染色）已被证明与放疗后的预后相关。[1] EF5是2-硝基咪唑乙硝唑的氟化衍生物。在缺氧条件下，EF5可通过与细胞内大分子形成加合物来有效提高肿瘤组织中的氧含量。细胞质、微粒体和线粒体中的多种酶可还原该物质。已有报道称，EF5可用于检测多种癌症的组织缺氧，包括宫颈鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌和肉瘤。 |
| 分子式 |
C8H7N4O3F5
|
|---|---|
| 分子量 |
302.15818
|
| 精确质量 |
302.044
|
| 元素分析 |
C, 31.80; H, 2.34; F, 31.44; N, 18.54; O, 15.88
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| CAS号 |
152721-37-4
|
| PubChem CID |
389053
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
2.468
|
| tPSA |
96.23
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
383
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(NCC(F)(F)C(F)(F)F)CN1C=CN=C1[N+]([O-])=O
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| InChi Key |
JGGDSDPOPRWSCX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C8H7F5N4O3/c9-7(10,8(11,12)13)4-15-5(18)3-16-2-1-14-6(16)17(19)20/h1-2H,3-4H2,(H,15,18)
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| 化学名 |
2-(2-nitroimidazol-1-yl)-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropyl)acetamide
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| 别名 |
EF-5; 383HJ2T87O; EF5; 2-(2-nitro-1h-imidazol-1-yl)-n-(2,2,3,3,3-pentafluoropropyl)acetamide; RefChem:909166; 152721-37-4;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~413.69 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3095 mL | 16.5475 mL | 33.0950 mL | |
| 5 mM | 0.6619 mL | 3.3095 mL | 6.6190 mL | |
| 10 mM | 0.3310 mL | 1.6548 mL | 3.3095 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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