Thrombopoietin receptor (TpoR)

当荧光素酶报告基因转染小鼠 BAF3 细胞时，艾曲波帕（0.002-50 μM；4 小时）表现出活性[1]。在 N2C-Tpo 细胞中，艾曲波帕（30 μM；120 分钟）对 p-STAT5 激活有影响[1]。在巨核细胞中，艾曲波帕（30 μM；120 分钟）刺激 p-STAT5[1]。艾曲波帕（0.1 nM-10 μM；30 分钟）刺激 BAF3/hTpoR 细胞的增殖[1]。当用elotrombopag (0.03-3 μM)处理十天时，骨髓CD34+细胞更有可能分化为CD41+巨核细胞[1]。 N2C-Tpo 细胞凋亡受艾曲波帕（0-3 μM；72 小时）影响[1]。 eloxacoum 的 MIC50 为 0.3 mg/L，可有效抑制肺炎球菌的生长，而对革兰氏阴性菌没有影响[3]。艾曲波帕（0-200 mg/L；24 小时）的 MIC50 为 1.5 mg/L，可抑制金黄色葡萄球菌的生长。当与 MIC50 为 1.2 mg/L 的万古霉素联合使用时，艾曲波帕的效力会增加[3]。艾曲波帕强烈促进 Huh7 细胞 G0/G1 期阻滞（0 或 10 μg/mL；72 小时）[5]。艾曲波帕在浓度为 0.1-100 μg/mL 时对 HCC 细胞系具有抗增殖作用，作用持续 72 小时[5]。

在黑猩猩中，艾曲波帕乙醇胺（10 mg/kg；每天口服一次，持续五天）表现出良好的耐受性[1]。埃洛曲波帕奥拉明（17.6 mg/kg；IP；每天一次，持续两天）使平均 S 大大降低。小鼠鼻腔感染有大量金黄色葡萄球菌[3]。

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当黑猩猩口服（每天10mg/kg，持续5天）时，艾曲波帕的体内活性表现为血小板数量增加了100%。总之，艾曲波帕选择性地与TpoR相互作用，而不与Tpo竞争，导致人骨髓祖细胞向巨核细胞的增殖和分化增加，血小板产量增加。这些结果表明，艾曲波帕和Tpo可能能够相加作用以增加血小板产量。1.

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黑猩猩重复剂量研究[1]
鉴于艾曲波帕在人类和黑猩猩血小板中表现出STAT激活的独特物种特异性，对五只雌性黑猩猩进行了为期5天的重复剂量安全性和药理学研究。黑猩猩通过口服强饲法单独服用赋形剂（n=2）或在赋形剂中服用艾曲波帕（n=3；每天10mg/kg）。在重复口服剂量后，艾曲波帕的给药耐受性良好。对血液学、凝血或临床化学参数没有不良影响。在接受艾曲波帕治疗的黑猩猩中，一只黑猩猩的血小板计数在最后一次给药后约1周增加了一倍多，另外两只黑猩猩的血小板数量增加了约1.5倍。血小板计数在达到峰值约2周后恢复到接近基线值（图6）。

萤光素酶报告基因检测[1]
洗涤BAF3/hTpoR或32D-mpl细胞，并在处理前用rmIL-3或rhTpo饥饿过夜。在Iscove改良的Dulbecco's培养基（IMDM）/0.5%胎牛血清（FBS）和30μM ZnCl2中，饥饿的亲本BAF3细胞（1×105个细胞/ml）在37°C、5%CO2下用Eltrombopag（0.002-50μM）或rhTpo（100ng/ml）处理4小时。将细胞在100μl裂解缓冲液（25mM tris、15%甘油、2%3-[（3-氨基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸、1%卵磷脂、1%牛血清白蛋白、4mM EGTA、8mM MgCl2、10mM二硫苏糖醇和0.4mM苯甲基磺酰氟，pH 7.8）中裂解15分钟，并加入96孔板（每孔30μl）。在使用化学光度计读取平板读数之前，立即向每个孔中加入Promega Steady Glow（100μl）。萤光素酶测定数据以四个重复孔的平均值和标准误差表示。

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Caspase-3和Caspase-7检测[1]
Caspase-Glo 3/7测定法（Promega）是一种发光测定法，用于测量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7的活性。添加胱天蛋白酶-Glo试剂导致细胞裂解，随后胱天蛋白酶切割底物并产生发光信号；发光量与存在的胱天蛋白酶的量成比例。细胞因子饥饿的N2C-Tpo细胞（最终浓度为1.4×105个细胞/ml）在白色观察板上生长，并在37°C下暴露于Eltrombopag（0.003-3μM）和/或rhTpo（1-100ng/ml）72小时。加入Caspase-Glo（100μl），在室温下孵育细胞90分钟。

细胞活力测定[1]
细胞类型： 鼠 BAF3 细胞
测试浓度： 0.002-50 μM
孵育时间：4小时
实验结果：用人TpoR有效抑制小鼠BAF3细胞，EC50值为0.27 μM。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： N2C-Tpo 细胞和 CD34+
测试浓度： N2C-Tpo 30 μM细胞; CD34+ 为 0、1、3 和 10 μM
孵育时间：N2C- Tpo 细胞为 120 分钟； CD34+ 30 分钟
实验结果：在 N2C-Tpo 细胞中处理后 60 分钟显示出激活的磷酸-STAT5 和最大信号强度。 CD34+ 治疗后 30 分钟，剂量依赖性激活 STAT5 磷酸化。

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细胞增殖检测[1]
细胞类型： BAF3/hTpoR 细胞
测试浓度： 0.1 nM-10 μM
孵育时间： 2 天
实验结果： 孵育 2 天后，EC50 为 0.03 μM，促进 BAF3/hTpoR 细胞增殖。

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细胞分化测定[1]
细胞类型： CD34+
测试浓度： 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1和 3 μM
孵育时间： 10 天
实验结果： 剂量依赖性刺激骨 m 分化

动物/疾病模型：雌性黑猩猩[1]
剂量：10 mg/kg
给药途径：口服（灌胃）；10 mg/kg，每日一次；持续5天
实验结果：治疗后血小板计数呈现先升高后下降的趋势，且未对动物的血液学、凝血或临床化学参数产生不良影响。

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动物/疾病模型：C57BL/6雄性小鼠（7周龄，20-22 g；经鼻腔注射金黄色葡萄球菌（5 × 10⁸ CFU，悬浮于40 µL PBS中））[3]
剂量：17.6 mg/kg
给药途径：腹腔注射；每日一次，持续2天。
实验结果：与对照组PBS小鼠（5.2 × 10⁷ CFU/肺）相比，鼻腔感染模型小鼠的平均细菌计数（5.0 × 10⁶ CFU/肺）显著降低。

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雌性黑猩猩（约7-8岁）分别灌胃给予艾曲波帕（10 mg/kg，溶于含0.2%十二烷基硫酸钠的2%羟丙基甲基纤维素水溶液中）或仅灌胃给予溶剂，剂量为1 ml/kg。黑猩猩每日接受5次仅灌胃给予溶剂（n = 2）或艾曲波帕（n = 3）的治疗。在治疗方案开始前、治疗期间和治疗后进行血小板计数和网织血小板计数。研究结束后，所有黑猩猩都被送回了种群。[1]

尽管仅对三只黑猩猩进行了有限的药代动力学采样，但数据表明，在黑猩猩中，艾曲波帕引起血小板计数较基线变化的药效学信号在最低浓度 (Cmin)、最高浓度 (Cmax) 和曲线下面积 (AUC) 值分别约为 0.107 μg/ml、0.525 μg/ml 和 12.1 μg·h/ml 时被检测到。[1]

妊娠期和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
关于艾曲波帕在哺乳期用药的信息有限。曾有一例母乳喂养的婴儿出生时患有血小板增多症，可能与母乳中的艾曲波帕有关。在获得更多数据之前，应在哺乳期间密切监测婴儿的血液指标，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。生产商建议在服用艾曲波帕期间避免母乳喂养。根据药物的半衰期，母亲在最后一次给药后 8 天内应能清除体内药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
一名母亲在孕期服用艾曲波帕，最大剂量为 100 mg，之后产下一名婴儿。该婴儿出生时患有血小板增多症，并在母亲哺乳期间持续数周。文中未提及母乳喂养的程度和母亲的用药剂量。作者认为，婴儿血小板增多症的持续存在可能是由于乳汁中的艾曲波帕所致。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

[1]. Preclinical activity of eltrombopag (SB-497115), an oral, nonpeptide thrombopoietin receptor agonist. Stem Cells. 2009 Feb;27(2):424-30.

[2]. Discovery and characterization of a selective, nonpeptidyl thrombopoietin receptor agonist. Exp Hematol. 2005 Jan;33(1):85-93.

[3]. Repurposing Eltrombopag for Multidrug Resistant Staphylococcus aureus Infections. Antibiotics (Basel). 2021 Nov 9;10(11):1372.

[4]. Identification of Eltrombopag as a Repurposing Drug Against Staphylococcus epidermidis and its Biofilms. Curr Microbiol. 2021 Feb 21.

[5]. The Eltrombopag antitumor effect on hepatocellular carcinoma. Int J Oncol. 2015 Nov;47(5):1696-702.

另见：艾曲波帕奥拉明（注释已移至）。

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药物适应症
瑞沃拉德适用于治疗对其他治疗（例如皮质类固醇、免疫球蛋白）无效的成人原发性免疫性血小板减少症 (ITP) 患者（参见第 4.2 节和第 5.1 节）。瑞沃拉德适用于治疗 1 岁及以上、自诊断起病程 6 个月或更长的原发性免疫性血小板减少症 (ITP) 儿童患者，且这些患者对其他治疗（例如皮质类固醇、免疫球蛋白）无效（参见第 4.2 节和第 5.1 节）。 Revolade适用于治疗患有慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染的成年患者的血小板减少症，其中血小板减少的程度是阻止开始或限制维持最佳干扰素疗法的主要因素（参见第4.4节和第5.1节）。 Revolade适用于对既往免疫抑制治疗无效或已接受大量预处理且不适合造血干细胞移植（参见第5.1节）的获得性重型再生障碍性贫血（SAA）成人患者。Eltrombopag是一种肼类化合物，其中每个氮原子均被取代，一个氮原子被3'-羧基-2-羟基[1,1'-联苯]-3-基取代，另一个氮原子被1-(3,4-二甲基苯基)-3-甲基-5-氧代-1,5-二氢-4H-吡唑-4-亚基取代。艾曲波帕是一种小分子c-mpl（TpoR）受体激动剂（TpoR是促血小板生成素的生理靶点），已被开发用于治疗血小板减少症（血小板计数异常低）等疾病。它既是促血小板生成素受体激动剂，也是一种外源性物质。它属于肼类、吡唑类和苯甲酸类化合物。
艾曲波帕是一种促血小板生成素受体激动剂。艾曲波帕的作用机制是作为血小板生成素受体激动剂、有机阴离子转运多肽1B1抑制剂、乳腺癌耐药蛋白抑制剂、UGT1A1抑制剂、UGT1A3抑制剂、UGT1A4抑制剂、UGT1A6抑制剂、UGT1A9抑制剂、UGT2B7抑制剂和UGT2B15抑制剂。艾曲波帕的生理效应是通过促进巨核细胞成熟和增加血小板生成来实现的。
另见：罗米司亭（注释已移至）艾曲波帕（注释已移至）。

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药物适应症
瑞沃拉德适用于治疗对其他治疗（例如皮质类固醇、免疫球蛋白）无效的成人原发性免疫性血小板减少症 (ITP) 患者（参见第 4.2 节和第 5.1 节）。瑞沃拉德适用于治疗 1 岁及以上、自诊断起病程 6 个月或更长的原发性免疫性血小板减少症 (ITP) 儿童患者，且这些患者对其他治疗（例如皮质类固醇、免疫球蛋白）无效（参见第 4.2 节和第 5.1 节）。 Revolade适用于治疗患有慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染的成年患者的血小板减少症，其中血小板减少的程度是阻止启动或限制维持最佳干扰素治疗的主要因素（参见第4.4节和第5.1节）。Revolade也适用于对既往免疫抑制治疗无效或已接受大量预处理且不适合造血干细胞移植的获得性重型再生障碍性贫血（SAA）成年患者（参见第5.1节）。

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Eltrombopag是一种首创的口服生物利用度高的、小分子非肽类血小板生成素受体（TpoR）激动剂，目前正在开发用于治疗各种病因引起的血小板减少症。体外研究表明，艾曲波帕的活性依赖于TpoR的表达，TpoR可激活信号转导和转录激活因子（STAT）以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路。本临床前研究旨在确定艾曲波帕是否选择性地与TpoR相互作用，从而促进血小板中巨核细胞的分化。通过原代人CD34(+)骨髓细胞增殖和分化为CD41(+)巨核细胞，证实了其具有促血小板生成功能。对多种物种血小板的测量表明，艾曲波帕仅特异性地激活人和黑猩猩的STAT通路。[1]

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抗菌素耐药性的持续上升迫切需要新的治疗药物来保障人类健康。药物重定位是一种极具吸引力的策略，可以显著缩短将新抗生素推向临床的时间。我们筛选了182种美国食品药品监督管理局（FDA）批准的药物，以寻找对抗金黄色葡萄球菌（一种主要致病菌）的潜在抗生素候选药物。筛选结果显示，三种小分子药物对金黄色葡萄球菌具有显著的抗菌活性：（1）LDK378（色瑞替尼），一种用于治疗肺癌的间变性淋巴瘤激酶（ALK）抑制剂；（2）盐酸决奈达隆，一种用于治疗房颤的抗心律失常药物；（3）艾曲波帕，一种用于治疗血小板减少症的血小板生成素受体激动剂。其中，艾曲波帕不仅对一种药物敏感的金黄色葡萄球菌菌株表现出最高的抗菌活性，而且对包括35株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在内的55株临床分离株也表现出最高的抗菌活性（抑制50%生长的最低抑菌浓度[MIC50] = 1.4-3.2 mg/L）。此外，我们还证明艾曲波帕在细胞感染模型中抑制了细菌生长，并降低了感染小鼠体内的细菌载量，这表明其具有作为一种新型抗金黄色葡萄球菌抗生素的潜力，可以克服目前抗生素耐药性的问题。[3]表皮葡萄球菌是医院感染的常见病原体，它很容易黏附于医疗器械上形成由高耐药性持续性细胞组成的生物膜。由于表皮葡萄球菌生物膜和持续性细胞在免疫抑制患者中引起的难治性感染，开发新型抗菌药物至关重要。本研究分析了血小板生成素受体激动剂艾曲波帕（EP）对表皮葡萄球菌浮游细胞、生物膜和持续性细胞的抗菌作用。EP对表皮葡萄球菌具有显著的毒性，最低抑菌浓度为8 μg/ml，并能以菌株依赖的方式有效抑制生物膜和持续性细胞的生长。此外，EP在处理12至24小时后对哺乳动物细胞仅表现出轻微的毒性。EP与万古霉素联用对表皮葡萄球菌具有部分协同作用，增强了其抗菌效果并降低了其对哺乳动物细胞的毒性。综上所述，EP 是一种潜在的抗生素，可用于治疗表皮葡萄球菌引起的难治性感染。[4]

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目前，索拉非尼是唯一可用于治疗晚期肝细胞癌 (HCC) 的化疗药物，但它不能用于肝硬化 (LC) 或血小板减少症患者。在这些情况下，如果将索拉非尼与增加血小板数量的治疗方法（例如血小板生成素 (TPO) 受体激动剂）联合使用，则可能有效。通过 TPO 治疗增加血小板计数可降低肝硬化程度。据报道，TPO 受体激动剂艾曲波帕 (EP) 对某些癌症具有抗肿瘤作用，即使这些癌症缺乏 TPO 受体表达。我们假设，EP 除了能够通过增加血小板计数来抑制肝纤维化外，还可能具有抗 HCC 的肿瘤活性。本研究通过评估EP对HepG2、Hep3B和Huh7细胞增殖的抑制作用，并探究补铁能否逆转这些抑制作用，从而检测EP的抗肿瘤活性。此外，本研究还利用流式细胞术进行细胞周期分析，并通过分析细胞周期相关蛋白的表达来评估信号转导。EP的抗肿瘤活性与最常用的铁螯合剂去铁胺（DFO）进行了比较。同时，本研究还评估了EP与索拉非尼的联合用药效果。结果表明，EP通过调节细胞内铁含量发挥抗肝细胞癌（HCC）的肿瘤活性。EP抑制细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达，并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。EP在HCC中的活性与DFO相当，且在低浓度下不与索拉非尼竞争。总之，我们的研究结果表明，EP 是一种治疗肝硬化和血小板减少症患者 HCC 的良好候选化疗药物。[5]

C29H36N6O6

564.63

564.269

C, 61.69; H, 6.43; N, 14.88; O, 17.00

496775-62-3

Eltrombopag;496775-61-2;(E/Z)-Eltrombopag-13C4;1217230-31-3

135449331

Purple to black solid powder

3.127

209.05

7

11

7

41

822

0

PLILLUUXAVKBPY-SBIAVEDLSA-N

InChI=1S/C25H22N4O4.2C2H7NO/c1-14-10-11-19(12-15(14)2)29-24(31)22(16(3)28-29)27-26-21-9-5-8-20(23(21)30)17-6-4-7-18(13-17)25(32)33;2*3-1-2-4/h4-13,26,30H,1-3H3,(H,32,33);2*4H,1-3H2/b27-22-

(Z)-3-(2-(1-(3,4-dimethylphenyl)-3-methyl-5-oxo-1,5-dihydro-4H-pyrazol-4-ylidene)hydrazinyl)-2-hydroxy-[1,1-biphenyl]-3-carboxyiic acid;2-aminoethan-1-ol (1:2)

SB-497115-GR Ethanolamine, SB497115GR; Eltrombopag ethanolamine; Eltrombopag Mono-Ethanolamine; CHEMBL461806; SCHEMBL2236368; SCHEMBL2236372; SB497115; SB-497115; SB 497115; trade name: PROMACTA

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.07 mg/mL (1.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1.07 mg/mL (1.90 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 10 mg/mL (17.71 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声助溶 (<60°C).
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。