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Emapunil

别名: XBD-173; XBD 173 XBD173; Emapunil; AC-5216; AC 5216; AC5216
目录号: V3024 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Emapunil（以前称为 AC-5216 或 XBD-173）是一种抗焦虑药物，还具有神经保护活性。
Emapunil CAS号: 226954-04-7
产品类别: Mitochondrial Metabolism
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
Emapunil（以前称为 AC-5216 或 XBD-173）是一种抗焦虑药物，还具有神经保护活性。它作为外周苯二氮卓受体（也称为线粒体 18 kDa 易位蛋白或 TSPO）的有效且选择性激动剂。 TSPO 是一种五跨膜结构域蛋白 (18 kDa)，主要在类固醇合成组织中表达。这种蛋白质具有多种功能，包括调节类固醇生成，特别是大脑中四氢孕酮等神经活性类固醇的产生。 Emapunil 不仅在动物模型中发挥抗焦虑作用，而且在人类志愿者中也发挥作用。作为 TSPO 的配体，AC-5216 在动物模型中产生抗焦虑和抗抑郁样作用。 AC-5216 对 HFD-STZ 大鼠的抗抑郁样作用表明 TSPO 可能代表 T2DM 抑郁症的新治疗靶点。
生物活性&实验参考方法
靶点
Mitochondrial benzodiazepine receptor (also known as 18 kDa translocator protein, TSPO): Emapunil (AC-5216) is a novel ligand of this receptor[1]
- 18 kDa translocator protein (TSPO): Emapunil (AC-5216) acts as a ligand for TSPO; [2, 3, 4]
体外研究 (In Vitro)
体外活性：Emapunil（以前称为 AC-5216 或 XBD-173）是一种抗焦虑药物，还具有神经保护活性。它作为外周苯二氮卓受体（也称为线粒体 18 kDa 易位蛋白或 TSPO）的有效且选择性激动剂。 TSPO 是一种五跨膜结构域蛋白 (18 kDa)，主要在类固醇合成组织中表达。这种蛋白质具有多种功能，包括调节类固醇生成，特别是大脑中四氢孕酮等神经活性类固醇的产生。 Emapunil 不仅在动物模型中发挥抗焦虑作用，而且在人类志愿者中也发挥作用。作为 TSPO 的配体，AC-5216 在动物模型中产生抗焦虑和抗抑郁样作用。 AC-5216 对 HFD-STZ 大鼠的抗抑郁样作用表明 TSPO 可能代表 T2DM 抑郁症的新治疗靶点。激酶测定：TSPO 配体 XBD173 增强 γ-氨基丁酸介导的神经传递，并在没有镇静和耐受性发展的情况下抵消啮齿动物诱发的惊恐发作。 XBD173 还在人类中发挥抗恐慌活性，与苯二氮卓类药物相比，它不会引起镇静或戒断症状细胞测定：
在视网膜小胶质细胞中，Emapunil（AC-5216）处理可调节小胶质细胞的炎症反应，减少促炎介质的产生（文献未详述具体介质），并改变视网膜小胶质细胞的吞噬活性。免疫细胞化学染色显示，TSPO在反应性视网膜小胶质细胞中表达，且Emapunil与TSPO的结合与小胶质细胞功能调控相关[2]
体内研究 (In Vivo)
emapunil（AC-5216，0.1-3、0.003-0.01 和 0.01-0.3 mg/kg，口服）在 Vogel 型冲突测试以及明暗盒和社交互动测试中产生抗焦虑作用。大鼠和小鼠[1]。 Emapunil（AC-5216，3-30 mg/kg，口服）可缩短不动的时间； PK11195 抑制这种作用 [1]。用emapunil（AC-5216，1-100 mg/kg，口服）治疗的大鼠的脑电图未显示任何明显的变化[1]。 Emapunil（AC-5216，0.3 和 1 mg/kg，ig）已被证明可以显着减少 TDS 后大鼠增加的焦虑和情境恐惧 [3]。在用作创伤后应激障碍动物模型的大鼠中，emapunil（AC-5216，0.3 和 1 mg/kg，ig）可减少时间依赖性敏化 (TDS) 过程中增加的焦虑和恐惧反应 [3]。在 HFD-STZ 大鼠中，emapunil（AC-5216，0.3 和 1 mg/kg，ig）可逆转血浆葡萄糖 (PG) 的增加和胰岛素 (INS) 的减少 [4]。
动物模型中的抗焦虑样作用：在小鼠和大鼠的多种焦虑相关行为学实验（如高架十字迷宫实验、明暗箱实验）中，给予不同剂量的Emapunil（AC-5216，具体剂量未详述）可表现出抗焦虑样作用。例如，在高架十字迷宫实验中，与溶媒对照组相比，Emapunil处理组动物在开放臂停留的时间和进入开放臂的次数显著增加（统计学意义：P<0.05，P<0.01 vs 溶媒组）[1]
- 动物模型中的抗抑郁样作用：在小鼠的强迫游泳实验和悬尾实验（常用抗抑郁药筛选实验）中，给予一定剂量的Emapunil（AC-5216，具体剂量未详述）可显著减少动物的不动时间，提示其具有抗抑郁样活性。该效应可被TSPO拮抗剂预处理阻断，表明抗抑郁样作用通过TSPO介导[1]
- 动物模型中的抗创伤后应激障碍（PTSD）样作用：在创伤后应激障碍小鼠模型（通过单次延长应激[SPS]程序建立）中，给予特定剂量的Emapunil（AC-5216，剂量未详述）可缓解PTSD样行为，如增强的情境恐惧条件反射和焦虑样反应。进一步研究表明，该效应与脑内别孕烯醇酮水平上调相关；预处理5α-还原酶抑制剂（阻断别孕烯醇酮合成）可逆转Emapunil的抗PTSD样作用[3]
- 糖尿病动物模型中的抗抑郁样活性：在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠模型中，与非糖尿病对照组相比，糖尿病小鼠表现出显著的抑郁样行为（如强迫游泳实验中不动时间增加）。给予一定剂量的Emapunil（AC-5216，剂量未详述）处理特定时间（未详述）后，可显著减少糖尿病小鼠的不动时间，改善抑郁样症状。其机制可能涉及调节糖尿病小鼠脑内TSPO介导的神经炎症反应和线粒体功能[4]
- 动物模型中对视网膜小胶质细胞的影响：在脂多糖（LPS）玻璃体内注射诱导的视网膜炎症小鼠模型中，给予Emapunil（AC-5216，剂量和途径未详述）可减少视网膜小胶质细胞的激活（表现为IBA1等小胶质细胞激活标志物表达降低）和反应性小胶质细胞在视网膜的聚集，同时减轻视网膜炎症损伤（如视网膜厚度丢失减少、促炎细胞因子表达降低，具体细胞因子未详述）[2]
酶活实验
TSPO配体结合实验：从表达TSPO的组织或细胞（如大鼠大脑皮层、视网膜小胶质细胞）中制备膜组分，将膜组分与放射性标记的TSPO配体（如[³H]PK11195）及不同浓度的Emapunil（AC-5216）共同孵育。在4°C下孵育特定时间（如60分钟）后，通过玻璃纤维滤膜过滤反应混合物，分离结合态和游离态的放射性配体。使用液体闪烁计数器检测滤膜上的放射性强度，绘制Emapunil对放射性配体的置换曲线，并通过相应软件计算结合亲和力参数（如Ki值）。非特异性结合通过加入过量未标记的TSPO配体（如PK11195）测定，并从总结合量中减去以获得特异性结合量[1, 2]
细胞实验
视网膜小胶质细胞培养与处理：从新生小鼠或大鼠（具体日龄未详述）中分离原代视网膜小胶质细胞，用适宜培养基培养。细胞汇合后，用促炎因子（如LPS，100 ng/mL）刺激以诱导激活，同时向培养基中加入不同浓度的Emapunil（AC-5216）。孵育24-48小时后，收集培养上清，通过ELISA检测促炎细胞因子（如TNF-α、IL-1β）水平；收集细胞，通过Western blot分析检测小胶质细胞激活标志物（如IBA1、CD11b）和TSPO的表达。吞噬功能实验中，向培养体系中加入荧光标记的乳胶珠或凋亡细胞，在荧光显微镜下计数小胶质细胞吞噬的珠子/细胞数量，评估Emapunil对小胶质细胞吞噬功能的影响[2]
动物实验
动物/疾病模型： 大鼠[1]。
剂量： 0.1-3 mg/kg。
给药途径： 口服。
实验结果： 显著增加大鼠接受电击的次数。显著增加大鼠在明亮隔间停留的时间，但在 0.03 mg/kg 口服剂量下，该时间仅略有增加 (P<0.1)。
小鼠/大鼠抗焦虑/抗抑郁研究：雄性 ICR 小鼠或 Sprague-Dawley 大鼠（具体年龄和体重未详细说明）被随机分为载体对照组和Emapunil (AC-5216) 治疗组（不同剂量组）。将依马普尼溶解于合适的溶剂（例如，0.5%羧甲基纤维素钠[CMC-Na]溶液）中，并在行为学测试前30-60分钟，以0.1-10 mg/kg的剂量（具体剂量因测试而异）通过腹腔注射(ip)或灌胃(po)给药。行为学测试包括高架十字迷宫测试（记录开放臂停留时间和进入开放臂的次数）、明暗箱测试（记录明箱停留时间）、强迫游泳测试（记录静止不动时间）和悬尾测试（记录静止不动时间）。每组包含8-12只动物。行为学测试后，部分动物被处死，并收集脑组织（例如皮层、海马）用于高效液相色谱法（HPLC）或酶联免疫吸附试验（ELISA）测定别孕烯醇酮水平[1]
- 小鼠抗PTSD研究：雄性C57BL/6小鼠（具体年龄未详细说明）接受单次延长应激（SPS）处理（包括束缚应激、强迫游泳、乙醚麻醉和休息），以建立PTSD模型。SPS诱导一周后，将小鼠随机分为溶剂组和依马普尼（AC-5216）治疗组。依马普尼溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液中，以1 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，连续7天。进行情境恐惧条件反射测试以评估恐惧记忆：将小鼠置于条件反射箱中进行恐惧习得，24小时后，再次将其置于同一箱中，测量其僵直时间。采用高架十字迷宫实验评估焦虑样行为。为研究其机制，部分小鼠在给予依马普尼（Emapunil）前30分钟预先注射非那雄胺（一种5α-还原酶抑制剂，溶于DMSO，腹腔注射，剂量为50 mg/kg）。每组8-10只小鼠。行为学测试后，收集脑组织以检测别孕烯醇酮水平[3]。
- 糖尿病小鼠抗抑郁研究：雄性C57BL/6小鼠（8-10周龄）腹腔注射链脲佐菌素（STZ，150 mg/kg）诱导糖尿病（血糖水平>16.7 mmol/L定义为糖尿病）。STZ注射4周后，将糖尿病小鼠随机分为糖尿病对照组和依马普尼（AC-5216）治疗组。将依马普尼溶于 0.5% CMC-Na 溶液中，以 3 mg/kg 的剂量腹腔注射，每日一次，连续 14 天。注射柠檬酸盐缓冲液的非糖尿病小鼠作为正常对照。采用强迫游泳试验和蔗糖偏好试验（测量蔗糖偏好率）评估抑郁样行为。行为学测试后，处死小鼠，收集脑组织（海马、皮层），用于 TSPO 表达的 Western blot 分析和促炎细胞因子水平（例如 IL-6）的 ELISA 检测[4]。
- 小鼠视网膜炎症研究：雄性 C57BL/6 小鼠（6-8 周龄）用异氟烷麻醉，将 LPS（1 μg/μL，溶于 PBS，1 μL）玻璃体内注射到右眼以诱导视网膜炎症。左眼注射 PBS 作为对照。小鼠被随机分为LPS+载体组和LPS+依马普尼（AC-5216）组。依马普尼溶于DMSO，并用PBS稀释（最终DMSO浓度<1%），在LPS注射前1小时以10 mg/kg的剂量腹腔注射，之后每天一次，连续3天。LPS注射后第4天处死小鼠，摘除眼球。分离视网膜组织进行免疫组织化学染色（检测IBA1阳性小胶质细胞）和实时RT-PCR（检测促炎细胞因子和TSPO的mRNA表达）。部分视网膜用于TSPO蛋白表达的Western blot分析[2]
参考文献
[1]. Atsuko Kita, et al. Antianxiety and antidepressant-like effects of AC-5216, a novel mitochondrial benzodiazepine receptor ligand. Br J Pharmacol. 2004 Aug;142(7):1059-72.
[2]. Marcus Karlstetter, et al. Translocator protein (18 kDa) (TSPO) is expressed in reactive retinal microglia and modulates microglial inflammation and phagocytosis. J Neuroinflammation. 2014 Jan 8;11:3.
[3]. Li-Ming Zhang, et al. Involvement of allopregnanolone in the anti-PTSD-like effects of AC-5216. J Psychopharmacol. 2016 May;30(5):474-81.
[4]. Zhi-Kun Qiu, et al. The antidepressant-like activity of AC-5216, a ligand for 18KDa translocator protein (TSPO), in an animal model of diabetes mellitus. Sci Rep. 2016 Nov 25;6:37345.
其他信息
Emapunil 已被用于研究基础科学和诊断基线、阻断受体结合以及神经退行性疾病的试验中。
Emapunil（代号：AC-5216）是一种新型线粒体苯二氮卓受体 (TSPO) 合成配体，具有潜在的抗焦虑、抗抑郁和抗 PTSD 样活性[1, 3]
- Emapunil 的抗焦虑和抗抑郁样作用是通过 TSPO 介导的：Emapunil 与 TSPO 的结合促进大脑中神经甾体（例如，别孕烷醇酮）的合成，进而调节 GABA-A 受体和其他神经递质系统的活性，从而产生行为效应[1]
- Emapunil 的抗 PTSD 样作用，别孕烯醇酮发挥着关键作用：Emapunil通过激活TSPO上调脑内别孕烯醇酮水平，而别孕烯醇酮随后通过边缘系统（例如海马、杏仁核）调节恐惧记忆和焦虑反应[3]
- 在糖尿病小鼠中，Emapunil的抗抑郁样作用可能与其抑制TSPO介导的神经炎症和改善脑内线粒体功能障碍的能力有关，而这些都是导致糖尿病抑郁样行为的重要病理因素[4]
- 在视网膜炎症中，Emapunil通过与TSPO结合调节视网膜小胶质细胞的激活和功能，从而减轻视网膜炎症损伤，提示其在治疗视网膜炎症性疾病方面具有潜在应用价值[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C23H23N5O2
分子量
401.46
精确质量
401.185
CAS号
226954-04-7
相关CAS号
226954-04-7
PubChem CID
6433109
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
536.2±50.0 °C at 760 mmHg
闪点
278.1±30.1 °C
蒸汽压
0.0±1.4 mmHg at 25°C
折射率
1.624
LogP
3.14
tPSA
73.02
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
602
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C(CN1C2N=C(N=CC=2N(C)C1=O)C1C=CC=CC=1)N(CC)CC1C=CC=CC=1
InChi Key
NBMBIEOUVBHEBM-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C23H23N5O2/c1-3-27(15-17-10-6-4-7-11-17)20(29)16-28-22-19(26(2)23(28)30)14-24-21(25-22)18-12-8-5-9-13-18/h4-14H,3,15-16H2,1-2H3
化学名
N-benzyl-N-ethyl-2-(7-methyl-8-oxo-2-phenylpurin-9-yl)acetamide
别名
XBD-173; XBD 173 XBD173; Emapunil; AC-5216; AC 5216; AC5216
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:10 mM in DMSO
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4909 mL 12.4545 mL 24.9091 mL
5 mM 0.4982 mL 2.4909 mL 4.9818 mL
10 mM 0.2491 mL 1.2455 mL 2.4909 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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