Emricasan   中文名称: 恩利卡生

Caspase; caspase-3
Emricasan, also known as IDN-6556 or PF-03491390, is a sub- to nanomolar active inhibitor of activated caspases. While Emricasan exhibits neuroprotective activity for hNPCs, ZIKV replication is not prevented[2].

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Emricasan, a pan-caspase inhibitor, was identified as the most potent anti-death compound with IC50 values of 0.13 – 0.9 μM in both caspase activity and cell viability assays for SNB-19 cells against three ZIKV strains: MR766 (1947 Ugandan strain), FSS13025 (2010 Cambodian strain), and PRVABC59 (2015 Puerto Rican strain) (Fig. 1a). It was also effective for all three cell types tested (Supplementary Fig. 1f and Supplementary Table 5). In addition, Emricasan reduced the number of active (cleaved) caspase-3-expressing forebrain-specific hNPCs infected by FSS13025 in both monolayer and 3D organoid cultures (Fig. 1b–c). Emricasan treatment of ZIKV-exposed brain organoids did not appear to affect hNPC proliferation compared to the mock treatment, as evaluated by phospho-Histone3 (PH3) expression (106 ± 10%; n = 8; P = 0.7; One-way ANOVA). Notably, ZIKV antigen persisted in both 2D and 3D cultures after Emricasan treatment (Fig. 1b–c). Therefore, Emricasan displays neuroprotective activity for hNPCs, but does not suppress ZIKV replication.[2]

Emricasan，也称为 IDN-6556 或 PF-03491390，是一种亚至纳摩尔活性半胱天冬酶抑制剂。虽然 Emricasan 对 hNPC 具有神经保护活性，但并不能阻止 ZIKV 复制[2]。

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Emricasan，一种泛caspase抑制剂，被鉴定为最有效的抗死亡化合物，在SNB-19细胞对抗三种ZIKV菌株:MR766(1947年乌干达菌株)，FSS13025(2010年柬埔寨菌株)和PRVABC59(2015年波多黎各菌株)的caspase活性和细胞活力测试中，IC50值为0.13 - 0.9 μM(图1a)。此外，Emricasan在单层和3D类器官培养中减少了FSS13025感染的活性(裂解的)表达caspase-3的前脑特异性hNPCs的数量(图1b-c)。与模拟处理相比，Emricasan处理暴露于zikv的脑类器官似乎没有影响hNPC的增殖，通过磷酸化组蛋白3 (PH3)表达来评估(106±10%;N = 8;P = 0.7;单向方差分析)。值得注意的是，在Emricasan处理后，寨卡病毒抗原在2D和3D培养物中都存在(图1b-c)。因此，Emricasan对hNPCs表现出神经保护活性，但不抑制ZIKV复制。[2]

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Emricasan 抑制了寨卡病毒（ZIKV）诱导的半胱天冬酶-3活性增加，并在单层和三维类器官培养中保护了人类皮质神经祖细胞（hNPCs）。[2]
在感染了三种ZIKV毒株（MR766, FSS13025, PRVABC59）的SNB-19胶质母细胞瘤细胞中，Emricasan 抑制caspase活性的IC50值分别为0.13 µM (MR766)、0.17 µM (FSS13025)和0.19 µM (PRVABC59)；提高细胞活力的IC50值分别为1.06 µM (MR766)、0.84 µM (FSS13025)和0.45 µM (PRVABC59)。[2]
Emricasan 减少了在单层和3D类器官培养中被ZIKV毒株FSS13025感染、表达活性（切割形式）caspase-3的 forebrain-specific hNPCs的数量。[2]
Emricasan 处理不抑制ZIKV复制，因为处理后ZIKV抗原在2D和3D培养物中持续存在。[2]
通过磷酸化组蛋白H3（PH3）表达评估，与模拟处理相比，Emricasan 处理暴露于ZIKV的脑类器官并不显著影响hNPCs的增殖。[2]
Emricasan 与抗病毒化合物PHA-690509的两药联用，在抑制SNB-19细胞的caspase-3活性以及保护ZIKV感染后的星形胶质细胞活力方面表现出叠加效应。在联合治疗中，Emricasan 不干扰PHA-690509抑制ZIKV感染的能力。[2]
先用Emricasan处理被PRVABC59感染的hNPCs 72小时，接着用抗病毒化合物Niclosamide处理48小时，导致了ZIKV阴性的hNPCs的恢复。[2]

Emricasan 可减少 NASH 相关的肝损伤，但不会减少代谢紊乱。它还可以减轻炎症。泛半胱天冬酶抑制剂 Emricasan 可减少小鼠 NASH 模型中的肝纤维形成和星状细胞活化[1]。 emricasan 目前正在进行 2 期临床试验，以确定它是否可以减轻慢性 HCV 感染引起的肝损伤和肝纤维化[2]。

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TUNEL实验显示，饲喂HFD的小鼠肝细胞凋亡增加了5倍，caspase-3和8的活性分别增加了1.5倍和1.3倍;在饲喂Emricasan (HFD- em)处理的HFD的小鼠中，这种细胞凋亡的增加明显减弱。同样，通过测定血清天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶水平、NAS组织学评分和IL -1 -β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)和C-X-C趋化因子配体-2 (CXCL2)定量反转录聚合酶链反应(qPCR)，与HFD相比，饲喂HFD- em小鼠的肝损伤和炎症减轻。这些差异不能归因于肝脂肪变性的差异，因为两个HFD组的肝脏甘油三酯含量相似。Emricasan通过qPCR降低α - sma(肝星状细胞活化标志)、纤维化评分、天狼星红染色、羟脯氨酸肝含量和促纤维化细胞因子，减少HFD动物的肝纤维化。 结论:总之，这些数据表明，在NASH小鼠模型中，肝损伤和纤维化通过抑制肝细胞凋亡而受到抑制，这表明Emricasan可能是一种有吸引力的NASH抗纤维化治疗药物。[2]

通过定量高通量筛选(qHTS)，每种化合物分别在4种浓度(0.37、1.84、9.2和46 μM)下进行单通道筛选。虽然单一化合物浓度(单线态)传统上用于大型化合物集合(如100万至300万化合物)的HTS，但具有多种化合物浓度的qHTS格式最近已用于中型或小型化合物集合，如批准的药物文库。具体地说，将SNB-19细胞和hNPCs以每3 μl/孔250个细胞的速度接种到PDL包被的1536孔实验板上，在37℃、5% CO2中孵育16小时。溶解在DMSO中的测试化合物通过自动pintool工作站以23 nl/孔的体积转移到分析板上。化合物与细胞在37℃、5% CO2中孵育30分钟，随后立即加入2 μl/孔的ZIKV (2 FFU/细胞)。寨卡病毒复合处理细胞的孵育时间因实验格式不同而不同。测量病毒诱导的caspase-3/7活性的实验需要将ZIKV在37°C、5% CO2中存在化合物的条件下孵育6小时。孵育后，在检测板上加入3.5 μl/孔的caspase-3/7混合试剂。在室温下孵育30分钟，用ViewLux平板阅读器测量产生的发光信号。测量病毒诱导的细胞死亡的实验需要将寨卡病毒在化合物存在下，在37°C、5% CO2中孵育72小时。孵育后，在测定板上加入3.5 μl/孔的ATP含量检测试剂。在室温下孵育30分钟，在ViewLux平板阅读器上测量产生的发光信号。逐步测定方案列在补充表1和2中。[2]

星形胶质细胞被模拟感染，用 DMSO 处理，或用 2 M 氯硝柳胺、92 M PHA-690509、9 μM emricasan 或 92 μM PHA-690509 和 9 M emricasan 的组合处理 1 小时，然后用 PRVABC59 感染 (MOI) = 0.5）。感染 24 小时后，固定细胞并进行 ZIKVE 和细胞核染色。

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ATP含量测定对细胞活力和复合细胞毒性的影响[2]
采用ATPlite发光检测系统检测试剂盒测定细胞活力。按照制造商的描述对试剂进行重组和制备。为测定寨卡病毒感染后的细胞死亡情况，将细胞置于37℃5% CO2培养皿中培养16 h，然后加入寨卡病毒培养液，37℃5% CO2孵育72 h。然后将ATP监测试剂ATPlite加入测定板中，孵育15分钟。使用ViewLux平板阅读器测量产生的发光。将没有细胞的孔作为100%细胞杀伤的对照，将没有寨卡病毒感染的细胞孔作为完全细胞存活率(0%细胞杀伤)，将数据归一化。为了分析所选化合物的潜在毒性，将细胞接种于96孔板中。1天后，用指定的化合物和浓度处理细胞24-48小时，然后加入Cell滴度- glo底物，并根据制造商的说明进行测量。

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使用基于发光法的检测试剂盒测量Caspase-3/7活性。将细胞接种到检测板中培养。向细胞中加入ZIKV溶液，随后孵育。然后向每孔加入Caspase-Glo-3/7试剂，室温孵育。使用读板器测量发光强度。数据以未感染细胞作为阴性对照，ZIKV感染细胞作为阳性对照进行归一化。[2]
使用基于发光法的ATP含量检测试剂盒测定细胞活力。将细胞在检测板中培养，然后加入ZIKV溶液并孵育72小时。随后向检测板加入ATP监测试剂并孵育。测量产生的发光信号。数据以不含细胞的孔作为100%细胞杀伤的对照，以含有未感染细胞的孔作为完全细胞活力进行归一化。[2]
对于免疫细胞化学，细胞用多聚甲醛固定。样品进行透化封闭，然后在4°C与一抗（如抗-cleaved caspase-3）孵育过夜，随后与二抗孵育。样品用含DAPI的封片剂封片。使用共聚焦显微镜拍摄图像。对随机选择的视野进行定量分析。[2]
对于类器官研究，将 forebrain-specific 类器官暴露于ZIKV。固定和免疫染色（例如针对cleaved caspase-3和DAPI）后，以盲法对共聚焦显微镜捕获的随机选择的皮质结构进行定量分析。通过计数脑室结构中活化的Caspase-3阳性细胞核占DAPI阳性总细胞核的比例来量化细胞死亡。[2]

试剂和配方[1]
将Emricasan（曾用名IDN-6556或PF-03491390）悬浮于载体[2% (v/v) DMSO溶于0.5% (w/v) 甲基纤维素]中，每日经口给予小鼠。采用高脂饮食（HFD），该饮食中47%的能量来自脂肪（主要来自乳脂，50%为饱和脂肪），2%的胆固醇，35%的能量来自碳水化合物（78%的碳水化合物来自蔗糖），18%的能量来自蛋白质，旨在模拟NASH患者的典型饮食。

动物[1]
本研究采用雄性C57BL/6J小鼠。所有动物均饲养于温度（24°C）和光照（12:12小时光照：黑暗）可控的设施中，并可自由获取食物和水。动物年龄匹配，并在约12-16周龄时使用。共研究了4组（n = 60），每组15只小鼠。第1组和第3组饲喂普通饲料。第2组和第4组饲喂高脂饲料（HFD），并在饮用水中添加50 g/L蔗糖，持续20周。第3组和第4组每日口服0.3 mg/kg Emricasan，第1组和第2组口服赋形剂。给药剂量基于既往研究²¹，该研究表明，口服0.3 mg/kg Emricasan的剂量相当于α-Fas诱导肝损伤模型中预防肝损伤的ED90值。分别于第0、5、10、15和20周测量小鼠的总体重。

Emricasan 药代动力学 [https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC6175779/]
表 1 总结了关键的药代动力学数据。在第 1 天和第 4 天，5 mg 剂量组和 50 mg 剂量组的 Emricasan AUC0–8、Cmax 和 AUC0–last 的几何平均值呈近似剂量比例增加。与第 1 天相比，第 4 天所有治疗组均未观察到血浆蓄积。总体而言，与 50 mg 组相比，低剂量治疗组所有药代动力学参数的受试者间变异性均较低，IDN-6556 5 mg 和 25 mg 组的变异系数 (CV) 为 28% 至 48%，IDN-6556 50 mg 组的变异系数为 99% 至 258%。

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大鼠药代动力学分析表明，静脉注射、腹腔注射和皮下注射后，药物清除迅速，末端半衰期（t_1/2）为 46 至 51 分钟。口服给药后的绝对生物利用度较低（2.7-4%），但口服给药后门静脉药物浓度是全身浓度的 3 倍，末端半衰期也延长了 3.7 倍，表明存在显著的首过效应。口服给药后，肝脏药物浓度至少在 4 小时内保持稳定，在 120 分钟时达到 C_max 2558 ng/g 肝脏。最后，静脉注射和口服给药后，分别有 51±20% 和 4.9±3.4% 的 IDN-6556 以完整形式经胆汁排泄。该评估表明，口服给药后，IDN-6556 在肝病模型中具有显著疗效，因此是治疗以细胞凋亡过度为特征的肝病的理想候选药物。 [https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14742742/]

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据报道，口服给药（每日两次，连续4天）后，人血中Emricasan的总浓度和最大浓度分别为1.90 µg/ml (3.35 µM) 和2.36 µg/ml (4.15 µM)。[2]
报道的Emricasan人血浆浓度比体外抑制寨卡病毒感染引起的caspase-3活性升高和细胞死亡的IC50值高约10倍。[2]

安全性 [https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC6175779/]
如图 2 所示，所有治疗组共发生 10 例死亡。其中 5 例为研究期间死亡，2 例发生在完成全部疗程后的一个月随访期内；另有 5 例为研究结束后或停药后通过严重不良事件 (SAE) 报告的死亡。所有这些死亡均归因于进行性肝病。21 例患者中有 17 例报告了不良事件 (AE)，其中 13 例报告了 SAE。所有 SAE 均被判定与治疗无关。唯一被认为与治疗相关的 AE 是 1 例安慰剂组受试者报告的恶心和呕吐。不良事件 (AE) 和严重不良事件 (SAE) 列于表 5。

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Emricasan 在人体试验（用于治疗慢性丙型肝炎病毒感染）中耐受性良好，未发生显著不良事件。[2]

[1]. Liver Int . 2015 Mar;35(3):953-66.

[2]. Nat Med . 2016 Oct;22(10):1101-1107.

Emricasan是首个经人体试验并获得FDA孤儿药资格认定的半胱天冬酶抑制剂。它由辉瑞公司研发，其作用机制在于保护肝细胞免受过度凋亡。

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药物适应症
已在研究用于治疗肝炎（病毒性、丙型肝炎）、肝病和肝移植（器官或组织移植）。
治疗非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)

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作用机制
IDN-6556可显著改善丙型肝炎病毒 (HCV) 感染患者的肝损伤指标。HCV感染影响着全球多达1.7亿患者。IDN-6556代表了一类新型药物，可保护肝脏免受病毒感染及其他原因引起的炎症和细胞损伤。多项研究表明，该药物可显著降低丙型肝炎病毒（HCV）患者的氨基转移酶活性，且耐受性良好。

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背景与目的：肝细胞凋亡是非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的标志性特征，会导致肝损伤和纤维化。尽管内源性和外源性凋亡途径均参与NASH的发病机制，但凋亡的最终共同步骤是由一类称为半胱天冬酶的半胱氨酸蛋白酶执行的。因此，我们的目的是确定给予泛半胱天冬酶抑制剂Emricasan是否能改善NASH小鼠模型中的肝损伤和纤维化。方法：C57/BL6J小鼠分别喂食普通饲料或高脂饲料（HFD）20周。所有小鼠均接受载体或Emricasan治疗。
结果：高脂饮食（HFD）组小鼠的TUNEL检测显示肝细胞凋亡增加5倍，caspase-3和caspase-8活性分别增加1.5倍和1.3倍；而Emricasan治疗组（HFD-Em）小鼠的凋亡显著减少。此外，与HFD组相比，HFD-Em组小鼠的血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平、NAS组织学评分以及IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白（MCP-1）和CXC趋化因子配体2（CXCL2）的定量逆转录聚合酶链式反应（qPCR）结果显示肝损伤和炎症减轻。由于两组HFD小鼠的肝脏甘油三酯含量相似，因此这些差异并非由肝脂肪变性差异所致。在HFD动物模型中，Emricasan通过降低αSMA（肝星状细胞活化的标志物）、纤维化评分、天狼星红染色、肝脏羟脯氨酸含量以及通过qPCR检测的促纤维化细胞因子水平，减轻了肝纤维化。
结论：总之，这些数据表明，在NASH小鼠模型中，抑制肝细胞凋亡可抑制肝损伤和纤维化，提示Emricasan可能是一种有前景的NASH抗纤维化疗法。[1]

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鉴于寨卡病毒（ZIKV）疫情及其与小头畸形和其他神经系统疾病的关联，我们开展了一项针对约6000种化合物的药物再利用筛选，其中包括已批准的药物、临床试验候选药物和具有药理活性的化合物；我们筛选出了能够抑制ZIKV感染或抑制不同神经细胞中感染诱导的caspase-3活性的化合物。泛半胱天冬酶抑制剂emricasan抑制了寨卡病毒(ZIKV)诱导的半胱天冬酶-3活性升高，并在单层和三维类器官培养中保护了人皮层神经祖细胞。十种结构不相关的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂抑制了ZIKV复制。尼克洛沙胺（一种经美国食品药品监督管理局(FDA)批准的B类驱虫药）也抑制了ZIKV复制。最后，使用来自神经保护和抗病毒两类化合物的联合治疗进一步增强了对人神经祖细胞和星形胶质细胞免受ZIKV诱导的细胞死亡的保护作用。我们的结果证明了这种筛选策略的有效性，并确定了用于抗ZIKV药物开发的先导化合物。[2]

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背景：肝硬化和急性加重型慢性肝衰竭(ACLF)与全身炎症和半胱天冬酶介导的肝细胞死亡有关。Emricasan是一种新型的泛半胱天冬酶抑制剂。本研究旨在评估恩美卡沙坦在肝硬化急性失代偿（AD）患者中的药代动力学、药效学、安全性和临床疗效。
方法：这是一项II期、多中心、双盲、随机对照试验。主要目的是评估恩美卡沙坦在伴有AD和器官衰竭的肝硬化患者中的药代动力学、药效学和安全性。AD定义为持续时间≤6周的急性失代偿事件。患者按比例随机分配至恩美卡沙坦5 mg bid组、恩美卡沙坦25 mg bid组、恩美卡沙坦50 mg bid组或安慰剂组。治疗持续至28天，或患者自愿停止治疗。
结果：23名受试者被随机分组，其中21名接受了给药（安慰剂组n=4；5 mg组n=5；25 mg组n=7；50 mg组n=5）。药代动力学数据显示，5 mg剂量组的血浆药物浓度较低（<50 ng/ml），而25 mg和50 mg剂量组的药代动力学特征相似。因此，在分析次要终点时，安慰剂组和5 mg组合并为“安慰剂/低剂量”组，25 mg组和50 mg组合并为“高剂量”组。21名患者中有5例死亡，均由肝病进展引起（安慰剂/低剂量组2例，高剂量组3例）。在第7天，安慰剂/低剂量组和高剂量组的MELD评分或CLIF-C ACLF评分与基线相比均无统计学意义上的显著变化（MELD -1 vs -1，CLIF-C ACLF 0.7 vs 0.8）。安慰剂/低剂量组和高剂量组的裂解角蛋白M30片段水平最初有所降低（相对变化百分比：第2天：-11.6 vs -42.6，P = 0.017；第4天：-3.5 vs -38.9，P = 0.017），但这种降低并未持续到第7天（-3.1 vs -20.8，P = 0.342）。
结论：本研究表明，emricasan在晚期肝病患者中安全且耐受性良好。然而，这项研究未能提供以半胱天冬酶抑制剂作为急性肝衰竭（ACLF）治疗策略的概念验证支持。Emricasan（也称为IDN-6556或PF-03491390）是一种活化半胱天冬酶抑制剂。[2] Emricasan目前正在进行II期临床试验，以评估其减轻慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的肝损伤和肝纤维化的疗效。[2] Emricasan对人神经祖细胞（hNPC）具有神经保护作用，可抵抗寨卡病毒（ZIKV）诱导的细胞死亡，但不能抑制ZIKV复制。[2] 未来的动物研究对于评估Emricasan在体内对抗ZIKV的疗效至关重要。在妊娠期间使用Emricasan治疗寨卡病毒感染是否安全，需要通过临床前毒理学研究和临床试验进行评估。[2]

C26H27F4N3O7

569.5021

569.178

C, 54.83; H, 4.78; F, 13.34; N, 7.38; O, 19.66

254750-02-2

254750-02-2;

12000240

white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.550

4.63

150.9

4

11

11

40

934

2

FC1C(=C([H])C(=C(C=1OC([H])([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C(=O)O[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])[H])N([H])C(C(N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)=O)=O)=O)F)F)F

SCVHJVCATBPIHN-SJCJKPOMSA-N

InChI=1S/C26H27F4N3O7/c1-12(31-24(38)25(39)32-16-8-6-5-7-13(16)26(2,3)4)23(37)33-17(10-19(35)36)18(34)11-40-22-20(29)14(27)9-15(28)21(22)30/h5-9,12,17H,10-11H2,1-4H3,(H,31,38)(H,32,39)(H,33,37)(H,35,36)/t12-,17-/m0/s1

(3S)-3-[[(2S)-2-[[2-(2-tert-butylanilino)-2-oxoacetyl]amino]propanoyl]amino]-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluorophenoxy)pentanoic acid

Emricasan; PF 03491390; PF-03491390; IDN-6556; (S)-3-((S)-2-(2-(2-TERT-BUTYLPHENYLAMINO)-2-OXOACETAMIDO)PROPANAMIDO)-4-OXO-5-(2,3,5,6-TETRAFLUOROPHENOXY)PENTANOIC ACID; (S)-3-((S)-2-(2-((2-(tert-Butyl)phenyl)amino)-2-oxoacetamido)propanamido)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluorophenoxy)pentanoic acid; C26H27F4N3O7; PF03491390; IDN-6556; IDN6556; IDN 6556

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~175.6 mM)
Ethanol: ~25 mg/mL (~43.9 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.39 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.39 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5%DMSO+40%PEG300+5%Tween80+50%ddH2O: 5mg/ml

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。