| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Usp5;Usp9x;Usp24
EOAI3402143 targets deubiquitinating enzymes, specifically Usp9x, Usp24, and Usp5, which are involved in the removal of ubiquitin from substrate proteins. Inhibition of these DUBs leads to the accumulation of ubiquitinated proteins, disrupting cellular protein homeostasis and promoting apoptosis. Usp9x is known to regulate the stability of key oncoproteins including MCL-1, and its inhibition sensitizes cancer cells to apoptosis. The compound’s covalent binding mechanism ensures sustained target engagement. It is a dose-dependent inhibitor with selectivity for these DUB targets. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
EOAI3402143 具有强大的 Usp9x 和 Usp5 抑制活性 [1]。EOAI3402143 可增加肿瘤细胞凋亡，并呈剂量依赖性地抑制 Usp9x 和 Usp24 的活性 [2]。当用 Usp9x 抑制剂 EOAI3402143 (G9) 处理 UM-2、UM-6、UM-16 和 UM-76 细胞时，细胞存活率呈剂量依赖性地降低。相反，当将 UM-2 细胞的 3D 集落生长与未处理的载体对照组进行比较时，600 nM 的 EOAI3402143 可完全抑制其生长 [3]。体外实验表明，EOAI3402143 以剂量依赖的方式抑制 Usp9x 和 Usp24 的活性，在亚微摩尔浓度下即可完全抑制 UM-2 细胞的 3D 集落形成。该化合物可增加多种癌细胞系中肿瘤细胞的凋亡。研究表明，EOAI3402143 可抑制 UM-2、UM-6、UM-16 和 UM-76 细胞中的 Usp9x 和 Usp24 活性。该化合物的体外活性表现为能够以浓度依赖的方式降低细胞存活率并诱导凋亡标志物（如 caspase 激活和 PARP 裂解）的表达。
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| 体内研究 (In Vivo) |
为了研究EOAI3402143 (G9)治疗对人MIAPACA2肿瘤异种移植模型的影响，我们对其进行了研究。NSG小鼠接受皮下注射人MIAPACA2细胞。使用卡尺测量追踪原发肿瘤的生长情况。一旦肿瘤达到可测量的程度，将小鼠分为两组，分别给予15 mg/kg剂量的G9或载体对照（PEG300/DMSO）。在整个治疗过程中，观察动物的体重、活动能力、行为和肿瘤生长情况。同时，在小鼠体内培养8041肿瘤，并采用与人MIAPACA2异种移植模型相同的G9治疗和肿瘤观察方案。与体外实验结果一致，Usp9x抑制剂抑制了人肿瘤异种移植模型中肿瘤的生长；然而，未观察到其对8041肿瘤异种移植模型生长的明显影响。然而，EOAI3402143 治疗可有效抑制人 MIAPACA2 和小鼠 8041 异种移植瘤中的 Usp9x 活性[3]。
体内实验表明，EOAI3402143 治疗可显著抑制人 MIAPACA2 异种移植瘤模型中的肿瘤生长，这与 Usp9x 的强效抑制作用相符。在小鼠模型中，该化合物可完全阻断或抑制多发性骨髓瘤肿瘤的生长。它在临床前癌症模型中展现出良好的抗肿瘤活性，支持其作为研究 DUB 生物学和泛素依赖性癌症信号通路的工具化合物的用途。体内疗效呈剂量依赖性，并与靶点结合和肿瘤组织中细胞凋亡的诱导相关。 |
| 酶活实验 |
EOAI3402143 的体外酶/受体结合研究通常采用重组 Usp9x、Usp24 或 Usp5 酶进行生化分析。标准方案通过将酶与泛素-AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）底物孵育来测定去泛素化酶活性，该底物在裂解后会释放荧光标记的 AMC。通过测量在化合物浓度递增的情况下荧光信号的降低来确定 IC50 值，从而评估抑制作用。共价结合通过质谱或活性探针进行确认。
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| 细胞实验 |
在96孔板中，每孔接种5000个UM-2、UM-6、UM-16和UM-76细胞，并加入指定浓度的EOAI3402143（1、2、3、4和5 μM），在37°C、CO2培养箱中培养三天。在37°C下孵育两小时后，向每孔加入20 μL浓度为5 g/L的MTT溶液。细胞用10% SDS缓冲液裂解后，使用酶标仪在570 nm处测量吸光度，并以630 nm作为参考波长。细胞以三重复的方式接种，并在第0、1、2、3和4天进行MTT检测，以评估细胞增殖情况[3]。
EOAI3402143的体外细胞实验包括用该化合物的系列稀释液处理癌细胞系（例如UM-2、MIAPACA2、多发性骨髓瘤细胞）24-72小时。使用MTT、CellTiter-Glo或克隆形成实验评估细胞活力。通过Annexin V/PI染色流式细胞术或测量caspase-3/7活性来定量细胞凋亡。通过Western blotting检测泛素化蛋白和特定底物（例如受Usp9x调控的MCL-1）来评估泛素-蛋白酶体通路调控情况。 |
| 动物实验 |
小鼠[3]
将2×10^6个8041细胞或5×10^6个MIAPACA2细胞悬浮于0.1 mL Matrigel/DMEM悬液中，经背中部注射到NSG [NOD/SCID/IL2r-g (null)]小鼠体内。待肿瘤生长至约100 mm^3后，将肿瘤大小相同的小鼠进行配对，并分配至不同的治疗组。对于携带8041肿瘤的小鼠，每组5只小鼠（载体组或EOAI3402143组）；对于携带MIAPACA2肿瘤的小鼠，每组4只小鼠（治疗组）。EOAI3402143以15 mg/kg的剂量，每隔一天腹腔注射一次，溶于DMSO:PEG300 (1:1)溶液中。肿瘤体积通过卡尺测量计算，肿瘤大小每周测量两次[3]。 EOAI3402143 的体内动物研究采用免疫缺陷小鼠的皮下异种移植模型。荷瘤小鼠通过腹腔注射或口服给药，以不同的剂量和给药方案接受该化合物治疗。肿瘤体积每周测量两次，终点指标包括肿瘤生长抑制、肿瘤消退和生存期。药效学评估包括分析肿瘤组织中 Usp9x 靶点结合、泛素积累和凋亡标志物。标准方案包括在整个研究期间监测体重和毒性评估。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
EOAI3402143 的药代动力学特性包括良好的 DMSO 溶解度和适用于体内制剂。该化合物为小分子，分子量为 503.42 g/mol，分子式为 C25H28Cl2N4O3。基于其理化性质，预计该化合物具有良好的口服生物利用度和组织分布。在药物研发过程中，通常会在临床前动物模型中测定详细的药代动力学参数，例如半衰期、清除率和分布容积。尽管该化合物半衰期较短，但其共价结合机制可能导致其与靶点的结合时间延长。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
EOAI3402143 的毒理学数据主要来源于临床前研究。作为一种去泛素化酶 (DUB) 抑制剂，其毒性特征与其作用机制相关，该机制可能影响正常的细胞蛋白质稳态。在动物研究中，该化合物在有效剂量下通常耐受性良好，但仍需监测体重、器官重量和组织病理学等标准毒理学参数。临床开发需要进一步的毒性研究。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体治疗。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
EOAI3402143 是一种用于研究去泛素化酶生物学以及 Usp9x 在癌症中作用的重要研究工具。它已上市销售，可用于研究 DUB 抑制剂在肿瘤治疗中的应用潜力。该化合物对 Usp9x、Usp24 和 Usp5 的选择性使其可用于解析各个 DUB 对癌细胞存活的贡献。其共价机制可提供持续抑制作用，使其成为靶点验证研究的有效探针。目前尚未确定其临床开发状态，仍处于临床前研究阶段。
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| 分子式 |
C25H28CL2N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
503.4
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| 精确质量 |
502.15
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| 元素分析 |
C, 59.65; H, 5.61; Cl, 14.08; N, 11.13; O, 9.53
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| CAS号 |
1699750-95-2
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| 相关CAS号 |
1699750-95-2;
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| PubChem CID |
91669215
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
714
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
IIKVQQNZHGBYGQ-KNTRCKAVSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H28Cl2N4O3/c1-2-3-22(30-25(32)19(17-28)16-23-21(26)8-9-24(27)29-23)18-4-6-20(7-5-18)34-15-12-31-10-13-33-14-11-31/h4-9,16,22H,2-3,10-15H2,1H3,(H,30,32)/b19-16+
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| 化学名 |
2-Cyano-3-(3,6-dichloro-pyridin-2-yl)-N-{1-[4-(2-morpholin-4-yl-ethoxy)-phenyl]-butyl}-acrylamide
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| 别名 |
EOAI 402143; EOAI 3402143; EOAI-3402143; EOAI3402143; G9 free base; G9 free base
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 50~100 mg/mL ( 99.32~198.64 mM )
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 10 mg/mL (19.86 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9865 mL | 9.9325 mL | 19.8649 mL | |
| 5 mM | 0.3973 mL | 1.9865 mL | 3.9730 mL | |
| 10 mM | 0.1986 mL | 0.9932 mL | 1.9865 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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