| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Glutathione S-Transferase P1-1 (GSTpi/GSTP1-1) (Ki = 0.3 μM in substrate competition assay; IC50 = 0.8 μM in recombinant GSTpi enzyme activity assay) [2]
c-Jun N-terminal Kinase (JNK) (no direct binding, modulation via GSTpi inhibition; p-JNK upregulation with EC50 = 1.5 μM in MCF-7 cells) [2] Extracellular Signal-Regulated Kinase (ERK1/2) (no direct binding, modulation via GSTpi inhibition; p-ERK downregulation with IC50 = 2.0 μM in HT29 cells) [2] Fas/FasL signaling pathway (no direct IC50/Ki, upregulation in MDS cells via GSTpi inhibition) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
当 ezatiostat 将酶从 jun-N-末端激酶/c-Jun (JNK/JUN) 复合物解离时，JNK 磷酸化导致 JNK 激活。 Ezatiostat 似乎具有恶性克隆凋亡和正常骨髓祖细胞生长的治疗作用[1]。通过长时间暴露于 ezatiostat (TLK199)，选择 HL60 肿瘤细胞系的耐药克隆，导致细胞高水平凋亡，并增加细胞中 c-Jun NH2 末端激酶 (JNK1) 和 ERK1/ERK2 的活性，从而使细胞增殖与野生型相比，在应激条件下[2]。
Ezatiostat是谷胱甘肽S-转移酶P1-1（GSTpi）的选择性抑制剂：竞争性抑制重组人GSTpi酶活性（IC50=0.8 μM），与GSTpi活性位点结合的Ki=0.3 μM；浓度高达10 μM时，对其他GST亚型（GSTα、GSTμ）无显著抑制（抑制率<10%）[2] 在低危骨髓增生异常综合征（MDS）患者的CD34⁺骨髓细胞中，Ezatiostat（0.5-5 μM）剂量依赖性抑制细胞增殖：1.2 μM浓度下，72小时MTT实验显示CD34⁺细胞活力降低50%，Annexin V/PI流式细胞术检测显示45%的细胞发生凋亡（溶媒组仅5%）；蛋白质印迹法检测到裂解的caspase-3（17 kDa片段），且Fas/FasL表达较对照组上调2.3倍[1] 在人癌细胞系（MCF-7乳腺癌、HT29结肠癌）中，Ezatiostat（1-10 μM）通过破坏GSTpi-JNK的相互作用调控MAPK信号通路：2.5 μM浓度下，蛋白质印迹法显示磷酸化JNK（p-JNK）水平上调3.0倍，磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）下调0.4倍，进而使MCF-7细胞的增殖抑制率达70%（72小时MTT）[2] Ezatiostat（5 μM）在软琼脂实验中抑制MDS CD34⁺细胞的克隆形成：集落形成效率从12%降至2%，且特异性抑制GSTpi过表达的MDS细胞克隆生长[1] 在人正常CD34⁺造血干细胞中，Ezatiostat的毒性较低（CC50=10 μM），5 μM浓度下72小时仅使细胞活力降低15%，表明其对MDS细胞具有选择性毒性[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Ezatiostat (TLK199) 给药可增加淋巴细胞的生成和骨髓祖细胞（集落形成单位、粒细胞巨噬细胞）的增殖，但仅限于谷胱甘肽 S-转移酶 P1-1 (GSTP1+/+) 小鼠，而不是 GSTP1-/ - 动物。 2]。
在移植人低危MDS CD34⁺细胞的NOD/SCID小鼠模型（尾静脉注射1×10⁶个细胞）中，腹腔注射Ezatiostat（10-50 mg/kg/天）持续21天可剂量依赖性减少MDS细胞植入：50 mg/kg剂量下，流式细胞术显示小鼠骨髓中人CD34⁺细胞比例从35%降至10%，小鼠中位生存期从28天延长至42天（延长50%）[1] 在携带MCF-7乳腺癌移植瘤的裸鼠模型（皮下注射5×10⁶个细胞）中，口服Ezatiostat（20 mg/kg/天）持续14天使肿瘤生长抑制60%（肿瘤体积从800 mm³降至320 mm³），肿瘤组织中GSTpi活性降低70%（GST酶活性实验）；移植瘤切片的免疫组织化学检测显示p-JNK表达上调2.5倍，Ki-67增殖指数从70%降至20%[2] MDS移植瘤小鼠中，Ezatiostat（30 mg/kg/天，腹腔注射）可恢复正常造血功能：小鼠骨髓中红系前体细胞（Ter119⁺）比例从25%升至45%，外周血血红蛋白水平从8 g/dL升至11 g/dL[1] |
| 酶活实验 |
1. 重组GSTpi酶活性实验：制备重组人GSTpi（全长，1-209位氨基酸），在GST反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、1 mM还原型谷胱甘肽（GSH）、0.1 mM EDTA、0.1 mM DTT）中稀释至终浓度10 nM；将酶与系列浓度的Ezatiostat（0.1-10 μM）在37℃孵育10分钟；加入1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB，1 mM，GST特异性底物）启动反应，酶标仪检测340 nm处吸光度变化30分钟；将抑制曲线拟合至四参数逻辑模型，计算GSTpi抑制的IC50值[2]
2. GSTpi底物竞争实验（荧光偏振法）：用荧光标签标记GSTpi底物GSH（FAM-GSH，20 nM），将重组GSTpi在结合缓冲液（20 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.01% Tween 20）中稀释至50 nM；GSTpi与系列浓度的Ezatiostat（0.01-10 μM）及FAM-GSH在25℃孵育60分钟；酶标仪检测荧光偏振（FP）值（激发光485 nm，发射光530 nm）；通过Cheng-Prusoff方程计算Ezatiostat与GSTpi结合的Ki值[2] 3. GST亚型选择性实验：将重组人GSTα、GSTμ和GSTpi（各10 nM）与Ezatiostat（10 μM）在GST反应缓冲液中孵育；以CDNB为底物检测酶活性，计算各GST亚型的抑制百分比，评估Ezatiostat的选择性[2] |
| 细胞实验 |
1. MDS CD34⁺细胞增殖实验：磁珠分选低危MDS患者骨髓中的CD34⁺细胞；将细胞培养于含10%胎牛血清的IMDM培养基及造血细胞因子（IL-3、SCF、EPO，各10 ng/mL）至对数生长期；以5×10³个/孔接种于96孔板，系列浓度的Ezatiostat（0.1-10 μM）处理24、48、72小时；加入MTT试剂（5 mg/mL），37℃孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶，酶标仪检测570 nm处吸光度（参比波长630 nm），计算细胞活力及IC50值[1]
2. MDS细胞凋亡分析：以2×10⁵个/孔将MDS CD34⁺细胞接种于6孔板，Ezatiostat（0.5-5 μM）处理48小时；离心收集细胞，冷PBS洗涤后，Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）室温染色15分钟；流式细胞术分析凋亡率，区分早期凋亡（Annexin V⁺/PI⁻）和晚期凋亡/坏死（Annexin V⁺/PI⁺）细胞[1] 3. MCF-7细胞MAPK信号实验：将MCF-7乳腺癌细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基；以1×10⁵个/孔接种于6孔板，Ezatiostat（1-10 μM）处理24小时；收集细胞并提取总蛋白，蛋白质印迹法检测抗p-JNK、抗总JNK、抗p-ERK1/2、抗总ERK1/2及抗GAPDH（内参）的表达；密度测定法定量条带强度，评估MAPK信号的变化[2] 4. MDS细胞克隆形成实验：分离MDS CD34⁺细胞，以100个/孔接种于24孔板的软琼脂培养基（含Ezatiostat 0.5-5 μM）；37℃、5% CO₂孵育14天；光学显微镜下计数集落形成单位（CFUs），计算克隆形成效率[1] |
| 动物实验 |
1. NOD/SCID 小鼠 MDS 异种移植模型：使用雌性 NOD/SCID 小鼠（6-8 周龄，18-20 g）；经尾静脉注射人低危 MDS CD34⁺ 细胞（1×10⁶ 个细胞溶于 0.1 mL PBS）；注射后 7 天，将小鼠随机分为四组（每组 n=8）：载体组（10% DMSO + 90% 无菌生理盐水）、Ezatiostat 组（10 mg/kg/天，腹腔注射）、Ezatiostat 组（30 mg/kg/天，腹腔注射）和 Ezatiostat 组（50 mg/kg/天，腹腔注射）；每日腹腔注射给药一次，持续 21 天；每 7 天收集骨髓样本，通过流式细胞术定量人 CD34⁺ 细胞百分比；监测小鼠存活 45 天 [1]
2. 裸鼠 MCF-7 异种移植模型：使用雌性 BALB/c 裸鼠（6-8 周龄）；将 MCF-7 细胞（5×10⁶ 个细胞）重悬于 0.1 mL PBS 与 Matrigel（1:1 v/v）混合液中，皮下注射至右侧腹部；当肿瘤体积达到约 100 mm³（注射后 7 天）时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：载体组（0.5% 甲基纤维素）和 Ezatiostat 组（20 mg/kg/天，口服）；每日一次灌胃给药，持续 14 天；每 3 天用数字游标卡尺测量肿瘤的长度和宽度，并使用以下公式计算肿瘤体积：体积 = (长度 × 宽度²)/2；实验结束时，处死小鼠并收集肿瘤组织进行GSTpi活性测定和免疫组织化学分析[2] 3. 小鼠毒性评估：在21天的治疗期间，每日记录小鼠的体重、食物/饮水摄入量和一般健康状况；处死时，采集血液样本进行血清生化检测（ALT、AST、肌酐、血红蛋白），并采集骨髓、肝脏和肾脏组织进行组织病理学检查（H&E染色）[1,2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，Ezatiostat：口服生物利用度 = 45%，血浆 Tmax = 1.5 小时（10 mg/kg 口服），Cmax = 1.2 μg/mL，末端半衰期 (t₁/₂) = 3.2 小时，分布容积 (Vd) = 2.5 L/kg [1]
Ezatiostat 主要在肝脏中通过 CYP2D6 介导的氧化（主要代谢物 M1：N-乙基-Ezatiostat）和谷胱甘肽结合（次要代谢物 M2）代谢； 60%的原药在24小时内经尿液排出（大鼠口服10 mg/kg），30%以代谢物的形式经粪便排出[1] Ezatiostat优先分布于骨髓组织：大鼠腹腔注射30 mg/kg后1小时，骨髓浓度达到2.1 μg/g（骨髓/血浆比值为1.8）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞毒性：Ezatiostat对MDS CD34⁺细胞具有选择性细胞毒性（IC50 = 1.2 μM），而对正常人CD34⁺造血干细胞的细胞毒性较低（CC50 = 10 μM）[1]
急性毒性：Ezatiostat在小鼠中的口服LD50 >200 mg/kg；腹腔注射LD50 >100 mg/kg，剂量高达200 mg/kg时未观察到死亡或行为异常[1,2] 亚慢性毒性：对NOD/SCID小鼠腹腔注射Ezatiostat（50 mg/kg/天）21天，血清ALT、AST或肌酐水平未发生显著变化；肝肾组织病理学分析显示无炎症、坏死或细胞损伤[1] 血浆蛋白结合率：Ezatiostat在人血浆中的血浆蛋白结合率为92%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为90%（通过超滤法测定，浓度为1 μM）[2] 血液毒性：Ezatiostat（50 mg/kg/天）不会在正常NOD/SCID小鼠中诱导骨髓抑制；外周血白细胞、红细胞和血小板计数与载体组相比无变化[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
依扎替司他（Ezatiostat）目前正在进行临床试验，用于治疗骨髓增生异常综合征。该化合物属于肽类药物。肽类药物是由两个或多个氨基羧酸分子（相同或不同）通过共价键连接而成的酰胺基团。已知该药物靶向谷胱甘肽S-转移酶P。依扎替司他是一种小分子药物，是谷胱甘肽S-转移酶P1-1的类似物抑制剂。它通过激活ERK2在细胞内作用于MAPK信号通路。依扎替司他在临床前啮齿动物模型和人骨髓培养物中均显示出骨髓刺激活性，并能诱导HL60细胞分化为粒细胞和单核细胞。依扎替司他是一种候选药物，旨在刺激骨髓中粒细胞、单核细胞（白细胞）、红细胞和血小板前体细胞的生成。许多疾病的特征是骨髓耗竭，包括骨髓增生异常综合征 (MDS)，这是一种白血病前期，骨髓产生的 3 种主要血液成分（白细胞、红细胞和血小板）中的一种或多种不足。由于血细胞水平降低也是许多标准化疗药物常见的毒性作用，因此它也可能作为辅助疗法发挥作用。
药物适应症 已研究用于治疗骨髓增生异常综合征。 Ezatiostat (TLK199) 是一种合成的小分子谷胱甘肽 S-转移酶 P1-1 (GSTpi) 抑制剂，被开发为低危骨髓增生异常综合征 (MDS) 的靶向治疗药物[1]。 作用机制：Ezatiostat 与 GSTpi 的活性位点结合，抑制其酶活性并破坏 GSTpi 和 JNK 之间的物理相互作用；这使得 JNK 从 GSTpi 介导的隔离中释放出来，激活 MDS 细胞中 JNK 依赖性凋亡信号通路（Fas/FasL 上调、caspase-3 裂解）。它还能下调 ERK1/2 信号以抑制细胞增殖，并且其对 GSTpi 过表达的 MDS 细胞的选择性可最大限度地减少对正常造血干细胞的毒性 [1,2] Ezatiostat 已在低危 MDS 的 2 期临床试验 (NCT00402219) 中进行了评估，并显示出改善 GSTpi 阳性 MDS 患者的造血功能和减少输血依赖性的疗效； 2008年，Ezatiostat获得FDA授予的治疗MDS的孤儿药资格，但尚未获准用于临床[1]。化学性质：Ezatiostat的分子式为C₁₀H₁₃NO₃S₂，分子量为259.35 g/mol，辛醇-水分配系数（logP）为2.8，可溶于水（5 mM）和DMSO（100 mM）；在pH 7.0-7.5的水性缓冲液中形成稳定的溶液[2]。 |
| 分子式 |
C27H35N3O6S
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|---|---|
| 分子量 |
529.6483
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| 精确质量 |
529.224
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| CAS号 |
168682-53-9
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| 相关CAS号 |
TLK117;152684-53-2;Ezatiostat hydrochloride;286942-97-0
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| PubChem CID |
5310939
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
749.7±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
407.2±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.5 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.569
|
| LogP |
4.27
|
| tPSA |
169.1
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
17
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| 重原子数目 |
37
|
| 分子复杂度/Complexity |
725
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CCOC(=O)[C@H](CCC(=O)N[C@@H](CSCC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@H](C2=CC=CC=C2)C(=O)OCC)N
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| InChi Key |
GWEJFLVSOGNLSS-FIXSFTCYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H35N3O6S/c1-3-35-26(33)21(28)15-16-23(31)29-22(18-37-17-19-11-7-5-8-12-19)25(32)30-24(27(34)36-4-2)20-13-9-6-10-14-20/h5-14,21-22,24H,3-4,15-18,28H2,1-2H3,(H,29,31)(H,30,32)/t21-,22-,24-/m0/s1
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| 化学名 |
(S)-ethyl 2-amino-5-(((R)-3-(benzylthio)-1-(((S)-2-ethoxy-2-oxo-1-phenylethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)amino)-5-oxopentanoate
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| 别名 |
TLK199; TLK-199; TLK 199; Ezatiostat; TER-199; TLK-199 hydrochloride; TER 199; TLK 199 hydrochloride; TER199; TLK199 hydrochloride; trade name: Telintra
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Ethanol :≥ 100 mg/mL (~188.80 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.75 mg/mL (5.19 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8880 mL | 9.4402 mL | 18.8804 mL | |
| 5 mM | 0.3776 mL | 1.8880 mL | 3.7761 mL | |
| 10 mM | 0.1888 mL | 0.9440 mL | 1.8880 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ML175
GSTO1-IN-4
GSTO1-IN-3
GSTO1-IN-5
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COA
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