| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent dye for binding to and staining of cell membranes
FM4-64 targets cellular membranes, specifically intercalating into the outer leaflet of the plasma membrane. It does not passively diffuse into the plasma membrane but integrates into lipid bilayers. The dye is internalized through endocytosis, enabling visualization of vesicle trafficking, endosomal pathways, and exocytosis. FM4-64 is used as a membrane structure marker. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. FM 工作液的配制
1.1 储备液的配制 用 DMSO 配制 5 mM 储备液。 1.2 工作液的配制 用预热的 HBSS 溶液配制 5-20 μM FM4-64 工作液。 注意：请根据您的具体需要调整 FM4-64 工作液的浓度，并使用新鲜配制的溶液。 2. 细胞染色（悬浮细胞） 2.1 离心并收集细胞，用 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度为 1 × 10~6/mL 2.2 加入 1 mL FM 工作液，室温孵育 5-30 分钟。 2.3 400 g 离心 3-4 分钟，弃上清液。 2.4 用 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。 将细胞重悬于 1 mL 无血清培养基或 PBS 中，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。 3.细胞染色（贴壁细胞） 3.1 将贴壁细胞培养在无菌盖玻片上。 3.2 将盖玻片从培养基中取出，吸除多余的培养基。 3.3 加入100 μL染料工作液，轻轻摇晃使染料完全覆盖细胞，孵育5-30分钟。 3.4 移除染料工作液，用培养基洗涤2-3次，每次5分钟，然后使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。 在体外，FM4-64用于对活细胞的质膜和细胞内细胞器进行染色。该染料在水溶液中不发荧光，但与脂质膜结合后会发出荧光。这使得研究人员能够实时观察和研究膜转运和内吞作用的动态过程。FM4-64广泛用于内吞和外吞膜结构的标记。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
FM4-64是一种红色荧光染料，可用于研究活体动物的内吞作用、外吞作用、囊泡运输和细胞器组织。它能够实时观察膜动力学，广泛应用于神经科学和细胞生物学研究。
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| 酶活实验 |
FM4-64的体外染色实验包括将活细胞与适当浓度（通常为1-10 μM）的染料孵育短时间（例如5-30分钟）。然后洗涤细胞，并使用配备合适滤光片的荧光显微镜进行成像。FM4-64在水溶液中不发荧光，但与脂质膜结合后会发出荧光。该染料可对细胞质膜进行染色，并通过内吞作用进入细胞内部。
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| 细胞实验 |
本研究通过荧光染料FM4-64（N-(3-三乙基铵丙基)-4-(对二乙氨基苯基己三烯基)-吡啶鎓2Br）的光谱位移，揭示了活细胞核膜（NE）内独特的微环境。该染料在生理温度下易于转运至核膜，并在620-650 nm激发下表现出增强的荧光，这与内吞途径和内质网（ER）中480-520 nm激发下的荧光强度形成对比。体外实验数据表明，该染料能够揭示带负电荷脂质的富集，这可能是由于局部磷脂合成所致。在有丝分裂过程中，对FM4-64与层粘蛋白相关多肽-1-绿色荧光蛋白进行双激发成像，结果表明核膜的解体能够保留内质网中的微尺度脂质复合物。在癌细胞或原代细胞中，核膜（NE）的褶皱很容易被观察到，T细胞杀伤肿瘤细胞的标志是核膜中长波长激发荧光的突然消失，这与细胞凋亡同时发生。FM4-64作为首个对核膜环境敏感的活性染料，为核膜的实时可视化和功能研究开辟了新的途径。[2]
目的：对荧光苯乙烯基染料FM 1-43和FM 4-64进行构象分析，以阐明两种染料对单个泌乳细胞囊泡和质膜的活性依赖性标记是否与其结构差异相关。方法：使用共聚焦显微镜研究FM 1-43和FM 4-64对单个囊泡和质膜的活性依赖性标记。测量与质膜融合的囊泡和单独的质膜的荧光强度，并计算其峰值振幅的比值。我们采用蒙特卡罗方法搜索FM 1-43和FM 4-64分子的构象空间，进一步对其进行了构象分析。结果：在FM 1-43对囊泡和质膜的染色中，荧光峰振幅比（囊泡与质膜）比FM 4-64染色高2.6倍。FM 4-64分子的低能构象分布在三种构象状态中（分别包含3、4和2个构象异构体），各状态的分子比例分别为62%、28%和9%。而FM 1-43的构象分布仅限于一种构象状态，且三种构象异构体的丰度大致相等，这可能是由于该分子具有更高的固有刚性所致。结论：观察到的FM 1-43分子的结构特征可能解释了其掺入囊泡基质后量子产率和/或结合亲和力的显著提高，从而导致其荧光发射强度高于FM 4-64。[3] FM染料广泛用于研究活真核细胞中的内吞作用、囊泡运输和细胞器组织。FM染料在植物细胞中的应用日益广泛，引发了关于其作为内吞作用标记物的适用性、其染色的细胞器以及其在囊泡运输网络中的具体路径的诸多争论。本文的主要目的是对植物细胞中这一争论的现状进行批判性评估。为此，本文提供了FM染料的重要特性、最佳染料浓度、染料储存条件以及染色和成像方案等背景信息。特别强调了在双标记实验中使用FM染料来识别特定细胞器的方法。由此，首次证实了FM4-64对高尔基体的染色作用。[4] FM4-64的体外细胞实验包括用染料处理活细胞，并利用延时荧光显微镜监测膜动力学。内吞作用通过测量荧光染料随时间的内化进入细胞内囊泡的情况来评估。外吞作用则通过监测囊泡与质膜融合时荧光强度的降低来研究。FM4-64被广泛用于研究囊泡运输和细胞器组织。 |
| 动物实验 |
FM4-64的体内动物实验包括将染料施用于活体动物（例如，通过注射到特定组织或器官）。收集组织样本，并使用荧光显微镜或共聚焦成像技术观察膜动力学。FM4-64用于研究活体动物的内吞作用、外吞作用和囊泡运输。具体实验方案取决于组织类型和实验目的。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
FM4-64 是一种水溶性苯乙烯基染料，具有高度亲脂性。其分子量为 607.52 (C30H37Br2N3S)。该染料通常用于水溶液中的细胞染色。其荧光特性（激发/发射最大值约为 515/640 nm）使其适用于红色通道成像。FM4-64 不发生被动扩散，而是通过内吞作用进入细胞。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
FM4-64在用于细胞染色的低浓度（1-10 μM）下通常被认为无毒。它是一种广泛使用的研究工具，尚未开发用于治疗用途。该染料的亲脂性使其在高浓度下可能引起细胞膜扰动。应遵循处理荧光染料的标准安全预防措施。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
小鼠耳蜗培养物中的毛细胞可通过瞬时暴露于FM1-43（一种用于研究胞吞和胞吐的苯乙烯基染料）进行选择性标记。实时共聚焦显微镜显示，该染料快速进入细胞，主要通过细胞顶端表面进入。冷却至4°C和高细胞外钙浓度会降低染料的负载量。用EGTA（可破坏顶端连接并阻止机械转导通道的门控）预处理可消除在钙存在下后续的染料负载。钙螯合后，染料负载量恢复，其时间进程与顶端连接再生相似。尽管Myo7a突变体毛细胞具有机械转导能力，但其所有机械转导通道在静息状态下通常处于关闭状态，除非受到强烈的兴奋性刺激，否则不会被FM1-43标记。低微摩尔浓度的FM1-43细胞外灌注可逆性地阻断机械转导。高细胞外钙离子浓度可降低阻断效应，且该阻断效应具有电压依赖性，在极高的正负电位下减弱，表明FM1-43是机械转导通道的可渗透性阻断剂。电压阶跃至极高电位后阻断效应的时间进程进一步提示FM1-43与其他阳离子竞争通道孔中的结合位点。在细胞内浓度下，FM1-43不阻断转导通道，而相同浓度的FM1-43在细胞外应用时则导致完全阻断。钙螯合和FM1-43均可降低氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的耳毒性，提示FM1-43和氨基糖苷类抗生素通过同一途径进入毛细胞。 [1]
FM4-64（CAS号：162112-35-8）是一种膜选择性红色荧光苯乙烯基吡啶染料，属于FM家族。它也被称为SynaptoRed C2。FM4-64广泛用作荧光探针，用于追踪活细胞和组织中的膜动力学、内吞作用、外吞作用和囊泡运输。该染料在水溶液中不发荧光，但与脂质膜结合后会发出荧光。FM4-64并非药物，也未获准用于临床；它是一种细胞生物学研究工具。 |
| 分子式 |
C30H45N3+2.2[BR-]
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|---|---|
| 分子量 |
607.5064
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| 精确质量 |
605.198
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| 元素分析 |
C, 59.31; H, 7.47; Br, 26.31; N, 6.92
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| CAS号 |
162112-35-8
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| PubChem CID |
6508728
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| 外观&性状 |
Gray to dark gray solid powder
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| LogP |
0.377
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| tPSA |
7.12
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
14
|
| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
561
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN(CC)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C=C/C=C/C2=CC=[N+](C=C2)CCC[N+](CC)(CC)CC.[Br-].[Br-]
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| InChi Key |
AFVSZGYRRUMOFH-UHFFFAOYSA-L
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H45N3.2BrH/c1-6-32(7-2)30-20-18-28(19-21-30)16-13-11-12-14-17-29-22-25-31(26-23-29)24-15-27-33(8-3,9-4)10-5;;/h11-14,16-23,25-26H,6-10,15,24,27H2,1-5H3;2*1H/q+2;;/p-2
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| 化学名 |
3-[4-[(1E,3E,5E)-6-[4-(diethylamino)phenyl]hexa-1,3,5-trienyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide
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| 别名 |
FM4 64; FM464; 162112-35-8; FM4-64; N-(3-Triethylammoniopropyl)-4-(6-(4-(diethylamino)phenyl) hexatrienyl)pyridinium dibromide; 3-[4-[(1E,3E,5E)-6-[4-(Diethylamino)phenyl]hexa-1,3,5-trienyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide; 4-((1E,3E,5E)-6-(4-(diethylamino)phenyl)hexa-1,3,5-trien-1-yl)-1-(3-(triethylammonio)propyl)pyridin-1-ium bromide; 4-(6-(4-(diethylamino)phenyl)hexa-1,3,5-trien-1-yl)-1-(3-(triethylammonio)propyl)pyridin-1-ium bromide; FM4-64
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~82.30 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6461 mL | 8.2303 mL | 16.4606 mL | |
| 5 mM | 0.3292 mL | 1.6461 mL | 3.2921 mL | |
| 10 mM | 0.1646 mL | 0.8230 mL | 1.6461 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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