| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Fluorescent dye for binding to and staining of cell membranes
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. FM工作溶液的制备
1.1 储备液的制备 用DMSO制备5mM储备液 1.2 工作溶液的制备 使用预热的HBSS溶液制备5-20μM FM4-64工作溶液 注意：请根据您的具体需要调整FM4-64工作溶液的浓度，并现配现用(使用新制备的溶液) 2. 细胞染色（悬浮细胞） 2.1 离心收集细胞，用PBS洗涤两次，每次5分钟。细胞密度为1×10~6/mL 2.2 加入1 mL FM工作溶液，在室温下孵育5-30分钟 2.3 在400g下离心3-4分钟，丢弃上清液 2.4 用PBS洗涤细胞两次，每次5分钟 将细胞重新悬浮在1 mL无血清培养基或PBS中后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察 3. 细胞染色（贴壁细胞） 3.1 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞 3.2 从培养基上取下盖玻片，吸出多余的培养基 3.3 加入100μL染料工作液，轻轻摇晃至完全覆盖细胞，孵育5-30分钟 3.4 吸出染料工作液，用培养基洗涤2-3次，每次5分钟，用荧光显微镜或流式细胞仪观察。 |
| 细胞实验 |
在这项研究中，研究人员报告了活细胞核膜（NE）内独特的微环境，这是由荧光染料FM4-64（N-（3-三乙基铵丙基）-4-（对二乙氨基苯基六三烯基）-吡啶鎓2Br）的光谱偏移所揭示的。在生理温度下，染料很容易转移到NE，当在620-650nm下激发时，它表现出增强的荧光，而在内吞途径和内质网（ER）中的激发波长为480-520nm。体外数据表明，染料显示带负电荷的脂质富集，可能是由于局部磷脂合成。FM4-64与有丝分裂过程中的薄层相关多肽-1-绿色荧光蛋白的双激发成像表明，NE的分解在ER中保留了微规模的脂质复合物。癌症或原代细胞中的NE的卷积很容易观察到，T细胞对肿瘤细胞的杀伤以NE中长波长激发荧光的突然丧失为标志，同时发生凋亡。FM4-64作为第一种对NE环境敏感的重要染料的报告为NE的实时可视化和功能研究开辟了新的途径。[2]
目的：对荧光苯乙烯基染料FM 1-43和FM 4-64进行构象分析，以阐明两种染料对单个催乳素囊泡和质膜的不同活性依赖性标记是否与其结构差异有关。 方法：利用共聚焦显微镜研究FM 1-43和FM 4-64对单个囊泡和质膜的活性依赖性标记。测量与质膜融合的囊泡和单独的质膜的荧光强度；计算它们各自的峰值振幅之比。通过蒙特卡洛方法搜索这些分子的构象空间，进一步对FM 1-43和FM 4-64进行了构象分析。 结果：在囊泡和质膜的FM 1-43染色中，荧光峰振幅的比值（囊泡与质膜）比FM 4-64染色高2.6倍。在FM 4-64分子中，低能构象分布在三种构象状态（分别由3、4和2个构象组成），其中处于给定状态的分子比例分别为62%、28%和9%。在FM 1-43中，构象分布仅限于一种构象状态，其中三种构象大致相等，这可以用分子的更大内在刚性来解释。 结论：观察到的FM 1-43分子的结构特征可能解释了将染料掺入囊泡基质后量子产率和/或结合亲和力的更高增加，因此与FM 4-64相比，荧光发射更强。[3] FM染料被广泛用于研究活真核细胞的内吞作用、囊泡运输和细胞器组织。FM染料在植物细胞中的使用越来越多，这引发了关于它们作为内吞标记物的适用性、它们染色哪些细胞器以及它们在囊泡运输网络中遵循的精确途径的争论。本文的主要目的是批判性地评估这场争论在植物细胞方面的现状。为此，提供了FM染料的重要特征、最佳染料浓度、染料储存条件以及染色和成像方案的背景信息。特别强调在双重标记实验中使用FM染料来鉴定特定的细胞器。通过这种方式，首次证明了FM4-64对高尔基体的染色。[4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
小鼠耳蜗培养物中的毛细胞可通过短暂暴露于FM1-43（一种用于研究胞吞和胞吐的苯乙烯基染料）而被选择性标记。实时共聚焦显微镜显示，染料进入细胞的速度很快，且主要通过细胞顶端表面进入。冷却至4℃和高细胞外钙浓度均可降低染料的负载量。用EGTA预处理（该处理可破坏顶端连接并阻止机械转导通道的门控）可消除后续在钙存在下的染料负载。钙螯合后，染料负载恢复，其时间进程与顶端连接再生过程相似。Myo7a突变体毛细胞虽然能够进行机械转导，但其所有机械转导通道在静息状态下均处于正常关闭状态，除非受到强烈的兴奋性刺激，否则不会被FM1-43标记。细胞外灌注FM1-43可逆地阻断机械转导，半阻断浓度在低微摩尔范围内。高细胞外钙离子浓度可降低阻滞作用，且阻滞作用具有电压依赖性，在极高的正负电位下均会减弱，表明FM1-43是一种机械转导通道的渗透性阻滞剂。电压阶跃至极高电位后阻滞作用解除的时间进程进一步提示FM1-43与其他阳离子竞争通道孔内的结合位点。在细胞内浓度下，FM1-43不会阻断转导通道，而该浓度在细胞外应用时会导致完全阻滞。钙螯合和FM1-43均能降低氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的耳毒性，提示FM1-43和氨基糖苷类抗生素通过同一途径进入毛细胞。[1]
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| 分子式 |
C30H45N3+2.2[BR-]
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|---|---|
| 分子量 |
607.5064
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| 精确质量 |
605.198
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| 元素分析 |
C, 59.31; H, 7.47; Br, 26.31; N, 6.92
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| CAS号 |
162112-35-8
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| PubChem CID |
6508728
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| 外观&性状 |
Gray to dark gray solid powder
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| LogP |
0.377
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| tPSA |
7.12
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
14
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
561
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN(CC)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C=C/C=C/C2=CC=[N+](C=C2)CCC[N+](CC)(CC)CC.[Br-].[Br-]
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| InChi Key |
AFVSZGYRRUMOFH-UHFFFAOYSA-L
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H45N3.2BrH/c1-6-32(7-2)30-20-18-28(19-21-30)16-13-11-12-14-17-29-22-25-31(26-23-29)24-15-27-33(8-3,9-4)10-5;;/h11-14,16-23,25-26H,6-10,15,24,27H2,1-5H3;2*1H/q+2;;/p-2
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| 化学名 |
3-[4-[(1E,3E,5E)-6-[4-(diethylamino)phenyl]hexa-1,3,5-trienyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide
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| 别名 |
FM4 64; FM464; 162112-35-8; FM4-64; N-(3-Triethylammoniopropyl)-4-(6-(4-(diethylamino)phenyl) hexatrienyl)pyridinium dibromide; 3-[4-[(1E,3E,5E)-6-[4-(Diethylamino)phenyl]hexa-1,3,5-trienyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide; 4-((1E,3E,5E)-6-(4-(diethylamino)phenyl)hexa-1,3,5-trien-1-yl)-1-(3-(triethylammonio)propyl)pyridin-1-ium bromide; 4-(6-(4-(diethylamino)phenyl)hexa-1,3,5-trien-1-yl)-1-(3-(triethylammonio)propyl)pyridin-1-ium bromide; FM4-64
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~82.30 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6461 mL | 8.2303 mL | 16.4606 mL | |
| 5 mM | 0.3292 mL | 1.6461 mL | 3.2921 mL | |
| 10 mM | 0.1646 mL | 0.8230 mL | 1.6461 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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