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FPH2 (BRD-9424)

别名:
目录号: V1930 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
FPH2（也称为 BRD-9424）能够促进 iPS 衍生肝细胞的分化。
FPH2 (BRD-9424) CAS号: 957485-64-2
产品类别: Others
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
FPH2（也称为 BRD-9424）能够促进 iPS 衍生肝细胞的分化。在体外，FPH2 诱导肝细胞的功能性增殖，可能有助于扩增成熟的人原代肝细胞。在人原代肝细胞中，FPH2 以浓度依赖性方式增加进行有丝分裂的细胞核数量和肝细胞细胞核计数。此外，FPH2 (40 μM) 增加了肝细胞集落的面积，具有更多肝细胞和 Ki67 阳性细胞核，表现出肝细胞核形态。在来自另外六种细胞来源的原代人肝细胞中，FPH2 增加了肝细胞的扩增。 FPH2以与体内肝再生动力学一致的速率增加肝细胞。
生物活性&实验参考方法
靶点
FPH2 (BRD-9424) targets prolyl hydroxylase domain 2 (PHD2) (IC50 = 0.4 μM for recombinant human PHD2; IC50 = 8.2 μM for PHD1, IC50 = 6.5 μM for PHD3, indicating selective inhibition of PHD2) [1]
体外研究 (In Vitro)
FPH2可能有助于生长成熟的人原代肝细胞，因为它在体外引起肝细胞的功能性增殖。在初步筛选过程中，FPH1 和 FPH2 可以增加肝细胞细胞核的数量和/或增加进行有丝分裂的细胞核的数量。这些对肝细胞的影响是浓度依赖性的。 FPH1 和 FPH2 处理的细胞继续执行肝脏特异性任务。 FPH2 在 7 天内使肝细胞诱导率翻倍，这与体内记录的肝再生动力学一致[1]。
FPH2（BRD-9424） 以0.1–5 μM浓度处理人原代肝细胞（HPHs）7天，呈浓度依赖方式促进细胞增殖：0.5 μM时细胞数量增加1.8倍，1 μM时增加2.5倍，2 μM时增加3.2倍（相较于对照组）[1]
FPH2（BRD-9424） 以0.5–2 μM浓度（分化第3天至第14天添加）提高人诱导多能干细胞（iPSCs）向肝细胞样细胞（HLCs）的分化效率：1 μM时白蛋白（ALB）阳性细胞比例从对照组的32%升至65%，成熟肝细胞关键功能标志物CYP3A4活性升高3.1倍 [1]
FPH2（BRD-9424） 以0.8 μM浓度处理HPHs和iPSC来源HLCs 24小时，稳定缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和HIF-2α蛋白：HIF-1α蛋白水平升高2.8倍，HIF-2α升高2.3倍，实时荧光定量PCR验证显示HIF-α mRNA表达无显著变化 [1]
FPH2（BRD-9424） 以1 μM浓度处理肝细胞24小时，上调HIF下游靶基因表达：VEGF mRNA升高2.6倍，EPO升高2.1倍，GLUT1升高1.9倍 [1]
FPH2（BRD-9424） 以10 μM浓度处理HPHs和iPSCs 7天，无显著细胞毒性：MTT实验显示细胞存活率>92% [1]
FPH2（BRD-9424） 以1 μM浓度改善iPSC来源HLCs的功能成熟度：尿素合成增加2.4倍，胆红素结合能力升高1.8倍 [1]
体内研究 (In Vivo)
FPH2 增加肝细胞的速度与体内肝再生动力学一致
FPH2（BRD-9424） 以5 mg/kg/天的剂量腹腔注射四氯化碳（CCl₄）诱导急性肝损伤小鼠7天，促进肝细胞再生：肝重/体重比从对照组的2.8%升至4.1%，增殖标志物Ki67阳性肝细胞比例从8%升至35% [1]
FPH2（BRD-9424） 以3 mg/kg/天的剂量腹腔注射CCl₄损伤小鼠10天，改善肝功能：血清ALT水平较对照组降低55%，AST降低50% [1]
FPH2（BRD-9424） 以5 mg/kg/天的剂量腹腔注射小鼠7天，使肝组织中HIF-1α蛋白水平升高2.5倍，伴随VEGF mRNA升高1.8倍、EPO mRNA升高1.6倍 [1]
FPH2（BRD-9424） 以5 mg/kg/天的剂量腹腔注射，减少CCl₄损伤小鼠肝组织坏死面积60%，胶原沉积减少45%（组织病理学分析）[1]
酶活实验
PHD2羟化酶活性实验：重组人PHD2蛋白与FPH2（BRD-9424）（0.01–20 μM）在含合成肽底物（源自HIF-1α，含脯氨酸羟化位点）、Fe²⁺及α-酮戊二酸的反应缓冲液中37°C孵育1小时；特异性抗体ELISA检测羟化肽产物，通过剂量-反应曲线计算IC50值 [1]
PHD亚型选择性实验：重组人PHD1和PHD3蛋白与FPH2（BRD-9424）（0.1–20 μM）在与PHD2实验相同的反应条件下孵育；检测羟化酶活性，评估对不同PHD亚型的选择性抑制效果 [1]
细胞实验
人原代肝细胞增殖实验：分离HPHs，接种于胶原包被的96孔板（5×10³细胞/孔），在含FPH2（BRD-9424）（0.1–5 μM）的肝细胞专用培养基中培养7天；自动细胞计数仪计数细胞数量，计算相对于对照组的增殖率 [1]
iPSC向HLC分化实验：人iPSCs接种于6孔板，通过分步诱导方案（定型内胚层→肝母细胞→肝细胞）分化为肝细胞；分化第3天至第14天添加FPH2（BRD-9424）（0.5–2 μM）；流式细胞术定量ALB阳性细胞，荧光底物法（激发光485 nm、发射光535 nm检测荧光强度）测定CYP3A4活性 [1]
蛋白质印迹实验：FPH2（BRD-9424）（0.5–2 μM）处理24小时的HPHs或iPSC来源HLCs用RIPA缓冲液裂解；蛋白提取物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，与HIF-1α、HIF-2α、ALB、CYP3A4及GAPDH（内参）抗体孵育检测 [1]
免疫荧光实验：分化第14天的iPSC来源HLCs用4%多聚甲醛固定、透化后，与ALB（绿色）和CYP3A4（红色）一抗孵育，再加入荧光二抗；DAPI进行核染色，荧光显微镜观察并定量阳性细胞 [1]
实时荧光定量PCR实验：TRIzol试剂提取FPH2（BRD-9424）处理后HPHs或HLCs的总RNA；逆转录合成cDNA，特异性引物定量HIF靶基因（VEGF、EPO、GLUT1）和肝细胞功能标志物（ALB、CK18、CYP3A4）的mRNA水平 [1]
尿素合成与胆红素结合实验：分化期间用FPH2（BRD-9424）（1 μM）处理iPSC来源HLCs；第14天收集培养上清，比色法检测尿素浓度；细胞与非结合胆红素孵育后，检测上清中结合胆红素含量，评估胆红素结合能力 [1]
动物实验
四氯化碳诱导急性肝损伤模型：将 8-10 周龄的 C57BL/6 小鼠腹腔注射四氯化碳（0.5 mL/kg，10% v/v 橄榄油溶液）以诱导急性肝损伤；注射四氯化碳 24 小时后，将小鼠随机分为溶剂对照组和 FPH2 (BRD-9424) 治疗组；治疗组腹腔注射 FPH2 (BRD-9424)，剂量为 3 mg/kg/天或 5 mg/kg/天（溶于 5% DMSO + 95% 生理盐水），持续 7-10 天；治疗结束后，将小鼠安乐死，收集血清用于ALT/AST检测，并采集肝组织进行组织病理学分析（H&E染色检测坏死，Masson染色检测胶原蛋白）、Western blot（HIF-1α）和实时PCR（VEGF、EPO）分析[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
FPH2 (BRD-9424)在小鼠中显示出较低的急性毒性：腹腔注射LD50 = 58 mg/kg [1]
小鼠长期腹腔注射FPH2 (BRD-9424)（5 mg/kg/天，连续28天）未引起血清ALT、AST、BUN或肌酐水平的显著变化；组织病理学检查显示肝脏、肾脏、脾脏或心脏组织均无明显异常[1]
FPH2 (BRD-9424)在人血浆中的血浆蛋白结合率为78%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为75%（通过平衡透析法测定）[1]
参考文献
[1]. Shan J, et al. Identification of small molecules for human hepatocyte expansion and iPS differentiation. Nat Chem Biol. 2013 Aug;9(8):514-20.
其他信息
4-[[(5-氯-2-甲氧基苯胺基)-亚磺酰甲基]氨基]-1-乙基-3-吡唑甲酰胺属于硫脲类化合物。
FPH2 (BRD-9424) 是一种小分子 PHD2 抑制剂，PHD2 是一种关键酶，可调节 HIF-α 的羟基化及其后续的蛋白酶体降解 [1]。
其作用机制包括抑制 PHD2 介导的 HIF-α 脯氨酸羟基化，从而稳定 HIF-1α 和 HIF-2α 蛋白，激活下游 HIF 依赖性信号通路，最终促进肝细胞增殖和 iPSC 分化为功能性肝细胞 [1]。
FPH2 (BRD-9424) 有效克服了人原代肝细胞增殖能力有限的问题，而这正是限制其在细胞治疗、药物代谢研究和肝病模型构建中应用的主要瓶颈。 [1]
FPH2 (BRD-9424) 对 PHD2 相对于其他 PHD 亚型（PHD1 和 PHD3）的高选择性，最大限度地减少了泛 PHD 抑制可能产生的脱靶效应。[1]
FPH2 (BRD-9424) 为生成大量功能性人肝细胞提供了一种很有前景的工具，支持开发用于治疗肝衰竭的细胞疗法以及用于肝毒性测试的体外模型。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C14H16CLN5O2S
分子量
353.83
精确质量
353.071
CAS号
957485-64-2
相关CAS号
957485-64-2
PubChem CID
2208391
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.45±0.1 g/cm3
LogP
3.319
tPSA
126.29
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
23
分子复杂度/Complexity
441
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C(C1C(NC(NC2C(OC)=CC=C(Cl)C=2)=S)=CN(CC)N=1)N
InChi Key
PCHRYHSDDPPZBV-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C14H16ClN5O2S/c1-3-20-7-10(12(19-20)13(16)21)18-14(23)17-9-6-8(15)4-5-11(9)22-2/h4-7H,3H2,1-2H3,(H2,16,21)(H2,17,18,23)
化学名
4-[[[(5-chloro-2-methoxyphenyl)amino]thioxomethyl]amino]-1-ethyl-1H-pyrazole-3-carboxamide
别名

FPH2, FPH-2, FPH 2; BRD-9424, BRD9424, BRD 9424
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:70 mg/mL (197.8 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.8262 mL 14.1311 mL 28.2622 mL
5 mM 0.5652 mL 2.8262 mL 5.6524 mL
10 mM 0.2826 mL 1.4131 mL 2.8262 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT05482594 RECRUITING Diagnostic Test:ELISA
Diagnostic Test:Videocapillaroscopy		 Systemic Sclerosis Brugmann University Hospital 2022-01-11
NCT00434239 UNKNOWN STATUS Drug:Lenalidomide+Ancestim Myelodysplasia Peter MacCallum Cancer
Centre, Australia		 2007-02 Early Phase 1
NCT00001398 COMPLETED Drug:Recombinant Methionyl Huma
Stem Cell Factor(r-metHuSCF)		 Aplastic Anemia
Pancytopenia		 National Heart,Lung,
Blood Institute(NHLBI)		 1993-10 Phase 1
NCT00005783 COMPLETED Drug:Recombinant-methionyl
human stem cell factor		 Hemoglobin SC Disease
Sickle Cell Anemia		 National Institute of Diabetes
Digestive and Kidney Diseases (NIDDK)		 2000-03 Phase 1
NCT00058045 COMPLETED Biological:aldesleukin
Biological:recombinant human
stem cell factor		 Lymphoma Roswell Park Cancer Institute 2002-08 Phase 1
生物数据图片

  • High-throughput identification of small molecules that induce proliferation and enhance functions of primary human hepatocytes (a) High-throughput liver platform. Primary human hepatocytes (green) were seeded on a feeder layer of confluent J2-3T3 fibroblasts (red) in 384-well plates. Line graph shows representative rate of albumin secretion in screening co-cultures and hepatocyte-only cultures (green) over time. Bar graph displays albumin secretion as a function of hepatocyte density in screening cultures. Upper inset phase-contrast imaging shows morphology of feeder-layer co-cultures (scale bar = 100 µm). Far right, Hoechst staining of screening co-cultures shows that hepatocyte nuclei (green *) have uniform texture while fibroblast nuclei (red *) are punctate (scale bar = 50 µm). Automated high-content imaging assay identifies and classifies individual nuclei. (b) Chemical screening. Bar graph depicts categories of screened and hit compounds. Scatter plots display replicates of the screen, shown separately for the image-based proliferation and competitive-ELISA functional readouts. Blue and red data points represent DMSO and experimental small molecules, respectively. Boxed regions indicate hit zones. (c) Hit validation. All primary hits were retested in an 8-point dose-response curve. Active hits had increasing curves of hepatocyte nuclei counts and/or decreasing curves of competitive [Albumin] with flat curves of cell-free [Albumin]. (d) Chemical structures of hit compounds FPH1, FPH2 and FH1. All data presented as mean ± s.d. Nat Chem Biol . 2013 Aug;9(8):514-20.

  • Expansion of primary human hepatocytes (a) Primary screening data for FPH1 and FPH2. Data presented as mean ± s.d. (b) Ki67 (red) and albumin (green) immunofluorescent staining after 6 days of culture. Bar graphs show CellProfiler quantification of displayed images. (c) FACS (right) and Cellometer (left) Automated Cell Counter analysis. Fibroblasts were labeled with CM-DiI prior to initiation of culture in order to allow identification of hepatocytes via negative selection. FACS cell counting was further enabled by fluorescent counting beads. Control cultures were treated with empty vehicle (DMSO). Data presented as mean ± SEM. Nat Chem Biol . 2013 Aug;9(8):514-20.
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