Fruquintinib   中文名称: 呋喹替尼

VEGFR1 (IC50 = 33 nM); VEGFR2 (IC50 = 35 nM); VEGFR3 (IC50 = 0.5 nM)
Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 (VEGFR1/Flt-1) (IC₅₀=33 nM in recombinant kinase assay);
Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 (VEGFR2/KDR) (IC₅₀=0.5 nM in recombinant kinase assay);
Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 3 (VEGFR3/Flt-4) (IC₅₀=1.8 nM in recombinant kinase assay) [1]

体外活性：呋喹替尼（原名 HMPL-013）是一种新型、强效、选择性口服小分子抑制剂，对 VEGFR 家族具有强效性和高选择性。目前正处于 II 期临床研究中。 I 期药代动力学数据分析显示，每日口服一次的最大耐受剂量呋喹替尼可实现 VEGFR2 完全抑制（药物浓度维持在小鼠体内对 VEGFR2 磷酸化产生 >85% 抑制所需的浓度以上），持续 24 小时。 VEGF/VEGFR信号轴已被证明是开发新型癌症疗法的重要靶点。小分子 VEGFR 抑制剂的一个具有挑战性的方面是在以前只有长效生物制剂才能实现的耐受剂量下实现持续的目标抑制。它需要高效力（低有效药物浓度）和在耐受剂量下足够的药物暴露，以便在给药期内药物浓度可以维持在有效药物浓度以上以实现目标抑制。激酶测定：在体外酶和细胞测定中，呋喹替尼抑制 VEGFR 家族激酶并抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 和人淋巴内皮细胞 (HLEC) 中的 VEGF/VEGFR 细胞信号传导，IC50 处于低纳摩尔水平。在一组 253 种激酶测试中，除 VEGFR 外，很少有激酶受到抑制。呋喹替尼是一种高效的 VEGF 诱导的血管生成抑制剂。细胞测定：将处于指数生长期的原代HUVEC或HLEC悬浮于100μL含有0.5％FBS的RPMI-1640培养基中，并以5000个细胞/孔接种于预先涂有0.2％明胶或纤连蛋白的96孔板中，并孵育过夜在 5% CO2、37°C 培养箱中。添加呋喹替尼和 VEGF-A165 或 VEGF-C (50 ng/mL) 并孵育 48 小时。使用 CCK-8 测定格式测定细胞的活力。

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呋喹替尼（Fruquintinib） 是一种强效、高选择性的VEGFR1、2、3酪氨酸激酶小分子抑制剂，对468种人源激酶面板的交叉反应性极低（选择性评分S₁₀=0.008，表明对VEGFR家族的选择性>99%）[1]
- 在HTRF-based激酶实验中，强效抑制重组人VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3的激酶活性，IC₅₀值分别为33 nM、0.5 nM和1.8 nM；对血管生成关键介质VEGFR2的 potency较VEGFR1高>100倍[1]
- 抑制VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖，IC₅₀=1.6 nM；剂量依赖性阻断VEGF诱导的HUVEC迁移（IC₅₀=2.3 nM）和管腔形成（IC₅₀=3.1 nM）[1]
- 对VEGFR依赖性肿瘤细胞系具有中等抗增殖活性：GI₅₀值分别为2.8 μM（人结直肠癌细胞HT-29）、3.5 μM（非小细胞肺癌细胞A549）、4.2 μM（肝癌细胞HepG2）、5.1 μM（乳腺癌细胞MDA-MB-231）；对VEGFR低表达细胞系（如MCF-7，GI₅₀>20 μM）无显著活性[1]
- 阻断VEGFR介导的下游信号通路：在VEGF（50 ng/mL）刺激的HUVEC中，呋喹替尼（Fruquintinib）（0.1–10 nM）剂量依赖性降低VEGFR2（Tyr1175）、AKT（Ser473）和ERK1/2（Thr202/Tyr204）的磷酸化水平；总VEGFR2、AKT和ERK1/2水平无变化[1]
- 体外抑制肿瘤细胞诱导的血管生成：HT-29细胞与HUVEC共培养可促进管腔形成；呋喹替尼（Fruquintinib）（1–10 nM）处理较溶媒对照组减少管腔形成40–75%[1]
- 抑制HT-29细胞克隆形成：0.5–5 μM 呋喹替尼（Fruquintinib） 培养14天后，克隆形成效率较溶媒对照组降低35–68%[1]

在胃癌BGC-823模型中，每日一次0.5 mg/kg和2 mg/kg剂量的呋喹替尼可分别抑制肿瘤生长62.3%和95.4∼98.6%。当剂量升高至5mg/kg和20mg/kg时，肿瘤分别消退24.1%和48.6%。呋喹替尼的抗肿瘤生长活性水平在不同的肿瘤异种移植模型中有所不同。即使在最低剂量 0.8 mg/kg 时，呋喹替尼也能显着降低微血管密度。

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Fruquintinib能有效抑制VEGF诱导的小鼠肺组织中KDR磷酸化[1]
Fruquintinib在体外抑制HUVEC和HEK293-KDR细胞的KDR信号传导。为了证实这种作用，并在体内建立PK/PD关系，我们在口服氟喹替尼后，对小鼠肺组织中VEGF-A诱导的KDR磷酸化进行了评估。如图4A所示，单次口服剂量为2.5 mg/kg的fruquininib后，VEGF刺激的KDR磷酸化被完全抑制，效果持续至少8小时，而p-KDR水平在给药后16小时恢复。在给药后1、4、8、16和24小时采集血浆样本，以测定fruquininib的浓度（图4B）。fruquininib在1小时时达到Cmax，从而达到p-KDR抑制的最大水平，使p-KDR水平低于基础水平。8 h时p-KDR抑制率仍维持在86%，血浆中相应的氟喹替尼浓度为176 ng/mL。与16小时肺组织中KDR磷酸化缺乏抑制一致，氟喹替尼的血浆浓度低于10 ng/mL。24小时血浆氟喹替尼浓度低于定量下限。这些结果表明，p-KDR在肺中的抑制作用与血浆药物暴露直接相关，血浆中176 ng/mL的fruquininib可达到80%以上的肺组织靶抑制作用。

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fruquininib抑制多种人类异种移植瘤模型的肿瘤生长[1]
我们在多种肿瘤异种移植物中评估了fruquintinib的抗肿瘤活性，并测量了血浆药物浓度，试图建立靶抑制-肿瘤生长抑制关系（图5A-5D和表2）。胃癌BGC-823模型的结果似乎表明，药物浓度至少需要维持在EC85以上（抑制KDR磷酸化85%所需的药物浓度）约8小时，才能达到>80%的肿瘤生长抑制（临床病情稳定），以及更长的靶标覆盖时间以实现肿瘤消退（临床部分缓解）（图5A-C）。BGC-823对fruquininib最敏感。在该模型中，每天给药一次，0.5 mg/kg和2 mg/kg时，fruquininib分别抑制肿瘤生长62.3%和95.4 ~ 98.6%（图5A和B，表2）。当剂量增加到5 mg/kg和20 mg/kg时，肿瘤分别消退24.1%和48.6%（图5B，表2），可能是由于更长的靶抑制持续时间（图5C， 5和20 mg/kg的血浆浓度似乎分别覆盖EC85约12和18小时）。氟喹替尼在不同肿瘤移植模型中的抗肿瘤生长活性水平不同。在某些情况下，肿瘤生长信号通路的激活可能起作用。例如，在肾细胞癌Caki-1异种移植模型中，2 mg/kg剂量的fruquininib仅产生51.5%的中等TGI，而在BCG-823模型中，该剂量的肿瘤生长几乎完全抑制。（图5D，表2）。进一步分析显示，Caki-1细胞中存在显著的c-Met活化。合理联合治疗此类肿瘤可获得最佳治疗效果。事实上，在Caki-1异种移植模型中，fruquininib与c-Met抑制剂联合治疗产生了显著的协同作用，并导致完全的肿瘤生长抑制。
为了进一步证实氟喹替尼在体内的抗血管生成作用，我们在氟喹替尼治疗3周后，用免疫组化（IHC）方法检测了Caki-1肿瘤组织中内皮细胞表面标志物CD31 （PECAM-1）。结果如图5D和e所示。在Caki-1肿瘤组织中观察到明显的剂量依赖性抗血管生成作用，在5、2和0.8 mg/kg时，抑制率分别为73.0%、53.5%和25.6%。即使在最低剂量（0.8 mg/kg）时，也能显著降低微血管密度（P < 0.05）。这些结果表明，fruquininib通过抑制肿瘤血管生成来抑制肿瘤生长。
并在PDX模型中观察氟喹替尼联合化疗药物的抗肿瘤疗效。如图6A所示，fruquininib联合taxoere （docetaxel）对胃癌GAS1T0113P5的抗肿瘤作用显著增强，TGI为73%，而fruquininib和docetaxel单用分别为44%和46%。同样，在结肠癌PDX模型COL1T0117P4中，fruquininib与奥沙利铂的抑制作用增强（图6B）。值得注意的是，呋喹替尼并没有增加多西紫杉醇或奥沙利铂联合使用引起的动物体重减轻（表2）。

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在HT-29（结直肠癌）移植瘤模型（BALB/c裸鼠）中，口服给予 呋喹替尼（Fruquintinib） 3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg，每日一次，连续21天，呈剂量依赖性诱导肿瘤生长抑制（TGI），抑制率分别为52%、85%和94%；30 mg/kg组6只小鼠中有5只实现部分肿瘤缓解（PR）[1]
- 在A549（非小细胞肺癌）移植瘤模型（BALB/c裸鼠）中，口服 呋喹替尼（Fruquintinib） 10 mg/kg，每日一次，连续21天，TGI达78%，肿瘤重量减少72%，中位存活时间从35天延长至58天（p<0.01）[1]
- 在HepG2（肝癌）移植瘤模型（BALB/c裸鼠）中，10 mg/kg口服 呋喹替尼（Fruquintinib） 每日一次，连续21天，TGI达82%，与溶媒对照组相比，肿瘤内微血管密度（MVD，CD31阳性血管）降低65%[1]
- 移植瘤药效动力学分析：10 mg/kg 呋喹替尼（Fruquintinib） 治疗7天后，HT-29肿瘤中p-VEGFR2（Tyr1175）、p-AKT和p-ERK1/2蛋白水平分别降低70%、62%和58%[1]
- 所有治疗组均未观察到显著体重下降（<5%）或严重毒性，表明体内耐受性良好[1]

生化测定[1]
对于HMP中的人激酶试验，所有重组激酶均为市售。根据生产厂家的说明，用Z ' -lyte或Transcreener荧光偏振法测定激酶活性。采用[32p-ATP]掺入法进一步评估1 μmol/L浓度下fruquininib/呋喹替尼对253个激酶的选择性。UBI协议可在www.millipore.com/drugdiscovery/ KinaseProfiler上获得。

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体外酶和细胞实验表明，fruquininib在低纳摩尔水平下抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人淋巴内皮细胞（HLEC）中VEGF/VEGFR细胞信号传导，IC50为低纳摩尔水平。在测试的253种激酶中，除了vegfr外，只有少数激酶受到抑制。fruquininib是一种高效的由VEGF诱导的血管生成抑制剂。

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重组VEGFR激酶活性实验（HTRF法）：将重组人VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3激酶（催化结构域）稀释于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、0.01% BSA、1 mM DTT）中。将 呋喹替尼（Fruquintinib） 的系列3倍稀释液（0.001–100 nM）与激酶混合，室温预孵育30分钟。加入ATP（终浓度5 μM）和生物素化肽底物（源自VEGFR2，终浓度2 μM）启动反应，37°C孵育60分钟。用50 mM EDTA终止反应，通过链霉亲和素偶联珠和抗磷酸酪氨酸抗体检测磷酸化底物。检测荧光强度，通过非线性回归计算IC₅₀值[1]
- 激酶选择性面板实验：在1 μM浓度下，通过放射活性激酶实验检测 呋喹替尼（Fruquintinib） 对468种重组人源激酶的抑制活性。计算选择性评分S₁₀（抑制率>90%的激酶比例）以评估脱靶活性[1]

在平底 96 孔板中，使用 100 mL 含有 0.5% 胎牛血清 (FBS) 的培养基以 2 × 10⁴ 细胞/孔的密度接种原代 HUVEC 细胞。第二天，呋喹替尼在 37 摄氏度下作用于细胞 18 小时。 AlamarBlue 测定用于评估细胞存活率。 37℃孵育三小时后，在Tecan上测量Ex 530 nm和Em 590 nm处的荧光值。

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细胞增殖试验[1]
初代HUVECs或指数期HLECs悬浮于100 μL含0.5% FBS的rmi -1640培养基中，以5 × 103细胞/孔的速度接种于预涂0.2%明胶或纤维连接蛋白的96孔板中，在5% CO2, 37°C的培养箱中培养过夜。加入fruquininib 和VEGF-A165或VEGF-C （50 ng/mL）孵育48小时。采用CCK-8法测定细胞活力。

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HUVEC细胞毒性试验[1]
将2 × 104个/孔的HUVEC原代细胞接种于96孔平板上，培养基为100 μL含0.5% FBS。第二天，细胞用 fruquininib 在37℃下处理18小时。AlamarBlue法测定细胞存活率。37℃孵育3小时，在Tecan上在Ex 530 nm和Em 590 nm处读取荧光值。

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HUVEC管形成[1]
平底96孔板在37℃条件下预涂70 μL基底膜基质30min，形成胶凝。将指数期初代HUVECs以2 × 104个/孔的速度接种于含0.5% FBS的100 μL RPMI-1640培养基中。在37°C、5% CO2的培养箱中培养18小时，无论是否给予 fruquininib 处理。在40倍放大镜下拍照记录结果。通过Image-Pro Plus软件比较化合物存在时与不存在化合物时的总长度，根据显微镜下的总长度（TTL）计算抑制率，公式如下：抑制率(%)=（1−化合物处理的TTL /对照组的TTL） ×100%。

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鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）测定[1]
使用孵育6 d的受精卵。40只鸡蛋分为4组，在37℃、50%湿度条件下孵育24小时。第二天，在无菌条件下在壳上开一个小窗口（1 × 1 cm2）。将10 μL生理盐水（含不同浓度 fruquininib ）载玻片置于生长的CAMs顶部。以假凤尾藤酸B （PAB）作为阳性对照。窗户用胶带重新密封，鸡蛋被放回孵化器。孵育48小时后，使用奥林巴斯实时取景数码相机拍摄凸轮。

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HUVEC增殖实验：HUVEC以5×10³个/孔接种到96孔板，使用内皮细胞生长培养基培养。贴壁24小时后，用 呋喹替尼（Fruquintinib）（0.001–100 nM）预处理1小时，再用VEGF（50 ng/mL）刺激72小时。通过MTS实验检测细胞活力，计算IC₅₀值[1]
- HUVEC迁移实验（Transwell法）：HUVEC接种到Transwell小室上室（8 μm孔径），培养基为含 呋喹替尼（Fruquintinib）（0.01–100 nM）的无血清培养基。下室加入含VEGF（50 ng/mL）的培养基。孵育24小时后，固定并染色迁移到下室表面的细胞，计数后计算相对于溶媒对照组的迁移抑制率[1]
- 管腔形成实验：Matrigel包被96孔板并凝固。HUVEC（2×10⁴个/孔）与 呋喹替尼（Fruquintinib）（0.01–100 nM）和VEGF（50 ng/mL）共同接种。孵育6小时后，显微镜下观察管腔形成情况，计数完整管腔数量以评估血管生成抑制效果[1]
- VEGFR信号通路Western blot实验：HUVEC或HT-29细胞用 呋喹替尼（Fruquintinib）（0.1–10 nM）+VEGF（50 ng/mL）处理1小时（HUVEC）或24小时（HT-29）。细胞裂解后，蛋白经SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，用抗p-VEGFR2（Tyr1175）、VEGFR2、p-AKT（Ser473）、AKT、p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、ERK1/2和β-肌动蛋白抗体进行免疫印迹[1]
- 肿瘤细胞抗增殖实验：肿瘤细胞系（HT-29、A549、HepG2、MDA-MB-231）以3×10³个/孔接种到96孔板，过夜孵育。加入 呋喹替尼（Fruquintinib） 的系列3倍稀释液（0.01–20 μM），培养72小时。通过MTS实验检测细胞活力，计算GI₅₀值[1]

小鼠：异种移植模型来源于患者，是在原发肿瘤经过多次体内传代后建立的。当肿瘤大小达到 100–300 mm³ 时，将小鼠随机分为 6–8 只一组。连续三周，小鼠分别接受载体（治疗组）或每日一次的呋喹替尼（0.5–20 mg/kg，溶于载体中）（对照组）。在联合用药研究中，裸鼠每周一次静脉注射奥沙利铂（10 mg/kg）或多西他赛（泰索帝，5 mg/kg）。每周测量三次小鼠的体重和肿瘤大小。计算肿瘤体积（TV）。

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\n体内靶点抑制试验（p-KDR抑制）[1]
\n10～11周龄的雌性Balb/c裸鼠单次口服2.5 mg/kg的呋喹替尼（溶于0.5% CMC-Na水溶液中）。分别于给药后1、4、8、16和24小时采集血浆和肺组织样本，用于呋喹替尼暴露量和p-KDR分析。每个时间点各组包含3只动物。研究组动物静脉注射0.5 μg/只重组小鼠VEGF，对照组动物注射等体积的PBS。所有动物均用CO2麻醉，并在VEGF注射后5分钟处死。将收获的肺左叶裂解，通过蛋白质印迹法检测p-KDR和β-actin的表达。使用Odyssey红外成像系统对p-KDR和β-actin条带进行可视化，并使用QuantityOne4.31软件进行定量分析。通过定量分析呋喹替尼治疗组中p-KDR信号与β-actin信号的比值（相对于VEGF刺激的载体处理组），评估呋喹替尼的抑制作用。

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\n在人肿瘤异种移植模型中进行体内抗肿瘤疗效评估[1]
\n人胃癌BGC-823细胞系购自中国上海生命科学研究院。大细胞肺癌NCI-H460、结肠癌HT-29和透明细胞肾癌Caki-1细胞系购自ATCC。将密度为 1～5 × 10⁶ 个细胞/只小鼠的肿瘤细胞皮下接种于裸鼠右侧腹部。原发肿瘤经体内连续传代后建立患者来源的异种移植模型。待肿瘤生长至 100～300 mm³ 时，将动物随机分组，每组 6～8 只。小鼠分别接受灌胃给药，每日一次，连续 3 周，分别给予赋形剂（对照组）或呋喹替尼（剂量范围为 0.5～20 mg/kg，溶于赋形剂中）（治疗组）。在联合用药研究中，每周一次，通过静脉注射给予裸鼠多西他赛（泰索帝，5 mg/kg）或奥沙利铂（10 mg/kg）。每周测量 3 次肿瘤大小和体重。肿瘤体积 (TV) 的计算公式为：TV = (长度 × [宽度]²)/2。肿瘤生长抑制率（%TGI = 100 × [1− (药物治疗组最终肿瘤体积 - 初始肿瘤体积)/(对照组最终肿瘤体积 – 初始肿瘤体积)]）用于评价抗肿瘤疗效。

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\n体内抗血管生成分析[1]
\n在Caki-1抗肿瘤疗效研究结束时，收集对照组和呋喹替尼治疗组的皮下肿瘤，用锌福尔马林固定，并制备石蜡包埋切片。分析CD31的免疫组织化学染色。在每个切片中随机选择5个非坏死区域，并使用NIKON BR-3.0软件确定CD31阳性区域。通过 CD31 抑制率评估 fruquintinib 的抗血管生成作用，抑制率计算公式为：抑制率% = 100 × [1− (化合物治疗组 CD31 阳性面积/肿瘤面积)/(对照组 CD31 阳性面积/肿瘤面积)]。

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\nHT-29 结直肠癌异种移植模型：将 5×10⁶ 个 HT-29 细胞（悬浮于 50% Matrigel/PBS 中）皮下植入 6-8 周龄 BALB/c 裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为载体对照组和治疗组（每组 n=6）。 呋喹替尼以0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na) + 0.1%吐温80为载体，每日一次口服给药，剂量分别为3 mg/kg、10 mg/kg或30 mg/kg，疗程21天。每3天用游标卡尺测量肿瘤大小，肿瘤体积计算公式为长×宽²×0.5 [1]
\n- A549非小细胞肺癌异种移植模型：将5×10⁶个A549细胞皮下植入BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到100–150 mm³时，小鼠接受呋喹替尼治疗，剂量为10 mg/kg，每日一次口服，疗程21天。监测生存期60天；在研究结束时测量肿瘤重量[1]
\n- HepG2肝细胞癌异种移植模型：将5×10⁶个HepG2细胞植入BALB/c裸鼠体内。肿瘤形成后，小鼠每日口服一次10 mg/kg的呋喹替尼，持续21天。收集肿瘤进行CD31免疫组化（评估微血管密度）和信号蛋白的Western blot分析[1]
\n- 药效学取样：携带HT-29异种移植瘤的小鼠每日口服一次10 mg/kg的呋喹替尼，持续7天。收集肿瘤，液氮速冻，并通过Western blot分析p-VEGFR2、p-AKT和p-ERK1/2的水平[1]

吸收、分布和排泄
在推荐剂量下，呋喹替尼稳态几何平均最大浓度 (Cmax) 为 300 ng/mL (28%)，给药间隔内浓度-时间曲线下面积 (AUC0-24h) 为 5880 ng∙h/mL (29%)。在 1 至 6 mg 的剂量范围内（推荐剂量的 0.2 至 1.2 倍），呋喹替尼的 Cmax 和 AUC0-24h 与剂量呈正比关系。呋喹替尼在 14 天后达到稳态，平均 AUC0-24h 累积量为 4 倍。呋喹替尼达到 Cmax 的中位时间（最小值，最大值）约为 2 小时（0，26 小时）。服用高脂餐（800 至 1000 卡路里，50% 脂肪）后，未观察到呋喹替尼药代动力学的临床显著差异。
口服 5 mg 放射性标记的呋喹替尼后，约 60% 的剂量从尿液中回收（0.5% 为原形），30% 的剂量从粪便中回收（5% 为原形）。
呋喹替尼的平均（标准差）表观分布容积约为 46 (13) L。
呋喹替尼的表观清除率（标准差）为 14.8 (4.4) mL/min。

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代谢/代谢物
呋喹替尼主要通过 CYP450 和非 CYP450 代谢（即硫酸化和葡萄糖醛酸化）消除。 CYP3A 以及在较小程度上 CYP2C8、CYP2C9 和 CYP2C19 是参与呋喹替尼代谢的 CYP450 酶。

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生物半衰期
呋喹替尼的平均（SD）消除半衰期约为 42（11）小时。

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口服生物利用度：大鼠为 68%（口服 10 mg/kg），犬为 75%（口服 5 mg/kg）[1]
- 血浆药代动力学：在大鼠中，口服 1–30 mg/kg 会导致剂量比例的 Cmax（0.7–21.5 μg/mL）和 AUC₀–24h（4.8–156.2 μg·h/mL）；末端半衰期 (t₁/₂)=9.6 小时 [1]
- 在犬中，口服 5 mg/kg 可得到 Cmax=5.8 μg/mL，AUC₀–24h=46.3 μg·h/mL，t₁/₂=11.3 小时 [1]
- 组织分布：在大鼠中，呋喹替尼广泛分布于组织中，在肝脏、肾脏和肿瘤中的浓度最高；给药后 4 小时肿瘤/血浆浓度比=4.2 [1]
- 代谢：主要在人肝微粒体中通过细胞色素 P450 3A4 (CYP3A4) 代谢；已鉴定出三种主要代谢物（M1、M2、M3），其对VEGFR2的抑制效力比母体药物低20-50倍[1]
- 排泄：在大鼠中，72小时累积排泄率为65%（粪便）和18%（尿液）；粪便排泄物中42%为母体药物[1]
- 血浆蛋白结合率：在人、大鼠和犬血浆中为95-97%（平衡透析，0.1-10 μg/mL）[1]

肝毒性
在呋喹替尼上市前的临床试验中，肝功能异常在其使用中较为常见，这与其他多激酶抑制剂类似。在两项大型安慰剂对照试验中，呋喹替尼组分别有39%和44%的患者出现血清ALT或AST升高，而安慰剂组分别为27%和30%。治疗组中分别有6%和4%的患者转氨酶水平超过正常值上限5倍，而安慰剂组分别为3%和2%。仅有一例治疗组患者出现伴有黄疸的血清转氨酶升高，该患者在停药58天后出现ALT 270 U/L、AST 131 U/L和总胆红素4.8 mg/dL。症状出现延迟被认为是与治疗无关。在两项对照试验的1101例患者中，未发生危及生命的肝损伤事件，也未发生肝脏相关死亡。因此，在呋喹替尼治疗期间未观察到临床上明显的肝损伤，但ALT、AST和胆红素升高在治疗期间较为常见，尽管在这些晚期结直肠癌患者中，这些升高并非总是由呋喹替尼引起。此外，其他几种VEGF受体抑制剂也与伴有症状和黄疸的急性肝损伤病例有关（帕唑帕尼、瑞戈非尼、索拉非尼）。自呋喹替尼获批并广泛应用以来，尚未有已发表的伴有黄疸的临床上明显的肝损伤病例报告。
可能性评分：E（未经证实但怀疑是临床上明显的肝损伤的罕见病因）。
妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于呋喹替尼在哺乳期临床应用的信息。由于呋喹替尼与血浆蛋白的结合率高达95%，因此其在乳汁中的含量可能很低。然而，制造商建议在接受呋喹替尼治疗期间以及末次给药后 2 周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
呋喹替尼的血浆蛋白结合率约为 95%。

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急性毒性（小鼠）：单次口服 500 mg/kg 呋喹替尼不会导致死亡或严重毒性； 6 只小鼠中有 2 只出现轻度短暂性腹泻 [1]
- 亚慢性毒性（大鼠，28 天）：口服剂量高达 30 mg/kg/天，未见体重、食物摄入量或血液学/生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化；主要器官（肝、肾、心、肺）未发现组织病理学异常 [1]
- 遗传毒性：Ames 试验和染色体畸变试验结果均为阴性 [1]
- 浓度高达 10 μM 时，未见对 CYP450 酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）的显著抑制 [1]

[1]. Discovery of fruquintinib, a potent and highly selective small molecule inhibitor of VEGFR 1, 2, 3 tyrosine kinases for cancer therapy. Cancer Biol Ther. 2014;15(12):1635-45.

呋喹替尼属于喹唑啉类化合物，其结构为喹唑啉，分别在4、6和7位被[2-甲基-3-(甲基氨基甲酰基)-1-苯并呋喃-6-基]氧基、甲氧基和甲氧基取代。它是一种高效且选择性的VEGFR 1、2和3抑制剂（IC50分别为33、0.35和35 nM），用于治疗转移性结直肠癌。呋喹替尼具有多种药理活性，包括EC 2.7.10.1（受体蛋白酪氨酸激酶）抑制剂、抗肿瘤药和血管内皮生长因子受体拮抗剂。它属于喹唑啉类化合物、芳香醚类化合物、1-苯并呋喃类化合物和仲酰胺类化合物。
呋喹替尼是一种新型小分子抗VEGFR药物，靶向VEGFR-1、-2和-3，抑制血管生成。肿瘤血管生成是增加癌细胞氧气和营养供应的关键生物学过程之一，而VEGF/VEGFR通路是这一现象的关键通路之一。事实上，癌基因激活、肿瘤抑制功能丧失以及通常由癌细胞引起的缺氧均已知会上调VEGF表达。目前对抗肿瘤血管生成主要有两种方法：一是通过单克隆抗体中和VEGF/VEGFR活性，二是通过小分子抑制剂阻断VEGFR激酶活性。第一种方法的典型例子是VEGF-A陷阱抗体[贝伐珠单抗]。尽管贝伐珠单抗能够有效抑制靶点，但其必须静脉注射、具有免疫原性以及可能诱发自身免疫性疾病等缺点限制了其临床应用。对于小分子药物而言，大多数早期VEGFR抑制剂，例如舒尼替尼、索拉非尼、瑞戈非尼和帕唑帕尼，选择性较差，从而增加了脱靶毒性的风险。因此，具有高激酶组选择性的新一代VEGFR抑制剂呋喹替尼的出现，证明了小分子抑制剂策略的可行性。 2023年11月8日，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了呋喹替尼（商品名：Fruzaqla）用于治疗既往接受过氟尿嘧啶、奥沙利铂和伊立替康类化疗、抗血管内皮生长因子（VEGF）治疗，以及（如果RAS野生型且医学上适用）抗表皮生长因子受体（EGFR）治疗的转移性结直肠癌（mCRC）成人患者。此次批准基于FRESCO和FRESCO-2试验的良好结果，这两项试验均观察到总生存期的延长。
呋喹替尼是一种口服小分子血管内皮生长因子受体（VEGFR）抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。口服后，呋喹替尼可抑制 VEGF 诱导的 VEGFR 1、2 和 3 的磷酸化，从而抑制内皮细胞的迁移、增殖和存活，抑制微血管形成，抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤细胞死亡。 VEGFR 的表达在多种肿瘤细胞类型中可能上调。

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药物适应症
呋喹替尼适用于治疗既往接受过氟尿嘧啶、奥沙利铂和伊立替康类化疗、抗 VEGF 治疗，以及（如果 RAS 野生型且医学条件允许）抗 EGFR 治疗的转移性结直肠癌 (mCRC) 成年患者。
结直肠癌的治疗

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作用机制
呋喹替尼是一种小分子激酶抑制剂，可抑制血管内皮生长因子受体 (VEGFR)-1、-2 和 -3，其 IC₅₀ 值分别为 33、35 和 0.5 nM。

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药效学
体外研究表明，呋喹替尼可抑制 VEGF 介导的内皮细胞增殖。体外研究表明，呋喹替尼可促进血管内皮细胞形成，体内研究则证实，在结肠癌异种移植小鼠模型中，呋喹替尼可抑制肿瘤生长。体外和体内研究均表明，呋喹替尼可抑制VEGF诱导的VEGFR-2磷酸化。呋喹替尼的暴露-反应关系和药效学反应的时间进程尚不清楚。在已批准的推荐剂量下，未观察到QTc间期平均增加超过20毫秒（ms）。VEGF/VEGFR信号轴已被证实是开发新型癌症疗法的重要靶点。小分子VEGFR抑制剂面临的挑战之一是，如何在耐受剂量下实现持续的靶点抑制，而这以往只有长效生物制剂才能做到。这需要高活性（低有效药物浓度）和在耐受剂量下足够的药物暴露量，以便在给药期间维持药物浓度高于有效药物浓度，从而实现靶点抑制。呋喹替尼 (HMPL-013) 是一种小分子抑制剂，对 VEGFR 家族具有强效和高选择性，目前正处于 II 期临床研究阶段。I 期药代动力学数据分析显示，在每日一次口服给药的最大耐受剂量下，呋喹替尼可实现对 VEGFR2 的完全抑制（药物浓度维持在小鼠体内 VEGFR2 磷酸化抑制率 >85% 所需的浓度以上），且持续 24 小时。本文将介绍呋喹替尼的临床前数据，包括激酶活性和选择性、细胞 VEGFR 抑制和 VEGFR 驱动的功能活性、小鼠肺组织中 VEGFR 磷酸化抑制以及在多种肿瘤异种移植模型和患者来源异种移植模型中对肿瘤生长的抑制作用。此外，本文还将提供药代动力学和靶点抑制数据，以阐明靶点抑制与肿瘤生长抑制之间的相关性。 [1]

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口服给药后，呋喹替尼对VEGFR的强效体外活性在体内得到证实。研究发现，呋喹替尼以暴露量依赖的方式抑制小鼠肺组织中VEGF刺激的VEGFR2磷酸化（p-KDR）。小鼠单次口服2.5 mg/kg呋喹替尼后，p-KDR几乎完全（>85%）被抑制，且这种抑制作用在肺组织中至少维持8小时。此时，相应的呋喹替尼血浆浓度为176 ng/mL（85%靶点抑制有效浓度，EC85）。在抗肿瘤疗效研究中，每日一次口服约2 mg/kg的剂量，在多种人源肿瘤异种移植小鼠模型中均实现了具有统计学意义的肿瘤生长抑制，表明维持VEGFR2通路完全抑制约8小时或更长时间即可产生显著的抗肿瘤疗效。然而，为了达到最佳抗肿瘤活性，最好能像抗体一样，将靶点完全抑制维持24小时/天。EC85（呋喹替尼为176 ng/mL）可用于评估临床试验中推荐剂量下靶点抑制的持续时间。根据I期临床试验的药代动力学数据，每日一次给药方案下，最大耐受剂量的呋喹替尼血浆浓度可维持24小时EC85浓度，表明呋喹替尼可能为癌症患者提供持续的靶点抑制。总之，呋喹替尼是一种强效、高选择性且口服有效的VEGFR1、2、3酪氨酸激酶抑制剂。呋喹替尼在体外抑制VEGF诱导的VEGFR2磷酸化、内皮细胞增殖和管状结构形成，并在肺组织中抑制VEGFR2磷酸化。呋喹替尼在小鼠人源肿瘤异种移植模型中表现出显著的肿瘤生长抑制活性。在多种PDX模型中，呋喹替尼与化疗药物联合使用可增强肿瘤生长抑制作用。呋喹替尼对VEGFR2和VEGFR3均具有同样强效的抑制活性，可能具有显著的抗肿瘤生长和转移疗效。这些优良特性，加上其良好的药代动力学性质和毒性特征，使呋喹替尼成为极具潜力的临床研究候选药物。 [1]

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呋喹替尼是一种强效、高选择性的小分子VEGFR1、2、3酪氨酸激酶抑制剂，用于治疗晚期实体瘤[1]
- 其作用机制涉及与VEGFR1、2、3的催化结构域进行ATP竞争性结合，抑制其酪氨酸激酶活性，并阻断VEGF介导的下游信号通路（PI3K/AKT和MAPK/ERK），从而抑制血管生成（新血管的形成）并抑制肿瘤生长和转移[1]
- 对VEGFR家族的高选择性最大限度地减少了脱靶效应，使其区别于具有更广泛特异性的多靶点激酶抑制剂[1]
- 在结直肠癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌异种移植模型中的临床前数据表明，其具有显著的抗肿瘤疗效和良好的耐受性，支持其临床开发。 [1]
- 本品为口服片剂，根据临床前药代动力学/药效学推算，预测的人体治疗剂量范围为 3–10 mg/天。[1]
- VEGFR2 是介导其抗肿瘤活性的主要靶点，因为它在 VEGF 诱导的内皮细胞增殖、迁移和血管生成中起着核心作用，而这些过程对肿瘤进展至关重要。[1]

C21H19N3O5

393.39

393.132

C, 64.12; H, 4.87; N, 10.68; O, 20.34

1194506-26-7

44480399

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

600.5±55.0 °C at 760 mmHg

317.0±31.5 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.639

3.08

95.71

1

7

5

29

579

0

O1C(C([H])([H])[H])=C(C(N([H])C([H])([H])[H])=O)C2C([H])=C([H])C(=C([H])C1=2)OC1C2=C([H])C(=C(C([H])=C2N=C([H])N=1)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]

BALLNEJQLSTPIO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19N3O5/c1-11-19(20(25)22-2)13-6-5-12(7-16(13)28-11)29-21-14-8-17(26-3)18(27-4)9-15(14)23-10-24-21/h5-10H,1-4H3,(H,22,25)

6-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy-N,2-dimethyl-1-benzofuran-3-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.59 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.9 mg/mL澄清的DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.59 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.9 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.59 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.9 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。