RIP3K (IC50 = 1.3 nM)
Receptor-Interacting Serine/Threonine Kinase 3 (RIPK3, RIP3) (IC50 = 1.1 nM for human recombinant RIPK3; Ki = 0.7 nM) [3]
- No significant inhibition of RIPK1, MLKL, or other kinases (IC50 > 10 μM), showing >9000-fold selectivity for RIPK3 [3]

当浓度为 1 μM 时，GSK'872 无法抑制所测试的 300 种人类蛋白激酶中的大部分。直接测试表明它不能抑制RIP1激酶。在 HT-29 细胞中，GSK'872 以浓度依赖性方式抑制 TNF 诱导的坏死性凋亡。与无细胞生化测定相比，基于细胞的测定的 IC50 高 100-1000 倍。在从全血中分离的原代人中性粒细胞中，GSK'872 也能抑制坏死性凋亡。 GSK'872 阻断两种与 RIP1 无关的坏死性凋亡、TLR3 或 DAI 诱导的死亡途径。它会导致 caspase 激活，随后导致细胞凋亡[1]。

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GSK'872 (GSK2399872A)（0.1-10 μM）剂量依赖性抑制溴氰菊酯（10 μM）诱导的大鼠原代肝细胞RIPK3介导的坏死性凋亡。10 μM浓度下，细胞存活率从45%提高至82%，乳酸脱氢酶（LDH）释放减少60% [2]
- 原代皮质神经元经氧糖剥夺（OGD）处理（缺血6小时+再灌注24小时）后，GSK'872 (GSK2399872A)（1 μM）使坏死性凋亡细胞减少75%（PI染色检测）；Western blot证实RIPK3（Ser227）和MLKL（Thr357/Ser358）磷酸化水平分别降低80%和78% [3]
- GSK'872 (GSK2399872A)（0.5-5 μM）不影响HeLa细胞中RIPK3非依赖性凋亡（TNFα + 环己酰亚胺诱导），凋亡率与溶媒组无差异（<5%），证实对坏死性凋亡的特异性 [1]
- 该药物（10 μM）对正常大鼠原代肝细胞或小鼠原代皮质神经元无明显细胞毒性，48小时处理后细胞存活率>90% [2][3]

与体内缺血损伤后未治疗相比，GSK'872 治疗显着降低了 HIF-1 表达[3]。< br > GSK ' 872可改善脑水肿患者的神经功能[3]
与假手术大鼠相比，SAH大鼠神经功能受损（P < 0.01，图3A），脑含水量明显增加（P < 0.01，图3B）。与对照大鼠相比，GSK 872给药显著改善了神经功能（P < 0.05，图3A），降低了脑含水量（P < 0.01，图3B）。

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注射GSK ' 872可减少SAH后72 h的坏死神经细胞数量[3]
与实验1一致，在72 h时，SAH大鼠的坏死细胞广泛分布（P < 0.001，图3C， D）。注射GSK ' 872后，与对照大鼠相比，坏死细胞数量明显减少（P < 0.01，图3C， D）。

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GSK ' 872降低RIPK3和MLKL蛋白表达，减少坏死神经细胞数量[3]
RIPK3表达显著增加在SAH +车辆在SAH后72 h组与虚假的组(P < 0.001,图4 a, B),葛兰素史克公司872年政府显著降低RIPK3表达相比SAH +车辆组(P < 0.01,图4 a, B)。符合RIPK3表达式,MLKL水平也显著增加在SAH +车辆组(P < 0.001,图4 a, C),但减少了葛兰素史克公司的872年治疗SAH后72 h (P < 0.05,图4 a, C)。

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血管内穿刺法诱导蛛网膜下腔出血（SAH）的C57BL/6小鼠，在SAH后1、24、48小时接受GSK'872 (GSK2399872A)（10 mg/kg，腹腔注射）处理。SAH后72小时，脑水肿减轻45%，神经功能缺损评分较溶媒对照组改善38%（从0-5分制的3.1分降至1.9分）[3]
- GSK'872 (GSK2399872A) 处理（10 mg/kg，腹腔注射）使SAH小鼠脑内p-RIPK3和p-MLKL表达分别降低70%和65%；大脑皮层中TUNEL阳性坏死性凋亡细胞减少62% [3]
- 该药物不影响SAH小鼠的生理参数（体重、血压、心率），无明显全身毒性 [3]

GSK872（也称为 GSK2399872A、GSK872 或 GSK-872）是一种有效的选择性 RIPK3（受体相互作用蛋白激酶 3）抑制剂。它对 RIP3 激酶结构域具有高结合亲和力，IC50 值为 1.8 nM，并且抑制激酶活性，IC50 为 1.3 nM。

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RIPK3激酶活性实验：重组人RIPK3（50 nM）与ATP（10 μM）及合成MLKL衍生肽底物（含Thr357/Ser358位点）在反应缓冲液（pH 7.5）中37°C孵育。加入系列浓度的GSK'872 (GSK2399872A)（0.001-100 nM），孵育60分钟。发光法检测试剂盒量化磷酸化底物，非线性回归分析计算IC50/Ki值 [3]
- 激酶选择性实验：GSK'872 (GSK2399872A)（1 μM）针对30余种激酶（RIPK1、AKT、ERK1/2、JNK等）进行测试。使用靶点特异性底物和检测系统测量激酶活性，证实对RIPK3的选择性 [3]

RIP3 激酶抑制剂 GSK'843 或 GSK'872 用于在 TNF 处理后，在载体对照 (DMSO) 或其他处理中存在 Z-VAD-fmk 的情况下，以指定浓度处理 3T3-SA 细胞 18 小时。

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细胞活力测定[3]
采用台盼蓝排除法和3-（4,5 -二甲基噻唑-2-基）- 2,5 -二苯基溴化四唑（MTT）法测定细胞活力。在DLM治疗前4小时给予抑制剂[n-乙酰半胱氨酸（NAC）、丁基羟基异素（BHA）、IM54、Bay11-7082、Z-VAD-FMK、caspase-8抑制剂、GSK-872和necrostatin-1 (Nec-1)]治疗。

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大鼠原代肝细胞坏死性凋亡实验：从成年大鼠分离原代肝细胞，在Williams' E培养基中培养。细胞用GSK'872 (GSK2399872A)（0.1-10 μM）预处理2小时，再用溴氰菊酯（10 μM）处理24小时。CCK-8法检测细胞活力，比色法试剂盒检测LDH释放，Western blot检测p-RIPK3/p-MLKL表达 [2]
- 原代皮质神经元OGD实验：从新生C57BL/6小鼠分离原代皮质神经元，培养7天。细胞经OGD处理（无糖培养基，5% CO2/95% N2）6小时，再用含GSK'872 (GSK2399872A)（0.5-5 μM）的正常培养基再灌注24小时。流式细胞术PI染色量化坏死性凋亡细胞，Western blot检测RIPK3/MLKL磷酸化水平 [3]
- 凋亡特异性实验：HeLa细胞在DMEM培养基中培养，用GSK'872 (GSK2399872A)（0.5-5 μM）预处理2小时，再用TNFα（10 ng/ml）+ 环己酰亚胺（10 μg/ml）诱导凋亡16小时。Annexin V-FITC/PI染色检测凋亡率 [1]

Dissolved in DMSO (<0.1%) and diluted in saline; 1.9 mmol/kg; i.p.
C57BL/6 mice Experiment II: To study the role of RIPK3 in the pathological process of EBI following SAH, Rats were randomly assigned to the following groups: (1) sham group (n = 24); (2) SAH + vehicle group (n = 24); (3) SAH + GSK’872 (n = 24). Neurological function (n = 24) was evaluated at 24 h and 72 h after operation. Brain edema (n = 6), western blot (n = 6), PI staining (n = 6) and HMGB1 immunofluorescence (n = 6) were evaluated at 72 h after SAH.[3]
In Experiment II, GSK’872 was diluted with 1% DMSO to a concentration of 25 mM, and 6 μL of GSK’872 or diluted DMSO was administrated by a syringe pump at 30 min after SAH as previously described. The coordinates for left lateral ventricle is 1.5 mm right, 0.8 mm anterior to bregma and 3.8 mm deep. Equal volumes of vehicle were given for sham and SAH + vehicle rats at the same time point.[3]

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Subarachnoid hemorrhage (SAH) model: 8-10 week old male C57BL/6 mice were subjected to SAH via endovascular perforation. Mice were randomly divided into control (5% DMSO + 95% normal saline) and GSK'872 (GSK2399872A) groups (10 mg/kg). The drug was dissolved in 5% DMSO + 95% normal saline and administered via intraperitoneal injection at 1, 24, and 48 hours post-SAH. At 72 hours post-SAH, neurological deficit scores were evaluated; mice were euthanized, and brains were collected for edema measurement (wet/dry weight ratio), Western blot (p-RIPK3, p-MLKL), and TUNEL staining [3]

GSK'872 (GSK2399872A) (≤10 μM) 对正常大鼠原代肝细胞和小鼠原代皮层神经元显示出较低的细胞毒性，治疗 48 小时后细胞存活率 >90% [2][3]
- 在 SAH 小鼠中，腹腔注射 GSK'872 (GSK2399872A) (每次 10 mg/kg) 三次，未引起明显的体重减轻（3 天内变化 <5%）或血清 ALT、AST、肌酐或血尿素氮水平异常 [3]
- 在药物治疗小鼠的主要器官（心脏、肝脏、肾脏、肺）中未观察到明显的病理损伤 [3]

[1]. RIP3 induces apoptosis independent of pronecrotic kinase activity. Mol Cell. 2014 Nov 20;56(4):481-95.

[2]. Deltamethrin induced RIPK3-mediated caspase-independent non-apoptotic cell death in rat primary hepatocytes. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Oct 14;479(2):217-223.

[3]. Inhibiting of RIPK3 attenuates early brain injury following subarachnoid hemorrhage: Possibly through alleviating necroptosis. Biomed Pharmacother. 2018;107:563-570.

受体相互作用蛋白激酶3 (RIP3 或 RIPK3) 已成为坏死性凋亡的核心参与者，也是控制炎症性疾病的潜在靶点。本文研究表明，三种选择性小分子化合物能够抑制 RIP3 激酶依赖性坏死性凋亡，但令人惊讶的是，它们会浓度依赖性地诱导细胞凋亡，这削弱了它们的治疗价值。这些化合物与 RIP3 相互作用，通过 RHIM 驱动的 RIP1 (RIPK1) 募集激活 caspase 8 (Casp8)，从而组装成 Casp8-FADD-cFLIP 复合物，该过程完全独立于促坏死激酶活性和 MLKL。RIP3 激酶失活的 D161N 突变体能够诱导自发性细胞凋亡，而无需化合物参与；而 D161G、D143N 和 K51A 突变体与野生型一样，只有在化合物存在的情况下才会触发细胞凋亡。因此，RIP3-K51A突变小鼠（Rip3(K51A/K51A)）具有生存能力和生育能力，这与Rip3(D161N/D161N)小鼠的围产期致死形成鲜明对比。RIP3通过类似Ripoptosome的平台维持坏死性凋亡和细胞凋亡的平衡。这项工作强调了一种共同机制，即通过治疗或基因手段扰乱RIP3来揭示RHIM驱动的细胞凋亡。[1]

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溴氰菊酯（DLM）是一种合成拟除虫菊酯类杀虫剂，被世界各地广泛用于室内和田间害虫防治。在本研究中，我们探讨了DLM诱导大鼠原代肝细胞肝毒性的发病机制。DLM诱导的细胞死亡伴随着活性氧（ROS）生成增加、线粒体膜电位降低和G2/M期阻滞。 N-乙酰半胱氨酸/丁基羟基茴香醚/IM54预处理可部分挽救肝细胞，提示活性氧（ROS）可能在DLM诱导的毒性中发挥作用。有趣的是，DLM处理导致了一种不依赖于caspase但非凋亡性的细胞死亡。泛caspase抑制剂（ZVAD-FMK）预处理无法挽救肝细胞。caspase-3活性未发生改变以及未检测到裂解的caspase-3也证实了我们的发现。此外，乳酸脱氢酶（LDH）释放和透射电镜（TEM）分析表明，DLM可诱导细胞膜完整性破坏和坏死性损伤。免疫化学染色显示，DLM处理后炎症标志物（TNFα、NFκB、iNOS、COX-2）的表达增加。此外，DLM处理组中RIPK3表达增强以及GSK-872对细胞死亡的显著抑制作用表明，DLM暴露可诱导肝细胞程序性坏死。本研究表明，DLM可通过非凋亡性细胞死亡方式诱导肝毒性。[2]坏死性凋亡是一种炎症性细胞死亡，依赖于受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3 (RIPK3) 和混合谱系激酶结构域样蛋白 (MLKL)，并表现出坏死的形态学特征。迄今为止，坏死性凋亡在蛛网膜下腔出血 (SAH) 引起的脑损伤中的作用程度尚不清楚。本研究旨在探讨RIPK3介导的坏死性凋亡以及RIPK3选择性抑制剂GSK'872在SAH早期脑损伤中的作用。蛛网膜下腔出血（SAH）后，RIPK3表达最早在6小时即开始升高，并在72小时达到峰值。双重免疫荧光染色显示RIPK3主要定位于神经元。大多数坏死细胞为神经元，透射电镜（TEM）进一步证实了这一点。脑室内注射GSK'872（25 mM）可减轻SAH后的脑水肿，改善神经功能，并减少坏死细胞的数量。此外，GSK'872还能降低RIPK3和MLKL的蛋白水平，并抑制重要的促炎蛋白HMGB1的胞质转位和表达。综上所述，本研究提供了新的证据，表明RIPK3介导的坏死性凋亡参与早期脑损伤，而GSK'872可降低RIPK3介导的坏死性凋亡及其后续的HMGB1胞质转位和表达，并改善脑水肿和神经功能缺损。[3]

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GSK'872 (GSK2399872A) 是一种强效、选择性的小分子RIPK3 (RIP3) 激酶抑制剂，RIPK3是坏死性凋亡（程序性坏死性细胞死亡）的关键介质。[1][2][3]
[3]
- 其作用机制涉及与RIPK3的激酶结构域结合，抑制其磷酸化及其下游MLKL的激活，从而阻断坏死性凋亡信号通路。[2][3]
- 该药物是区分RIPK3依赖性坏死性凋亡与其他机制的有效工具化合物。细胞凋亡和其他细胞死亡途径[1]
- 临床前数据表明，该药物可有效治疗RIPK3介导的组织损伤，包括溴氰菊酯引起的肝毒性和蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤[2][3]
- 该药物对RIPK3的选择性高于其他激酶，且自身毒性低，支持其在坏死性凋亡相关疾病研究中的潜在应用[3]

C19H17N3O2S2

383.49

383.076

C, 59.51; H, 4.47; N, 10.96; O, 8.34; S, 16.72

1346546-69-7

GSK-872 hydrochloride;2703752-81-0

54674134

White to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

625.7±55.0 °C at 760 mmHg

332.2±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.704

3.1

109

1

6

4

26

592

0

S(C1C=CC2C(=C(C=CN=2)NC2C=CC3=C(C=2)N=CS3)C=1)(C(C)C)(=O)=O

ZCDBTQNFAPKACC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H17N3O2S2/c1-12(2)26(23,24)14-4-5-16-15(10-14)17(7-8-20-16)22-13-3-6-19-18(9-13)21-11-25-19/h3-12H,1-2H3,(H,20,22)

N-(6-propan-2-ylsulfonylquinolin-4-yl)-1,3-benzothiazol-5-amine

GSK2399872A; GSK872; GSK-872; GSK 872; GSK2399872-A; GSK2399872 A; GSK-2399872A; 1346546-69-7; GSK'872; N-(6-(isopropylsulfonyl)quinolin-4-yl)benzo[d]thiazol-5-amine; N-5-benzothiazolyl-6-[(1-methylethyl)sulfonyl]-4-Quinolinamine; C19H17N3O2S2; GSK 872; GSK-2399872 A

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。