hLXRα (EC50 = 190 nM); hLXRβ(EC50 = 30 nM)[4]

在体外，GW3965 盐酸盐可诱导 GBM 细胞死亡，并且对表达 EGFRvIII 的肿瘤细胞具有更高的效力。 GW3965 盐酸盐可降低 LDLR 水平，同时上调 E3 泛素连接酶 IDOL 和胆固醇转运蛋白基因 ABCA1 的表达[2]。 LXR 配体抑制胶原蛋白或 CRP 诱导的血小板聚集和钙动员。当用 1 μg/mL CRP 激活血小板时，GW3965 盐酸盐（1 或 5 μM）对纤维蛋白原结合和 P-选择素暴露表现出轻微的抑制作用。然而，较高浓度的 GW3965 盐酸盐 (10 μM) 和 T0901317 (40 μM) 会减少血小板表面纤维蛋白原和 P-选择素的量[3]。

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LXR激动剂GW3965在体外促进GBM细胞死亡，增强表达EGFRvIII的肿瘤细胞的疗效[2]
细胞内胆固醇水平可以通过以下方式调节：（1）通过LDLR摄取LDL，（2）通过ABCA1或ABCG1转运蛋白排出胆固醇，以及（3）羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMG-CoA还原酶）依赖性合成。鉴于药物LXR激活限制细胞内胆固醇可用性的能力，我们假设合成LXR激动剂可能会抑制GBM细胞的生长和存活。 事实上，用LXR激动剂GW3965治疗U87和U87 EGFRvIII GBM细胞4天，导致剂量依赖性生长抑制和促进肿瘤细胞死亡。此外，与携带EGFRvIII的肿瘤细胞对外源性胆固醇的依赖性增强一致，这些细胞的细胞死亡明显大于亲本U87细胞系（图4A-D）。值得注意的是，添加LDL可以剂量依赖性地挽救肿瘤细胞死亡（图4E-G），这强烈表明GW3965的杀瘤作用是通过改变细胞胆固醇的可用性来介导的。[2]

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为了揭示GW3965诱导肿瘤细胞死亡的机制，对LXR靶基因ABCA1和IDOL进行了实时PCR和免疫印迹分析GW3965治疗促进ABCA1和IDOL的剂量依赖性增加，同时LDLR蛋白水平降低（图5A-D；补充图S5）。不幸的是，目前还没有能够检测内源性IDOL表达的抗体。通过ABCA1调节胆固醇流出是一个1步过程；ABCA1是LXR的直接转录靶点。相比之下，LXR对LDLR的调控需要IDOL的转录和翻译，然后是泛素介导的LDLR降解。GW3965介导的LDLR在GBM细胞中的降解需要更长的时间，并且需要比ABCA1诱导更高的药物剂量（图5C和D）。GW3965对ABCA1和LDLR表达的影响在一组GBM和其他癌症细胞系中得到证实，这些细胞系的LDLR水平与高水平的EGFR磷酸化有关（图5E）。值得注意的是，促进细胞死亡所需的GW3965剂量（图4B-D）与完成LDLR降解所需的剂量（图5C和D）密切相关。总之，这些结果表明，GW3965的杀瘤活性需要降低LDLR水平。[2]

为了直接测试GBM细胞死亡是否需要LDLR降解来响应GW3965，我们测量了慢病毒LDLR shRNA敲除或打乱对照对药物敏感性的影响。低剂量GW3965（1或2μM）诱导ABCA1，但不会降低LDLR表达或导致GBM细胞死亡（图6A-C）。慢病毒递送LDLR shRNA导致LDLR敲除，在低剂量GW3965治疗后，有力地促进了肿瘤细胞死亡（图6A-C）。为了研究IDOL介导的LDLR降解在促进这种凋亡反应中的作用（图6D），我们测量了腺病毒递送IDOL对低剂量GW3965致敏U87 EGFRvIII GBM细胞的影响。酚复制LDLR敲除的效果，IDOL过表达能有效地使GBM细胞对低剂量GW3965敏感（图6E和F）。单独的LDLR敲除和单独的IDOL过表达都不足以促进GBM细胞死亡（图6）。这些发现表明，IDOL介导的LDLR降解是GW3965诱导GBM细胞死亡机制的重要组成部分。然而，仅靶向LDLR不足以引发GBM细胞死亡的观察表明，其他机制，如促进ABCA1依赖性胆固醇外流，也有助于[2]。

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GW3965导致LXR与胶原受体GPVI近端的信号成分相关，这表明LXR在血小板中的作用可能导致血小板反应减弱。动脉粥样硬化病变部位血小板的激活会导致心肌梗死和中风前的血栓形成。使用小鼠体内血栓形成模型，我们发现GW3965具有抗血栓形成作用，可以减小血栓的大小和稳定性。GW3965的动脉粥样硬化保护作用及其新的抗血小板/血栓形成作用表明，LXR是预防动脉粥样硬化血栓形成疾病的潜在靶点。[3]

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为了进一步提高叔胺的LXRα活性，使用Rink酰胺接头合成了1280种羧酰胺，并在1μM下筛选了LXRα/SRC1-LiSA的活性。从阵列中鉴定出六种羧酰胺（6−11），其在LXRα/SRC1-LiSA中的活性小于1μM（表1）。其中一些类似物在苄胺取代基（9−11）中含有间三氟甲基官能团，其中2-氯-3-三氟甲基苄胺11被确定为最有效的类似物，在LXRα/SRC1-LiSA中的EC50为45 nM。如早期系列羧酰胺所示，11在基于细胞的LXRα-GAL4报告基因检测中显示效力降低。由于通过酰胺4转化为羧酸5提高了细胞效力，因此使用Sasrin接头合成了相应的羧酸12。羧酸12/GW3965在LXRα/SRC1-LiSA中的EC50为125 nM，在SRC1肽的募集方面与EPC（1）具有相当的疗效。令我们高兴的是，GW3965/12在基于LXRα细胞的报告基因测定中保持了其效力，EC50为190 nM（表1，图1B）。当针对一组核受体进行筛选时，12个仅与LXRβ（图1A）和孕烷X受体（PXR）表现出交叉反应性（数据未显示）。LXRβ-和PXR-GAL4嵌合体的全剂量反应分析表明，与PXR相比，12对LXR的激活选择性是10倍以上（图1B）。因此，羧酸12是一种强效的LXR激动剂，具有良好的细胞活性和对其他核受体的优异选择性[4]。

非病理动物的 CNS 不会经历 GW3965 盐酸盐引起 STZ 大鼠脊髓、小脑和大脑皮层神经活性类固醇的升高。当糖尿病动物接受GW3965盐酸盐治疗时，它们的脊髓表达更多的髓磷脂碱性蛋白，并具有更高水平的二氢孕酮[1]。在体内，GW3965 盐酸盐（40 mg/kg，口服）可显着使 GBM 细胞死亡增加 25 倍，并强力促进 ABCA1 并降低 LDLR 表达[2]。此外，它还能抑制 59% 的肿瘤生长。 GW3965盐酸盐（2mg/kg，IV）可延长体内出血持续时间并调节血小板血栓形成[3]。

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观察到Ro5-4864（即TSPO的配体）或GW3965（即LXRs的配体）治疗诱导STZ大鼠脊髓、小脑和大脑皮层中神经活性类固醇的增加，但在非病理动物的CNS中没有。有趣的是，所分析的三个中枢神经系统区域和两种药理学工具之间的诱导模式不同。特别是，LXRs的激活可能代表了一种有前景的神经保护策略，因为与Ro5-4864治疗不同，GW3965治疗没有引起神经活性类固醇血浆水平的显著变化。这表明，激活LXRs可能会选择性地提高中枢神经系统中神经活性类固醇的水平，从而避免这些分子全身治疗可能产生的内分泌副作用。有趣的是，GW3965治疗诱导糖尿病动物脊髓中二氢孕酮的增加，这与髓鞘碱性蛋白表达的增加有关。因此，我们证明LXR激活能够缓解糖尿病的中枢神经系统症状。[1]

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LXR激动剂在体内抑制GBM肿瘤生长[2]
为了测试LXR激动剂在治疗GBM方面的治疗潜力，我们确定了GW3965在体内阻断生长和促进肿瘤细胞死亡的疗效。将U87/EGFRvIII细胞皮下植入小鼠体内，然后用GW3965（每天口服40mg/kg）治疗12天。GW3965处理强烈诱导ABCA1表达并降低LDLR表达（图7A）。值得注意的是，这种活性伴随着59%的肿瘤生长抑制（图7B和C）和25倍的GBM细胞凋亡增加（图7D和E）。这些数据表明，LXR激动剂在体内能有效抑制GBM生长并促进肿瘤细胞死亡。

使用人LXRα的无细胞配体传感分析（LiSA）从葛兰素史克化合物文件的高通量筛选中鉴定出叔胺3。LXRαLiSA测量类固醇受体辅激活子1（SRC1）的24个氨基酸片段向受体配体结合结构域的配体依赖性募集[4]。

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人洗血小板制剂[3]
人类血液是从自愿的健康志愿者身上采集的。将总共50 mL血液收集到含有3 mL 4%（重量/体积）抗凝剂柠檬酸钠的注射器中，并与7 mL酸性柠檬酸葡萄糖（ACD）混合，然后通过如前所述的差速离心制备洗涤后的血小板。35将血小板重新悬浮在改性的Tyrode-N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液（134mM NaCl、0.34mM Na2HPO4、2.9mM KCl、12mM NaHCO3、20mM N-2-羟乙基胡椒-N′-2-乙烯磺酸、5mM葡萄糖和1mM MgCl2，pH 7.3）中，并在实验前在30°C下静置30分钟。

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血小板聚集和致密颗粒分泌测定[3]
血小板（4×108个细胞/mL）与荧光素在37°C下孵育2分钟，然后在光学光度计中用激动剂刺激，持续搅拌（1200 rpm）。如前所述，通过测量光密度的变化来确定血小板聚集35，通过使用荧光素萤光素酶系统试剂盒测量三磷酸腺苷（ATP）浓度的变化来测定致密颗粒分泌。

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荧光光谱法测定[Ca2+]i[3]
如前所述，在预装有荧光染料Fluo-4NW的血小板中测量细胞内钙的动员。39用CRP或凝血酶刺激血小板，使用Fluoroskan上升板读数器在485nm处激发，在530nm处测量发射，测量钙的释放。

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血小板内LXR-β的流式细胞术测量[3]
为了测量血小板内的LXR，将洗涤过的血小板用2%甲酰盐水固定，用BD Phosflow烫发缓冲液III渗透，洗涤，重新悬浮在HEPES缓冲液盐水中，并与LXR-β抗体一起孵育。然后洗涤血小板，将其重新悬浮在HBS中，与Cy3标记的第二抗体一起孵育，用0.2%甲酰盐水固定，并通过流式细胞术进行分析。使用适当的同种型对照设置阴性对照。

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流式细胞术分析：α颗粒分泌和纤维蛋白原与整合素αIIbβ3的结合[3]
流式细胞术通过检测与αIIbβ3结合的纤维蛋白原水平和血小板表面P-选择素暴露水平，检测整合素αIIbα3和血小板α颗粒分泌的亲和力上调。用CRP刺激后，将血小板与异硫氰酸荧光素标记的纤维蛋白原和PE/Cy5抗人-CD62P（P-选择素）在室温下孵育20分钟。通过在0.2%（体积/体积）甲酰盐水中稀释100倍来停止反应。使用FACSCalibur设备进行流式细胞术采集，并使用CellQuest Pro软件版本3.3从5000个事件中收集数据。使用适当的IgG1κ-同种型匹配的对照来设置阴性对照，用于抗CD62P抗体和乙二醇四乙酸（10μM）用于纤维蛋白原结合。

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体外血栓形成[3]
将柠檬酸全血与亲脂性染料3,3-二己氧基碳菁碘化物一起孵育，并以20 dyn/cm2的剪切速率通过胶原蛋白涂层（400μg/mL）Vena8Biochip灌注。使用尼康eclipse（TE2000-U）显微镜每30秒拍摄一次血栓Z图像，并使用幻灯片第5版计算血栓荧光强度。

将6×103个细胞接种到5%FBS的6孔板中24小时，然后换成1%LPDS培养基，用GW3965按时间顺序处理。用PBS洗涤细胞一次；然后根据其方案（Invitrogen）使用TRIzol试剂提取总RNA。接下来，将800ng RNA互补合成cDNA，并使用实时PCR（Bio-Rad）扩增，并将其值与每个复制的内部控制基因36B4（RPLP0）进行归一化。使用的引物如下：ABCA1正向：5′-ACAGTTGTGGCCCTTTG-3′，反向：5′-APGTCCAGGGCTGGGGTTC-3′；IDOL正向：5′-CGAGGCTGCCAACCA-3′，反向：5′-TGCAGGTCCAAAAGATACATCT-3′；36B4正向：5′-AATGCAGCATCTACAAC-CC-3′，反向：5′-TCGTTTTGTACCCGTTGATGA-3′[2]。

年龄和体重匹配的雄性 C57BL/6J 小鼠以 5 只/笼的密度饲养在 21°C 和 50% 相对湿度下，光照：黑暗周期为 12 小时。小鼠饲喂标准啮齿动物饲料（PMI Feeds，5001），并自由摄取食物和水。C57BL/6J小鼠每日两次经口灌胃给予GW3965A（10 mg/kg）或赋形剂（0.5%甲基纤维素），持续3、7或14天。在异氟烷麻醉下，通过心脏穿刺采集血液。使用全自动生化分析仪测定血清脂质水平。使用ABI7700序列检测仪测定ABCA1 mRNA表达的变化。使用Trizol试剂从GW3965处理组动物的组织中分离RNA。倍数变化基于赋形剂对照组的循环阈值（Ct值）。所有操作均符合《动物福利法》和美国农业部的相关规定，并经葛兰素史克机构动物护理和使用委员会批准[4]。

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糖尿病的诱导和实验治疗[1]
通过腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素（STZ，65 mg/kg，溶于0.09 M柠檬酸缓冲液，pH 4.8）诱导两月龄雄性大鼠发生糖尿病。对照组动物注射0.09 M柠檬酸缓冲液（pH 4.8）。注射链脲佐菌素48小时后，使用OneTouch Ultra2血糖仪测量尾静脉血糖水平，以确认高血糖症的发生。仅平均血浆葡萄糖水平超过300 mg/ml的动物被判定为糖尿病。在用Ro5-4864或GW3965治疗前以及处死前，也对血糖水平进行了评估。STZ注射两个月后，糖尿病动物每周接受一次Ro5-4864（3 mg/kg）或GW3965（50 mg/kg）治疗。因此，它们在一个月内接受了四次皮下注射。对照组糖尿病大鼠注射200 μl载体（芝麻油）。按照相同的实验方案，4月龄非糖尿病雄性大鼠分别注射Ro5-4864、GW3965或载体。末次给药后24小时处死大鼠。

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异种移植模型[2]
将同源人恶性胶质瘤细胞（U87、U87-EGFRvIII）和人原发性胶质母细胞瘤模型GBM39植入免疫缺陷型SCID/Beige小鼠体内，进行皮下异种移植研究。SCID/Beige小鼠在特定菌群无病原体条件下饲养繁殖。

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尾部出血试验[3]
15只7至8周龄的C57BL/6小鼠在尾部活检前，经腹腔注射氯胺酮（80 mg/kg）和赛拉嗪（5 mg/kg）进行麻醉。记录出血停止时间，最长记录20分钟。

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活体显微镜和激光诱导损伤[3]
活体显微镜和数据分析方法如前所述。简而言之，8只C57BL/6小鼠经腹腔注射氯胺酮（125 mg/kg）、赛拉嗪（12.5 mg/kg）和阿托品（0.25 mg/kg）进行麻醉。通过置于颈静脉的套管进入小鼠循环系统，并用Alexa-488标记的抗GPIb抗体标记血小板。将睾丸及其周围的提睾肌剥离后，使用微点消融激光笔对提睾肌小动脉壁进行损伤。使用奥林巴斯BX正置显微镜观察血栓形成情况。使用滨松CCD相机以640×480像素格式拍摄损伤前后的图像，并使用Slidebook软件5.0版进行分析。

溶于 0.5% 甲基纤维素；≤10 mg/kg；灌胃给药 [1]

C57BL/6 小鼠

在小鼠中，12/GW3965 的口服生物利用度为 70%，Cmax 为 12.7 μg/mL，半衰期为 2 小时（给药剂量为 10 mg/kg）。药代动力学数据分析表明，给药后 7 小时内，血清中 12/GW3965 的浓度是其在细胞中 EC50 值的 5 倍。在 C57BL/6 小鼠中，以 10 mg/kg 的剂量，每日两次给药，连续 14 天，评估了 12/GW3965 的药理活性。到第 3 天，小肠中 ABCA1 的表达增加了 8 倍，外周巨噬细胞中增加了 7 倍（图 2A），而血浆中高密度脂蛋白胆固醇 (HDLc) 的水平在第 3 天增加了 30%，并维持到第 14 天（图 2B）。因此，12/GW3965 是一种口服有效的 LXR 激动剂，可上调 ABCA1 表达并提高 C57BL/6 小鼠体内循环 HDL 的水平。[4]

[1]. LXR and TSPO as new therapeutic targets to increase the levels of neuroactive steroids in the central nervous system of diabetic animals. Neurochemistry International (2012), 60(6), 616-621.

[2]. An LXR Agonist Promotes Glioblastoma Cell Death through Inhibition of an EGFR/AKT/SREBP-1/LDLR-Dependent Pathway. Cancer Discovery (2011), 1(5), 442-456.

[3]. LXR as a novel antithrombotic target. Blood (2011), 117(21), 5751-5761.

[4]. Identification of a nonsteroidal liver X receptor agonist through parallel array synthesis of tertiary amines. J Med Chem. 2002 May 9;45(10):1963-6.

使用肝X受体（LXR）激动剂GW3965靶向LDLR，可导致LDLR诱导降解因子（IDOL）介导的LDLR降解，并增加ABCA1胆固醇外排转运蛋白的表达，从而在体内胶质母细胞瘤（GBM）模型中显著促进肿瘤细胞死亡。这些结果表明，EGFRvIII可通过PI3K/SREBP-1依赖性上调LDLR来促进肿瘤存活，并提示LXR激动剂在GBM患者治疗中可能发挥作用。[2]

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从叔胺类化合物库中筛选出一种高效、选择性强、口服有效的LXR激动剂。 GW3965 (12) 在无细胞配体传感试验中以 125 nM 的 EC50 值募集类固醇受体共激活因子 1 至人 LXRα，并在基于细胞的报告基因试验中作为 hLXRα 和 hLXRβ 的完全激动剂，EC50 值分别为 190 nM 和 30 nM。以 10 mg/kg 的剂量口服 GW3965 (12) 后，C57BL/6 小鼠小肠和外周巨噬细胞中逆向胆固醇转运蛋白 ABCA1 的表达增加，血浆中高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 浓度增加 30%。GW3965 (12) 将成为研究 LXR 在逆向胆固醇转运和脂质代谢调控中作用的重要化学工具。[4]

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链脲佐菌素 (STZ) 糖尿病大鼠中枢神经系统 (CNS) 中神经活性类固醇水平降低。一致认为，它们在该实验模型中发挥保护作用，对抗中枢神经系统（CNS）中发生的退行性事件。因此，一种有前景的治疗策略是直接提高CNS中这些物质的水平。本研究评估了转位蛋白-18 kDa (TSPO) 或肝X受体 (LXR) 的激活是否会影响糖尿病和非糖尿病动物CNS中神经活性类固醇的水平。我们观察到，使用Ro5-4864（即TSPO的配体）或GW3965（即LXR的配体）治疗可诱导STZ诱导的大鼠脊髓、小脑和大脑皮层中神经活性类固醇的增加，但在非病理动物的CNS中未观察到这种增加。有趣的是，在所分析的三个CNS区域以及两种药理学工具之间，诱导模式存在差异。特别是，LXR的激活可能代表一种有前景的神经保护策略，因为与Ro5-4864治疗不同，GW3965治疗并未引起血浆中神经活性类固醇水平的显著变化。这表明，激活LXR可能选择性地提高中枢神经系统（CNS）中神经活性类固醇的水平，从而避免全身性使用这些分子可能产生的内分泌副作用。有趣的是，GW3965治疗可增加糖尿病动物脊髓中二氢孕酮的水平，并伴有髓鞘碱性蛋白表达的增加。因此，我们证明LXR的激活能够缓解糖尿病的中枢神经系统症状。[1]胶质母细胞瘤（GBM）是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤，也是所有癌症中最致命的癌症之一。表皮生长因子受体 (EGFR) 突变（EGFRvIII）和磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3K) 过度激活在胶质母细胞瘤 (GBM) 中很常见，它们促进肿瘤生长和存活，包括通过固醇调节元件结合蛋白1 (SREBP-1) 依赖的脂肪生成。胆固醇代谢在GBM发病机制中的作用、其与EGFR/PI3K信号通路的关联以及其潜在的治疗靶点尚不清楚。在本研究中，我们对GBM细胞系、异种移植模型和GBM临床样本（包括接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼治疗的患者样本）进行了研究，揭示了一条通过低密度脂蛋白受体 (LDLR) 激活的、PI3K/SREBP-1依赖的肿瘤存活通路。使用肝X受体 (LXR) 激动剂 GW3965 靶向 LDLR 可导致 LDLR 诱导降解因子 (IDOL) 介导的 LDLR 降解，并增加 ABCA1 胆固醇外排转运蛋白的表达，从而在体内胶质母细胞瘤 (GBM) 模型中有效促进肿瘤细胞死亡。这些结果表明，EGFRvIII 可通过 PI3K/SREBP-1 依赖性上调 LDLR 来促进肿瘤存活，并提示 LXR 激动剂在 GBM 患者治疗中可能发挥作用。[2] 肝X受体 (LXR) 是参与胆固醇稳态调节的转录因子。LXR 配体具有抗动脉粥样硬化特性，且该特性独立于其对胆固醇代谢的影响。血小板参与动脉粥样硬化的发生，尽管其无核，但仍表达核受体。我们假设LXR配体的抗动脉粥样硬化作用可能部分通过血小板介导，因此探索了LXR在血小板中的潜在作用。我们的结果表明，LXR-β存在于人血小板中，并且LXR配体GW3965和T0901317能够非基因组性地调节多种激动剂刺激的血小板聚集。GW3965使LXR与胶原受体GPVI附近的信号通路成分结合，提示LXR在血小板中发挥作用的潜在机制是降低血小板反应。动脉粥样硬化病变部位的血小板活化会导致血栓形成，进而引发心肌梗死和中风。我们利用小鼠体内血栓模型证明，GW3965具有抗血栓作用，能够减小血栓的大小并降低其稳定性。 GW3965 具有抗动脉粥样硬化作用，并具有新型抗血小板/血栓形成作用[3]。从叔胺类化合物库中筛选出一种强效、选择性、口服有效的 LXR 激动剂。GW3965 (12) 在无细胞配体传感实验中，以 125 nM 的 EC50 值将类固醇受体共激活因子 1 募集至人 LXRα；在基于细胞的报告基因实验中，GW3965 对 hLXRα 和 hLXRβ 均表现出完全激动剂活性，EC50 值分别为 190 nM 和 30 nM。以 10 mg/kg 的剂量口服 GW3965 后，C57BL/6 小鼠小肠和外周巨噬细胞中逆向胆固醇转运蛋白 ABCA1 的表达增加，血浆中高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 浓度升高 30%。化合物 12 将成为研究 LXR 在调节胆固醇逆向转运和脂质代谢中的作用的宝贵化学工具。[4]

C33H31CLF3NO3.HCL

618.51

617.171

C, 64.08; H, 5.22; Cl, 11.46; F, 9.21; N, 2.26; O, 7.76

405911-17-3

GW3965;405911-09-3

16078973

Typically exists as white to off-white solids at room temperature

8.891

49.77

2

7

13

42

753

0

ClC1C(C(F)(F)F)=C([H])C([H])=C([H])C=1C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])OC1=C([H])C([H])=C([H])C(C([H])([H])C(=O)O[H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H].Cl[H]

NMPUWJFHNOUNQU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C33H31ClF3NO3.ClH/c34-32-27(15-8-17-30(32)33(35,36)37)22-38(18-9-19-41-28-16-7-10-24(20-28)21-31(39)40)23-29(25-11-3-1-4-12-25)26-13-5-2-6-14-26;/h1-8,10-17,20,29H,9,18-19,21-23H2,(H,39,40);1H

2-(3-(3-((2-chloro-3-(trifluoromethyl)benzyl)(2,2-diphenylethyl)amino)propoxy)phenyl)acetic acid hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.04 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (16.17 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。