| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VEGFR
hVEGF-IN-1 (compound 1) (1 nM-100 μM; 5 min) exhibits a binding affinity to both IRES-A (WT) and IRES-A mutant RNA oligomer (IRES-MU1), with Kds of 1.29 and 13.4 μM, respectively, as determined by microscale thermophoresis (MST) measurements[1]. hVEGF-IN-1 (0.375-3 μM; 0-24 h) decreases MDA-MB-231 cell migration by about 25% at the concentration of 3 μM[1]. hVEGF-IN-1 (0.1875-3 μM; 48 h) lowers the amount of VEGF-A protein in MCF-7 cells[1]. hVEGF-IN-1 (0.375-3 μM; 48 h) cuts the migrated MCF-7 cells' relative wound closure by about 35% at a concentration of 3 μM[1]. hVEGF-IN-1 (1.25-10 μM) decreases the stability of the IRES-A G-Quadruplex in a dose-dependent manner[1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
hVEGF-IN-1（化合物 1）（1 nM-100 μM；5 分钟）对 IRES-A (WT) 和 IRES-A 突变体 RNA 寡聚物 (IRES-MU1) 表现出结合亲和力，Kds 分别为 1.29 和 13.4 μM，通过微量热泳 (MST) 测量确定[1]。
hVEGF-IN-1（0.375-3 μM；0-24 小时）在浓度为 3 μM[1]。 hVEGF-IN-1（0.1875-3 μM；48 小时）可降低 MCF-7 细胞中 VEGF-A 蛋白的量[1]。 hVEGF-IN-1 （0.375-3 μM；48 小时）在 3 μM 浓度下，迁移的 MCF-7 细胞的相对伤口闭合率降低约 35%[1]。 hVEGF-IN-1 (1.25-10 μM) 降低IRES-A G-Quadruplex 的稳定性以剂量依赖性方式[1]。 在MCF-7细胞的双荧光素酶报告基因实验中，compound 1 下调了由hVEGF-A IRES-A区域介导的帽非依赖性翻译。在1.5 µM浓度下，它将由IRES-A驱动的MetLuc活性降低了约80%。此效应对于野生型IRES序列具有特异性，在突变对照（MU2, MU3）中未观察到。 在MCF-7细胞中，通过ELISA测定，compound 1 在1.5 µM浓度下使VEGF-A蛋白的分泌量减少约75%。蛋白质印迹分析也证实了细胞VEGF-A蛋白水平的剂量依赖性降低（测试浓度高达3 µM）。 RT-PCR和qRT-PCR分析表明，compound 1 不影响hVEGF-A基因或含有IRES-A的报告基因的转录。 在化学诱导缺氧条件（100 µM CoCl₂）下的划痕愈合实验中，compound 1（3 µM）显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的迁移，将相对伤口闭合率降低至约35%，与VEGF-A siRNA敲低的效果相当。通过添加外源性VEGF-A蛋白可以部分挽救这种迁移抑制效应。 在使用更具侵袭性的MDA-MB-231乳腺癌细胞系的Trans-well迁移实验中，compound 1（3 µM）将细胞迁移减少至对照的约25%。 实时细胞分析（RTCA）证实，compound 1 在24小时内以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞的迁移。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
hVEGF-IN-1（化合物 1）（7.5 mg/kg；每天一次腹膜内注射，持续 20 天）抑制人乳腺肿瘤异种移植物中的肿瘤生长[1]。
在采用MCF-7细胞建立的裸鼠人乳腺癌异种移植模型中，每天腹腔注射（i.p.）一次7.5 mg/kg的compound 1，持续20天，可显著抑制肿瘤生长。治疗20天后，治疗组的平均肿瘤体积小于300 mm³，而生理盐水对照组超过700 mm³。最终肿瘤重量减少了约60.1%（0.18 g vs 对照组0.45 g）。 对compound 1治疗组肿瘤组织的免疫组化（IHC）分析显示，与对照组相比，VEGF-A蛋白表达显著降低。[1] |
| 酶活实验 |
表面等离子共振（SPR）： 将生物素标记的RNA寡聚体（IRES-A WT, IRES-A MU1）和对照发夹DNA固定在GLH芯片上。将compound 1和其他库化合物在运行缓冲液（50 mM Tris, 150 mM KCl, 0.005% Tween-20, pH 7.4）中连续稀释，以50 µL/min的流速注入芯片表面。结合相持续300秒，随后在25°C下进行200秒的解离相。记录结合响应，并使用Langmuir拟合模型计算解离常数（K_D）。[1]
微量热泳动（MST）： 对于直接结合测量，将靶标RNA寡聚体（IRES-A WT, MU1或MU2）用荧光染料（FAM）标记。将恒定浓度的标记RNA与compound 1的系列稀释液在含有100 mM KCl和0.1 mM EDTA的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中孵育。孵育后，将样品加入玻璃毛细管，使用MST仪器测量热泳动。将归一化荧光的变化对化合物浓度作图以确定K_D值。 对于与BG4抗体的竞争结合，将BG4蛋白用NT-647染料标记。将恒定浓度的标记BG4与体外转录的IRES-A mRNA的系列稀释液在存在或不存在固定浓度compound 1的条件下孵育。进行MST测量以确定结合亲和力的变化。[1] 竞争性透析： 将各种核酸结构，包括IRES-A WT RNA G-四链体、其他RNA/DNA G-四链体、双链DNA（CT DNA）和对照RNA（发夹、随机RNA），在退火后置于单独的透析盒中。将所有透析盒浸没在含有固定浓度compound 1的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4, 100 mM NaCl）的公共储液池中，在25°C下透析24小时。透析后，通过分光光度法定量结合到每种核酸上的化合物量，以评估结合选择性。[1] 圆二色谱（CD）： 将RNA寡聚体在含有100 mM KCl的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中退火。在不存在和存在递增浓度compound 1的条件下记录25°C下的CD光谱。监测特征峰（例如，平行G-四链体在~260 nm）的变化以评估结构扰动。 对于熔解实验，在不存在和存在compound 1（5 µM）的条件下，以可控速率从25°C升温至95°C，监测262 nm处的CD信号。从拟合的熔解曲线确定熔解温度（T_m）。[1] 电泳迁移率变动分析（EMSA）： 将退火的IRES-A RNA寡聚体（WT和MU2）与递增浓度的compound 1在含有100 mM KCl的缓冲液中孵育。然后将混合物上样到用含有100 mM KCl的 Running buffer 制备的16%非变性聚丙烯酰胺凝胶上。在恒定电压下进行电泳。凝胶用荧光核酸染料染色并显影，观察RNA迁移率的变动或对应于不同结构状态的条带强度变化。[1] |
| 细胞实验 |
细胞系：MCF-7细胞
浓度：0.1875、0.375、0.75、1.5、3 μM 孵育时间：48小时 结果：hVEGF-A表达下调。 双荧光素酶报告基因实验： 将MCF-7细胞与两种质粒共转染：一种表达海肾荧光素酶（pRL-TK）作为内参，另一种在报告基因构建体中，将Metridia荧光素酶（MetLuc）基因置于IRES-A序列（WT或突变体）的下游。转染4小时后，用不同浓度（0.1875至1.5 µM）的compound 1处理细胞24小时。收集细胞培养上清液，使用化学发光法测量分泌的MetLuc活性。分别测量细胞裂解液中的海肾荧光素酶活性用于归一化。计算MetLuc与海肾荧光素酶活性的比值，以确定对IRES介导的翻译的影响。[1] 酶联免疫吸附试验（ELISA）： 用浓度范围从0到1.5 µM的compound 1处理MCF-7细胞24小时。收集细胞培养上清液，使用商业化的针对人VEGF-A的ELISA试剂盒，按照说明书操作，定量分泌的VEGF-A蛋白水平。测量吸光度，并根据标准曲线确定蛋白浓度。[1] 蛋白质印迹： 将用compound 1（0至3 µM）处理24-48小时的MCF-7细胞裂解。定量总蛋白，通过SDS-PAGE分离，并转移至膜上。用抗VEGF-A和β-肌动蛋白（上样对照）的一抗孵育膜，然后使用适当的辣根过氧化物酶偶联的二抗。通过化学发光法显影蛋白条带。[1] RNA免疫沉淀（RIP）： 将MCF-7细胞转染表达FLAG标签BG4抗体的质粒。24小时后，用compound 1（2.5或5 µM）或DMSO再处理24小时。用甲醛交联细胞，裂解，并将裂解液与抗FLAG磁珠在4°C孵育过夜。洗涤磁珠，洗脱结合的RNA，然后进行反向交联和蛋白酶K消化。使用针对IRES-A区域的特异性引物，通过斑点印迹、RT-PCR和qRT-PCR分析纯化的RNA，以定量BG4结合的RNA。[1] 细胞划痕（伤口愈合）实验： 将MCF-7细胞在6孔板中培养至融合。使用移液器吸头划痕。然后用100 µM CoCl₂模拟缺氧，并用不同浓度的compound 1（0.375至3 µM）处理或转染VEGF-A siRNA（作为对照）48小时。在一些孔中，化合物处理48小时后，添加外源性VEGF-A蛋白继续培养12小时。使用相差显微镜在0小时和48小时（或VEGF-A挽救实验的60小时）对划痕区域进行拍照。使用图像分析软件量化伤口闭合面积。[1] Trans-well迁移实验： 将MDA-MB-231细胞悬浮在含有或不含compound 1（0.375至3 µM）的无血清培养基中，并接种到带有多孔膜的trans-well小室的上层。下层小室含有含10%胎牛血清（FBS）和100 µM CoCl₂（作为化学引诱剂）的培养基。允许细胞迁移24小时。移除膜上表面未迁移的细胞。对膜下表面的迁移细胞进行固定，用MTT染色，溶解于DMSO中，并通过测量570 nm处的吸光度进行定量。[1] 迁移的实时细胞分析（RTCA）： 将MDA-MB-231细胞血清饥饿24小时。将CIM-16板的下层小室填充含有FBS和CoCl₂的培养基，其中含有或不含compound 1（0.5至8 µM）。上层小室填充含有相同浓度化合物的无血清培养基。背景测量后，将血清饥饿的细胞接种到上层小室。将板放入RTCA仪器中，自动监测细胞穿过微孔膜的迁移（以细胞指数表示），每15分钟一次，持续24小时。[1] |
| 动物实验 |
将MCF-7细胞以7.5 mg/kg的剂量腹腔注射（ip）给BALB/c雌性裸鼠，每日一次，连续20天。异种移植瘤模型及治疗：将MCF-7人乳腺癌细胞皮下植入BALB/c雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约1000 mm³时，切除肿瘤组织，将其分割后重新植入实验小鼠的腋窝。小鼠随机分为三组：阴性对照组（生理盐水）、阳性对照组（阿霉素，1 mg/kg）和治疗组（化合物1，7.5 mg/kg）。化合物或生理盐水均通过腹腔注射（ip）给药，每日一次，连续20天。注射体积为150 µL。每日测量肿瘤直径（长和宽）和体重。 20天后，将小鼠安乐死，切除肿瘤并称重，然后对肿瘤组织进行免疫组织化学（IHC）分析，检测VEGF-A的表达。[1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
所提供的文献中没有化合物 1 的具体 ADME 或药代动力学数据（例如，半衰期、清除率、生物利用度）。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在MCF-7细胞中，化合物1的细胞毒性IC₅₀为12.5 µM。在MCF-7异种移植小鼠模型中，接受化合物1（7.5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续20天）治疗的小鼠体重未见显著变化，表明在该剂量和给药方案下，该化合物在实验条件下具有极低的全身毒性。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化合物 1 是一种新型喹唑啉衍生物，化学名称为 N-(2-(4-(N-(4-(2-二乙氨基乙氧基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙酰胺。
它是通过基于表面等离子共振 (SPR) 的筛选方法发现的，该方法筛选了一个包含 144 种天然产物及其衍生物的化合物库，以寻找能够与 hVEGF-A IRES-A 区富含 G 的序列结合的化合物。 其作用机制被认为是选择性地结合并破坏位于 hVEGF-A mRNA 5′-UTR 中的特定 RNA G-四链体结构。这会破坏不依赖于帽结构的翻译起始，导致 VEGF-A 蛋白合成减少，进而抑制肿瘤细胞迁移和肿瘤生长。 |
| 分子式 |
C34H43N7O2
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|---|---|
| 分子量 |
581.750927209854
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| 精确质量 |
581.347
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| CAS号 |
1637443-98-1
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| 相关CAS号 |
1637443-98-1
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| PubChem CID |
131704486
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
4.8
|
| tPSA |
85.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
13
|
| 重原子数目 |
43
|
| 分子复杂度/Complexity |
813
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
VIBJAHJNWHZSJP-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C34H43N7O2/c1-4-40(5-2)24-25-43-27-16-14-26(15-17-27)35-33-29-11-7-9-13-31(29)37-34(38-33)28-10-6-8-12-30(28)36-32(42)18-19-41-22-20-39(3)21-23-41/h6-17H,4-5,18-25H2,1-3H3,(H,36,42)(H,35,37,38)
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| 化学名 |
N-[2-[4-[4-[2-(diethylamino)ethoxy]anilino]quinazolin-2-yl]phenyl]-3-(4-methylpiperazin-1-yl)propanamide
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| 别名 |
hVEGF-IN-1
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~25 mg/mL (~43 mM)
Ethanol: ~50 mg/mL (~86 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7190 mL | 8.5948 mL | 17.1895 mL | |
| 5 mM | 0.3438 mL | 1.7190 mL | 3.4379 mL | |
| 10 mM | 0.1719 mL | 0.8595 mL | 1.7190 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
VEGFR2-IN-7
SYHA1813
VEGFR-2-IN-38
BHEP
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