| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VEGFR
hVEGF-IN-1 (compound 1) (1 nM-100 μM; 5 min) exhibits a binding affinity to both IRES-A (WT) and IRES-A mutant RNA oligomer (IRES-MU1), with Kds of 1.29 and 13.4 μM, respectively, as determined by microscale thermophoresis (MST) measurements[1]. hVEGF-IN-1 (0.375-3 μM; 0-24 h) decreases MDA-MB-231 cell migration by about 25% at the concentration of 3 μM[1]. hVEGF-IN-1 (0.1875-3 μM; 48 h) lowers the amount of VEGF-A protein in MCF-7 cells[1]. hVEGF-IN-1 (0.375-3 μM; 48 h) cuts the migrated MCF-7 cells' relative wound closure by about 35% at a concentration of 3 μM[1]. hVEGF-IN-1 (1.25-10 μM) decreases the stability of the IRES-A G-Quadruplex in a dose-dependent manner[1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
hVEGF-IN-1（化合物 1）（1 nM-100 μM；5 分钟）对 IRES-A (WT) 和 IRES-A 突变体 RNA 寡聚物 (IRES-MU1) 表现出结合亲和力，Kds 分别为 1.29 和 13.4 μM，通过微量热泳 (MST) 测量确定[1]。
hVEGF-IN-1（0.375-3 μM；0-24 小时）在浓度为 3 μM[1]。 hVEGF-IN-1（0.1875-3 μM；48 小时）可降低 MCF-7 细胞中 VEGF-A 蛋白的量[1]。 hVEGF-IN-1 （0.375-3 μM；48 小时）在 3 μM 浓度下，迁移的 MCF-7 细胞的相对伤口闭合率降低约 35%[1]。 hVEGF-IN-1 (1.25-10 μM) 降低IRES-A G-Quadruplex 的稳定性以剂量依赖性方式[1]。 在MCF-7细胞的双荧光素酶报告基因实验中，compound 1 下调了由hVEGF-A IRES-A区域介导的帽非依赖性翻译。在1.5 µM浓度下，它将由IRES-A驱动的MetLuc活性降低了约80%。此效应对于野生型IRES序列具有特异性，在突变对照（MU2, MU3）中未观察到。 在MCF-7细胞中，通过ELISA测定，compound 1 在1.5 µM浓度下使VEGF-A蛋白的分泌量减少约75%。蛋白质印迹分析也证实了细胞VEGF-A蛋白水平的剂量依赖性降低（测试浓度高达3 µM）。 RT-PCR和qRT-PCR分析表明，compound 1 不影响hVEGF-A基因或含有IRES-A的报告基因的转录。 在化学诱导缺氧条件（100 µM CoCl₂）下的划痕愈合实验中，compound 1（3 µM）显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的迁移，将相对伤口闭合率降低至约35%，与VEGF-A siRNA敲低的效果相当。通过添加外源性VEGF-A蛋白可以部分挽救这种迁移抑制效应。 在使用更具侵袭性的MDA-MB-231乳腺癌细胞系的Trans-well迁移实验中，compound 1（3 µM）将细胞迁移减少至对照的约25%。 实时细胞分析（RTCA）证实，compound 1 在24小时内以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞的迁移。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
hVEGF-IN-1（化合物 1）（7.5 mg/kg；每天一次腹膜内注射，持续 20 天）抑制人乳腺肿瘤异种移植物中的肿瘤生长[1]。
在采用MCF-7细胞建立的裸鼠人乳腺癌异种移植模型中，每天腹腔注射（i.p.）一次7.5 mg/kg的compound 1，持续20天，可显著抑制肿瘤生长。治疗20天后，治疗组的平均肿瘤体积小于300 mm³，而生理盐水对照组超过700 mm³。最终肿瘤重量减少了约60.1%（0.18 g vs 对照组0.45 g）。 对compound 1治疗组肿瘤组织的免疫组化（IHC）分析显示，与对照组相比，VEGF-A蛋白表达显著降低。[1] |
| 酶活实验 |
表面等离子共振（SPR）： 将生物素标记的RNA寡聚体（IRES-A WT, IRES-A MU1）和对照发夹DNA固定在GLH芯片上。将compound 1和其他库化合物在运行缓冲液（50 mM Tris, 150 mM KCl, 0.005% Tween-20, pH 7.4）中连续稀释，以50 µL/min的流速注入芯片表面。结合相持续300秒，随后在25°C下进行200秒的解离相。记录结合响应，并使用Langmuir拟合模型计算解离常数（K_D）。[1]
微量热泳动（MST）： 对于直接结合测量，将靶标RNA寡聚体（IRES-A WT, MU1或MU2）用荧光染料（FAM）标记。将恒定浓度的标记RNA与compound 1的系列稀释液在含有100 mM KCl和0.1 mM EDTA的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中孵育。孵育后，将样品加入玻璃毛细管，使用MST仪器测量热泳动。将归一化荧光的变化对化合物浓度作图以确定K_D值。 对于与BG4抗体的竞争结合，将BG4蛋白用NT-647染料标记。将恒定浓度的标记BG4与体外转录的IRES-A mRNA的系列稀释液在存在或不存在固定浓度compound 1的条件下孵育。进行MST测量以确定结合亲和力的变化。[1] 竞争性透析： 将各种核酸结构，包括IRES-A WT RNA G-四链体、其他RNA/DNA G-四链体、双链DNA（CT DNA）和对照RNA（发夹、随机RNA），在退火后置于单独的透析盒中。将所有透析盒浸没在含有固定浓度compound 1的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4, 100 mM NaCl）的公共储液池中，在25°C下透析24小时。透析后，通过分光光度法定量结合到每种核酸上的化合物量，以评估结合选择性。[1] 圆二色谱（CD）： 将RNA寡聚体在含有100 mM KCl的10 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）中退火。在不存在和存在递增浓度compound 1的条件下记录25°C下的CD光谱。监测特征峰（例如，平行G-四链体在~260 nm）的变化以评估结构扰动。 对于熔解实验，在不存在和存在compound 1（5 µM）的条件下，以可控速率从25°C升温至95°C，监测262 nm处的CD信号。从拟合的熔解曲线确定熔解温度（T_m）。[1] 电泳迁移率变动分析（EMSA）： 将退火的IRES-A RNA寡聚体（WT和MU2）与递增浓度的compound 1在含有100 mM KCl的缓冲液中孵育。然后将混合物上样到用含有100 mM KCl的 Running buffer 制备的16%非变性聚丙烯酰胺凝胶上。在恒定电压下进行电泳。凝胶用荧光核酸染料染色并显影，观察RNA迁移率的变动或对应于不同结构状态的条带强度变化。[1] |
| 细胞实验 |
细胞系：MCF-7细胞
浓度：0.1875、0.375、0.75、1.5、3 μM 孵育时间：48小时 结果：hVEGF-A表达下调。 双荧光素酶报告基因实验： 将MCF-7细胞与两种质粒共转染：一种表达海肾荧光素酶（pRL-TK）作为内参，另一种在报告基因构建体中，将Metridia荧光素酶（MetLuc）基因置于IRES-A序列（WT或突变体）的下游。转染4小时后，用不同浓度（0.1875至1.5 µM）的compound 1处理细胞24小时。收集细胞培养上清液，使用化学发光法测量分泌的MetLuc活性。分别测量细胞裂解液中的海肾荧光素酶活性用于归一化。计算MetLuc与海肾荧光素酶活性的比值，以确定对IRES介导的翻译的影响。[1] 酶联免疫吸附试验（ELISA）： 用浓度范围从0到1.5 µM的compound 1处理MCF-7细胞24小时。收集细胞培养上清液，使用商业化的针对人VEGF-A的ELISA试剂盒，按照说明书操作，定量分泌的VEGF-A蛋白水平。测量吸光度，并根据标准曲线确定蛋白浓度。[1] 蛋白质印迹： 将用compound 1（0至3 µM）处理24-48小时的MCF-7细胞裂解。定量总蛋白，通过SDS-PAGE分离，并转移至膜上。用抗VEGF-A和β-肌动蛋白（上样对照）的一抗孵育膜，然后使用适当的辣根过氧化物酶偶联的二抗。通过化学发光法显影蛋白条带。[1] RNA免疫沉淀（RIP）： 将MCF-7细胞转染表达FLAG标签BG4抗体的质粒。24小时后，用compound 1（2.5或5 µM）或DMSO再处理24小时。用甲醛交联细胞，裂解，并将裂解液与抗FLAG磁珠在4°C孵育过夜。洗涤磁珠，洗脱结合的RNA，然后进行反向交联和蛋白酶K消化。使用针对IRES-A区域的特异性引物，通过斑点印迹、RT-PCR和qRT-PCR分析纯化的RNA，以定量BG4结合的RNA。[1] 细胞划痕（伤口愈合）实验： 将MCF-7细胞在6孔板中培养至融合。使用移液器吸头划痕。然后用100 µM CoCl₂模拟缺氧，并用不同浓度的compound 1（0.375至3 µM）处理或转染VEGF-A siRNA（作为对照）48小时。在一些孔中，化合物处理48小时后，添加外源性VEGF-A蛋白继续培养12小时。使用相差显微镜在0小时和48小时（或VEGF-A挽救实验的60小时）对划痕区域进行拍照。使用图像分析软件量化伤口闭合面积。[1] Trans-well迁移实验： 将MDA-MB-231细胞悬浮在含有或不含compound 1（0.375至3 µM）的无血清培养基中，并接种到带有多孔膜的trans-well小室的上层。下层小室含有含10%胎牛血清（FBS）和100 µM CoCl₂（作为化学引诱剂）的培养基。允许细胞迁移24小时。移除膜上表面未迁移的细胞。对膜下表面的迁移细胞进行固定，用MTT染色，溶解于DMSO中，并通过测量570 nm处的吸光度进行定量。[1] 迁移的实时细胞分析（RTCA）： 将MDA-MB-231细胞血清饥饿24小时。将CIM-16板的下层小室填充含有FBS和CoCl₂的培养基，其中含有或不含compound 1（0.5至8 µM）。上层小室填充含有相同浓度化合物的无血清培养基。背景测量后，将血清饥饿的细胞接种到上层小室。将板放入RTCA仪器中，自动监测细胞穿过微孔膜的迁移（以细胞指数表示），每15分钟一次，持续24小时。[1] |
| 动物实验 |
BALB/c female nude mice were implanted MCF-7 cells
7.5 mg/kg I.p. once daily for 20 days Xenograft Tumor Model and Treatment: Female BALB/c nude mice were subcutaneously implanted with MCF-7 human breast cancer cells. When tumors reached approximately 1000 mm³, tumor tissues were excised, divided, and re-implanted into the underarm regions of experimental mice. Mice were randomly divided into three groups: negative control (saline), positive control (doxorubicin, 1 mg/kg), and treatment (compound 1, 7.5 mg/kg). Compounds or saline were administered via intraperitoneal (i.p.) injection once daily for 20 consecutive days. The injection volume was 150 µL. Tumor diameters (length and width) and body weights were measured daily. After 20 days, mice were euthanized, tumors were excised and weighed, and tumor tissues were processed for immunohistochemistry (IHC) analysis of VEGF-A expression. [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
The provided literature does not contain specific ADME or pharmacokinetics data (e.g., half-life, clearance, bioavailability) for compound 1. [1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In MCF-7 cells, the cytotoxicity IC₅₀ of compound 1 was reported to be 12.5 µM.
In the MCF-7 xenograft mouse model, no significant change in body weight was observed in the group treated with compound 1 (7.5 mg/kg, i.p., daily for 20 days), indicating minimal systemic toxicity at this dose and regimen under the experimental conditions. [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Compound 1 is a novel quinazoline derivative, chemically designated as N-(2-(4-(N-(4-(2-diethylaminoethoxy)phenyl)amino)quinazolin-2-yl)phenyl)-3-(4-methylpiperazin-1-yl)propanamide.
It was discovered through SPR-based screening of a library of 144 natural products and derivatives for binding to the G-rich sequence in the hVEGF-A IRES-A region. Its proposed mechanism of action is the selective binding and destabilization of a specific RNA G-quadruplex structure located in the 5′-UTR of hVEGF-A mRNA. This disrupts cap-independent translation initiation, leading to reduced VEGF-A protein synthesis, which in turn inhibits tumor cell migration and tumor growth. |
| 分子式 |
C34H43N7O2
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|---|---|
| 分子量 |
581.750927209854
|
| 精确质量 |
581.347
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| CAS号 |
1637443-98-1
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| 相关CAS号 |
1637443-98-1
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| PubChem CID |
131704486
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
|
| LogP |
4.8
|
| tPSA |
85.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
13
|
| 重原子数目 |
43
|
| 分子复杂度/Complexity |
813
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
VIBJAHJNWHZSJP-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C34H43N7O2/c1-4-40(5-2)24-25-43-27-16-14-26(15-17-27)35-33-29-11-7-9-13-31(29)37-34(38-33)28-10-6-8-12-30(28)36-32(42)18-19-41-22-20-39(3)21-23-41/h6-17H,4-5,18-25H2,1-3H3,(H,36,42)(H,35,37,38)
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| 化学名 |
N-[2-[4-[4-[2-(diethylamino)ethoxy]anilino]quinazolin-2-yl]phenyl]-3-(4-methylpiperazin-1-yl)propanamide
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| 别名 |
hVEGF-IN-1
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~25 mg/mL (~43 mM)
Ethanol: ~50 mg/mL (~86 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7190 mL | 8.5948 mL | 17.1895 mL | |
| 5 mM | 0.3438 mL | 1.7190 mL | 3.4379 mL | |
| 10 mM | 0.1719 mL | 0.8595 mL | 1.7190 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
VEGFR2-IN-7
SYHA1813
VEGFR-2-IN-38
BHEP
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