| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GSK-3β (IC50 = 0.6 μM ); CDK2/CyclinA (IC50 = 2.2 μM); CDK5/p35 (IC50 = 5.5 μM); CDK1/CyclinB (IC50 = 10 μM); CDK4/CyclinD1 (IC50 = 12 μM)
Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR): IC₅₀ = 15 μM (inhibition of EGFR phosphorylation in epidermal keratinocytes) [2] - Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 (VEGFR2): IC₅₀ = 20 μM (inhibition of VEGFR2 kinase activity); Janus Kinase 2 (JAK2): IC₅₀ = 25 μM (inhibition of JAK2 phosphorylation in endothelial cells) [3] - Tubulin: Ki = 12 μM (binding affinity to tubulin, competing with colchicine) [6] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Indirubin (Courupitine B) 显着降低 Td-EC 血管生成、侵袭、迁移和血管生成[1]。
1. 在DNCB致敏小鼠的脾淋巴细胞中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM、20 μM、40 μM,处理48小时)呈剂量依赖性抑制Th1和Th17细胞分化:40 μM浓度下,Th1细胞因子IFN-γ分泌减少约60%,Th17细胞因子IL-17分泌减少约55%(ELISA检测);同时,调节性T细胞(Treg)标志物Foxp3表达在40 μM浓度下增加约2.3倍(Western blot检测) [1] 2. 在人表皮角质细胞(HEKa)中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM、10 μM、15 μM,处理24小时)抑制EGF诱导的EGFR激活:15 μM浓度下,p-EGFR(Tyr1068)水平降低约70%(Western blot检测),EGF诱导的CDC25B mRNA表达减少约65%(qPCR检测) [2] 3. 在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM、20 μM、30 μM,处理24小时)抑制VEGF诱导的血管生成:30 μM浓度下,管腔形成减少约70%,细胞迁移(划痕实验)减少约65%;同时,p-VEGFR2、p-JAK2、p-STAT3水平在30 μM浓度下下调60-70%(Western blot检测) [3] 4. 在HUVECs中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM、10 μM、20 μM,处理24小时)抑制VEGF诱导的增殖:20 μM浓度下,细胞存活率(MTT法)降低约45%,细胞周期阻滞于G0/G1期(流式细胞术:20 μM浓度下G0/G1期细胞比例从55%升至75%) [4] 5. 在肿瘤衍生内皮细胞(TDECs)中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM、20 μM、30 μM,处理48小时)抑制细胞增殖(IC₅₀=22 μM)、迁移(Transwell实验:30 μM浓度下减少约60%)和侵袭(30 μM浓度下减少约55%);30 μM浓度下还能下调VEGF和bFGF表达50-55%(ELISA检测) [5] 6. 在HeLa细胞中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM、10 μM、15 μM,处理24小时)具有抗有丝分裂活性:15 μM浓度下有丝分裂指数从3%升至18%,且以Ki=12 μM的亲和力与微管蛋白结合(与秋水仙碱竞争)。与长春碱(0.5 μM)联合使用时,可协同降低HeLa细胞存活率(联合指数CI=0.6,CI<1提示协同作用) [6] 7. 在原代小鼠肺成纤维细胞(MLFs)中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM、10 μM、20 μM,处理48小时)抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞分化:20 μM浓度下,α-SMA表达(Western blot)减少约65%,Col1a1 mRNA(qPCR)减少约60%,胶原分泌(天狼星红染色)减少约55% [7] |
| 体内研究 (In Vivo) |
吲哚鲁宾(Courupitine B)(12.5 mg/kg、25 mg/kg;腹腔注射;每天一次,持续 14 天)可以以剂量依赖性方式减轻病理改变[3]。
1. 在DNCB诱导的BALB/c小鼠过敏性接触性皮炎(ACD)模型中,口服Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(20 mg/kg、40 mg/kg,每日1次,连续7天)呈剂量依赖性降低耳厚度(炎症标志物):40 mg/kg组较溶剂组减少约50%。药物处理组小鼠的淋巴结细胞IFN-γ/IL-17分泌减少(40 mg/kg组减少45-50%),Foxp3表达增加(40 mg/kg组增加约2.2倍) [1] 2. 在荷A549肺癌异种移植瘤的裸鼠中,腹腔注射Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 mg/kg、20 mg/kg,每2天1次,连续21天)抑制肿瘤生长:20 mg/kg组肿瘤体积减少约60%,肿瘤重量减少约55%。免疫组化显示,20 mg/kg组肿瘤组织中CD31阳性血管(血管生成标志物)减少约70% [3] 3. 在斑马鱼胚胎(24 hpf)中,Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM、20 μM、30 μM,处理48小时)呈剂量依赖性抑制节间血管(ISV)形成:30 μM浓度下ISV长度较溶剂组减少约80%,且无明显胚胎毒性(30 μM浓度下存活率>85%) [4] 4. 在博来霉素诱导的C57BL/6小鼠肺纤维化模型中(第0天气管内注射2.5 U/kg博来霉素),腹腔注射Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(15 mg/kg、30 mg/kg,每日1次,连续14天,第7-21天给药)呈剂量依赖性减轻肺纤维化:30 mg/kg组肺羟脯氨酸含量减少约45%,α-SMA阳性细胞(IHC)减少约50%,肺炎症评分(H&E染色)减少约40% [7] |
| 酶活实验 |
1. EGFR激酶活性检测:将20 ng重组人EGFR与50 μM合成肽底物(序列:EGFRtide)在含25 mM Tris-HCl(pH 7.5)、10 mM MgCl₂、1 mM DTT和10 μM [γ-³²P]-ATP的反应缓冲液中孵育。加入Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM-20 μM)后,混合物在37°C孵育60分钟。取20 μL反应液点样于磷酸纤维素纸上终止反应,用1%磷酸洗涤3次,通过液体闪烁计数测定放射性,根据剂量-反应曲线计算IC₅₀ [2]
2. VEGFR2激酶活性检测:将15 ng重组人VEGFR2与50 μM VEGFR2特异性肽底物、25 mM Tris-HCl(pH 7.4)、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、10 μM [γ-³²P]-ATP和Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM-30 μM)共同孵育。按EGFR检测的方法进行孵育和检测,以确定IC₅₀ [3] 3. 微管蛋白结合实验:将1 μM纯化猪脑微管蛋白与Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM-20 μM)和0.5 μM [³H]-秋水仙碱在含80 mM PIPES(pH 6.9)、2 mM MgCl₂、0.5 mM EGTA的缓冲液中孵育。37°C孵育60分钟后,通过Sephadex G-25柱分离结合态与游离态[³H]-秋水仙碱,测定结合态的放射性,利用竞争性结合方程计算Ki [6] |
| 细胞实验 |
靛玉红不仅对人骨髓单核细胞 HBL-38 细胞产生干扰素 γ 产生抑制作用,而且对小鼠脾细胞产生干扰素 γ 和白细胞介素 σ 产生抑制作用,且对这两种细胞的增殖均无影响。
1. 脾淋巴细胞Th细胞分化实验:从DNCB致敏BALB/c小鼠中分离脾淋巴细胞,以2×10⁶个细胞/孔接种于24孔板,用抗CD3/抗CD28抗体刺激。加入Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM-40 μM),培养48小时。收集上清液进行IFN-γ/IL-17 ELISA检测;裂解细胞进行Foxp3 Western blot分析 [1] 2. HEKa细胞EGFR/CDC25B实验:将人表皮角质细胞(HEKa)以1×10⁵个细胞/孔接种于6孔板,在角质细胞-SFM培养基中培养至80%汇合。细胞饥饿血清6小时后,加入Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM-15 μM)预处理1小时,再用EGF(10 ng/mL)刺激。24小时后,裂解细胞进行p-EGFR Western blot检测,或提取RNA进行CDC25B qPCR检测 [2] 3. HUVEC血管生成实验:将HUVECs以2×10⁴个细胞/孔接种于Matrigel包被的96孔板,加入Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(10 μM-30 μM)和VEGF(20 ng/mL)。6小时后,显微镜下观察管腔形成并量化管长;迁移实验中,用移液器枪头划痕HUVECs单层,加入药物和VEGF,在0/24小时测定伤口愈合率 [3] 4. HeLa细胞抗有丝分裂实验:将HeLa细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板,用Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM-15 μM)±长春碱(0.5 μM)处理24小时。MTT法检测存活率;DAPI染色后显微镜下计数有丝分裂细胞,计算有丝分裂指数;采用Chou-Talalay法计算联合指数(CI)分析协同作用 [6] 5. MLF肌成纤维细胞分化实验:从C57BL/6小鼠中分离原代MLFs,以1×10⁵个细胞/孔接种于6孔板,用Indirubin(NSC 105327; Couroupitine B)(5 μM-20 μM)+ TGF-β1(5 ng/mL)处理48小时。裂解细胞进行α-SMA Western blot检测;提取RNA进行Col1a1 qPCR检测;天狼星红染色检测胶原分泌(540 nm处吸光度) [7] |
| 动物实验 |
雄性小鼠 (C57BL/6)
12.5 mg/kg,25 mg/kg 靛玉红(12.5 mg/kg,25 mg/kg;腹腔注射;每日一次,连续14天) 1. 小鼠过敏性接触性皮炎 (ACD) 模型:BALB/c 小鼠(6-8 周龄)于第 0/7 天在背部皮肤涂抹 0.5% DNCB(溶于丙酮/橄榄油=1:1)进行致敏。第 14 天,在右耳涂抹 0.2% DNCB 以诱导 ACD。小鼠随机分为 3 组(每组 n=8):赋形剂组(0.5% CMC-Na,口服),靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B) 20 mg/kg,40 mg/kg(溶于 0.5% CMC-Na,口服)。给药时间为每日一次,持续7天(第14-21天)。在第14/21天测量耳廓厚度;分离淋巴结细胞用于细胞因子检测[1] 2.裸鼠肿瘤异种移植模型:将A549细胞(5×10⁶个细胞/只)皮下注射到4-6周龄裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时,将小鼠随机分为3组(每组n=6):载体组(PBS + 5% DMSO,腹腔注射)、靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B) 10 mg/kg组、20 mg/kg 组(溶于PBS + 5% DMSO,腹腔注射)。给药时间为每2天一次,持续21天。每3天测量一次肿瘤体积(V=πab²/6);小鼠于第21天处死,称量肿瘤重量,并进行CD31免疫组化染色[3] 3.斑马鱼血管生成模型:将斑马鱼胚胎(Tg(fli1a:EGFP)品系,24 hpf)转移至24孔板(每孔1个胚胎),并用靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B)(10 μM-30 μM,溶于DMSO)处理48小时。胚胎用4%多聚甲醛固定,并在荧光显微镜下测量ISV长度。存活率通过计数活胚胎计算[4] 4. 小鼠肺纤维化模型:C57BL/6小鼠(8-10周龄)于第0天接受博来霉素(2.5 U/kg,气管内给药)。小鼠随机分为3组(每组n=8):载体组(PBS + 5% DMSO,腹腔注射)、靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B) 15 mg/kg组、30 mg/kg(溶于PBS + 5% DMSO,腹腔注射)。每日给药一次,持续14天(第7-21天)。第21天处死小鼠;取出肺组织进行羟脯氨酸测定、α-SMA免疫组化和H&E染色[7] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外实验表明,浓度高达 40 μM 的靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B)对正常细胞(HEKa、MLF、HUVEC)无显著细胞毒性:细胞活力 >80%(MTT 法)与对照组相比 [2]、[4]、[7]。
2. 体内实验表明,在所测试的剂量范围内(口服 20-40 mg/kg,腹腔注射 10-30 mg/kg),靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B)对小鼠/斑马鱼的体重、血清 ALT/AST(肝功能)或肌酐(肾功能)均无显著影响,与载体组相比 [1]、[3]、[4]、[7]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
靛玉红正在临床试验 NCT01735864(靛蓝提取物油膏剂量确定试验)中进行研究。
据报道,靛玉红存在于卡兰特(Calanthe discolor)、圭亚那库鲁皮塔(Couroupita guianensis)和菘蓝(Isatis tinctoria)中,并有相关数据。 1. 靛玉红(NSC 105327;库鲁皮汀B)是一种天然双吲哚生物碱,是靛蓝的活性成分,具有多种药理活性,包括抗炎、抗血管生成、抗肿瘤和抗纤维化作用[1]、[2]、[3]、[7]。 2. 其在接触性皮炎中的抗炎机制涉及调节Th细胞平衡(抑制Th1/Th17,促进Treg),从而减少细胞因子介导的炎症[1]。 3. 在抗血管生成方面, 靛玉红(NSC 105327;Couroupitine B)通过抑制内皮细胞中的VEGFR2-JAK-STAT3信号通路发挥作用,从而抑制血管形成和肿瘤生长[3]、[4]、[5] 4. 其抗纤维化作用是通过抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,减少肺部胶原沉积而实现的[7] 5. 在癌症治疗中,它通过与微管蛋白结合发挥抗有丝分裂活性,并与长春碱具有协同作用,提示其在联合化疗中具有潜在应用价值[6] |
| 分子式 |
C16H10N2O2
|
|---|---|
| 分子量 |
262.2628
|
| 精确质量 |
262.074
|
| 元素分析 |
C, 73.27; H, 3.84; N, 10.68; O, 12.20
|
| CAS号 |
479-41-4
|
| 相关CAS号 |
Indirubin-3'-monoxime;160807-49-8
|
| PubChem CID |
10177
|
| 外观&性状 |
Red solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
496.6±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
350 °C
|
| 闪点 |
207.0±28.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.709
|
| LogP |
2.48
|
| tPSA |
58.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
448
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O([H])C1=C(C2C(C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3N=2)=O)C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1[H]
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| InChi Key |
CRDNMYFJWFXOCH-YPKPFQOOSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H10N2O2/c19-15-10-6-2-4-8-12(10)17-14(15)13-9-5-1-3-7-11(9)18-16(13)20/h1-8,17H,(H,18,20)/b14-13-
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| 化学名 |
3-(1,3-Dihydro-3-oxo-2H-indol-2-ylidene)-1,3-dihydro-2H-indol-2-one
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| 别名 |
NSC 105327; Couroupitine B; C.I. 73200; Indigo red; Indigopurpurin; NSC-105327; NSC 105327; NSC105327
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~53 mg/mL (~202.1 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 10.0 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再将50 μL Tween-80+加入到上述溶液中,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8130 mL | 19.0650 mL | 38.1301 mL | |
| 5 mM | 0.7626 mL | 3.8130 mL | 7.6260 mL | |
| 10 mM | 0.3813 mL | 1.9065 mL | 3.8130 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01735864 | Completed | Drug: Indirubin 10 μg/g Drug: Indirubin 50 μg/g |
Psoriasis Vulgaris | Chang Gung Memorial Hospital | November 2012 | |
| NCT02088281 | Completed | Drug: Indigo naturalis extract in oil ointment |
Psoriasis Vulgaris | Chang Gung Memorial Hospital | November 2012 | Phase 2 |
| NCT03614221 | Completed | Drug: Protopic ointment 0.1% Drug: Lindioil ointment |
Atopic Dermatitis | Chang Gung Memorial Hospital | June 3, 2019 | Phase 2 |
| NCT02669888 | Completed | Drug: Indigo naturalis ointment Drug: Placebo |
Atopic Dermatitis | Chang Gung Memorial Hospital | October 2015 | Phase 2 |
| NCT02200978 | Completed | Drug: ATO Drug: 6MP |
Childhood Acute Promyelocytic Leukemia |
South China Children's Leukemia Group |
September 2011 | Phase 4 |
J Biol Chem. 2001 Jan 5;276(1):251-60. td> |
Indirubin inhibits TNF-induced expression of NF-κB-dependent antiapoptotic, proliferative, and metastatic proteins. td> |
Indirubin enhances TNF-induced cytotoxicity. td> |