| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GSK-3β (IC50 = 22 nM); CDK5/p25 (IC50 = 100 nM); CDK1/cyclin B (IC50 = 180 nM); 5-LOX (IC50 = 7.8-10 μM)
Glycogen Synthase Kinase-3β (GSK-3β) (IC₅₀ = 0.05 μM) [1] Cyclin-Dependent Kinase 5/p25 (CDK5/p25) (IC₅₀ = 0.07 μM) [1] Cyclin-Dependent Kinase 1/Cyclin B (CDK1/Cyclin B) (IC₅₀ = 0.12 μM) [1] Cyclin-Dependent Kinase 2/Cyclin A (CDK2/Cyclin A) (IC₅₀ = 0.18 μM) [1] Cyclin-Dependent Kinase 2/Cyclin E (CDK2/Cyclin E) (IC₅₀ = 0.21 μM) [1] Histone Deacetylase (HDAC) 1 (IC₅₀ = 2.3 μM) [4] Histone Deacetylase (HDAC) 3 (IC₅₀ = 3.1 μM) [4] Histone Deacetylase (HDAC) 6 (IC₅₀ = 1.8 μM) [4] Leukotriene B4 Receptor 1 (BLT1) (no definite IC₅₀ data provided) [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Indirubin-3'-monoxime 的 Ki 为 0.85 μM，Km 为 110 μM。它通过与 ATP 互补来抑制 GSK-3β。即使 IC50 值约为 100 nM，indirubin-3'-monoxime 仍可防止 GSK-3{ 引起的 tau 磷酸化。在 AT100 表位，磷酸化完全被 indiviubunin-3'-monoxime 抑制 [1]。观察到 indinabinin-3'-monoxime 对血管平滑肌细胞 (VSMC) 增殖的抑制作用的 IC50 约为 2 μM。 PDGF诱导的VSMC迁移被吲哚鲁宾-3'-单肟抑制]。 indorubin-3'-monoxime 会破坏单核细胞中促进迁移的 LT 生成和 VSMC 中的迁移反应。此外，indirubin-3'-monoxime 具有相当的功效（IC50 值分别为 5.0±1.1 和 3.7±1.2μM），可阻碍单核细胞和中性粒细胞中 5-脂氧合酶 (5-LO) 产物的产生。 indorubin-3'-monoxime 是一种 5-LO 试剂，在无细胞实验中的 IC50 为 7.8-10 μM [3]。
1. 激酶与HDAC双重抑制作用：靛玉红-3'-单肟（Indirubin-3'-monoxime）强效抑制GSK-3β和CDK5/p25（IC₅₀分别为0.05 μM和0.07 μM），中度抑制其他CDK家族成员（CDK1/Cyclin B、CDK2/Cyclin A/E）[1]；同时对HDAC1、HDAC3和HDAC6具有抑制活性（IC₅₀分别为2.3 μM、3.1 μM和1.8 μM），发挥双重激酶-HDAC抑制作用[4] 2. 抑制tau蛋白异常磷酸化：冈田酸（OA）诱导SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞tau蛋白过度磷酸化后，靛玉红-3'-单肟（0.1-1 μM）以剂量依赖性方式降低tau蛋白Ser396和Thr231位点的磷酸化水平（Western blot检测），1 μM剂量下p-tau/总tau比值分别降低68%和72%，该效应通过抑制GSK-3β和CDK5介导[1, 2] 3. 癌细胞抗增殖与促凋亡活性：靛玉红-3'-单肟（0.5-10 μM）抑制多种癌细胞系（HeLa、MCF-7、A549、HepG2）增殖，MTT法检测IC₅₀值为1.2-3.5 μM；在HeLa细胞中诱导G2/M期细胞周期阻滞（流式细胞术：10 μM剂量下G2/M期细胞从18%升至42%）和凋亡（Annexin V-FITC/PI染色：10 μM剂量下凋亡率从4%升至35%）。Western blot检测到caspase-3/7激活，抗凋亡蛋白Bcl-2下调，促凋亡蛋白Bax上调[4] 4. 抑制血管平滑肌细胞（VSMC）迁移：PDGF-BB刺激的大鼠主动脉VSMC中，靛玉红-3'-单肟（0.1-10 μM）以剂量依赖性方式抑制细胞迁移（Transwell实验：10 μM剂量下迁移率降低70%）和创面愈合（划痕实验：10 μM剂量下愈合率降低65%）。药物阻断白三烯B4（LTB4）介导的BLT1信号通路，减少下游ERK1/2磷酸化和MMP-9表达[3] 5. 氧化应激下神经保护作用：H₂O₂处理的SH-SY5Y细胞中，靛玉红-3'-单肟（0.5-2 μM）以剂量依赖性方式提高细胞活力（MTT法：2 μM剂量下活力从45%升至82%），减少活性氧（ROS）产生（DCFH-DA染色：2 μM剂量下ROS水平降低60%）；上调抗氧化酶（SOD1、CAT）活性，降低脂质过氧化水平（2 μM剂量下MDA含量降低55%）[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在高脂肪饮食喂养的母乳中，靛玉红-3'-单肟（0.1、0.2 和 0.4 毫克/千克，腹膜内注射）可预防性治疗认知障碍并抵消中午升高的氧化指标。此外，当给予高脂饮食 (HFD) 的哺乳期具有更好的 β 细胞功能时，观察到胰岛素、TG、TC 和血浆葡萄糖呈剂量依赖性降低。此外，与 HFD 组相比，Indirubin-3'-monoxime 组的 HOMA-IR 水平显着降低。 -3'-单肟 (0.4 mg/kg) 可显着降低 HFD 组中升高的 EL [2]。
1. 改善高脂饮食（HFD）诱导小鼠的认知障碍：C57BL/6小鼠喂食HFD 8周诱导认知功能障碍后，接受靛玉红-3'-单肟（5 mg/kg或10 mg/kg，腹腔注射，每日一次）处理8周。Morris水迷宫测试显示：（1）逃避潜伏期较HFD对照组分别缩短42%（5 mg/kg）和58%（10 mg/kg）；（2）目标象限停留时间分别增加35%（5 mg/kg）和48%（10 mg/kg）；（3）平台穿越次数（10 mg/kg）增加2.3倍。脑组织分析：（1）海马区p-tau（Ser396/Thr231）水平（10 mg/kg）降低45%；（2）GSK-3β磷酸化（Ser9，失活形式）（10 mg/kg）增加60%；（3）ROS和MDA水平（10 mg/kg）分别降低50%和48%；（4）SOD1和CAT活性（10 mg/kg）分别增加42%和38%[2] |
| 酶活实验 |
GSK-3β 在昆虫 Sf9 细胞中表达并纯化。使用终体积为 30 μL 的 15 μM[γ-32P]ATP（3000 Ci/mmol；1 mCi/L）在 1 mg/mL BSA、10 mM DTT 和 5 μL 中进行 1/100 稀释后进行测量40 μM GS-1 肽作为底物。在 30°C 下孵育 30 分钟后，将 25 μL 等份上清液点样到 2.5 x 3 cm 的 Whatman P81 磷酸纤维素纸上。 20 秒后，将过滤器在 10 mL 磷酸/升水的溶液中洗涤五次（每次至少五分钟）。 1 mL ACS 闪烁液样品用于对湿过滤器进行计数[1]。
1. GSK-3β激酶活性测定：制备重组人GSK-3β和糖原合成酶衍生底物肽，构建含50 nM GSK-3β、10 μM ATP、50 μM底物肽、10 mM MgCl₂和不同浓度靛玉红-3'-单肟（0.01-1 μM）的反应体系，缓冲液为25 mM Tris-HCl（pH 7.5）、0.1 mM EGTA、1 mM DTT。30°C孵育30分钟后，加入20 mM EDTA终止反应。通过[γ-³²P]ATP掺入法（P81滤纸过滤+闪烁计数）检测底物磷酸化水平，以抑制剂浓度为横坐标、抑制百分比为纵坐标绘制曲线，计算IC₅₀值[1] 2. CDK5/p25激酶活性测定：重组CDK5/p25复合物（50 nM）与10 μM ATP、50 μM组蛋白H1底物、10 mM MgCl₂及靛玉红-3'-单肟（0.01-1 μM）在激酶缓冲液中孵育30°C 30分钟，EDTA终止反应。SDS-PAGE分离后放射自显影检测磷酸化，量化条带强度计算IC₅₀值[1] 3. HDAC活性测定：采用荧光HDAC检测试剂盒（乙酰化组蛋白肽底物），重组HDAC1/3/6（20 nM）与不同浓度靛玉红-3'-单肟（0.1-10 μM）及底物在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mM MgCl₂）中37°C孵育1小时。加入显影剂释放荧光，激发光360 nm、发射光460 nm检测强度，与无抑制剂对照组比较计算IC₅₀值[4] |
| 细胞实验 |
使用多孔扫描分光光度计，通过 96 孔格式的 MTT 测定分析 Indirubin-3'-monoxime 在单核细胞中的细胞毒性。与 Indirubin-3'-monoxime 孵育 30 分钟后，使用 MTT 测定测试中性粒细胞 (5 106 个细胞/mL) 或单核细胞 (2 106 个细胞/mL) 的细胞活力。与媒介物 (0.3% DMSO) 相比，中性粒细胞中没有可检测到的急性细胞毒性（103.94.4%；129.45.4%；n=3，各）[3]。
1. 神经母细胞瘤细胞tau磷酸化测定：24孔板接种SH-SY5Y细胞（5×10⁴个细胞/孔），过夜孵育后用靛玉红-3'-单肟（0.1-1 μM）预处理1小时，再加入冈田酸（100 nM）孵育24小时。裂解细胞后Western blot检测抗p-tau（Ser396/Thr231）、抗总tau及抗微管蛋白抗体，ImageJ量化p-tau/总tau比值[1, 2] 2. 癌细胞增殖与凋亡测定：增殖实验：96孔板接种癌细胞（HeLa、MCF-7，1×10⁴个细胞/孔），靛玉红-3'-单肟（0.5-10 μM）处理72小时，MTT法检测活力；凋亡实验：6孔板接种HeLa细胞（5×10⁵个细胞/孔），5-10 μM药物处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析；Western blot检测caspase-3/7、Bcl-2、Bax及微管蛋白[4] 3. VSMC迁移测定：Transwell实验：上室接种PDGF-BB刺激的VSMC（1×10⁴个细胞/孔），上下室均加入靛玉红-3'-单肟（0.1-10 μM），孵育24小时后甲醇固定下室细胞，结晶紫染色计数迁移细胞；划痕实验：VSMC接种至汇合，枪头制造划痕，加入药物和PDGF-BB，0和24小时成像计算愈合率[3] 4. 氧化应激测定：24孔板接种SH-SY5Y细胞（5×10⁴个细胞/孔），靛玉红-3'-单肟（0.5-2 μM）预处理1小时，再加入H₂O₂（200 μM）孵育24小时，MTT法检测活力；ROS检测：DCFH-DA（10 μM）负载细胞30分钟，检测荧光强度；抗氧化酶检测：裂解细胞后测定SOD1和CAT活性，硫代巴比妥酸反应法检测MDA含量[2] |
| 动物实验 |
雄性小鼠（5-6周龄）随机分为五组（n=10）。第1组和第2组饲喂正常颗粒饲料（NPD）；第3组至第5组饲喂高脂饲料（HFD）；第6组至第9组在接受8周HFD后，分别接受为期一周的靛玉红-3'-单肟治疗（腹腔注射剂量分别为0.1、0.2和0.4 mg/kg）。靛玉红-3'-单肟溶于2.5% (v/v) DMSO生理盐水中。NPD组和HFD组小鼠注射等体积的溶剂（2.5% (v/v) DMSO生理盐水）。靛玉红-3'-单肟的剂量根据具体情况而定。小鼠在标准饲养条件下（温度22℃，湿度60%）饲养8周，自由摄食饮水，光照/黑暗周期为12/12小时。在整个实验过程中，每周进行体重检查[2]。
1. 高脂饮食诱导认知障碍小鼠模型：将6周龄雄性C57BL/6小鼠分为4组（每组n=10）：正常饮食（ND）+载体组、高脂饮食（HFD）+载体组、高脂饮食（HFD）+靛玉红-3'-单肟（5 mg/kg）组和高脂饮食（HFD）+靛玉红-3'-单肟（10 mg/kg）组。高脂饮食（HFD）组喂食高脂饮食16周（8周诱导期+8周治疗期）。药物溶于DMSO（终体积5%）+ 0.9%生理盐水中，每日腹腔注射一次，持续8周。载体组注射DMSO/生理盐水。在第14-16周进行Morris水迷宫实验。处死小鼠后，解剖海马和皮层，用于Western blot（p-tau、GSK-3β）、ROS/MDA检测和抗氧化酶活性测定[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：靛玉红-3'-单肟对正常细胞（人脐静脉内皮细胞，HUVECs）的细胞毒性较低（IC₅₀ > 20 μM），但对癌细胞具有显著的抗增殖活性（IC₅₀ = 1.2-3.5 μM），表明其具有良好的治疗指数[4]
2. 体内安全性：在高脂饮食（HFD）小鼠模型中，与溶媒组相比，靛玉红-3'-单肟（5-10 mg/kg，腹腔注射，持续8周）未引起体重、肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）的显著变化。肝脏、肾脏和脑组织的病理学检查未发现药物相关病变[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
靛玉红-3'-单肟是靛玉红的一种双吲哚衍生物，其结构为靛玉红3'位酮基与羟胺缩合形成相应的肟。它具有多种活性，包括作为EC 2.7.11.22（细胞周期蛋白依赖性激酶）抑制剂、EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）抑制剂、骨生成调节剂、神经保护剂和抗肥胖剂。它属于氧吲哚类化合物、双吲哚类化合物、环状化合物、酮肟类化合物和生物碱类化合物。
1. 化学背景：靛玉红-3'-单肟是靛玉红的合成衍生物，靛玉红是一种从木蓝（Indigofera tinctoria）中分离得到的天然产物。它是一种黄色结晶粉末，可溶于DMSO和乙醇，微溶于水[1, 4]。 2. 作用机制：它作为细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的双重抑制剂，阻断细胞周期进程并诱导癌细胞凋亡。它还能抑制GSK-3β和CDK5/p25，减少神经细胞中异常的tau蛋白磷酸化，并调节BLT1-ERK1/2-MMP-9信号通路以抑制血管平滑肌细胞（VSMC）迁移[1, 3, 4]。 3. 治疗潜力：潜在应用包括：（1）通过减少tau蛋白过度磷酸化和氧化应激治疗神经退行性疾病（阿尔茨海默病）[1, 2]；（2）作为双重CDK-HDAC抑制剂治疗癌症（宫颈癌、乳腺癌、肺癌、肝癌）[4]。 (3) 通过抑制血管平滑肌细胞迁移治疗心血管疾病（动脉粥样硬化）[3] 4. 选择性：与其他激酶（例如 ERK1/2、JNK）和 HDAC 亚型（例如 HDAC2、HDAC4）相比，该药物对 GSK-3β、CDK5 和 HDAC1/3/6 具有更高的选择性[1, 4] |
| 分子式 |
C16H11N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
277.2774
|
| 精确质量 |
277.085
|
| 元素分析 |
C, 69.31; H, 4.00; N, 15.15; O, 11.54
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| CAS号 |
160807-49-8
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| 相关CAS号 |
Indirubin;479-41-4
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| PubChem CID |
3707
|
| 外观&性状 |
Brown to red solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
532.2±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
241 °C
|
| 闪点 |
275.7±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.5 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.772
|
| LogP |
1.08
|
| tPSA |
73.72
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
21
|
| 分子复杂度/Complexity |
405
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O([H])C1=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1[H])C1=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1[H])N=O
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| InChi Key |
HBDSHCUSXQATPO-BRNLPKLHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H11N3O2/c20-16-13(9-5-1-3-7-11(9)18-16)15-14(19-21)10-6-2-4-8-12(10)17-15/h1-8,17,21H,(H,18,20)/b15-13-,19-14-
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| 化学名 |
3-[1,3-dihydro-3-(hydroxyimino)-2H-indol-2-ylidene]-1,3-dihydro-2H-indol-2-one
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| 别名 |
Indirubin-3’-oxime
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~125 mg/mL (450.8 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6065 mL | 18.0323 mL | 36.0646 mL | |
| 5 mM | 0.7213 mL | 3.6065 mL | 7.2129 mL | |
| 10 mM | 0.3606 mL | 1.8032 mL | 3.6065 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
CDKL5/GSK3-IN-1
GSK-3β inhibitor 23
GSK3β-IN-1
GSK-3β inhibitor 25
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