FGFR1 (IC50 = 0.9 nM); FGFR2 (IC50 = 1.4 nM); FGFR3 (IC50 = 1 nM); FGFR4 (IC50 = 60 nM)

体外活性：BGJ398 还可以抑制 VEGFR2，但效力较低。 BGJ398 抑制 VEGFR2 的 IC50 为 0.18 μM。 BGJ398 抑制其他激酶，包括 ABL、FYN、KIT、LCK、LYN 和 YES，IC50 分别为 2.3 μM、1.9 μM、0.75 μM、2.5 μM、0.3 μM 和 1.1 μM。在细胞水平上，BGJ398 抑制 FGFR1-、FGFR2-Q 和 FGFR3 依赖性 BaF3 细胞的增殖，IC50 分别为 2.9 μM、2.0 μM 和 2 μM。 BGJ398 干扰特定酪氨酸残基的自磷酸化，包括 FGFR-WT、FGFR2-WT、FGFR3-K650E、FGFR3-S249C 和 FGFR4-WT，IC50 分别为 4.6 nM、4.9 nM、5 nM、5 nM 和 168 nM。 BGJ398 抑制野生型 (WT) FGFR3 过表达的癌细胞（例如 RT112、RT4、SW780 和 JMSU1）的增殖，IC50 分别为 5 nM、30 nM、32 nM 和 15 nM。激酶测定：在放射性标记的 ATP 存在下，通过测量纯化的 GST 融合 FGFR3-K650E 激酶结构域对合成底物的磷酸化来评估酶促激酶活性。通过将 10 μL 3 倍浓缩的 BGJ398 溶液或对照与 10 μL 相应底物混合物（肽底物、ATP 和 [γ33P]ATP）混合来测量酶活性。通过添加 10 μL 3 倍浓缩的酶溶液（在测定缓冲液中）来启动反应。测定组分的最终浓度如下：10 ng GST-FGFR3-K650E、20 mM Tris-HCl、pH 7.5、3 mM MnCl2、3 mM MgCl2、1 mM DTT、250 μg/mL PEG 20000、2 μg /mL 聚 (EY) 4:1、1% DMSO 和 0.5 μM ATP (γ-[33P]-ATP 0.1 μCi)。根据过滤结合 (FB) 方法，在 96 孔板中在室温下进行 10 分钟，最终体积为 30 μL，包括 BGJ398。通过添加 20 μL 125 mM EDTA 来终止酶反应，并按如下方式对 33P 掺入多肽底物进行定量：将 30 μL 停止的反应混合物转移到之前用 125 mM EDTA 浸泡 5 分钟的 Immobilon-PVDF 膜上。甲醇，用水冲洗，用 0.5% H3PO4 浸泡 5 分钟，然后安装在断开真空源的真空歧管上。点样后，连接真空，并用 0.5% H3PO4 (200 μL) 冲洗每个孔。除去游离膜并在摇床上用 1% H3PO4 抛光四次，用乙醇抛光一次。将膜干燥并添加 10 μL/孔的闪烁液覆盖。最终将板密封并在微板闪烁计数器中计数。 IC50值通过BGJ398的抑制百分比的线性回归分析来计算。细胞测定：鼠 BaF3 细胞系在补充有 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中培养，通过使用通过突变或与二聚化伙伴融合激活的酪氨酸激酶进行稳定转导，使其增殖和存活不依赖于 IL-3。 4.5 g/L 葡萄糖、1.5 g/L 碳酸氢钠和青霉素/链球菌。细胞每周传代两次。使用荧光素酶生物发光测定评估 BGJ398 介导的 BaF3 细胞增殖和活力的抑制。使用 μFill 液体分配器将指数生长的 BaF3 或 BaF3 Tel-TK 细胞以 50 μL/孔接种到 384 孔板（4250 个细胞/孔）中。 BGJ398 在 DMSO 中连续稀释并排列在聚丙烯 384 孔板中。然后使用 pintool 转移装置将 50 nL BGJ398 转移至含有细胞的板中，并将板在 37 °C (5% CO2) 下孵育 48 小时。然后添加 25 μL Bright-Glo，并使用 Analyst-GT 定量发光。使用定制曲线拟合软件来生成细胞活力百分比与抑制剂浓度对数函数的逻辑拟合。 IC50 值确定为将细胞活力降低至 DMSO 对照的 50% 所需的 BGJ398 浓度。

在该原位异种移植膀胱癌模型中，连续 12 天口服 10 和 30 mg/kg 剂量的 BGJ398 后可诱导肿瘤生长抑制和停滞。有趣的是，接受 BGJ398 的动物要么没有体重减轻（10 毫克/公斤），要么体重增加 10%（30 毫克/公斤），这进一步表明了疗效。 RT112荷瘤雌性Rowett大鼠接受单次口服BGJ398单磷酸盐，剂量为4.25和8.51 mg/kg。 BGJ398 以剂量依赖性方式显着降低 pFRS2 和 pMAPK 的水平。 BGJ398 以剂量依赖性方式显着抑制 bFGF 刺激的血管生成。然而，BGJ398 不会损害 VEGF 诱导的血管形成。

纯化的 GST 融合 FGFR3-K650E 激酶结构域在放射性标记 ATP 存在的情况下磷酸化合成底物，以测量酶激酶活性。将 10 μL 相应底物混合物（肽底物、ATP 和 [γ³³P]ATP）与 10 μL 3 倍浓缩的 BGJ398 溶液或对照混合，测定酶活性。将测定缓冲液与 10 μL 浓缩酶溶液混合 3 次以启动反应。以下是检测成分的最终浓度：0.5 μM ATP (γ-[³³P]-ATP 0.1 μCi)、3 mM MnCl₂、3 mM MgCl2、1 mM DTT、250 μg/mL PEG 20000、2 μg/mL 聚 (EY) 4:1、1% DMSO 和 10 ng GST-FGFR3-K650E。该测定采用过滤结合 (FB) 方法在 96 孔板中室温进行 10 分钟，最终体积为 30 μL，其中包含 BGJ398。当添加 20 μL 125 mM EDTA 时，酶促反应停止，并按如下方式测量掺入多肽底物中的 ³³P 量：将 30 微升停止的反应混合物置于 Immobilon 上-PVDF膜在甲醇中浸泡5分钟，用水冲洗，然后在0.5% H₃PO₄中浸泡5分钟。然后将膜安装在真空歧管上，该真空歧管具有断开的真空源。点样后，连接真空，并用 200 μL 0.5% H₃PO₄ 冲洗每个孔。取出游离膜并在摇床上用 1% H₃PO₄ 漂洗四次，用乙醇漂洗一次。将膜脱水并覆盖一层闪烁液（10 μL/孔）。最后，使用微板闪烁计数器对板进行密封和计数。使用线性回归分析BGJ398抑制百分比以确定IC50值。

补充有 10% FBS、4.5 g/L 葡萄糖、1.5 g/L 碳酸氢钠和 Pen/Strep 的 RPMI-1640 培养基用于培养小鼠 BaF3 细胞系，该细胞系的增殖和存活已通过以下方法使其增殖和存活不依赖于 IL-3：通过突变或与二聚化伙伴融合激活的酪氨酸激酶进行稳定转导。细胞每周传代两次。荧光素酶生物发光测定用于评估 BGJ398 介导的 BaF3 细胞增殖和活力抑制。使用 μFill 液体分配器将呈指数生长的 BaF3 或 BaF3 Tel-TK 细胞以每孔 50 μL 的体积接种到 384 孔板（4250 个细胞/孔）中。在聚丙烯 384 孔板中，BGJ398 在 DMSO 中连续稀释。使用 pintool 转移装置添加 50 nL BGJ398 后，将板在 37 °C (5% CO2) 下孵育 48 小时。添加 25 μL Bright-Glo 后，使用 Analyst-GT 测量发光。抑制剂浓度的对数用于生成细胞活力百分比的逻辑拟合。这是使用定制曲线拟合软件完成的。当细胞活力降低至 DMSO 对照的 50% 时，BGJ398 的浓度称为 IC50 值。

Mice: Female HsdNpa: It is done with athymic Nude-nu mice. Over the course of 12 days, infigratinib (BGJ-398) is given orally at doses of 10 and 30 mg/kg/qd in a suspension formulation in PEG300/D5W (2:1, v/v). In order to compare the treatment group to the control group, tumor and body weight data are analyzed using ANOVA and post hoc Dunnett's test. An intragroup comparison is made using the post hoc Tukey test. With GraphPad Prism 4.02, statistical analysis is carried out. The T/C (%) value is computed as a measure of efficacy.
Rats: Female nudity We use 6-to 9-week-old Rowett rats. Using a formulation of infigratinib (BGJ-398), which is a solution in acetic acid-acetate buffer pH 4.6/PEG300 (1:1, v/v), the tumor-bearing rats (n = 8) receive daily gavage treatments of 5, 10, and 15 mg/kg/qd (free base equivalents) for a duration of 20 days. There is a 5 mL/kg application volume. Using calipers, tumor volumes are measured and calculated using the following formula: length×width×height×π/6. T/C (%) is a measure of antitumor activity that is calculated as (mean change in tumor volume of treated animals / mean change in tumor volume of control animals)×100. A regression's percentage is computed.

[1]. J Med Chem . 2011 Oct 27;54(20):7066-83.

C26H31CL2N7O3

560.48

559.19

C, 55.72; H, 5.57; Cl, 12.65; N, 17.49; O, 8.56

872511-34-7

Infigratinib phosphate;1310746-10-1

White to off-white solid powder

CCN1CCN(CC1)C2=CC=C(C=C2)NC3=CC(=NC=N3)N(C)C(=O)NC4=C(C(=CC(=C4Cl)OC)OC)Cl

QADPYRIHXKWUSV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H31Cl2N7O3/c1-5-34-10-12-35(13-11-34)18-8-6-17(7-9-18)31-21-15-22(30-16-29-21)33(2)26(36)32-25-23(27)19(37-3)14-20(38-4)24(25)28/h6-9,14-16H,5,10-13H2,1-4H3,(H,32,36)(H,29,30,31)

3-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-[6-[4-(4-ethylpiperazin-1-yl)anilino]pyrimidin-4-yl]-1-methylurea

NVP-BGJ398; Infigratinib; NVPBGJ398; BGJ398; BGJ-398; NVPBGJ 398; NVPBGJ-398; BG J398

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30 mg/kg

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。