| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PORCN (porcupine); WNT
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| 体外研究 (In Vitro) |
Wnt/β-catenin信号的异常激活在肝细胞癌（HCC）的发生和发展中起着关键作用，其中约一半的HCC在CTNNB1或AXIN1中获得突变。然而，目前尚不清楚这些突变是否如之前对结直肠癌所建议的那样，施加了足够的β-catenin信号传导，还是需要上游Wnt配体激活来维持最佳生长。通过使用九个HCC细胞系，我们发现siRNA介导的β-catenin敲除会损害所有这些细胞系的生长。通过用IWP-12豪猪抑制剂治疗或敲除WLS来阻断Wnt分泌，可以减少大多数系的生长。出乎意料的是，干扰Wnt分泌并没有明显影响大多数细胞系中β-catenin信号的水平，这表明其他机制是生长抑制作用的基础。然而，IWP-12治疗并没有诱导自噬或内质网（ER）应激，这可能是由于内质网中Wnt配体的积累所致。在各种测定中，用于比较的结直肠癌癌症细胞系也观察到了类似的结果。这些结果表明，大多数β-catenin降解复合物成分突变的结直肠癌和肝癌并不强烈依赖细胞外Wnt配体暴露来支持最佳生长。此外，我们的研究结果还表明，阻断Wnt分泌可能有助于通过目前未被重视的替代途径抑制肿瘤。
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| 体内研究 (In Vivo) |
尽管IWP-L6在小鼠血浆中的代谢稳定性适中，但它在斑马鱼中具有很高的活性。我们之前已经证明，tankyrase（Tnks）抑制剂IWR-1和Porcon抑制剂IWP-12（7）都能有效阻断成年和幼鱼尾鳍的再生，这是一个Wnt依赖性过程。3,8,16我们在本文中表明，IWP-L6（27）表现出更强大的活性（图6）。我们进一步表明，IWP-L6（27）和35，而不是30和32，在低微摩尔浓度下有效地抑制了后轴形成，这是一种Wnt/β-catenin依赖的发育过程（图7）。因此，在体内试验中，IWP-L6（27）和35的效力至少是IWP-12（7）的10倍，是IWR-1的2.5倍。16虽然小鼠Porcn和斑马鱼Porcn之间只有69%的序列同一性，但在小鼠成纤维细胞（L细胞）中测得的体外EC50值（图3）与在鱼类中观察到的体内活性相关，但不是线性的[1]。
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| 酶活实验 |
S9代谢测定。[1]
雄性ICR/CD-1小鼠S9组分用于此实验。将50μL（1mg）S9蛋白加入15mL玻璃螺旋盖管中。在冰上加入700μL含有目标化合物的50 mM Tris（pH 7.5）溶液。加入所有试剂后，化合物的最终浓度为2μM。加入250μL NADPH再生系统（1.7 mg/mL NADP、7.8 mg/mL葡萄糖-6-磷酸、6 U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，溶于2%w/v NaHCO3/10 mM MgCl2中），并将试管置于37°C的振荡水浴中。在加入相I辅因子后的不同时间点，通过加入1mL含有内标化合物、n-苄基苯甲酰胺和甲酸的甲醇来停止反应。样品在室温下孵育10分钟，然后在玻璃管中以975×g的速度旋转一次。在微量离心机中以16000×g的速度第二次离心上清液5分钟。通过LC-MS/MS分析上清液。使用AB SCIEX 3200 QTrap（一种组合式三重四极杆/离子阱仪器）为每种化合物开发了分析方法。用于定量的化合物转换如下：IWP-L6（27）:473.2至303.1；苯胺：171.2至127.0；n-苄基苯甲酰胺（内标）：212.1至91.1。使用岛津Prominence LC与安捷伦C18 XDB柱（5微米，50×4.6毫米）进行色谱。将IWP-L6和苯胺的峰面积归一化为n-苄基苯甲酰胺峰面积，然后将每个时间点存在的化合物的相对量归一化为时间0存在的量，并以百分比表示。 血浆代谢测定。[1] 使用酸化柠檬酸葡萄糖（ACD）抗凝剂收集的小鼠、大鼠和人血浆购自Bioreceigation（纽约州韦斯特伯里）。将IWP-L6（27）以2μM的终浓度添加到1mL的每种血浆中，将材料等分到eppendorf管中，然后在37°C的水浴中孵育指定的时间点。在每个时间点，取出等分试样，沉淀蛋白质，提取化合物，并如上所述进行分析。 |
| 细胞实验 |
MTT实验[2]
将总共10 mM的3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）加入到接种在96孔板中的细胞中，并在37°C和5%CO2中孵育3小时。移除培养基，向每个孔中加入100μl DMSO。在波长为490nm的微孔板吸光度读数器上读取每个孔的吸光度。对于siRNA介导的基因敲除，每个细胞系至少两次检测四个独立孔，而对于IWP-12处理，使用六个独立孔。计算每种情况的平均值和标准误差。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Porcupine蛋白属于膜结合O-酰基转移酶家族。它催化Wnt蛋白的棕榈酰化，这一过程是Wnt蛋白分泌和发挥活性所必需的。我们近期公开了一类小分子化合物（IWPs），这是首批报道的Porcn抑制剂。本文将介绍其结构-活性关系研究以及亚纳摩尔级抑制剂的鉴定。此外，本文还报道了IWPs对Wnt依赖性发育过程的影响，包括斑马鱼后轴形成和肾小管形成。[1]
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| 分子式 |
C18H18N4O2S3
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|---|---|
| 分子量 |
418.548
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| 精确质量 |
418.059
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| 元素分析 |
C, 51.65; H, 4.33; N, 13.39; O, 7.65; S, 22.98
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| CAS号 |
688353-45-9
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| PubChem CID |
3244448
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.783
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| LogP |
3.99
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| tPSA |
154
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
711
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
RBFDSBJDWZOTGR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H18N4O2S3/c1-9-4-5-11-13(6-9)27-17(19-11)21-14(23)8-25-18-20-12-7-10(2)26-15(12)16(24)22(18)3/h4-6,10H,7-8H2,1-3H3,(H,19,21,23)
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| 化学名 |
2-[(3,6-dimethyl-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)sulfanyl]-N-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide
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| 别名 |
IWP-12; IWP 12; 688353-45-9; IWP12; IWP-12; MLS000091043; SMR000025621; 2-[(3,6-dimethyl-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)sulfanyl]-N-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide; IWP 12; N-(6-Methyl-2-benzothiazolyl)-2-[(3,4,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-4-oxothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)thio]acetamide; IWP12
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~59.73 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.97 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3892 mL | 11.9460 mL | 23.8920 mL | |
| 5 mM | 0.4778 mL | 2.3892 mL | 4.7784 mL | |
| 10 mM | 0.2389 mL | 1.1946 mL | 2.3892 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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