| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PORCN (porcupine); WNT
Porcupine (PORCN), a membrane-bound O-acyltransferase (MBOAT) that catalyzes the palmitoylation of Wnt proteins. IWP-12 inhibits cell-autonomous Wnt signaling and blocks Wnt/β-catenin and Wnt/planar cell polarity (PCP) signaling pathways. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Wnt/β-catenin信号通路的异常激活在肝细胞癌（HCC）的发生和发展中起着关键作用，其中约一半的HCC存在CTNNB1或AXIN1基因突变。然而，这些突变是否足以维持足够的β-catenin信号通路活性，或者是否需要上游Wnt配体的激活才能维持最佳生长（如先前在结直肠癌中观察到的那样），目前尚不清楚。我们利用9种HCC细胞系，发现siRNA介导的β-catenin敲低会抑制所有这些细胞系的生长。通过IWP-12（一种刺猬蛋白抑制剂）处理或敲低WLS来阻断Wnt分泌，可以降低大多数细胞系的生长。出乎意料的是，干扰Wnt分泌并没有明显影响大多数细胞系中β-catenin信号的水平，这表明生长抑制作用可能由其他机制介导。然而，IWP-12 处理并未诱导自噬或内质网 (ER) 应激，这可能是由于 Wnt 配体在内质网内积累所致。在用于比较的各种实验中，结直肠癌细胞系也观察到了类似的结果。这些结果表明，大多数 β-catenin 降解复合物组分发生突变的结直肠癌和肝癌并不强烈依赖细胞外 Wnt 配体暴露来维持最佳生长。此外，我们的结果还表明，阻断 Wnt 分泌可能通过目前尚未认识到的其他途径帮助抑制肿瘤。IWP-12 以 15 nM 的 IC₅₀ 值抑制细胞自主的 Wnt 信号通路。它能阻止 Porcupine (Porcn) 对 Wnt 蛋白的棕榈酰化。该化合物能抑制幼年斑马鱼尾鳍切除后的再生。IWP-12 在多种细胞环境中均表现出对 Wnt 信号通路的强效抑制作用。
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| 体内研究 (In Vivo) |
尽管 IWP-L6 (27) 在小鼠血浆中的代谢稳定性不高，但它在斑马鱼中却表现出很高的活性。我们之前已证明，tankyrase (Tnks) 抑制剂 IWR-1 和 Porcn 抑制剂 IWP-12 (7) 均能有效阻断成年和幼年鱼类尾鳍的再生，而尾鳍再生是一个 Wnt 依赖性过程3,8,16。本文中，我们发现 IWP-L6 (27) 的活性更强（图 6）。此外，我们还发现，IWP-L6 (27) 和化合物 35（而非化合物 30 和 32）在低微摩尔浓度下即可有效抑制后轴的形成，后轴的形成是一个 Wnt/β-catenin 依赖性的发育过程（图 7）。因此，在本体内试验中，IWP-L6 (27) 和 35 的效力至少是 IWP-12 (7) 的 10 倍，是 IWR-1 的 2.5 倍。16 虽然小鼠 Porcn 和斑马鱼 Porcn 的序列同一性仅为 69%，但在小鼠成纤维细胞（L 细胞）中测得的体外 EC50 值（图 3）与在鱼类中观察到的体内活性相关，但并非呈线性关系。[1] IWP-12 可抑制幼年斑马鱼尾鳍切除后的再生，证实了其体内活性。该化合物适用于体内试验。IWP-12 已被用于研究干细胞分化和癌症生物学。其在哺乳动物模型中的详细体内疗效尚未得到广泛报道。
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| 酶活实验 |
S9代谢分析。[1]
使用雄性ICR/CD-1小鼠的S9组分。将50 μL（1 mg）S9蛋白加入15 mL玻璃螺旋盖试管中。在冰上加入700 μL含有目标化合物的50 mM Tris（pH 7.5）溶液。加入所有试剂后，化合物的最终浓度为2 μM。加入250 μL NADPH再生系统（1.7 mg/mL NADP、7.8 mg/mL葡萄糖-6-磷酸、6 U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，溶于2% (w/v) NaHCO3/10 mM MgCl2溶液中），并将试管置于37 °C摇床水浴中。在加入I相辅因子后的不同时间点，加入1 mL含有内标化合物N-苄基苯甲酰胺和甲酸的甲醇溶液终止反应。样品在室温下孵育10分钟，然后在玻璃管中以975×g离心一次。取上清液，在微型离心机中以16,000×g离心5分钟。取上清液进行LC-MS/MS分析。使用AB SCIEX 3200-QTrap（三重四极杆/离子阱质谱联用仪）为每种化合物建立了分析方法。用于定量分析的化合物离子对如下：IWP-L6 (27)：473.2至303.1；苯胺：171.2至127.0；N-苄基苯甲酰胺（内标）：212.1至91.1。色谱分析采用配备Agilent C18 XDB色谱柱（5微米，50×4.6毫米）的岛津Prominence液相色谱仪。 IWP-L6 和苯胺的峰面积均以正苄基苯甲酰胺的峰面积进行归一化，然后将每个时间点的化合物相对含量以 0 时刻的含量进行归一化，并以百分比表示。 血浆代谢测定。[1] 使用酸化柠檬酸葡萄糖 (ACD) 抗凝剂收集的小鼠、大鼠和人血浆购自 Bioreclamation 公司（纽约州韦斯特伯里）。将 IWP-L6 (27) 加入到 1 mL 各血浆中，使其最终浓度为 2 μM，然后将样品分装到 Eppendorf 管中，并在 37 °C 水浴中孵育指定时间。在每个时间点，取出一份等分试样，沉淀蛋白质，提取化合物，并按上述方法进行分析。 PORCN 酶活性测定：将刺猬酶与不同浓度的 IWP-12 和 Wnt 蛋白底物或棕榈酰化替代底物在含有适当辅因子的测定缓冲液中于 37°C 孵育 30-60 分钟。通过放射性标记棕榈酸酯的掺入或质谱法测定棕榈酰化反应。计算 IC₅₀ 值。 |
| 细胞实验 |
MTT 法[2]
将 10 mM 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物 (MTT) 加入到接种于 96 孔板中的细胞中，并在 37°C、5% CO2 条件下孵育 3 小时。移除培养基，并向每个孔中加入 100 μl DMSO。使用酶标仪在 490 nm 波长处读取每个孔的吸光度值。对于 siRNA 介导的基因敲低，每个细胞系至少重复两次，每次检测均使用四个独立的孔；而对于 IWP-12 处理，则使用六个独立的孔。计算每种条件下的平均值和标准误差。 Wnt/β-catenin信号通路报告基因检测：将稳定表达Wnt反应性荧光素酶报告基因（例如TOPFlash）的细胞用不同浓度（0.1-100 nM）的IWP-12处理24-48小时。使用荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性。根据剂量反应曲线计算Wnt信号通路抑制的IC₅₀值。 |
| 动物实验 |
斑马鱼尾鳍再生模型：对幼年斑马鱼进行尾鳍切除术。采用浸泡法给予不同浓度的IWP-12。术后数天内监测并量化尾鳍再生情况。与载体对照组相比，评估IWP-12对再生的抑制作用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
IWP-12 的分子量为 418.56 g/mol，分子式为 C₁₈H₁₈N₄O₂S₃。HPLC 纯度≥98%。该化合物可溶于 DMSO。其生物利用度和半衰期等全面的药代动力学参数仍有待进一步研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有文献中尚未发表详细的毒性数据。IWP-12 仅供研究使用。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全操作规程。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
刺猬蛋白（Porcupine protein，PORCN）属于膜结合O-酰基转移酶家族。它催化Wnt蛋白的棕榈酰化，这一过程对Wnt蛋白的分泌和活性至关重要。我们近期公开了一类小分子化合物（IWPs），它们是首批报道的Porcn抑制剂。本文将介绍它们的构效关系研究以及亚纳摩尔级抑制剂的鉴定。此外，本文还报道了IWPs对斑马鱼Wnt依赖性发育过程的影响，包括后轴形成和肾小管形成。[1] IWP-12是一种强效的Porcupine (PORCN)抑制剂，其IC₅₀值为15 nM，可抑制细胞自主的Wnt信号通路。它能阻止Wnt蛋白的棕榈酰化，并抑制Wnt/β-catenin和Wnt/平面细胞极性通路。 IWP-12 可抑制斑马鱼尾鳍再生，目前用于干细胞和癌症研究。尚未有临床试验或上市许可方面的报道。
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| 分子式 |
C18H18N4O2S3
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|---|---|
| 分子量 |
418.548
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| 精确质量 |
418.059
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| 元素分析 |
C, 51.65; H, 4.33; N, 13.39; O, 7.65; S, 22.98
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| CAS号 |
688353-45-9
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| PubChem CID |
3244448
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.783
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| LogP |
3.99
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| tPSA |
154
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
711
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1CC2=C(S1)C(=O)N(C(=N2)SCC(=O)NC3=NC4=C(S3)C=C(C=C4)C)C
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| InChi Key |
RBFDSBJDWZOTGR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H18N4O2S3/c1-9-4-5-11-13(6-9)27-17(19-11)21-14(23)8-25-18-20-12-7-10(2)26-15(12)16(24)22(18)3/h4-6,10H,7-8H2,1-3H3,(H,19,21,23)
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| 化学名 |
2-[(3,6-dimethyl-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)sulfanyl]-N-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide
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| 别名 |
IWP-12; IWP 12; 688353-45-9; IWP12; IWP-12; MLS000091043; SMR000025621; 2-[(3,6-dimethyl-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)sulfanyl]-N-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide; IWP 12; N-(6-Methyl-2-benzothiazolyl)-2-[(3,4,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-4-oxothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)thio]acetamide; IWP12
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~59.73 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.97 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3892 mL | 11.9460 mL | 23.8920 mL | |
| 5 mM | 0.4778 mL | 2.3892 mL | 4.7784 mL | |
| 10 mM | 0.2389 mL | 1.1946 mL | 2.3892 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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