Na+/Ca2+ exchanger (IC50 = 5.7±2.1 µM)
Inhibitor of reverse mode Na+/Ca2+ exchanger (NCXrev) in hippocampal neurons (IC50 = 5.7 ± 2.1 μM) [1]
Inhibitor of NMDA receptors in hippocampal neurons (IC50 = 13.4 ± 3.6 μM) [1]
Inhibitor of mitochondrial complex I in the respiratory chain (IC50 = 11.4 ± 2.4 μM for 2,4-DNP-stimulated respiration in neurons) [1]
Inhibitor of type 1 ryanodine receptor (RyR1) from mouse skeletal muscle (IC50 = 5.1 ± 0.9 μM for [3H]ryanodine binding) [2]
Inhibitor of type 2 ryanodine receptor (RyR2) from mouse cardiac muscle (IC50 = 13.4 ± 1.8 μM for [3H]ryanodine binding) [2]
Inhibitor of hERG potassium channels (IC50 = 88.6 ± 25.7 nM for hERG tail current) [3]
Inhibitor of native rabbit ventricular I_Kr (IC50 = 120.3 ± 27.5 nM) [3]
Inhibitor of reverse-mode NCX1 activity in prostate cancer cells [4]

甲磺酸 KB-R7943 可抑制 NMDA 诱导的胞质 Ca2+ 升高，并以 13.4±3.6 µM 的 IC50 值阻断 NMDAR 介导的离子电流，但它会加速谷氨酸处理神经元中的钙离子失调和线粒体去极化。KB-R7943 对线粒体的去极化作用与 Ca2+ 无关。KB-R7943 以 11.4±2.4 µM 的 IC50 值阻止 2,4-二硝基苯酚刺激培养神经元的呼吸作用。此外，KB-R7943 还能可逆地、剂量依赖性地阻断 NMDA 诱导的离子电流以及 NCXrev。 KB-R7943 证实了电生理实验[1]中观察到的 NMDA 受体抑制作用，其以剂量依赖的方式抑制 NMDA 诱导的细胞内钙离子浓度 ([Ca2+]c) 升高，IC50 值为 13.4±3.6 µM。在用 KB-R7943（10 μM，10 分钟）预处理的 wtRyR1-HEK 293 细胞中，咖啡因刺激引起的反应显著降低。此外，与 0.5 mM 和 0.75 mM 相比，1 mM KB-R7943 对咖啡因诱导的 Ca2+ 释放的抑制作用更为显著（分别为 60%、58% 和 37%，p<0.05）[2]。在将膜去极化至+20 mV后，KB-R7943对40 mV电流尾部的IC50值分别为~89 nM和~120 nM，表明其在膜去极化时能迅速抑制IhERG和内源性IKr通道。然而，KB-R7943对IhERG通道的抑制作用并无选择性，其抑制效果表现出时间和电压依赖性[3]。在培养的海马神经元中，15 μM KB-R7943加速了25 μM谷氨酸诱导的延迟性Ca2+失调（DCD），将DCD完成时间从817±27 s缩短至398±38 s。此外，它还能阻止去除谷氨酸后[Ca2+]的恢复，并抑制线粒体去极化。 [1]
KB-R7943 抑制短杆菌肽诱导的海马神经元胞质 Ca2+ 浓度升高，IC50 为 5.7±2.1 μM。该作用依赖于 Na+。[1]
在电生理膜片钳实验中，15 μM KB-R7943 抑制培养的海马神经元中由反向模式 NCX (NCXrev) 介导的全细胞外向离子电流。[1]
KB-R7943 以剂量依赖性和可逆性方式阻断海马神经元中 NMDA 诱发的离子电流。[1]
在培养的海马神经元中，KB-R7943 (15 μM) 增加静息状态下的 NAD(P)H 荧光，并抑制谷氨酸诱导的 NAD(P)H 氧化，其作用类似于复合物 I 抑制剂鱼藤酮。 [1] 在分离的脑线粒体中，KB-R7943 呈剂量依赖性地使以复合物 I 底物（苹果酸/谷氨酸）而非琥珀酸（复合物 II 底物）供给的线粒体去极化。当线粒体氧化复合物 I 底物时，KB-R7943 也抑制呼吸作用和 Ca2+ 摄取，但对氧化琥珀酸的线粒体则无此作用。[1] 在分离的成年小鼠趾短屈肌 (FDB) 骨骼肌纤维中，10 μM KB-R7943 可逆性地减弱电刺激诱发的 Ca2+ 瞬变，在 20 Hz 刺激序列期间，积分峰值降低了 87.9±4.8%。这种效应具有使用依赖性。[2] 在稳定表达野生型 RyR1 的 HEK 293 细胞中，10 μM KB-R7943 显著减弱了咖啡因诱导的 Ca2+ 释放。 [2]
在单通道记录中，向胞质侧添加10 μM KB-R7943，在激活Ca2+条件下，可使重组RyR1通道的开放概率(Po)降低11倍以上（抑制率82±0.1%），RyR2通道的开放概率(Po)降低10倍以上（降低率92±0.04%）。[2]
KB-R7943抑制HEK 293细胞中的hERG电流(IhERG)，IC50值为88.6±25.7 nM。这种抑制作用具有浓度依赖性、时间依赖性和电压依赖性，并且部分可逆。它减缓了IhERG的激活和失活过程。 [3]
KB-R7943 对 IhERG 的抑制作用在 hERG 通道孔的 Y652 (IC50 = 1.13±0.14 μM) 和 F656 (IC50 = 11.09±0.23 μM) 位点发生丙氨酸突变后减弱。S624A 突变的影响较小 (IC50 = 216.7±31 nM)。[3]
KB-R7943 对兔心室肌细胞中天然 I_Kr 的抑制作用 IC50 为 120.3±27.5 nM。[3]
在前列腺癌 PC3 和 LNCaP 细胞中，浓度 ≥10 μM 的 KB-R7943 呈剂量依赖性地降低细胞活力。 30 μM KB-R7943 处理可增加 G1 期细胞周期阻滞，抑制细胞迁移（在伤口愈合和 Transwell 实验中），并诱导细胞凋亡。[4] 在 PC3 和 LNCaP 细胞中，KB-R7943 以剂量依赖性（起始浓度为 30 μM）和时间依赖性（起始浓度为 12 小时）的方式增加 LC3-II 水平，并增加 eGFP-LC3 斑点和自噬体的数量，表明自噬体积累。[4] KB-R7943 (30 μM) 可阻断 PC3 细胞中的自噬通量，因为与氯喹联合处理并未进一步增加 LC3-II 水平，而 P62 水平的变化呈剂量依赖性。 [4]
KB-R7943 (30 μM) 可抑制 PC3 细胞中的 PI3K/AKT/mTOR 通路（降低 p-AKT 和 p-mTOR 水平）并激活 JNK 通路（增加 p-JNK 水平）。JNK 抑制剂 SP600125 可降低 KB-R7943 诱导的 LC3-II 水平。[4]
与单独使用 KB-R7943 相比，KB-R7943 (30 μM) 与多西他赛 (5 nM) 或自噬抑制剂（氯喹、渥曼青霉素、3-MA）联合治疗可降低前列腺癌细胞的活力并增加其凋亡。[4]

在小鼠异种移植模型中，每日腹腔注射 KB-R7943（10 mg/kg）可显著抑制 PC3 肿瘤异种移植瘤的生长。肿瘤组织的免疫组化结果显示 Ki-67 水平降低，而 LC3 和 cleaved caspase-3 水平升高。[4]

在恒温密闭腔室中，于37°C下持续搅拌条件下，使用克拉克型氧电极测量线粒体呼吸速率。标准培养基包含KCl、HEPES、MgCl₂、KH₂PO₄和EGTA，并分别添加丙酮酸和苹果酸或琥珀酸和谷氨酸。在37°C下持续搅拌条件下，使用微型Ca²⁺选择性电极在小型腔室中测量线粒体Ca²⁺摄取，培养基中添加BSA、ADP和寡霉素。[1] 通过将富含RyR1或RyR2的微粒体膜囊泡与[³H]雷诺定在含有HEPES、KCl、NaCl和游离Ca²⁺的溶液中孵育来进行[³H]雷诺定结合实验。通过玻璃纤维滤膜过滤终止结合反应，并通过添加过量的未标记雷诺定测定非特异性结合。[2]
对于单通道记录，将RyR1或RyR2通道重组到平面脂双层中。通过向顺式腔室（Cs+浓度较高）引入肌浆网囊泡来诱导通道整合。使用膜片钳放大器在施加于反式腔室的保持电位下测量单通道活性。根据记录计算通道开放概率、平均开放时间和平均关闭停留时间。[2]
在室温下进行hERG电流（IhERG）的全细胞膜片钳记录。使用毛细管玻璃制作火焰抛光电极。对于IhERG测量，细胞内液包含CsF、NaCl、EGTA和HEPES；外液不含Mg2+。对于NCX介导的电流，电极溶液包含KCl、天冬氨酸钾、四乙基氯化铵、HEPES、K-EGTA、MgCl₂和Na-ATP；外液包含NaCl、CsCl、KCl、MgCl₂、CaCl₂、葡萄糖、Na-HEPES、蔗糖、硝苯地平、乌本苷和TTX。采用灌注快速步进系统将药物局部递送至分离的神经元。[1] 使用Flexidock软件对KB-R7943与开放状态hERG孔同源模型进行对接模拟。结合口袋包含氨基酸残基T623、S624、V625、G648、Y652、F656和S660。对接过程中允许这些残基侧链键旋转。[3]

在添加了 2 mM 谷氨酰胺、100 μg/mL 链霉素、100 U/mL 青霉素、1 mM 丙酮酸钠和 10% 胎牛血清的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养，可维持稳定表达野生型 RyR1 的 HEK 293 细胞（wtRyR1-HEK 293）的存活。将 wtRyR1-HEK 293 细胞在 37°C 下用 5 μM Fluo-4 乙酰甲酯孵育 30 分钟，以在成像缓冲液（包含 140 mM NaCl、5 mM KCl、2 mM MgCl₂、2 mM CaCl₂、10 mM HEPES 和 10 mM 葡萄糖，pH 7.4，并添加 0.05% 牛血清白蛋白）中测量 Ca²⁺ 瞬变。对细胞进行三次成像缓冲液洗涤，然后在室温下静置20分钟。使用配备有40倍物镜的电荷耦合器件（CCD）相机的IX-71显微镜，对经成像缓冲液洗涤三次的染料标记细胞进行成像。使用EasyRatioPro软件记录并跟踪图像序列。使用AutoMate Scientific软件将溶解于成像缓冲液中的咖啡因聚焦于细胞表面，作用15秒。在KB-R7943溶解于成像缓冲液并与wtRyR1-HEK 293细胞孵育10分钟后，施加咖啡因[2]。

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从出生后第1天的幼鼠中制备海马神经元原代培养物。对于荧光成像，将神经元与Fura-2FF-AM和罗丹明123共标记，然后用标准浴液冲洗。使用配备EM-CCD相机的倒置显微镜进行荧光成像。使用 360±20 nm 的激发光追踪 NAD(P)H 自发荧光，并在 460±25 nm 处记录。[1]
对于细胞呼吸测定，将培养的海马神经元生长于测定板中。使用 Seahorse XF24 分析仪测量耗氧率 (OCR)。测量前，将培养基替换为添加了葡萄糖和丙酮酸的标准浴液。根据实验需要，将寡霉素、2,4-二硝基苯酚 (DNP) 以及鱼藤酮和抗霉素 A 的组合应用于神经元。[1]
对于 Ca2+ 瞬变的光度分析，将分离的 FDB 纤维用 Fluo-4 乙酰氧基甲酯在正常林格氏液中加载。施加电场刺激，并使用数字光度计测量单个纤维的荧光发射。 [2]
对于 Ca2+ 成像，稳定表达野生型 RyR1 的 HEK 293 细胞用 Fluo-4 乙酰甲酯进行标记。使用 CCD 相机对细胞进行成像。局部施加咖啡因，并在施加咖啡因前 10 分钟孵育 KB-R7943。[2]
使用稳定表达野生型或突变型 hERG 的 HEK 293 细胞进行 IhERG 测量。细胞进行传代和铺板。拉制膜片钳电极并进行热抛光。补偿串联电阻。测量在 35-37°C 下进行。动作电位电压钳实验采用心室动作电位波形。[3]
使用 CCK-8 法测量前列腺癌细胞活力。将细胞接种于 96 孔板中，用化合物处理 24 小时，然后加入 CCK-8 溶液。测量 450 nm 处的吸光度。 [4]
采用碘化丙啶 (PI) 染色，通过流式细胞术分析细胞周期分布。PC3 细胞经处理、固定后，用 PI 染色，然后进行分析。[4]
采用 Annexin V-FITC 试剂盒，通过流式细胞术检测细胞凋亡。PC3 细胞经处理后，用 Annexin V-FITC 和 PI 染色，然后进行分析。[4]
进行蛋白质印迹分析时，从细胞裂解液中提取总蛋白，经 SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜上，并与一抗（例如 LC3A/B、p-mTOR、mTOR、P62、CyclinD1、p-JNK、JNK 等）于 4°C 孵育过夜，随后与二抗孵育。使用 ECL 法显色。[4]
单层划痕愈合实验：用移液器吸头在 PC3 细胞上划痕形成伤口，并用 KB-R7943 处理。分别在0、24和48小时拍摄细胞迁移照片。[4]
Matrigel侵袭实验：将PC3细胞接种于Transwell小室上室，上室加入无血清培养基或KB-R7943处理。下室加入含血清培养基。孵育后，对侵袭细胞进行固定、染色和计数。[4]
透射电镜观察：将PC3细胞用KB-R7943处理，然后用戊二醛固定，四氧化锇处理，脱水，包埋，并在透射电镜下观察。[4]
免疫组织化学染色：对石蜡包埋的组织切片进行染色。切片用一抗（例如，抗LC3A/B、抗caspase-3、抗NCX1、抗Ki67）和二抗进行染色，采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶法。[4]

将PC3细胞（1×10^6）皮下接种到4-5周龄雄性裸鼠背部。肿瘤接种14天后，将小鼠随机分为两组（每组7只），每天腹腔注射（IP）缓冲液（对照组）或KB-R7943（10 mg/kg，溶于PBS）。每周测量一次肿瘤大小和体重。注射30天后，处死动物，称量肿瘤重量，并进行Western blotting或石蜡包埋处理。[4]

[1]. KB-R7943, an inhibitor of the reverse Na+ /Ca2+ exchanger, blocks N-methyl-D-aspartate receptor and inhibits mitochondrial complex I. Br J Pharmacol. 2011 Jan;162(1):255-70.

[2]. The Na+/Ca2+ exchange inhibitor 2-(2-(4-(4-nitrobenzyloxy)phenyl)ethyl)isothiourea methanesulfonate(KB-R7943) also blocks ryanodine receptors type 1 (RyR1) and type 2 (RyR2) channels. Mol Pharmacol. 2009 Sep;76(3):560-8.

[3]. High potency inhibition of hERG potassium channels by the sodium-calcium exchange inhibitor KB-R7943. Br J Pharmacol. 2012 Apr;165(7):2260-73.

[4]. The reverse-mode NCX1 activity inhibitor KB-R7943 promotes prostate cancer cell death by activating the JNK pathway and blocking autophagic flux. Oncotarget. 2016;7(27):42059-70.

KB-R7943（2-[2-[4-(4-硝基苄氧基)苯基]乙基]异硫脲甲磺酸盐）于1996年被引入，是一种选择性NCX1（反向作用型）抑制剂。它至今仍是应用最广泛的NCXrev抑制剂。[1]
除NCX外，KB-R7943还具有多种脱靶效应，包括抑制L型电压门控Ca2+通道、胞内钙库操纵性Ca2+内流、TRP通道、线粒体Ca2+单向转运蛋白和尼古丁乙酰胆碱受体。[1, 2]
该化合物对谷氨酸兴奋性毒性的神经保护作用可能是通过抑制复合物I引起的轻微线粒体去极化实现的，从而限制线粒体对Ca2+的摄取，防止Ca2+诱导的损伤。 [1] KB-R7943 是一种活性依赖性 RyR1 和 RyR2 通道阻滞剂，在增强通道活性的条件下（例如，胞质 Ca2+ 浓度升高或刺激频率提高），其通道开放概率显著降低。[2] 由于 KB-R7943 具有强效的 hERG/I_Kr 通道抑制作用，因此在解读心脏标本数据时，需要考虑其阻断这些通道的倾向。结构相关的 NCX 抑制剂 SN-6 作为 hERG 通道抑制剂的效力比 KB-R7943 低约 100 倍。[3] KB-R7943 可能是一种潜在的前列腺癌治疗方法，因为它可以通过激活 JNK 信号通路并阻断自噬流来促进细胞死亡。[4]

C17H21N3O6S2

427.49

427.087

C, 47.76; H, 4.95; N, 9.83; O, 22.46; S, 15.00

182004-65-5

182004-64-4;182004-65-5 (mesylate);

9823846

White to yellow solid powder

534.6ºC at 760mmHg

277.1ºC

1.67E-11mmHg at 25°C

5.251

192.97

3

8

7

28

479

0

S(/C(=N/[H])/N([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[N+](=O)[O-].S(C([H])([H])[H])(=O)(=O)O[H]

WGIKEBHIKKWJLG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H17N3O3S.CH4O3S/c17-16(18)23-10-9-12-3-7-15(8-4-12)22-11-13-1-5-14(6-2-13)19(20)21;1-5(2,3)4/h1-8H,9-11H2,(H3,17,18);1H3,(H,2,3,4)

methanesulfonic acid;2-[4-[(4-nitrophenyl)methoxy]phenyl]ethyl carbamimidothioate

KB-R7943 mesylate; KB-R7943; KB-R 7943; KB R7943

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 86~100 mg/mL (201.2~233.9 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。