| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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描述：KU0060648 HCl 是一种新型、高效的 DNA 依赖性蛋白激酶 (DNA-PK) 和 PI3Kα/β/δ（磷脂酰肌醇 3-激酶）双重抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。它对 DNA-PK 和 PI3Kα/β/δ 的 IC50 值分别为 8.6 nM 和 4 nM、0.5 nM、0.1 nM。与其他 PIKK 和 60 种其他激酶相比，它对 DNA-PK 的选择性高 20-1000 倍。
| 靶点 |
DNA-PK (IC50: 0.019 μM in MCF7 cells; IC50: 0.17 μM in SW620 cells)
PI-3K (IC50: 0.039 μM in MCF7 cells; IC50: >10 μM in SW620 cells, with only 42% inhibition at 10 μM) PI-3K isoforms: greatest potency against PI-3Kα and least potency against PI-3Kγ [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：KU-0060648 对多种人类癌细胞系表现出不同的生长抑制作用，但细胞毒性并不显著。在基于细胞的实验中，KU-0060648 对 MCF7 细胞的 DNA-PK 和 PI-3K 抑制作用强于 SW620 细胞。1 mM KU-0060648 处理 5 天后，MCF7 细胞增殖抑制率超过 95%，而 SW620 细胞增殖抑制率仅为 55%。在克隆形成存活实验中，KU-0060648 增强了依托泊苷和阿霉素在 DNA-PKcs 功能正常的细胞中的细胞毒性，但在 DNA-PKcs 缺陷的细胞中则没有这种作用，这证实了拓扑异构酶 II 抑制剂对依托泊苷和阿霉素的细胞毒性增强是由于 DNA-PK 抑制所致。
KU-0060648 在 MCF7 细胞中抑制细胞 DNA-PK 自磷酸化的 IC50 为 0.019 μM，在 SW620 细胞中为 0.17 μM。 它抑制 PI-3K 介导的 AKT 磷酸化，在 MCF7 细胞中 IC50 为 0.039 μM，在 SW620 细胞中 IC50 >10 μM（10 μM 时仅抑制 42%）。 在 5 天的连续暴露实验中，1 μM KU-0060648 对 MCF7 细胞的增殖抑制率 >95%，对 SW620 细胞的增殖抑制率 55%，对所有测试的细胞系（LoVo、T47D、MDA-MB-231）的增殖抑制率 >50%。 GI50 值：SW620 0.95 μM，LoVo 0.21 μM，MCF7 0.27 μM，T47D 0.41 μM，MDA-MB-231 1 μM。 经 1 μM KU-0060648 处理 16 小时后，除 MDA-MB-231 细胞（41%）外，所有细胞系的存活率约为 80%。 在克隆形成实验中，1 μM KU-0060648 可使依托泊苷的细胞毒性增强 100 倍以上。 SW620 在 MCF7 中提高了 9 倍，在 LoVo 中提高了 100 倍以上？ （表1：SW620细胞对依托泊苷的增强倍数为105±16；MCF7细胞为8.9±4.9；LoVo细胞为6.6±2.6；T47D细胞为4.1±0.6；MDA-MB-231细胞为3.6±1.2）。 阿霉素细胞毒性增强：MCF7细胞增强超过100倍，SW620细胞增强12倍，LoVo细胞增强73倍，T47D细胞增强58倍，MDA-MB-231细胞增强3.8倍。 在DNA-PKcs缺陷型V3细胞与DNA-PKcs功能正常的V3-YAC细胞中，化疗增敏作用主要依赖于DNA-PK：KU-0060648在V3-YAC细胞中使依托泊苷的细胞毒性增强超过13倍，但在V3细胞中仅增强2.5倍。 在M059J细胞中与 M059-Fus-1（功能正常）相比，KU-0060648 使 M059-Fus-1 中阿霉素的细胞毒性增强高达 32 倍，但在 M059J 中仅增强 1.4 倍。 KU-0060648 单独使用可使 V3/V3-YAC 细胞的存活率降低 <15%，使 M059J/M059-Fus-1 细胞的存活率降低 <5%。 M059J 和 M059-Fus-1 的 PI-3K 活性（AKT 磷酸化）相当，且均能被 KU-0060648 和 ZSTK474 抑制 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带 SW620 和 MCF7 异种移植瘤的小鼠中，KU-0060648 的浓度足以在体外抑制肿瘤生长并增强化疗敏感性，且在肿瘤内以无毒剂量维持至少 4 小时。 KU-0060648 单独使用可延缓 MCF7 异种移植瘤的生长，并使依托泊苷诱导的 MCF7 和 SW620 异种移植瘤的生长延迟时间延长至 4.5 倍，且未导致依托泊苷毒性达到不可接受的水平。
在携带 MCF7 异种移植瘤的小鼠中，KU-0060648 单独使用（10 mg/kg，腹腔注射，每日两次，持续 14 天）可使肿瘤生长延迟时间中位数为 30 天（达到 RTV4 的时间 = 40 天，平均 43.3±3.6 天，P=0.0467）。 依托泊苷磷酸酯单独使用（11.35 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续 5 天）可使肿瘤生长延迟时间中位数为 38 天（达到 RTV4 的时间 = 48 天，平均 31.7±8.6 天，P=0.0001）。 联合用药KU-0060648（每日一次？实际上是每日两次？图 4A：KU-0060648 每日两次，共 14 天？但文本中提到 MCF7 联合用药“每日一次，持续 14 天”？请澄清：在 MCF7 联合用药中，KU-0060648 是每日一次吗？文本：“对于联合用药，KU-0060648 腹腔注射，每日一次或两次，持续 5 天（SW620）或每日一次，持续 14 天（MCF7）”。因此，MCF7 联合用药是每日一次。然而，图 4A 的图例中提到 KU-0060648 单独使用每日两次，共 14 天，但联合用药呢？需要明确说明。文本摘录：“联合治疗导致中位生长延迟 55 天（达到 RTV4 的时间=65 天，平均 52±6.8 天，P=0.006）”。毒性：单药治疗最大体重减轻 3%，联合用药组为7%。 在SW620异种移植模型中，KU-0060648单药（10 mg/kg，腹腔注射，每日两次？实际上是每日一次，连续5天？文本：“单药KU-0060648，10 mg/kg，腹腔注射，每日两次，连续5天”，但联合用药组也“每日一次，连续5天”？图4B显示了每日一次和每日两次的给药方案。文本：“当KU-0060648每日两次给药时，肿瘤生长延迟了2天”。然而，由于肿瘤快速生长，没有统计学意义上的显著延迟。 离体药效学试验：在SW620肿瘤中，KU-0060648（2.5或25 mg/kg，静脉注射）导致DNA-PK活性（p53 Ser15磷酸化）呈剂量依赖性降低。在25 mg/kg剂量下，接近100% DNA-PK活性抑制至少4小时，肿瘤浓度足以产生生物学效应[1] |
| 酶活实验 |
提供的论文中未描述（没有无细胞酶测定的详细信息）。[1]
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| 细胞实验 |
但其中也描述了一些基于细胞的检测方法。“细胞检测”部分应包含基于细胞实验的详细步骤。以下摘自“材料与方法”部分。
细胞培养：所有人类细胞（LoVo、SW620、T47D、MCF7、MDA-MB-231、V3、V3-YAC、M059J、M059-Fus-1）均培养于含10% FBS、青霉素（50 U/ml）、链霉素（50 μg/ml）的RPMI 1640或DMEM培养基中，置于37°C、5% CO2条件下培养。 细胞对DNA-PK和PI-3K活性的测定：细胞暴露于KU-0060648 1小时后，用X射线（10 Gy）照射以诱导DNA-PK自磷酸化；30分钟后使用Phosphosafe试剂制备细胞裂解液。采用抗pSer2056 DNA-PKcs和总DNA-PKcs进行Western blot分析。PI-3K活性检测：细胞暴露于KU-0060648 1小时后，用IGF-1（50 ng/ml）处理30分钟；采用抗pSer473 AKT和总AKT进行Western blot分析。进行密度分析；IC50值根据S型剂量反应曲线计算。 细胞毒性和生长抑制：克隆形成实验——细胞暴露于依托泊苷或阿霉素（含/不含KU-0060648 (1 μM)）16小时后，接种于无药培养基中，10-14天后对克隆进行染色并计数。生长抑制（连续暴露5天）通过SRB法测定； GI50 计算。 Western blot 详情：Tris-Acetate 3-8% 梯度凝胶，转移至硝酸纤维素膜，用一抗（DNA-PKcs、pSer2056 DNA-PKcs、AKT、pSer473 AKT、肌动蛋白）进行探针检测，HRP 标记的二抗，ECL 检测，LAS-3000 成像仪 [1] |
| 动物实验 |
携带 SW620 和 MCF7 异种移植瘤的小鼠
动物实验方案描述： 血浆药代动力学：雌性 Balb C 小鼠接受 KU-0060648 10 mg/kg 静脉注射、口服或腹腔注射。制剂：等摩尔磷酸盐溶液，最终 pH 值为 5。每隔 360 分钟处死小鼠；采用 LC-MS/MS 法测定血浆浓度。 组织分布：携带 MCF7 或 SW620 异种移植瘤（~650 mm³）的雌性无胸腺 CD1-nu/nu 小鼠接受 KU-0060648 12.5 mg/kg 静脉注射。分别在 60 分钟或 240 分钟处死；切除肿瘤，在 PBS 中匀浆（1:3 w/v）；采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定血浆和肿瘤中的药物浓度。 离体药效学试验：将SW620荷瘤小鼠静脉注射KU-0060648 2.5或25 mg/kg，或注射赋形剂。1或4小时后，切除肿瘤并匀浆；采用p53肽底物（Ser15磷酸化）通过ELISA测定DNA-PK活性。 抗肿瘤疗效：对携带SW620或MCF7异种移植瘤（可触及，约5×5 mm）的小鼠进行治疗。SW620荷瘤小鼠：KU-0060648 10 mg/kg，腹腔注射，每日两次，连续5天（两次给药间隔8小时），或每日一次，连续5天；依托泊苷磷酸酯11.35 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续5天（相当于10 mg/kg游离依托泊苷）。联合用药：KU-0060648在依托泊苷给药前立即给药。MCF7细胞系：KU-0060648 10 mg/kg，腹腔注射，每日两次，持续14天（单药治疗）或每日一次，持续14天（联合用药）；依托泊苷给药方案相同。肿瘤体积用游标卡尺测量，计算公式为a²×b/2；采用相对肿瘤体积（RTV）[1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在Balb C小鼠中，10 mg/kg剂量的KU-0060648的血浆药代动力学参数如下：
静脉注射：Cmax 1.9 μg/ml，Tmax 5 min，AUCinf 242 μg/mlmin，T1/2 102 min，CL 41 ml/kg/min。 口服：Cmax 0.9 μg/ml，Tmax 120 min，AUCinf 287 μg/mlmin，T1/2 142 min，CL 35 ml/kg/min，生物利用度 119%。 腹腔注射：Cmax 0.9 μg/ml，Tmax 30 min，AUCinf 189 μg/mlmin，T1/2 106 min，CL 54 ml/kg/min，生物利用度 78%。 荷瘤小鼠的组织分布12.5 mg/kg 静脉注射： 在 MCF7 异种移植瘤中：60 分钟时 – 血浆浓度为 1.0±0.6 μM，肿瘤浓度为 7.0±3.8 μM；120 分钟时 – 血浆浓度为 0.8±0.5 μM，肿瘤浓度为 4.7±1.1 μM。 在 SW620 异种移植瘤中：60 分钟时 – 血浆浓度为 2.1±0.5 μM，肿瘤浓度为 4.9±0.3 μM；120 分钟时 – 血浆浓度为 0.7±0.2 μM，肿瘤浓度为 2.9±0.4 μM。 肿瘤内浓度 >1 μM（足以进行体外化疗增敏）至少维持 4 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
疗效研究中观察到的毒性：
在MCF7异种移植模型中，单独使用KU-0060648或单独使用依托泊苷均未引起明显的毒性（最大体重下降3%）。联合用药未引起不可接受的毒性（最大体重下降7%）。 在SW620异种移植模型中，单独使用KU-0060648或依托泊苷均未引起显著毒性（无体重下降）。联合用药导致最大体重下降11%（尚可接受）。[1] |
| 参考文献 |
Mol Cancer Ther.2012 Aug;11(8):1789-98.
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| 其他信息 |
KU-0060648是一种DNA-PK和PI-3K双重抑制剂，由LY294002药效团开发而来，其溶解度提高了500倍以上，对DNA-PK的抑制效力更强，并且对其他PIKK家族成员（ATM、ATR、mTOR）具有选择性。
它是一种ATP竞争性抑制剂。 该化合物表现出细胞系依赖性的PI-3K抑制作用； SW620 细胞中 PI-3K 抑制的缺乏可能是由于亚型表达差异所致（KU-0060648 对 PI-3Kα 的抑制效力最强，对 PI-3Kγ 的抑制效力最弱）。 MCF7 和 T47D 细胞（携带 PIK3CA 突变）对 KU-0060648 单药生长抑制的敏感性高于 MDA-MB-231 细胞（无突变）。 体内实验表明，KU-0060648 单药对 MCF7 异种移植瘤（PIK3CA 突变型）具有抗肿瘤活性，但对 SW620 异种移植瘤无效。 KU-0060648 的化疗增敏作用主要归因于 DNA-PK 抑制，这已通过同源配对的 DNA-PKcs 功能正常和缺陷细胞得到证实 [1]。 |
| 相关CAS号 |
881375-00-4
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|---|---|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 别名 |
KU-0060648 HCl
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~10 mM
Water: N/A Ethanol: N/A |
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计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
