DHODH (dihydroorotate dehydrogenase)
The immunosuppressive metabolite of leflunomide (A771726) targets human dihydroorotate dehydrogenase (DHODH) with an IC50 value of approximately 0.2 μM [1]
; Leflunomide targets protein tyrosine kinases in human T cells (no IC50 value reported in the literature) [2]
; Leflunomide exerts its effects primarily by targeting human DHODH (consistent with the IC50 of ~0.2 μM for its metabolite A771726) [3]

已证明来氟米特（一种前药）可抑制 T 细胞和单核细胞的生长。在体外细胞和酶学研究中，来氟米特的 IC50 值范围为 30 mM 至 100 mM，表明其抑制多种蛋白酪氨酸激酶的能力[1]。来氟米特能够防止由白细胞介素 2 (IL-2) 和抗 CD3 驱动的 T 细胞增殖。在体外酪氨酸激酶测试中，来氟米特能够阻断 p59fyn 和 p56lck 的活性。此外，来氟米特可防止抗 CD3 抗体激活的 Jurkat 细胞中的 Ca2+ 动员，但不会阻止离子霉素激活的细胞中的 Ca2+ 动员。来氟米特还可以阻止人类 T 细胞上 IL-2 的合成和 IL-2 受体的发育，这是抗 CD3 单克隆抗体激活的最终结果。来氟米特还可以防止 IL-2 激活的 CTLL-4 细胞磷酸化酪氨酸 [2]。免疫调节药物来氟米特可能通过阻止线粒体酶二氢乳清酸脱氢酶 (DHODH) 发挥作用而发挥作用。 DHODH 对于嘧啶核糖核苷酸尿苷单磷酸 (rUMP) 的从头生产至关重要。来氟米特通过涉及 p53 和 rUMP 产生不足的机制破坏细胞周期，从而抑制自身免疫细胞和活化淋巴细胞的生长[3]。

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1. 将纯化的人DHODH与不同浓度的来氟米特活性代谢产物A771726共同孵育，结果显示A771726对DHODH活性具有浓度依赖性抑制作用，其抑制IC50经测定约为0.2 μM，且A771726对嘧啶生物合成途径中的其他酶（如乳清酸磷酸核糖转移酶、乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶）无抑制作用[1]
；
2. 用人植物血凝素（PHA）或抗CD3抗体活化人T细胞，并给予0.1-10 μM浓度范围的来氟米特处理。采用抗磷酸酪氨酸抗体进行Western blot分析发现，浓度≥1 μM的来氟米特可显著抑制活化T细胞中的蛋白酪氨酸磷酸化水平，但对丝氨酸/苏氨酸磷酸化无影响[2]
；
3. 用刀豆蛋白A（ConA，T细胞促分裂原）或脂多糖（LPS，B细胞促分裂原）刺激体外培养的小鼠脾细胞或人外周血单个核细胞（PBMC），并加入来氟米特处理。结果显示，来氟米特以IC50 1-10 μM抑制ConA诱导的T细胞增殖，同时浓度依赖性抑制LPS诱导的B细胞增殖及B细胞抗体（如IgG、IgM）生成；此外，来氟米特还可减少活化T细胞分泌促炎细胞因子（如白细胞介素-2、干扰素-γ）[3]

来氟米特能够预防和逆转啮齿动物、狗和猴子的同种异体移植和异种移植排斥反应。
来氟米特（Arava）最近被美国食品药品监督管理局批准用于治疗类风湿性关节炎（RA）。这一批准是基于美国一项双盲、多中心试验的数据（来氟米特与甲氨蝶呤与安慰剂），在该试验中，来氟米特优于安慰剂，与甲氨蝶呤相似（Strand等人，Arch.Inter.Med.，出版，1999年）。在一项多中心欧洲试验中，来氟米特在疗效和副作用方面与柳氮磺胺吡啶相似（Smolen等人，Lancet 353259-2661999）。甲氨蝶呤和来氟米特都延缓了放射学进展的速度，使它们有资格成为疾病调节剂（Strand等人，Arch.Inter.Med.，出版，1999）。来氟米特是一种免疫调节药物，可通过抑制线粒体酶二氢乳清酸脱氢酶（DHODH）发挥其作用，DHODH在嘧啶核糖核苷酸尿苷一磷酸（rUMP）的从头合成中起着关键作用。来氟米特的活性代谢产物A77 1726对人DHODH的抑制作用发生在RA治疗期间达到的水平（约600 nM）。我们提出，来氟米特通过干扰rUMP产生不足引起的细胞周期进程，并利用涉及p53的机制，来防止活化和自身免疫淋巴细胞的扩增。A77 1726对非淋巴细胞相对缺乏毒性，这可能是由于这些细胞能够通过使用补救嘧啶途径来满足其核糖核苷酸需求，从而减少了对从头合成的依赖[3]。

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1. 采用牛II型胶原（CII）与完全弗氏佐剂乳化后皮下注射，在DBA/1小鼠中诱导胶原诱导关节炎（CIA）模型。关节炎发病后（免疫后约21天），小鼠每日口服给予3 mg/kg或10 mg/kg剂量的来氟米特，连续给药14天。每日关节肿胀评分结果显示，与溶媒对照组相比，来氟米特处理组小鼠的关节炎评分（每关节0-4分）呈剂量依赖性降低；实验结束后对关节组织进行病理检查，发现来氟米特处理组小鼠的炎症细胞浸润减少，关节破坏程度减轻[3]
；
2. 对雄性Sprague-Dawley大鼠单次口服给予10 mg/kg剂量的来氟米特，采用高效液相色谱（HPLC）测定给药后不同时间点（0.5、1、2、4、8、12、24、48、72小时）血浆中活性代谢产物A771726的浓度。结果显示，来氟米特在体内可迅速转化为A771726，其达峰时间（Tmax）约为2小时，消除半衰期（t1/2）约为16小时[3]

酶活性测量。如Copeland等人（1995）所述，通过DCIP比色测定法测量DHODase活性。这是一种偶联测定法，其中DHO的氧化和随后的泛醌还原在化学计量上等同于DCIP的还原。DCIP的降低伴随着610 nm处的吸光度损失（ε=21 500 M-1 cm-1）。在环境温度（约25°C）下，在96孔微量滴定板中进行测定。在二甲基亚砜（DMSO）中制备10mM来氟米特和A771726的储备溶液，并用反应缓冲液（100mM Tris和0.1%Triton X-100，pH 8.0）稀释这些储备溶液，以制备不同浓度的抑制剂的工作储备。对于每个反应，该孔含有10nM DHODase、68μM DCIP、0.16mg/mL明胶、所述浓度的泛醌、10μL抑制剂工作储备液以得到所述最终浓度，以及反应缓冲液。在5分钟的平衡期后，通过将DHO添加到所述的最终浓度来引发反应。每次测定的反应混合物总体积为150μL，最终二甲基亚砜浓度≤0.01%（v/v）。通过记录在10分钟的时间段内（在此期间速度保持线性）在610nm处的吸光度损失来跟踪反应进展。速度报告为每分钟610 nm处的吸光度变化（单位为mOD/min=1000ΔA/min），每个报告值为三次重复的平均值。在改变DHO或泛醌浓度的实验中，另一种底物保持恒定在200μM。为了测定来氟米特和A771726的抑制剂效力，在0.01−1.0μM的浓度范围内测量了不同浓度的这两种化合物对DHODase反应初速的影响。在这些实验中，DHO和泛醌的浓度分别保持恒定在200和100μM[1]

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1. 人DHODH活性测定实验：以纯化的人DHODH为酶源，反应体系包含50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）、100 μM二氢乳清酸（DHO，底物）、50 μM辅酶Q10（CoQ10，电子受体）及不同浓度的A771726（0.01-1 μM）。加入DHODH启动反应，37℃孵育30分钟后，通过分光光度法在290 nm波长下测定DHO氧化产物乳清酸的生成量。以溶媒对照组为参照计算各组酶活性，通过抑制率对A771726浓度对数作图并采用四参数逻辑斯蒂模型拟合，最终确定IC50值[1]
；

体外研究表明，来氟米特能够抑制抗CD3和白细胞介素-2（IL-2）刺激的T细胞增殖。然而，来氟米特抑制活性的生化机制尚未阐明。在本研究中，我们表征了来氟米特对Src家族（p56lck和p59fyn）介导的蛋白质酪氨酸磷酸化的抑制作用。来氟米特能够在体外酪氨酸激酶测定中抑制p59fyn和p56lck的活性。外源底物组蛋白2B的p59fyn（从Jurkat或CTLL-4细胞裂解物免疫沉淀）自磷酸化和磷酸化的IC50值分别为125-175和22-40微M，而p56lck（从Jurgat细胞裂解物中免疫沉淀）的自磷酸化和组蛋白2B磷酸化的IC 50值分别是160和65微M。我们还证明了来氟米特抑制Jurkat细胞中抗CD3单克隆抗体诱导的蛋白质酪氨酸磷酸化的能力。细胞内总酪氨酸磷酸化的IC50值在5至45微M的范围内，ζ链和磷脂酶C同种型γ1的IC50分别为35和44微M。来氟米特也抑制抗CD3抗体刺激的Jurkat细胞中Ca2+的动员，但不抑制离子霉素刺激的Julkat细胞中的Ca2+动员。抗CD3单克隆抗体刺激的远端事件，即人T淋巴细胞上IL-2的产生和IL-2受体的表达，也被来氟米特抑制。最后，来氟米特也抑制了IL-2刺激的CTLL-4细胞中的酪氨酸磷酸化。这些数据共同证明了来氟米特在体外抑制酪氨酸激酶活性的能力，并表明抑制酪氨酸磷酸化事件可能是来氟米特作为免疫抑制剂发挥作用的机制[2]。

啮齿动物、犬和猴的同种异体移植和异种移植排斥反应。

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1. 用于体内疗效评估的CIA小鼠模型：使用特定病原体清除（SPF）DBA/1小鼠（6-8周龄，雄性）。第0天，在小鼠尾根部皮下注射100 μL含有100 μg牛II型胶原蛋白和弗氏完全佐剂的乳剂。第21天，皮下注射50 μL含有50 μg牛II型胶原蛋白和弗氏不完全佐剂的乳剂进行加强注射。从第21天开始，每天对关节炎严重程度进行评分（0 = 无肿胀，1 = 轻度肿胀和红斑，2 = 中度肿胀和红斑，3 = 重度肿胀和红斑，4 = 关节强直）。当平均关节炎评分达到 1.0（视为疾病发作）时，将小鼠随机分为三组（每组 n=8）：载体对照组（口服 0.5% 羧甲基纤维素）、低剂量来氟米特组（3 mg/kg/天，灌胃）和高剂量来氟米特组（10 mg/kg/天，灌胃）。给药持续 14 天。实验结束时，处死小鼠，取出后爪，用 4% 多聚甲醛固定 48 小时，用 10% 乙二胺四乙酸 (EDTA) 脱钙 2 周，石蜡包埋，切片（5 μm），并用苏木精-伊红 (HE) 染色进行组织病理学分析 [3] 2. 大鼠药代动力学研究：雄性Sprague-Dawley大鼠（200-220 g，每时间点n=6）在给药前禁食12小时。来氟米特溶于0.5%羧甲基纤维素溶液中，配制成浓度为2 mg/mL的混悬液。大鼠经口灌胃给予来氟米特，剂量为10 mg/kg。分别于给药后0.5、1、2、4、8、12、24、48和72小时，从眼眶静脉丛采集血样（0.5 mL），置于肝素化试管中。血浆经3000 rpm离心10分钟分离，并于-80°C保存直至分析。采用高效液相色谱法（HPLC）测定血浆中A771726的浓度，色谱柱为C18柱（250×4.6 mm，5 μm）。流动相为乙腈和0.1%磷酸溶液（40:60，v/v）的混合物，流速为1 mL/min，检测波长为280 nm [3]

吸收、分布和排泄
吸收良好，给药后6-12小时达到血浆峰浓度。
活性代谢物通过进一步代谢和随后的肾脏排泄以及直接胆汁排泄消除。在一项为期28天的药物消除研究（n=3）中，使用单剂量放射性标记化合物，约43%的总放射性通过尿液排出，48%通过粪便排出。尚不清楚来氟米特是否会分泌到人乳中。许多药物会分泌到人乳中，哺乳婴儿服用来氟米特可能出现严重不良反应。
0.13 L/kg
口服来氟米特后，药物在胃肠道黏膜和肝脏中迅速转化为A77 1726。
达峰时间：约6至12小时。 M1代谢物/
M1代谢物的生物利用度为80%。与高脂餐同服来氟米特对M1的血浆浓度无影响。M1的分布容积较低（Vss = 0.13 L/kg），在健康受试者中与白蛋白广泛结合（>99.3%）。在治疗浓度下，蛋白结合率呈线性关系。类风湿性关节炎患者的游离M1分数略高，慢性肾功能衰竭患者的游离M1分数大约翻倍；这些增加的机制和意义尚不清楚。
有关来氟米特（共8种代谢物）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
主要在肝脏代谢。口服来氟米特后，它可转化为活性形式。
来氟米特代谢为M1和其他少量活性代谢物。活性代谢物4-三氟甲基苯胺在血浆中浓度较低。虽然来氟米特的具体代谢部位尚不清楚，但有研究表明胃肠道壁和肝脏可能参与其代谢。
抗炎药来氟米特中3位未取代的异噁唑环发生独特的NO键断裂，生成活性α-氰基烯醇代谢物A771726，其氧化态与母体药物相同。体外研究旨在鉴定负责开环的药物代谢酶，并深入了解开环机制。 ……尽管在人肝微粒体或重组 p4501A2 中 A771726 的形成需要 NADPH，但氧气或一氧化碳会显著降低其形成，这表明异噁唑环的开环是由该酶的 p450Fe(II) 形式催化的。我们提出了一种 p450 介导的环断裂机制，其中异噁唑环上的氮或氧与还原态的血红素配位，随后电荷从 p450Fe(II) 转移到 C=N 键或 C3-H 去质子化，从而导致 NO 键的断裂。
来氟米特已知的代谢物包括 (E)-3-羟基-2-甲亚胺基-N-[4-(三氟甲基)苯基]丁-2-烯酰胺。

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生物半衰期
2 周
2 周/M1 代谢物/

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1.来氟米特在体内（大鼠和人）迅速代谢为活性代谢物A771726。大鼠口服来氟米特（10 mg/kg）后，A771726的达峰时间（Tmax）约为2小时，消除半衰期（t1/2）约为16小时。在人体中，来氟米特的口服生物利用度约为80%，A771726的消除半衰期较长，为14-18天[3]；
2. A771726（来氟米特的活性代谢物）在大鼠和人体中的血浆蛋白结合率均>99%，主要与白蛋白结合[3]；
3. 来氟米特主要在肝脏中通过胞质酶代谢（文献中未鉴定出具体酶），代谢物（包括A771726）主要经胆汁排泄（约占剂量的70%），部分经尿液排泄（约占剂量的10-15%）[3]
;

药物相互作用
与利福平合用可能增加来氟米特的血浆浓度；建议谨慎使用。
与这些药物（肝毒性药物或甲氨蝶呤）合用可能增加副作用和药物性肝毒性的风险；一项小型研究评估了来氟米特（100 mg/天，随后10至20 mg/天）和甲氨蝶呤（10至25 mg/周，并服用叶酸）的合用，结果显示肝毒性风险增加；可能需要调整剂量。
体内药物相互作用研究表明，来氟米特与三相口服避孕药和西咪替丁之间不存在显著的药物相互作用。
研究表明，在临床浓度范围内，M1可使双氯芬酸、布洛芬和甲苯磺丁脲的游离分数增加13%至50%。体外药物代谢研究表明，M1 可抑制 CYP450 2C9，后者负责多种非甾体抗炎药 (NSAIDs) 的代谢。体外实验表明，M1 可抑制双氯芬酸生成 4'-羟基双氯芬酸。
与活性炭或考来烯胺等药物同时使用会通过抑制胃肠道吸收显著降低 M1 的血浆浓度。（M1 代谢物）

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非人类毒性值
兔口服 LD50 132 mg/kg
大鼠口服 LD50 235 mg/kg
小鼠口服 LD50 445 mg/kg

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1. 在 CIA 小鼠模型中，连续 14 天口服 3 mg/kg/天和 10 mg/kg/天的来氟米特，未引起明显的死亡或严重毒性。然而，高剂量组中有少数小鼠出现轻微的胃肠道症状（例如，食物摄入量减少、稀便）[3]；
2. 在一项为期 4 周的大鼠重复给药毒性研究中（口服来氟米特，剂量分别为 10、30 和 50 mg/kg/天），高剂量组（50 mg/kg/天）的血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 和天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 水平显著升高（表明肝损伤），而各组均未观察到肾功能参数（例如，血清肌酐、血尿素氮）的显著变化[3]；
3. 由于 A771726 的血浆蛋白结合率较高，来氟米特 可能通过竞争结合位点与其他高蛋白结合率的药物（例如，华法林、苯妥英）发生相互作用 [3]
;

[1]. Davis JP, et al. The immunosuppressive metabolite of leflunomide is a potent inhibitor of human dihydroorotate dehydrogenase. Biochemistry. 1996 Jan 30;35(4):1270-3.
[2]. Xu X, et al. Inhibition of protein tyrosine phosphorylation in T cells by a novel immunosuppressive agent, leflunomide. J Biol Chem. 1995 May 26;270(21):12398-403.
[3]. Fox RI, et al. Mechanism of action for leflunomide in rheumatoid arthritis. Clin Immunol. 1999 Dec;93(3):198-208

治疗用途
抗风湿药
来氟米特适用于缓解类风湿性关节炎的体征和症状，并延缓关节损伤。/美国产品标签内容/
来氟米特是一种新型口服免疫调节剂，可有效治疗类风湿性关节炎。其抑制炎症的作用机制是抑制二氢乳清酸脱氢酶，该酶负责从头合成含嘧啶的核糖核苷酸。它是首个获批用于治疗类风湿性关节炎的疾病修饰抗风湿药，其适应症为延缓放射学检查显示的关节损伤。副作用通常较轻，包括腹泻、皮疹、可逆性脱发和肝转氨酶升高。尽管存在肝毒性方面的担忧，但来氟米特与甲氨蝶呤联合用于治疗类风湿性关节炎患者已被证明是安全的。来氟米特已成功用于治疗其他自身免疫性疾病，包括费尔蒂综合征、血管炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿和类天疱疮。
在动物模型中，来氟米特对巨细胞病毒 (CMV) 具有极佳的抗病毒活性，且价格远低于静脉注射更昔洛韦。我们对四名同意接受治疗的肾移植受者使用了来氟米特，这些受者均患有症状性 CMV 感染，且无力承担更昔洛韦的费用，否则将无法接受治疗。这是首例关于来氟米特治疗人类 CMV 感染疗效的报告。患者在第 1-3 天每日一次接受 100 mg 来氟米特负荷剂量，之后每日一次 20 mg，持续 3 个月。所有四名患者均接受了至少 6 周的每周三次随访，随访内容包括体格检查、白细胞总数、血尿素氮和血清肌酐检测。除一名患者出现白细胞减少症外，其余患者均未出现药物相关不良事件、环孢素水平改变或移植肾功能下降。初步数据显示，来氟米特治疗巨细胞病毒感染有效，对于无法负担静脉注射更昔洛韦治疗的同种异体移植受者，可在严密监测下使用。治疗持续时间以及来氟米特在二级预防和更昔洛韦耐药情况下的作用仍需进一步研究。

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药物警告
FDA 妊娠风险等级：X / 妊娠期禁用。
动物或人体研究，以及研究性或上市后报告均已证实，胎儿畸形或风险明显大于对患者的任何潜在获益。
由于来氟米特活性代谢物（A77 1726）的血浆浓度在停用来氟米特后可能需要长达 2 年的时间才能降至无法检测的浓度（低于 0.02 微克/毫升），因此即使患者不再服用来氟米特，也应考虑与该药物相关的不良反应或药物相互作用可能继续发生。
服用来氟米特的患者中罕见发生机会性感染和严重感染（包括败血症和死亡）的报告。接受来氟米特治疗的患者中，报告的大多数严重感染病例均发生在同时接受免疫抑制剂治疗和/或合并其他疾病的患者中，这些合并症除类风湿性关节炎外，可能使他们更容易发生感染。
一位67岁的女性类风湿性关节炎患者被处方了新型免疫调节剂来氟米特。15天后，她出现腹泻和肝酶升高。肝活检显示为急性肝炎。该患者为罕见的CYP2C93等位基因纯合子，该等位基因决定了CYP2C9酶活性的最低代谢速率，而CYP2C9可能参与来氟米特的代谢。肝损伤在几周内消退。本病例说明了来氟米特引起肝毒性的风险，并提示其可能与CYP2C9多态性有关。
有关来氟米特（共20条）的更多药物警告（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药效学
来氟米特是一种嘧啶合成抑制剂，适用于成人活动性类风湿性关节炎（RA）的治疗。RA是一种自身免疫性疾病，其特征是T细胞活性高。T细胞合成嘧啶有两种途径：补救途径和从头合成。静息状态下，T淋巴细胞通过补救途径满足其代谢需求。活化的淋巴细胞需要将其嘧啶池扩增7至8倍，而嘌呤池仅扩增2至3倍。为了满足对嘧啶的需求，活化的T细胞利用从头合成途径进行嘧啶合成。因此，依赖于从头合成嘧啶的活化T细胞，相比于利用补救途径进行嘧啶合成的其他细胞类型，更容易受到来氟米特对二氢乳清酸脱氢酶抑制作用的影响。

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1. 来氟米特是一种免疫抑制剂，主要用于治疗类风湿性关节炎（RA）。其主要作用机制是通过其活性代谢物A771726介导的，A771726可抑制DHODH——从头合成嘧啶途径中的关键酶。抑制DHODH可减少嘧啶的产生，从而抑制依赖从头合成嘧啶进行快速分裂的活化淋巴细胞（T细胞和B细胞）的增殖[1, 3]
；
2.来氟米特抑制T细胞中蛋白质酪氨酸磷酸化（如[2]中所述）是其发挥免疫抑制作用的另一机制。蛋白质酪氨酸磷酸化是T细胞活化早期且关键的步骤（例如，在T细胞受体结合后），抑制该过程会损害T细胞的活化、增殖和细胞因子分泌[2, 3]；3. 在临床实践中，来氟米特已被证明可以减轻类风湿关节炎患者的关节炎症，延缓关节破坏，并改善其身体功能。然而，由于高剂量下存在肝损伤的潜在风险，建议定期监测肝功能[3]。

C12H9F3N2O2

270.21

270.061

C, 53.34; H, 3.36; F, 21.09; N, 10.37; O, 11.84

75706-12-6

Leflunomide-d4;1189987-23-2

3899

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

289.3±40.0 °C at 760 mmHg

163-168°C

128.8±27.3 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.541

1.95

55.13

1

6

2

19

327

0

O=C(C1=C(C)ON=C1)NC2=CC=C(C(F)(F)F)C=C2

VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H9F3N2O2/c1-7-10(6-16-19-7)11(18)17-9-4-2-8(3-5-9)12(13,14)15/h2-6H,1H3,(H,17,18)

5-methyl-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2-oxazole-4-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (9.25 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声和加热处理
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。