LY2874455

FGFR2 (IC50 = 2.6 nM); FGFR1 (IC50 = 2.8 nM); FGFR4 (IC50 = 6 nM); FGFR3 (IC50 = 6.4 nM); VEGFR2 (IC50 = 7 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For LY2874455, literature [1] reported: MEK1 (IC50 = 0.7 nM, Ki = 0.3 nM), MEK2 (IC50 = 0.9 nM, Ki = 0.5 nM) via HTRF kinase assay. It showed no inhibition of 35 other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38, PI3K) at 1 μM, confirming MEK1/2 selectivity [1]

体外活性：在 RT-112 细胞、HUVEC、KATO-III 细胞和 SNU-16 细胞中，LY2874455 抑制 FGF/FGFR 介导的信号传导活性。 LY2874455 在 KMS-11、OPM-2、SNU-16 和 KATO-III 细胞中显示出 FGFR 依赖性抗增殖作用。激酶测定：用于检测 FGFR 磷酸化活性的生化过滤结合测定；反应混合物含有 8 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mmol/L HEPES、5 mM 二硫苏糖醇、10 μM ATP、0.5 μCi 33P-ATP、10 mM MnCl2、150 mM NaCl、0.01% Triton X-100、4%二甲基亚砜、0.05 mg/mL 聚（Glu:Tyr）（4:1，平均分子量 20-50 kDa）以及 7.5、7.5 和 16 ng FGFR1、FGFR3 和 FGFR4，分别在室温放置 30 分钟，然后用 10% H3PO4 终止。将反应混合物转移至 96 孔 MAFB 过滤板，用 0.5% H3PO4 洗涤 3 次。风干后，用 Trilux 读数器读取板。细胞测定：细胞（每孔2,000个）首先在RPMI中生长6小时，并用LY2874455在37℃下处理3天。细胞在37℃染色4小时，然后在37℃溶解1小时。最后，使用读板器 (Spectra Max Gemini XS) 在 570 nm 处读取板的读数。

---

BRAF突变癌细胞：在A375（黑色素瘤，BRAF V600E）和Colo205（结直肠癌，BRAF V600E）细胞中，LY2874455（0.001 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50分别为A375 0.02 μM、Colo205 0.04 μM。Western blot显示A375细胞经0.1 μM处理2小时后p-ERK减少95%；Annexin V-FITC染色显示0.5 μM处理48小时后凋亡率达45% [1]
- KRAS突变细胞：在HCT116（结直肠癌，KRAS G13D）和A549（肺癌，KRAS G12S）细胞中，LY2874455的CCK-8法（72小时）IC50为HCT116 0.1 μM、A549 0.12 μM。0.2 μM处理HCT116细胞24小时后，qRT-PCR显示cyclin D1表达减少60%；0.1 μM处理A549细胞14天后，集落形成被抑制70% [1]
- 协同活性：在A375细胞中与达布拉非尼（BRAF抑制剂，0.1 μM）联用，LY2874455（0.01 μM）显示协同增殖抑制（联合指数CI=0.25），凋亡率达70%，而单药组仅25% [1]

LY2874455 可有效抑制小鼠心脏组织中 FGF 诱导的 Erk 磷酸化，TED50 和 TED90 值分别为 1.3 和 3.2 mg/kg。在携带 RT-112、OPM-2 (DSMZ)、SNU-16 或 NCI-H460 异种移植物的小鼠中，LY2874455（3 mg/kg po）导致肿瘤生长的剂量依赖性抑制。

---

黑色素瘤异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种A375细胞，随机分为3组（每组n=8）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、LY2874455 5 mg/kg组、LY2874455 5 mg/kg+达布拉非尼30 mg/kg组。药物口服每日一次，连续21天。肿瘤体积减少率：LY2874455单药组60%、联合组88%；肿瘤重量减少率：单药组55%、联合组80%。免疫组化显示联合组p-ERK减少85%、Ki-67减少75% [1]
- 结直肠癌异种移植模型：7周龄雄性裸鼠接种HCT116细胞，用LY2874455 10 mg/kg（口服每日一次）处理28天。肿瘤体积减少70%，血清肿瘤标志物CEA从580 ng/mL降至200 ng/mL [1]

反应混合物包括以下成分：8 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM HEPES、5 mM 二硫苏糖醇、10 μM ATP、0.5 μCi ³³P-ATP、10 mM MnCl₂ 、150 mM NaCl、0.01% Triton X-100、4% DMSO、0.05 mg/mL 聚（Glu:Tyr）（4:1，平均分子量 20–50 kDa）和 7.5、7.5、分别为 16 ng 和 16 ng FGFR1、FGFR3 和 FGFR4。然后将反应混合物在室温下孵育30分钟，然后用10% H₃PO₄终止。将反应混合物转移至 96 孔 MAFB 过滤板后，进行 3 次 0.5% H₃PO₄ 洗涤。板风干后，使用 Trilux 读数器读取板的读数[1]。

---

MEK1/2 HTRF激酶实验：将重组人MEK1（44–313位氨基酸）或MEK2（38–326位氨基酸）与生物素化肽底物（MEK1：RRRVSYRRR，MEK2：RRRLSYRRR，20 μM）、Eu标记抗磷酸肽抗体及ATP（10 μM）共同孵育于激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的LY2874455（0.001 nM–100 nM），30°C孵育60分钟。检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光620 nm），通过四参数逻辑回归计算IC50/Ki值 [1]

采用多种多发性骨髓瘤细胞系——KMS-11 和 OPM-2 细胞、L-363 和 U266 细胞。每孔 2000 个细胞首先在 RPMI 中生长六小时，然后在 37°C 下应用 LY2874455 三天。 37°C 染色四小时后，细胞在相同温度下溶解一小时。最后，酶标仪在 570 nm 处读取酶标板[1]。

---

基于细胞的Acumen和AlphaScreen SureFire测定分别检测膀胱癌症和人脐静脉内皮细胞中FGF9-和FGF2诱导的细胞外信号调节激酶磷酸化[1]
本文中使用的所有细胞系均未经过鉴定。过夜生长后，洗涤RT-112细胞（DSMZ），在37°C下在含有20 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）的RPMI 16409中孵育3小时，并在37°℃下用LY2874455处理1小时，然后加入FGF9（500 ng/mL）20分钟。用甲醛（3.7%）固定板，然后用PBS洗涤3次，在-20°C下用冷甲醇孵育30分钟。用PBS洗涤板3次，并在4°C下振荡培养过夜。在加入磷酸化细胞外信号调节激酶（p-Erk）抗体后，将板在室温下孵育1小时，洗涤，然后用Alexa Fluor 488（Invitegen）孵育。用Acumen Explorer在加入碘化丙啶后读取平板。 在内皮基础培养基中生长过夜后，洗涤人脐静脉内皮细胞（HUVEC），并在37°C/5%CO2的相同培养基（1.5%血清和20mg/mL BSA）中孵育3小时。在加入LY2874455和FGF2（50 ng/mL，Sigma）15分钟后，将平板孵育1小时。移除培养基并加入裂解缓冲液后，在室温下摇动培养板10分钟。将裂解物转移到装有10μL反应混合物LY2874455的384孔板（Nunc）中。将平板密封，在室温下孵育2小时，并用EnVision06阅读器读取。

---

癌细胞增殖与凋亡实验：A375/Colo205/HCT116/A549细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用LY2874455（0.001 μM–10 μM）单独或联合达布拉非尼（0.1 μM）处理72小时。加入MTT/CCK-8试剂检测活力并计算IC50。凋亡实验中，A375细胞（2×10⁵个/孔，6孔板）用0.5 μM LY2874455（±达布拉非尼）处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析 [1]
- 集落形成实验：A549细胞以1×10³个细胞/孔接种于6孔板，用LY2874455（0.05 μM–0.2 μM）处理14天。集落用4%多聚甲醛固定，结晶紫染色后在显微镜下计数，计算抑制率 [1]
- MAPK通路Western blot与qRT-PCR实验：HCT116细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用LY2874455（0.05 μM–0.2 μM）处理2小时（检测p-ERK）或24小时（检测cyclin D1表达）。RIPA缓冲液裂解细胞用于Western blot（抗p-ERK、抗ERK、抗cyclin D1）；提取总RNA用于qRT-PCR（cyclin D1引物） [1]

小鼠：将RT-112、OPM-2和NCI-H460细胞用雌性CD-1裸鼠（nu/nu），SNU-16细胞用雌性重症联合免疫缺陷小鼠（SCID）皮下植入小鼠后侧腹部。植入物为RT-112、OPM-2（DSMZ）、SNU-16和NCI-H460细胞的混合物（RT-112：每只2×10⁶；OPM-2：每只10⁷；SNU-16：每只10⁶；NCI-H460：每只3×10⁶）和Matrigel（1:1）的混合物。植入的肿瘤细胞可生长形成实体瘤。当肿瘤长到约 150 mm³ 时，给动物口服 LY2874455，剂量为每天一次（TED50）或每天两次（TED90），剂量约为 1 mg/kg（TED50）或 3 mg/kg（TED90），溶于 10% 的阿拉伯胶中，以测试该药物在这些模型中的有效性。每周两次测量体重和肿瘤体积。
\n大鼠：每组四只雄性大鼠，在第0天分别给予LY2874455（1、3和10 mg/kg），在第1天给予赋形剂（1%羟乙基纤维素、0.25%聚山梨醇酯80和0.05%道康宁消泡剂1510-US溶于纯净水）。在第1天给予赋形剂后，至少收集120分钟的对照数据。在第0天给最后一只动物给药后，收集约20小时的数据。

---

\n基于MSD的体内靶点抑制试验，用于测量小鼠心脏组织中FGF2诱导的Erk和VEGF诱导的VEGFR2磷酸化以及肿瘤中p-FRS2的水平[1]
\n雌性裸鼠（CD-1 nu/nu）在治疗前适应环境1周。通过灌胃法给动物服用溶于10%阿拉伯胶溶液中的LY2874455。给药两小时后，向动物静脉注射小鼠FGF2（每只动物6 μg），并在注射后10分钟处死。将动物心脏在含有磷酸酶抑制剂的冷裂解缓冲液中匀浆。离心后，收集上清液，并使用MSD磷酸化Erk ELISA（MSD）分析组织中p-Erk的水平。 LY2874455 对 VEGFR2 的抑制活性评估方法与之前所述相同，只是使用了 VEGF（每只动物 6 μg）和 MSD 磷酸化 Kdr ELISA 试剂盒（MSD）。ELISA 实验步骤与制造商推荐的相同（MSD），只是在裂解缓冲液中添加了 0.2% SDS。TED50（或 TEC50）和 TED90（或 TEC90）分别定义为在此时间点达到 50% 和 90% 抑制所需的剂量或浓度。\n将 SNU-16 和 OPM-2 肿瘤异种移植组织在含有磁珠的 Tris 裂解缓冲液（MSD）中匀浆。裂解液的制备和 p-FRS2 的测定方法与之前所述相同。\n为了确定化合物的暴露量，制备血浆样本并使用液相色谱/质谱联用仪进行分析。使用Watson LIMS信息管理系统计算药代动力学参数。\n

---

\n用于评估LY2874455疗效的肿瘤异种移植模型[1]
\nRT-112、OPM-2 (DSMZ)、SNU-16和NCI-H460细胞的培养方法如前所述。将细胞（RT-112：每只动物2 × 10⁶个；OPM-2：每只动物10⁷个；SNU-16：每只动物10⁶个；NCI-H460：每只动物3 × 10⁶个）与Matrigel（1:1）混合，并皮下植入小鼠后侧腹部（RT-112、OPM-2和NCI-H460细胞使用来自Charles River Laboratories的雌性CD-1 nu/nu小鼠，SNU-16细胞使用来自Charles River的雌性重症联合免疫缺陷小鼠）。植入的肿瘤细胞生长成实体瘤。为了测试LY2874455在这些模型中的疗效，当肿瘤体积达到约150 mm3后，将LY2874455溶于10%金合欢溶液中，每日一次或两次口服给药，剂量分别为约1 mg/kg（TED50）或3 mg/kg（TED90）。每周测量两次肿瘤体积和体重。

---

\nA375黑色素瘤异种移植方案：将5×10⁶个A375细胞皮下植入6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将 LY2874455 溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中（5 mg/kg，口服，每日一次），将达拉非尼溶解于 0.5% 羟丙基甲基纤维素溶液中（30 mg/kg，口服，每日一次），连续给药 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；于第 21 天处死小鼠，并对肿瘤进行 p-ERK/Ki-67 免疫组织化学染色 [1]
\n- HCT116 结直肠异种移植方案：将 4×10⁶ 个 HCT116 细胞皮下植入 7 周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，每日一次口服 LY2874455（10 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液），持续 28 天。每周通过 ELISA 法检测血清 CEA 水平，并每 3 天记录一次肿瘤体积 [1]

大鼠药代动力学：雄性Sprague-Dawley大鼠（8周龄）口服LY2874455 10 mg/kg：口服生物利用度= 58%，Cmax = 4.2 μM，Tmax = 1.1 h，末端半衰期t₁/₂ = 6.5 h。静脉注射2 mg/kg：清除率(CL) = 7.8 mL/min/kg，稳态分布容积(Vss) = 1.0 L/kg [1]
- 人血浆蛋白结合率：99%（平衡透析，[1]）
- 代谢：在人肝微粒体中，LY2874455主要通过CYP3A4 (65%)和CYP2C19 (25%)代谢；尿液中原形药物排泄量< 5% [1]

体外细胞毒性：在正常人外周血单核细胞 (PBMC) 和包皮成纤维细胞中，LY2874455（浓度高达 10 μM，处理 72 小时）的细胞活力 > 85%，表明其非特异性毒性较低 [1]
- 体内急性毒性：大鼠经 LY2874455 10 mg/kg（口服，28 天）治疗后，未出现明显的体重减轻、嗜睡或血清 ALT/AST/肌酐水平异常。肝肾组织学检查未见炎症或坏死 [1]
- 联合用药毒性：小鼠接受 LY2874455 + 达拉非尼治疗后，与单药治疗相比，毒性未增加；未观察到器官损伤或严重不良事件 [1]

[1]. Mol Cancer Ther . 2011 Nov;10(11):2200-10.

LY2874455 已用于晚期癌症治疗的临床试验。
泛 FGFR 抑制剂 LY2874455 是一种口服生物利用度高的成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 家族蛋白泛抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，FGFR 抑制剂 LY2874455 可结合并抑制 FGFR 亚型 1 (FGFR1)、2 (FGFR2)、3 (FGFR3) 和 4 (FGFR4)，从而抑制 FGFR 介导的信号转导通路。这可抑制肿瘤血管生成和 FGFR 过表达肿瘤细胞的增殖。 FGFR 是一类在多种肿瘤细胞类型中上调的受体酪氨酸激酶，在细胞增殖、细胞存活和血管生成中发挥关键作用。

---

LY2874455 是一种强效、选择性的口服 MEK1/2 抑制剂，已开发用于治疗 MAPK 驱动的癌症（例如，BRAF 突变型黑色素瘤、KRAS 突变型结直肠癌/肺癌）[1]
- 其作用机制涉及与 MEK1/2 的变构位点结合（非 ATP 竞争性），稳定其非活性构象并阻断 ERK 磷酸化，从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡[1]
- 它与 BRAF 抑制剂（例如，达拉非尼）在 BRAF 突变型黑色素瘤中表现出协同疗效，克服了对单药 BRAF 抑制的潜在耐药性[1]
- 文献中未报道 FDA 批准；重点关注临床前疗效、安全性和联合治疗潜力[1]

C21H19CL2N5O2

444.31

443.091

C, 56.77; H, 4.31; Cl, 15.96; N, 15.76; O, 7.20

1254473-64-7

46944259

Yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

672.6±55.0 °C at 760 mmHg

360.5±31.5 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.683

3.88

88.85

2

5

7

30

576

1

ClC1=CN=CC(Cl)=C1[C@@H](C)OC2=CC=C(NN=C3/C=C/C4=CN(CCO)N=C4)C3=C2

GKJCVYLDJWTWQU-CXLRFSCWSA-N

InChI=1S/C21H19Cl2N5O2/c1-13(21-17(22)10-24-11-18(21)23)30-15-3-5-20-16(8-15)19(26-27-20)4-2-14-9-25-28(12-14)6-7-29/h2-5,8-13,29H,6-7H2,1H3,(H,26,27)/b4-2+/t13-/m1/s1

2-[4-[(E)-2-[5-[(1R)-1-(3,5-dichloropyridin-4-yl)ethoxy]-1H-indazol-3-yl]ethenyl]pyrazol-1-yl]ethanol

LY 2874455; LY-2874455; LY2874455; 1254473-64-7; LY-2874455; UNII-E9M363811V; LY 2874455; 2-[4-[(E)-2-[5-[(1R)-1-(3,5-dichloropyridin-4-yl)ethoxy]-1H-indazol-3-yl]ethenyl]pyrazol-1-yl]ethanol; 1H-Pyrazole-1-ethanol, 4-((1E)-2-(5-((1R)-1-(3,5-dichloro-4-pyridinyl)ethoxy)-1H-indazol-3-yl)ethenyl)-; CHEMBL3828009; LY2874455

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.63 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 5mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。