p110α (IC50 = 0.5 μM); p110δ (IC50 = 0.57 μM); p110β (IC50 = 0.97 μM); human CK2 (IC50 = 98 nM); human CK2α2 (IC50 = 3.869 μM); DNA-PK (IC50 = 1.4 μM)

LY294002 不仅对 PI3K 具有选择性；它也可能作用于其他脂质激酶和其他看似无关的蛋白质。除了 mTOR 和 DNA-PK 之外，LY294002 已被证明可以抑制 CK2（酪蛋白激酶 2）和 Pim-1 以及其他蛋白激酶。 LY294002 使 Akt/PKB 失活，从而触发细胞凋亡并抑制细胞增殖。在这些结肠癌细胞系中，LY294002 表现出显着的生长抑制和细胞凋亡诱导作用，同时磷酸化 Akt (Ser473) 的表达降低。 [2] 在肿瘤细胞中，LY294002 显着增加核固缩并减少细胞质体积。因此，LY294002 显着降低培养物中卵巢癌细胞的增殖。 LY294002 诱导细胞生长特异性 G1 期停滞，从而几乎完全抑制黑色素瘤细胞增殖，并部分抑制 MG-63（骨肉瘤细胞系）增殖。 LY294002 对细胞周期进程的影响可能揭示 PI3K 激活途径与癌细胞周期控制之间的潜在联系。 [3]

LY294002 在小鼠癌性腹膜炎模型中表现出显着的有效性，因为它还诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生长，特别是在 LoVo 肿瘤中。 [2] LY294002 显着减少卵巢癌生长和腹水形成。[3] LY294002 显着减缓腹水和卵巢癌的发展。[3]

LY294002 对 PI3K 的抑制作用是使用纯化的重组酶和 1μM ATP 在放射测定中测定的。在室温 (24oC) 下，激酶反应持续一小时，然后通过添加 PBS 停止。然后，通过拟合可变斜率 S 形剂量反应曲线来计算 IC50 值。激酶选择性筛选用于确定 CK2 和 GSK3β（糖原合酶激酶 3β）的抑制作用。在 10μM ATP 中，根据 Upstate 激酶组对 LY294002 进行评估。

将1.0×105个细胞（100μL体积/孔）接种到96孔微量滴定板中。添加LY294002后，将一式三份的孔在37℃下培养0-48小时。处理后，将 10 μL Premix WST-1 添加到每个微培养孔中，然后将板在 37 °C 下孵育 60 分钟。此时，使用酶标仪在 450 nm 处进行吸光度测量。

两组无胸腺裸鼠（5-7周龄）腹腔注射OVCAR-3细胞
0-100 mg/kg
腹腔注射

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无胸腺裸鼠腹腔注射卵巢癌细胞系OVCAR-3。接种7天后，小鼠接受或不接受LY294002（100 mg/kg体重）治疗，持续3周。每周测量两次体重和腹围。实验结束时，处死小鼠，测量腹水量，并切除肿瘤。LY294002治疗组的平均肿瘤负荷较对照组减少了约65%。治疗组几乎没有出现腹水；对照组的平均腹水量为3.3 ± 0.38 ml。将OVCAR-3细胞在体外分别用LY294002（1、5和10 μM）处理24小时，并进行无LY294002处理的培养。与对照组相比，1、5和10 μM LY294002处理组的细胞数量分别减少了27%、56%和75%。体内和体外形态学研究表明，LY294002可诱导肿瘤细胞出现明显的核固缩和胞质体积缩小，证实为细胞凋亡。因此，LY294002在体内显著抑制卵巢癌的生长和腹水形成，在体外显著抑制卵巢癌细胞的增殖，提示PI3-K抑制剂可能成为治疗卵巢癌的有效手段。[3]

[1]. Biochem J. 2007 Jun 15;404(3):449-58.

[2]. Clin Cancer Res. 2002 Jun;8(6):1957-63.

[3]. Clin Cancer Res. 2000 Mar;6(3):880-6.

LY294002 是一种色酮，其 8 位被苯基取代，2 位被吗啉基取代。它具有 EC 2.7.1.137（磷脂酰肌醇 3-激酶）抑制剂、自噬抑制剂和抗衰老剂的作用。它属于色酮类化合物、吗啉类化合物和有机氯化合物。
磷脂酰肌醇3-激酶特异性抑制剂。
据报道，2-(4-吗啉基)-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮存在于蜜蜂（Hexagonia apiaria）和双色蜜蜂（Dietes bicolor）中，并有相关数据。
PI3K/BET抑制剂LY294002是一种吗啉类磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和溴结构域及末端结构域（BET）蛋白家族的抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，PI3K/BET抑制剂LY294002特异性靶向并结合PI3K和BET蛋白溴结构域中的乙酰化赖氨酸识别基序。抑制PI3K活性可抑制PI3K/AKT激酶信号通路。这可能导致PI3K介导的信号通路过度激活的肿瘤细胞的生长和存活受到抑制。抑制BET蛋白可阻止其与乙酰化组蛋白的相互作用，破坏染色质重塑，并抑制对细胞增殖和存活至关重要的致癌驱动基因的表达，这些因素共同作用可能导致BET过表达肿瘤细胞的增殖受到抑制。PI3K信号通路的激活通常与肿瘤发生相关。BET蛋白由BRD2、BRD3、BRD4和BRDT组成，是转录调控因子，在发育和细胞生长过程中发挥重要作用。在肿瘤细胞中，BET蛋白在癌基因转录和肿瘤细胞增殖的调控中发挥关键作用。

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目的：磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和Akt/蛋白激酶B（PKB）能够使多种人类癌细胞逃避凋亡。我们假设PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基色酮（LY294002）能够灭活Akt/PKB，从而抑制细胞增殖并在体外和体内诱导细胞凋亡。实验设计：本研究使用了人结肠癌细胞系（DLD-1、LoVo、HCT15和Colo205）及其小鼠异种移植瘤（DLD-1和LoVo）。采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测癌细胞中磷酸化Akt（Ser(473)）的表达和凋亡情况。为了评估培养细胞中 caspase-3 的活性，我们还进行了 caspase 比色法检测。结果：LY294002 在这些结肠癌细胞系中表现出显著的生长抑制和凋亡诱导作用，并伴有磷酸化 Akt (Ser(473)) 表达的降低。然而，LY294002 的敏感性与磷酸化 Akt 的表达水平之间存在显著差异。尽管 LoVo 和 Colo205 细胞对 LY294002 表现出高敏感性，凋亡增加，但 DLD-1 和 HCT15 细胞并未表现出快速的凋亡诱导。LoVo 细胞中 caspase-3 活性显著升高，而 DLD-1 细胞中 caspase-3 活性则不显著。在小鼠异种移植瘤实验中，我们发现体内给予LY294002也能抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡，尤其是在LoVo肿瘤中，因此在小鼠腹膜癌模型中显示出显著疗效。结论：PI3K-Akt/PKB在结肠癌的发生发展中发挥重要作用，它有助于促进细胞生长并使细胞逃避凋亡。这些结果表明LY294002有望成为治疗结直肠癌的抗肿瘤药物。[2]磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）可诱导细胞有丝分裂、细胞生长和细胞转化。编码P110α亚基的基因扩增可能是卵巢癌进展中的一个重要事件，PI3-K抑制剂可能是治疗该疾病的潜在药物。我们评估了强效PI3-K抑制剂LY294002对体内外卵巢癌生长以及体内腹水形成的影响。将卵巢癌细胞系OVCAR-3腹腔注射到无胸腺小鼠体内。接种7天后，小鼠接受或不接受LY294002（100 mg/kg体重）治疗，持续3周。每周测量两次小鼠的体重和腹围。实验结束时，处死小鼠，测量腹水量并切除肿瘤。LY294002治疗组的平均肿瘤负荷较对照组减少了约65%。治疗组几乎没有出现腹水；对照组的平均腹水量为3.3 ± 0.38 ml。将OVCAR-3细胞在体外分别用LY294002（1、5和10 μM）处理24小时，并进行无LY294002处理的培养。与对照组相比，1、5和10 μM LY294002处理组的细胞数量分别减少了27%、56%和75%。体内和体外形态学研究表明，LY294002可诱导肿瘤细胞出现明显的核固缩和胞质体积缩小，证实为细胞凋亡。因此，LY294002在体内显著抑制卵巢癌的生长和腹水形成，在体外显著抑制卵巢癌细胞的增殖，提示PI3-K抑制剂可能成为治疗卵巢癌的有效手段。[3]

C19H17NO3

307.3432

307.12

C, 74.25; H, 5.58; N, 4.56; O, 15.62

154447-36-6

LY294002 hydrochloride;934389-88-5

3973

White to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

494.6±45.0 °C at 760 mmHg

182-184ºC

253.0±28.7 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.627

3.82

42.68

0

4

2

23

463

0

O1CCN(C2=CC(=O)C3C=CC=C(C4C=CC=CC=4)C=3O2)CC1

CZQHHVNHHHRRDU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H17NO3/c21-17-13-18(20-9-11-22-12-10-20)23-19-15(7-4-8-16(17)19)14-5-2-1-3-6-14/h1-8,13H,9-12H2

2-morpholin-4-yl-8-phenylchromen-4-one

LY-294002; LY 294002; 2-(4-Morpholinyl)-8-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one; LY-294002; 2-morpholino-8-phenyl-4H-chromen-4-one; 2-morpholin-4-yl-8-phenyl-4H-chromen-4-one; 2-morpholin-4-yl-8-phenylchromen-4-one; LY294002

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~36 mg/mL (117.1 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: ~21 mg/mL (~68.3 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.87 mg/mL (9.34 mM) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (7.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (7.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (7.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度: 4%DMSO+30%PEG 300+5%Tween 80+ddH2O: 5mg/mL

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配方 6 中的溶解度: 15.71 mg/mL (51.12 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。