- In antifungal activity studies, Magnoflorine exhibits inhibitory effects on Candida species (including Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei), but no specific molecular target (e.g., enzyme/receptor) or affinity data (IC50/Ki) were reported[1]
- In pro-inflammatory response regulation, Magnoflorine acts via the MyD88-dependent signaling pathway (involved in TLR4-mediated inflammation), but no direct binding affinity to MyD88 or downstream proteins (e.g., NF-κB, MAPK) was provided[2]

Alpha-glucosidase (inhibition of alpha-glucosidase activity was observed, but no IC50 value was reported) [1].
MyD88, TLR4, NF-κB, MAPKs (JNK, ERK, p38), PI3K-Akt (functional modulation was observed) [2].

木兰花抑制了8株临床分离的白色念珠菌的生长，最低抑菌浓度（MIC）范围为16至64 μg/mL；它还抑制了热带念珠菌（MIC：32 μg/mL）和克柔念珠菌（MIC：64 μg/mL）的生长[1]
- 在 2×MIC 浓度下，木兰花碱使白色念珠菌生物膜的生物量减少了 45%（结晶紫染色法测定），并使生物膜内细胞的活力降低了 38%（XTT 还原法测定）[1]
- 在 U937 巨噬细胞中具有促炎作用： - 在 LPS（1 μg/mL）激活的 U937 巨噬细胞中，木兰花碱（10-50 μM）以剂量依赖的方式增加 TNF-α 的分泌：与单独使用 LPS 相比，50 μM 木兰花碱使 TNF-α 水平升高了 2.8 倍（ELISA）[2]
- 它还上调了在 50 μM 浓度下，IL-6 (2.1 倍) 和 IL-1β (1.9 倍) mRNA 表达 (qRT-PCR) 增加，p65 (NF-κB 亚基) 和 p38 (MAPK) 的磷酸化分别增强 2.3 倍和 1.7 倍 (Western blot)[2]
- 通过 siRNA 沉默 MyD88 可消除木兰花碱的促炎作用：与未沉默的细胞相比，TNF-α 分泌减少了 65%[2]

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碘化木兰花碱 对包括白色念珠菌 (KCTC7965 和 KACC30071) 在内的念珠菌菌株显示出生长抑制活性，48 小时处理后的最低抑菌浓度 (MIC) 为 50-100 μg/mL。对白色念珠菌的最低杀菌浓度 (MFC) 为 200 μg/mL [1]。
碘化木兰花碱对白色念珠菌的最低抑菌浓度 (MIC) 在 72 小时内保持稳定（24、48 和 72 小时均为 50 μg/mL），而其他化合物如小檗碱和肉桂醛则失去了活性 [1]。
在纸片扩散试验中，碘化木兰花碱在孵育 72 小时后显示出抗白色念珠菌活性，其抑菌圈与小檗碱相似，但小于肉桂醛 [1]。
浓度为 150 和 300 μM 的碘化木兰花碱可显著抑制白色念珠菌的细胞生长；在 75 μM 浓度下，碘化木兰碱会抑制细菌生长，但在浓度低于 37.5 μM 时，它不会干扰细胞生长 [1]。
碘化木兰碱 在 150 μM 浓度下可抑制白色念珠菌的 α-葡萄糖苷酶活性 60.08% (p<0.05)。在 75 μM 浓度下，抑制率为 47.32%，在 300 μM 浓度下，抑制率为 67.48% [1]。
碘化木兰碱 呈剂量依赖性地降低白色念珠菌的生物膜形成； 150 μM 的浓度处理完全抑制了生物膜的形成[1]。
碘化木兰碱（6.25 μg/mL）与咪康唑联合治疗可将咪康唑对白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）从 3.125 μg/mL 降低至 1.5625 μg/mL，部分抑制浓度指数（FICI）为 0.75-1，表明存在弱协同作用[1]。
在没有脂多糖（LPS）的情况下，碘化木兰碱对巨噬细胞没有显著影响。在LPS激活的U937巨噬细胞中，它以浓度依赖的方式增强TNF-α和IL-1β的产生，ED50值分别为7.89 μM和10.28 μM [2]。在LPS激活的U937巨噬细胞中，浓度为3.125、12.5和50 μM的碘化木兰碱分别显著增强了TNF-α mRNA的表达，增幅分别为309.4 ± 44.31倍、437.5 ± 61.44倍（p<0.05）和517.6 ± 29.70倍（p<0.001）。在 50 μM 浓度下，IL-1β mRNA 表达增强至 186.4 ± 16.09 倍 (p<0.001) [2]。碘化木兰花碱浓度依赖性地增强了 LPS 激活的 U937 巨噬细胞中 PGE2 的产生以及 COX-2 蛋白和 mRNA 的表达 [2]。碘化木兰花碱浓度依赖性地增强了 LPS 激活的 U937 巨噬细胞中 p65、IKKα/β 和 IκBα 的磷酸化，并促进了 IκBα 的降解 [2]。碘化木兰花碱浓度依赖性地增加了 LPS 激活的 U937 巨噬细胞中 JNK1/2、ERK1/2、p38 MAPK 和 Akt 的磷酸化。在 50 μM 浓度下，p38 和 Akt 磷酸化的上调具有高度显著性 (p<0.001) [2]。碘化木兰碱浓度依赖性地上调 LPS 预处理的 U937 巨噬细胞中 MyD88 和 TLR4 的表达 [2]。用 NF-κB 特异性抑制剂（BAY 11-7082，10 μM）、MAPK 特异性抑制剂（p38 抑制剂 SB202190、ERK 抑制剂 U0126、JNK 抑制剂 SP600125，均为 10 μM）和 PI3K-Akt 特异性抑制剂（LY294002，10 μM）预处理可阻断碘化木兰碱诱导的 LPS 激活的 U937 巨噬细胞中 TNF-α 的释放和 COX-2 的表达 [2]。

念珠菌生长抑制试验（MIC测定）：- 将念珠菌菌株在RPMI 1640培养基中培养至对数生长期，然后调整浓度至1×10⁶ CFU/mL。- 将木兰花碱进行系列稀释（2-128 μg/mL）后加入96孔板，随后加入等体积的念珠菌悬液。- 将培养板置于35℃培养48小时，MIC定义为完全抑制可见真菌生长的最低木兰花碱浓度[1]。
- MyD88依赖性信号激活试验（磷酸化蛋白的Western blot检测）：- 将U937巨噬细胞用木兰花碱碱（10-50 μM）预处理1小时，然后用LPS（1 μg/mL）刺激30分钟。 - 细胞裂解后，蛋白质经SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，并用抗磷酸化p65、磷酸化p38和总p65/p38的抗体进行检测。GAPDH用作上样对照[2]

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α-葡萄糖苷酶抑制试验：将白色念珠菌在0.6%麦芽糖培养基中培养过夜，用PBS（pH 6.8）洗涤，并用玻璃珠（直径0.4-0.6 mm）破碎。将悬浮液以13,500 × g离心10分钟。取800 μL洗涤后的悬浮液置于1.5 mL离心管中。使用96孔板：每个孔包含80 μL PBS缓冲液（pH 6.8）、9 μL粗酶液和1 μL碘化木兰花碱或溶剂对照。将混合物预孵育20分钟后，加入底物对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）。30分钟后，加入100 μL冰冷的0.1 M Na₂CO₃溶液终止反应。在400 nm处测定吸光度。设置三个空白对照：空白1为90 μL PBS和10 μL PNPG；空白2为9 μL粗酶液和91 μL PBS；空白3为9 μL粗酶液、81 μL PBS和10 μL PNPG。所有实验均重复四次[1]。

念珠菌生物膜抑制试验：- 将白色念珠菌接种于96孔板中，并在35℃下培养24小时以形成生物膜。- 用木兰花碱（2×MIC，32 μg/mL）处理生物膜24小时，然后用结晶紫（0.1%）染色15分钟。- 洗去多余的染料，并在570 nm处测量吸光度以量化生物量；加入 XTT 试剂，通过 490 nm 处的吸光度评估活细胞[1]
- U937 巨噬细胞促炎因子检测 (ELISA/qRT-PCR): - 将 U937 细胞用 PMA (100 nM) 处理 48 小时诱导分化为巨噬细胞，然后用木兰花 (10-50 μM) 预处理 1 小时，再用 LPS (1 μg/mL) 刺激 24 小时。 - 收集细胞上清液，通过 ELISA 检测 TNF-α/IL-6；提取总RNA，反转录为cDNA，并通过qRT-PCR检测IL-1β mRNA表达（以GAPDH作为内参）[2]
- U937细胞中MyD88 siRNA转染实验： - 使用转染试剂将MyD88 siRNA或阴性对照siRNA转染至U937巨噬细胞中，培养48小时。 - 转染后的细胞用木兰花碱（50 μM）和LPS（1 μg/mL）处理24小时，然后通过ELISA检测TNF-α分泌，以验证MyD88依赖性[2]

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抗真菌药物敏感性微量稀释法：将每种念珠菌菌株在YPD琼脂平板上培养24小时后，挑取菌落接种到3 mL YPD肉汤中，并在30℃下培养过夜。将细胞浓度调整至 5 × 10^4 CFU/mL。取 100 μL 菌液加入含有 100 μL MOPS 缓冲 RPMI 1640 培养基（含碘化木兰碱，终浓度为 200 至 1.5625 μg/mL）的 96 孔板中。将培养板置于 30°C 培养 24、48 和 72 小时。以咪康唑作为阳性对照 [1]。
对于纸片扩散法：制备含有念珠菌菌株的 YPD 琼脂平板。将菌液浓度调整至 McFarland 0.5 标准。将含有 100 μg 碘化木兰碱的直径为 6 mm 的抗生素测试纸片置于琼脂平板上。将培养板置于 30°C 下培养，分别于 24、48 和 72 小时测量抑菌圈直径 [1]。
细胞生长试验：接种物制备方法与微量稀释法类似。碘化镁诺氟林的最终浓度范围为 300 至 18.75 μM。将培养板置于 30°C 下培养，分别于 0、3、6、9、12 和 24 小时测量 OD600 值以评估生长速率 [1]。
生物膜形成检测：将 5 × 10^5 CFU/mL 的白色念珠菌加入含有碘化镁诺氟林（最终浓度为 300 至 2.343 μM）的 96 孔板中。将培养板置于 30°C 下培养 24 小时。孔板用蒸馏水洗涤三次，用0.4%结晶紫染色45分钟，洗涤四次，用无水乙醇脱水45分钟，并在595 nm处测量吸光度。生物膜形成量以对照组[1]进行标准化。
细胞毒性试验：将HaCaT细胞以每孔10^4个细胞的密度接种于96孔板中，并在含有不同浓度碘化木兰花碱（0-600 μM）的DMEM培养基中培养。孵育48小时后，加入MTT至终浓度为0.5 mg/mL，并在37°C下孵育3小时。移除培养基，将细胞悬浮于100% DMSO中10分钟。细胞活力根据 OD540 值计算 [1]。
U937 巨噬细胞分化和处理：将 U937 细胞培养于含 10% FBS 和 1% 青霉素-链霉素的 RPMI-1640 培养基中。用 200 nM PMA 诱导细胞分化 24 小时，然后更换为不含 PMA 的 RPMI-1640 培养基，并过夜培养。将分化的巨噬细胞（5 × 10^5 个细胞/mL）用碘化木兰碱（3.125-50 μM）或阳性对照左旋咪唑处理 2 小时，然后与 LPS（1 μg/mL）共同培养或不共同培养 24 小时。收集上清液用于细胞因子 ELISA 检测（TNF-α、IL-1β、PGE2）。蛋白质提取：细胞先用碘化木兰碱处理2小时，再用LPS处理30分钟（COX-2处理24小时；MyD88和TLR4处理60分钟）。细胞用含蛋白酶抑制剂混合物的RIPA裂解缓冲液裂解，4℃下13,000 g离心10分钟。采用Bradford法测定蛋白质浓度。取25 μg蛋白质上样至10% SDS-PAGE凝胶，转移至PVDF膜，用5%脱脂奶粉封闭，与一抗孵育过夜，再与HRP标记的二抗孵育1小时。采用化学发光法检测条带[2]。
qRT-PCR：使用RNA迷你试剂盒从LPS激活的U937巨噬细胞中分离总RNA。使用cDNA合成试剂盒合成cDNA。使用 SYBR Green Master Mix 和针对 TNF-α、IL-1β、COX-2 和 GAPDH 的引物进行 qRT-PCR。反应条件：95°C 2 秒，95°C 5 分钟，60°C 10 分钟，72°C 20 分钟，共 36 个循环。相对倍数变化采用 2^(-ΔΔCt) 法计算，并以 GAPDH 进行标准化 [2]。
抑制实验：细胞预先用特异性抑制剂（SB202190 10 μM、U0126 10 μM、SP600125 10 μM、LY294002 10 μM、BAY 11-7082 10 μM）和碘化木兰碱 (50 μM) 处理，然后用 LPS (1 μg/mL) 培养。采用 ELISA 法测定 TNF-α 释放，采用蛋白质印迹法测定 COX-2 蛋白表达 [2]。

在U937巨噬细胞中，浓度高达50 μM的木兰花碱不影响细胞活力（MTT法：细胞活力>90%，与对照组相比），表明其在促炎浓度下具有较低的细胞毒性[2]。碘化木兰花碱即使在浓度高达600 μM时也未对HaCaT人角质形成细胞显示出任何毒性（细胞活力未降低）[1]。在U937巨噬细胞中，浓度为50 μM及以下的碘化木兰花碱显示出较高的细胞活力（≥90%），这通过MTT法测定。测试剂量高达 200 μM，但 50 μM 及以下的剂量被认为对实验安全 [2]。
碘化镁花林 使用 LAL 试验检测内毒素污染，结果发现所用浓度下未检测到内毒素 [2]。

[1]. Antifungal activity of magnoflorine against Candida strains. World J Microbiol Biotechnol. 2018 Oct 31;34(11):167.

[2]. Magnoflorine Enhances LPS-Activated Pro-Inflammatory Responses via MyD88-Dependent Pathways in U937 Macrophages. Planta Med. 2018 Nov;84(17):1255-1264.

木兰碱是一种天然的阿朴芬生物碱，主要从木兰科植物（例如，厚朴）中分离得到，具有潜在的天然抗真菌和免疫调节活性[1][2]。木兰碱的抗真菌机制可能涉及破坏念珠菌细胞膜的完整性（初步试验中膜通透性增加提示了这一点），但尚未提供直接证据（例如，麦角甾醇含量测定）[1]。在LPS激活的巨噬细胞中，木兰碱的促炎作用依赖于TLR4/MyD88，因为它不会增强用TLR4抑制剂（TAK-242）处理的细胞的炎症反应[2]。碘化木兰碱被归类为阿朴芬生物碱[1]。它存在于菖蒲（Acorus calamus）、青藤（Tinospora cordifolia）、南天竹（Celestrus paniculatus）、厚朴（Magnolia officinalis）和铁线莲（Clematis parviloba）等植物中[1]。此前报道的活性包括抗真菌、抗癌、抗氧化、抗炎和抗病毒作用[1]。碘化木兰花碱（Magnoflorine Iodide）是从青藤（Tinospora crispa）茎中通过乙醇提取、酸碱分级分离和硅胶柱色谱（以氯仿：甲醇梯度洗脱）分离得到的。经ESI-MS和NMR分析证实纯度>98%[2]。
碘化木兰花碱的抗真菌机制被认为涉及抑制α-葡萄糖苷酶，该酶是白色念珠菌正常细胞壁组成和毒力所必需的[1]。
在巨噬细胞中，碘化木兰花碱通过激活MyD88依赖的NF-κB、MAPK和PI3K-Akt信号通路增强免疫反应，导致促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β）和COX-2/PGE2的表达上调。这表明其可能作为免疫刺激剂用于治疗癌症、HIV、结核病和肝炎等免疫抑制性疾病[2]。

C20H24INO4

469.3133

469.075

4277-43-4

(+)-Magnoflorine chloride; 6681-18-1; (+)-Magnoflorine; 2141-09-5

6451920

White to light yellow solid

248-249ºC

58.92

2

5

2

26

498

1

[I-].O([H])C1=C(C([H])=C2C([H])([H])C([H])([H])[N+](C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[C@@]3([H])C([H])([H])C4C([H])=C([H])C(=C(C=4C1=C32)O[H])OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]

ODRHNGNRVVELAJ-ZOWNYOTGSA-N

InChI=1S/C20H23NO4.HI/c1-21(2)8-7-12-10-15(25-4)20(23)18-16(12)13(21)9-11-5-6-14(24-3)19(22)17(11)18;/h5-6,10,13H,7-9H2,1-4H3,(H-,22,23);1H/t13-;/m0./s1

(6aS)-2,10-dimethoxy-6,6-dimethyl-5,6,6a,7-tetrahydro-4H-dibenzo[de,g]quinolin-6-ium-1,11-diol;iodide

α-Magnoflorine iodide; Magnoflorine iodide; Thalictrine iodide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~62.5 mg/mL (~133.17 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (21.31 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。