MBX-2982 (SAR260093)

GPR119

在“慢性洗脱/清洗”中用MBX-2982 (1 μM)剪切细胞，与对照实验细胞比较，IBMX包涵体捕获的cAMP积累显着增加（P<0.01；ANOVA；n=3-6） AR-231，453在与急性刺激观察到的浓度范围内产生持续反应（1.82倍变化），pEC50分别为8.67±0.11和8.93±0.17。同样，观察到MBX-2982的浓度反应发生较大但不太严重的变化（57.54倍），持续和急性pEC50分别为7.03±0.13和8.79±0.12[1]。

为了检查 GLUTag 和原代肠细胞中的观察结果是否具有生理相关性，用 10 mg/kg 的 GPR119 激动剂 MBX-2982 处理 C57BL/6 小鼠。请注意，为了检查直接的 GPR119 效应，本实验中没有联合使用DPP-IV 双胞胎，而是使用DPP-IV 来保存血液样本中的活性GLP-1。 许可证MBX-2982 的胚胎的GLP-1 水平在没有氧化剂过量的情况下增加，表明GPR119介导的GLP-1不再依赖于码头[2]。

将 GloSensor 22F 质粒转染至 HEK-GPR119 细胞中，24-30 小时后，使用细胞测量动态 cAMP。制备细胞悬浮液的步骤包括 PBS 洗涤、Accutase 处理，然后重悬于培养基中。两次离心（300 g，5 分钟）沉淀细胞后，将它们重悬于测定缓冲液（Hank 平衡盐溶液，pH 7.4）中，其中补充有 20 mM HEPES 和 0.01% 不含脂肪酸的 BSA。然后对细胞进行计数并在缓冲液中稀释至 600,000 个细胞/mL。接下来，添加 2% v/v 的 GloSensor cAMP 试剂，并让细胞和试剂在 20°C 下平衡两小时，并定期混合。一式三份，将 50 µl/孔的细胞添加到白底 384 孔板（30,000 个细胞/孔）中，并使用 Envision 读板器测量基线发光。为了达到规定的最终浓度，将 5 μL MBX-2982 在 DMSO 中严重稀释后手动添加到测定孔中，然后在测定缓冲液中按 1:100 稀释以获得 ×10 浓缩溶液。为了发现同一孔内 cAMP 随时间的动态变化，将板在 20°C 下孵育，并定期测量发光。 cAMP 反应表示为每个时间点对照（用媒介物处理的细胞）的倍数。 [1]

制作细胞悬浮液的过程包括使用 PBS 洗涤和 Accutase 处理去除 HEK-GPR119 细胞，然后重新悬浮在培养基中。细胞在烧瓶中生长至汇合。之后，通过离心沉淀（227g，7分钟，20°C）将细胞洗涤两次，然后重悬于温热的测定缓冲液（Hank's平衡盐溶液，pH 7.4，补充有20 mM HEPES和0.01%不含脂肪酸的BSA）中）。第二次洗涤后在 37°C 下孵育 5 分钟。细胞计数后，将细胞在温热的测定缓冲液中稀释至 200,000 个细胞/mL[1]。

小鼠：本研究采用雄性C57BL/6小鼠。10周龄雄性小鼠（每组n=20）禁食过夜后，分别口服给予MBX-2982（10 mg/kg）或赋形剂（15%聚乙二醇400+85%羟丙基-β-环糊精，23.5%）。给药30分钟后，取一半小鼠（每组n=10）用二氧化碳窒息法处死，并通过心脏穿刺采集血液。为维持GLP-1的活性，在采血管中预先加入DPP-IV抑制剂（每1 mL血液加入10 µL），并在心脏穿刺前用该抑制剂冲洗注射器内壁。另一半动物（每组 n = 10）在葡萄糖负荷后 10 分钟处死并采集血液样本，并在化合物给药后 30 分钟口服葡萄糖推注（3 g/kg）。使用活性 GLP-1（版本 2）试剂盒测定血浆样本中的 GLP-1 水平。

[1]. Sustained wash-resistant receptor activation responses of GPR119 agonists. Eur J Pharmacol. 2015 Sep 5;762:430-42.

[2]. Agonists at GPR119 mediate secretion of GLP-1 from mouse enteroendocrine cells through glucose-independent pathways. Br J Pharmacol. 2012 Apr;165(8):2799-807.

[3]. GPR119: a promising target for nonalcoholic fatty liver disease. FASEB J. 2016 Jan;30(1):324-35.

MBX-2982 已用于糖尿病治疗研究的临床试验中。

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G蛋白偶联受体119 (GPR119) 参与代谢稳态的调节，GPR119激动剂是治疗2型糖尿病和肥胖症的靶点。我们使用内源性激动剂油酰乙醇胺和多种小分子合成激动剂，研究了受体信号传导的时间动态。通过基于动态发光生物传感器的检测和终点cAMP积累检测，我们发现，尽管无论使用何种激动剂，GPR119均表现出强烈的激活反应，但激动剂驱动的脱敏并非其主要的调控机制。对cAMP反应的时间分析表明，部分（但并非所有）受试激动剂能够产生持续的信号传导，且这种信号传导不受药物洗脱的影响。进一步分析表明，一种合成激动剂AR-231,453的持续作用与缓慢的解离动力学相符。相比之下，MBX-2982 和 AZ1 的持续反应似乎与膜沉积有关。我们还在内源表达系统（GLUTag 细胞中的 GLP-1 分泌）中检测到了 AR-231,453 的耐洗脱反应，其水平与生理相关。总之，我们的研究结果表明，在重组表达系统中，GPR119 的激活是持续的，几乎没有明显的受体脱敏迹象，并且对于某些配体，即使去除过量的激动剂，持续的激动剂反应仍然存在。这为靶向 GPR119 的潜在候选药物的时间反应谱提供了新的理解，并强调了仔细研究 GPCR 产生持续反应机制的重要性。[1]

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背景和目的：G 蛋白偶联受体 119 (GPR119) 介导胰腺 β 细胞分泌胰岛素和肠道 L 细胞释放胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)。虽然GPR119介导的胰岛素分泌依赖于葡萄糖，但GPR119介导的GLP-1分泌是否同样需要葡萄糖尚不清楚。本研究旨在探讨GPR119介导的GLP-1分泌是否依赖于葡萄糖，并比较L细胞和β细胞中激素分泌的细胞机制。实验方法：在肠道L细胞系GLUTag、原代肠道细胞培养物和体内，分析了GPR119激动剂和离子通道调节剂在有无葡萄糖存在下对GLP-1分泌的影响。同时，分析了胰腺β细胞系Min6细胞的胰岛素分泌情况作为对照。主要结果：在GLUTag细胞中，无论是否存在葡萄糖，GPR119激动剂均能刺激GLP-1分泌。在小鼠原代结肠细胞培养物中，GPR119激动剂在无葡萄糖条件下也能刺激GLP-1分泌。此外，GPR119激动剂可增加未接受葡萄糖负荷小鼠的血浆GLP-1水平。然而，在Min6细胞中，GPR119介导的胰岛素分泌依赖于葡萄糖。在本研究测试的药理学试剂中，硝苯地平（一种L型电压依赖性钙通道阻滞剂）呈剂量依赖性地降低了GLUTag细胞的GLP-1分泌，但在无葡萄糖条件下对Min6细胞无影响。结论和意义：与胰岛β细胞不同，肠道L细胞中GPR119介导的GLP-1分泌在体外和体内均不依赖于葡萄糖，这可能是由于L细胞中较高的基础钙张力所致。[2]

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非酒精性脂肪性肝病与代谢综合征相关，其独特特征是肝脏中脂质过度积累。G蛋白偶联受体119 (GPR119) 是2型糖尿病的一个有前景的治疗靶点。然而，GPR119激活在肝脂肪变性中的作用及其确切机制尚未得到研究。在野生型和GPR119基因敲除（KO）小鼠的原代培养肝细胞中，GPR119 KO肝细胞中脂肪生成酶的表达升高。在II期临床试验中，用GPR119激动剂（MBX-2982 [MBX] 和GSK1292263）处理肝细胞和HepG2细胞，可抑制核内和总固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1（一种关键的脂肪生成转录因子）的蛋白表达。在喂食高脂饮食的小鼠中，口服MBX可显著抑制肝脏脂质积累以及SREBP-1和脂肪生成相关基因的表达水平，而MBX的肝脏抗脂肪生成作用在GPR119 KO小鼠中消失。 MBX激活AMPK并增加SREBP-1c（一种抑制性SREBP-1c）的Ser-372磷酸化水平。此外，抑制AMPK可逆转MBX诱导的SREBP-1下调。这些发现首次证明，GPR119配体通过抑制肝细胞中SREBP-1介导的脂肪生成来减轻肝脂肪变性。[3]

C22H24N8OS

448.54396

448.179

C, 58.91; H, 5.39; N, 24.98; O, 3.57; S, 7.15

1037792-44-1

25025505

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

683.6±65.0 °C at 760 mmHg

367.3±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.739

3.88

122.98

0

9

7

32

564

0

CCC1=CN=C(N2CCC(C3=NC(COC4=CC=C(N5N=NN=C5)C=C4)=CS3)CC2)N=C1

NFTMKHWBOINJGM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H24N8OS/c1-2-16-11-23-22(24-12-16)29-9-7-17(8-10-29)21-26-18(14-32-21)13-31-20-5-3-19(4-6-20)30-15-25-27-28-30/h3-6,11-12,14-15,17H,2,7-10,13H2,1H3

2-[1-(5-ethylpyrimidin-2-yl)piperidin-4-yl]-4-[[4-(tetrazol-1-yl)phenoxy]methyl]-1,3-thiazole

SAR-260093; SAR 260093; SAR260093; MBX-2982; MBX2982; MBX 2982

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~50 mg/mL (~111.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。