MBX-2982 (SAR260093)

GPR119
MBX-2982 targets G protein-coupled receptor 119 (GPR119). GPR119 is a receptor that interacts with bioactive lipids and is known to stimulate glucose-dependent insulin secretion. By agonizing GPR119, MBX-2982 increases the levels of GLP-1 (glucagon-like peptide-1). Activation of GPR119 leads to improved glucose homeostasis through enhanced insulin secretion and incretin hormone release.

在“慢性洗脱/洗涤”条件下，MBX-2982 (1 μM) 处理剪切细胞后，与对照组细胞相比，IBMX 包涵体检测显示 cAMP 积累显著增加 (P<0.01；ANOVA；n=3-6)。AR-231,453 的 pEC50 值分别为 8.67±0.11 和 8.93±0.17，在急性刺激观察到的浓度范围内，其均能产生持续反应（1.82 倍变化）。与此类似，MBX-2982 的浓度反应变化幅度更大但程度较轻（57.54 倍），其急性 pEC50 值和持续 pEC50 值分别为 8.79±0.12 和 7.03±0.13 [1]。体外实验表明，MBX-2982 是一种强效且选择性的 GPR119 激动剂，能够刺激胰岛β细胞分泌葡萄糖依赖性胰岛素。该化合物可提高体外GLP-1水平。公开资料中关于其体外效力（EC₅₀值）的详细数据有限。该化合物对GPR119具有选择性，且口服生物利用度良好。

为了研究 GLUTag 和原代肠细胞中发现的生理相关性，我们给 C57BL/6 小鼠注射了 10 mg/kg 的 GPR119 激动剂 MBX-2982。本实验使用 DPP-IV 来维持血液样本中活性 GLP-1 的水平；然而，为了直接检测 GPR119 的作用，我们并未将 DPP-IV 处理的小鼠进行合并。经 MBX-2982 处理的小鼠胚胎中 GLP-1 水平升高，且未出现氧化剂过量，这表明 GPR119 介导的 GLP-1 不再依赖于 Dock 蛋白 [2]。
在体内，MBX-2982 已在 2 型糖尿病的临床前模型和临床试验中进行了评估。口服该化合物可提高 GLP-1 水平。MBX-2982 已显示出改善糖尿病动物模型葡萄糖稳态的疗效。该化合物已进入 II 期临床试验。公开资料中关于具体疗效数据和给药方案的信息有限。

将 GloSensor 22F 质粒转染至 HEK-GPR119 细胞，24-30 小时后，用这些细胞测定动态 cAMP 水平。制备细胞悬液的步骤包括：PBS 洗涤、Accutase 处理，然后重悬于培养基中。离心两次（300 g，5 分钟）收集细胞沉淀后，将细胞重悬于检测缓冲液（Hank's 平衡盐溶液，pH 7.4）中，该缓冲液添加了 20 mM HEPES 和 0.01% 无脂肪酸 BSA。计数细胞后，用缓冲液将细胞稀释至 600,000 个细胞/mL。接下来，加入 2% (v/v) 的 GloSensor cAMP 试剂，并将细胞和试剂在 20°C 下平衡 2 小时，期间定期混匀。将 50 µl/孔的细胞悬液加入白色底 384 孔板（每孔 30,000 个细胞），每个样品重复三次，并使用 Envision 酶标仪测量基线发光值。为了达到所需的最终浓度，将 5 μL MBX-2982 手动加入到检测孔中，该溶液先用 DMSO 高度稀释，再用检测缓冲液稀释 100 倍，得到浓度为 10 倍的溶液。为了检测同一孔内 cAMP 随时间变化的动态变化，将孔板在 20°C 下孵育，并定期测量发光值。每个时间点的 cAMP 反应均以相对于对照组（用载体处理的细胞）的倍数表示。[1]
MBX-2982 的非细胞受体结合实验采用放射性配体置换法，使用表达人 GPR119 受体的膜制备物。将膜与放射性标记的 GPR119 配体和不同浓度的化合物一起孵育。结合放射性通过过滤和闪烁计数法测定。IC₅₀ 或 Ki 值由竞争性结合曲线计算得出。功能性检测可能包括 [³⁵S]-GTPγS 结合试验，以测定受体激活情况。

制备细胞悬液的过程包括：使用PBS缓冲液洗涤和Accutase酶处理使HEK-GPR119细胞脱落，然后重悬于培养基中。将细胞在培养瓶中培养至汇合。之后，通过离心（227g，7分钟，20℃）沉淀细胞两次，然后重悬于温热的检测缓冲液（Hank's平衡盐溶液，pH 7.4，添加20 mM HEPES和0.01%无脂肪酸BSA）中。第二次洗涤后，在37℃孵育5分钟。细胞计数后，将细胞用温热的检测缓冲液稀释至200,000个细胞/mL[1]。体外细胞实验涉及表达人GPR119受体的细胞。用不同浓度的MBX-2982处理细胞，并检测下游信号通路，例如cAMP积累或ERK磷酸化。受体激活的EC₅₀值由剂量反应曲线计算得出。GLP-1分泌可在肠内分泌细胞系中进行测定。

小鼠：本研究采用雄性C57BL/6小鼠。10周龄雄性小鼠（每组n=20）禁食过夜后，分别口服给予MBX-2982（10 mg/kg）或赋形剂（15%聚乙二醇400+85%羟丙基-β-环糊精，23.5%）。给药30分钟后，取一半小鼠（每组n=10）用二氧化碳窒息法处死，并通过心脏穿刺采集血液。为维持GLP-1的活性，在采血管中预先加入DPP-IV抑制剂（每1 mL血液加入10 µL），并在心脏穿刺前用该抑制剂冲洗注射器内壁。另一半动物（每组 n = 10）在葡萄糖负荷后 10 分钟处死并采集血液样本，并在化合物给药后 30 分钟口服葡萄糖推注（3 g/kg）。使用活性 GLP-1（版本 2）试剂盒测定血浆样本中的 GLP-1 水平。
体内动物研究采用糖尿病啮齿动物模型。MBX-2982 经口服给药。测量血糖水平以评估疗效。测量 GLP-1 水平以确认靶点结合情况。评估该化合物对葡萄糖耐量和胰岛素分泌的影响。具体方案和给药方案详见原始文献。

MBX-2982 具有口服生物利用度。其分子量为 448.54 g/mol，分子式为 C₂₂H₂₄N₈OS。该化合物已在临床试验中进行评估，赛诺菲在审查了已完成的 II 期试验数据后，将相关权益归还给了 Metabolex。

公开资料中关于MBX-2982的具体毒性数据有限。作为一种用于治疗2型糖尿病的GPR119激动剂，本应进行标准的临床前毒理学研究。该化合物仅供研究用途，使用时应采取适当的安全预防措施。

[1]. Sustained wash-resistant receptor activation responses of GPR119 agonists. Eur J Pharmacol. 2015 Sep 5;762:430-42.

[2]. Agonists at GPR119 mediate secretion of GLP-1 from mouse enteroendocrine cells through glucose-independent pathways. Br J Pharmacol. 2012 Apr;165(8):2799-807.

[3]. GPR119: a promising target for nonalcoholic fatty liver disease. FASEB J. 2016 Jan;30(1):324-35.

MBX-2982 已用于糖尿病治疗的临床试验。G蛋白偶联受体119 (GPR119) 参与代谢稳态的调节，GPR119激动剂是治疗2型糖尿病和肥胖症的靶点。我们使用内源性激动剂油酰乙醇胺和几种小分子合成激动剂研究了受体信号传导的时间动态。通过动态发光生物传感器检测和终点cAMP积累测定，我们发现，尽管GPR119无论使用何种激动剂均表现出强烈的激活反应，但激动剂驱动的脱敏并非其主要的调节机制。对cAMP反应的时间分析表明，部分（但并非全部）受试激动剂产生了持续的信号传导，且不受药物洗脱的影响。进一步分析表明，合成激动剂AR-231,453的持续作用与其缓慢的解离动力学相符。相比之下，MBX-2982 和 AZ1 的持续反应似乎与膜沉积有关。我们还在内源表达系统（GLUTag 细胞中的 GLP-1 分泌）中检测到 AR-231,453 的抗洗脱反应，其水平与生理参数相关。总之，我们的结果表明，在重组表达系统中，GPR119 的激活是持续的，几乎没有明显的受体脱敏迹象，并且某些配体的持续激动剂反应即使在去除过量激动剂后仍然存在。这为靶向 GPR119 的潜在候选药物的时间-反应曲线提供了新的见解，并强调了仔细研究 GPCR 产生持续反应机制的重要性。[1]

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背景和目标：G 蛋白偶联受体 119 (GPR119) 介导胰腺 β 细胞分泌胰岛素和肠道 L 细胞释放胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)。虽然GPR119介导的胰岛素分泌依赖于葡萄糖，但GPR119介导的GLP-1分泌是否同样依赖于葡萄糖尚不清楚。本研究旨在探讨GPR119介导的GLP-1分泌是否依赖于葡萄糖，并比较L细胞和β细胞中激素分泌的细胞机制。方法：在肠道L细胞系GLUTag、原代肠道细胞培养物和体内，分析了GPR119激动剂和离子通道调节剂在有无葡萄糖存在下对GLP-1分泌的影响。以胰腺β细胞系Min6的胰岛素分泌作为对照。主要结果：在GLUTag细胞中，无论是否存在葡萄糖，GPR119激动剂均能刺激GLP-1分泌。在小鼠原代结肠细胞培养物中，GPR119激动剂在无葡萄糖存在下也能刺激GLP-1分泌。此外，GPR119激动剂可提高未接触葡萄糖的小鼠血浆GLP-1水平。然而，在Min6细胞中，GPR119介导的胰岛素分泌依赖于葡萄糖。在本研究测试的药理试剂中，硝苯地平（一种L型电压依赖性钙通道阻滞剂）呈剂量依赖性地降低了GLUTag细胞中GLP-1的分泌，但在无葡萄糖条件下对Min6细胞无影响。结论和意义：与胰岛β细胞不同，肠道L细胞中GPR119介导的GLP-1分泌在体外和体内均不依赖于葡萄糖，这可能是由于L细胞中较高的基础钙张力所致。[2]

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非酒精性脂肪性肝病与代谢综合征相关，其特征是肝脏中脂质过度积累。G蛋白偶联受体119 (GPR119) 是2型糖尿病的一个有前景的治疗靶点。然而，GPR119激活在肝脂肪变性中的作用及其确切机制尚未得到研究。在野生型和GPR119基因敲除（KO）小鼠的原代培养肝细胞中，GPR119 KO肝细胞中脂肪生成酶的表达增加。在一项II期临床试验中，用GPR119激动剂（MBX-2982 [MBX]和GSK1292263）处理肝细胞和HepG2细胞可抑制核内和总固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1的蛋白表达，SREBP-1是脂肪生成的关键转录因子。在喂食高脂饮食的小鼠中，口服MBX可显著抑制肝脏脂质积累以及SREBP-1和脂肪生成相关基因的表达水平，而MBX在肝脏中的抗脂肪生成作用在GPR119 KO小鼠中消失。 MBX激活AMPK并增加抑制性SREBP-1c的Ser-372磷酸化水平。此外，抑制AMPK可逆转MBX诱导的SREBP-1下调。这些发现首次证明GPR119配体通过抑制肝细胞中SREBP-1介导的脂肪生成来减轻肝脂肪变性。[3] MBX-2982 (SAR260093) 是一种强效、选择性、口服生物利用度高的GPR119激动剂，用于治疗2型糖尿病。它可提高GLP-1水平并刺激葡萄糖依赖性胰岛素分泌。该化合物已在II期临床试验中进行评估。本产品仅供研究用途，不得用于人体治疗。

C22H24N8OS

448.54396

448.179

C, 58.91; H, 5.39; N, 24.98; O, 3.57; S, 7.15

1037792-44-1

25025505

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

683.6±65.0 °C at 760 mmHg

367.3±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.739

3.88

122.98

0

9

7

32

564

0

CCC1=CN=C(N2CCC(C3=NC(COC4=CC=C(N5N=NN=C5)C=C4)=CS3)CC2)N=C1

NFTMKHWBOINJGM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H24N8OS/c1-2-16-11-23-22(24-12-16)29-9-7-17(8-10-29)21-26-18(14-32-21)13-31-20-5-3-19(4-6-20)30-15-25-27-28-30/h3-6,11-12,14-15,17H,2,7-10,13H2,1H3

2-[1-(5-ethylpyrimidin-2-yl)piperidin-4-yl]-4-[[4-(tetrazol-1-yl)phenoxy]methyl]-1,3-thiazole

SAR-260093; SAR 260093; SAR260093; MBX-2982; MBX2982; MBX 2982

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~50 mg/mL (~111.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。